尿中乙型肝炎病毒DNA检测对小儿乙肝相关性肾炎诊断价值研究

目的　探讨尿中乙肝病毒DNA(HBV DNA)的检测对诊断小儿乙肝病毒相关性肾炎 (HBV GN)的意义。方法　应用聚合酶链式反应 (PCR)、免疫荧光 (IF)及原位杂交法 (ISH)检测患儿血清和尿中HBV DNA及肾活检石蜡包埋组织切片中HBV抗原与HBV DNA的存在状况。结果　 32例患儿经血清HBV DNA与肾组织中HBV抗原检测 ,符合HBV GN诊断的 19例 ,其中 11例经ISH检测发现肾活检石蜡包埋组织切片中HBV DNA阳性 ,13例尿HBV DNA阳性 ,阳性率分别为 5 7 9%、6 8 5 %。结论　检测肾小球疾病患儿尿中HBV DNA可协助HBV GN的临床诊断     

应用聚合酶链反应检测乙肝病毒感染患儿血清HBV—DNA

目前认为,HBV-DNA是反映HBV感染最直接的指标,聚合酶链反应(PCR)是检测HBV-DNA最敏感、最特异而简便的方法。为进一步了解HBV感染者血清学变化与HBV-DNA的关系,以便更准确地解释血清学各抗原抗体的意义,我们采用PCR技术对102例HBV感染小儿进行了HBV-DNA检测,现报告如下。     

HBsAg携带者母亲肝组织HBV—DNA与母婴传播关系的研究

关于HBV母婴传播研究,国内外已较深入。对HBsAg携带者(ASC)母亲肝组织HBV-DNA与母婴传播关系的研究资料较少。本文试图就此问题进行探讨。     

楼莲胶囊对乙型肝炎病毒携带者血清乙型肝炎病毒标志物的影响

目的　探讨楼莲胶囊对乙型肝炎病毒 (HBV)标志物的影响。方法　 12 0例HBV携带者中 6 0例用楼莲胶囊治疗 (试验组 ) ,30例用护肝胶囊治疗 (试验对照组 ) ,30例不用任何药物治疗 (空白对照组 ) ,观察 3组病毒标志物的变化 ,实时荧光定量PCR(FQ PCR)方法检测血清HBVDNA含量。结果　试验组对乙肝病毒标志物 (HBVDNA)降低明显优于对照组。结论　HBV携带者经楼莲胶囊治疗 ,可使血清HBVDNA浓度明显下降     

肾病综合征患儿血、尿巨细胞病毒DNA的检测

巨细胞病毒(CMV)感染问题日益受到人们的关注,儿童特发性肾病综合征(INS)与CMV感染的关系研究报告不多。本院采用PCR技术检测40例INS患儿中CMV感染情况,并对CMV阳性的INS患儿的临床特征作一分析。     

应用原位杂交和原位聚合酶链反应技术检测肾组织中乙型肝炎病毒DNA

为深入探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相关性肾炎的发病机理，应用地高辛素标记ＨＢＶＤＮＡ探针原位杂交和直接原位聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对５例血清ＨＢＶ标志物阳性、临床诊断为ＨＢＶ相关性肾炎患儿的肾活检石蜡包埋组织切片行ＨＢＶＤＮＡ检测，并采用免疫组化ＬＳＡＢ法做标本的ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）检测。结果显示５例中有４例标本原位杂交和直接原位ＰＣＲ检测均呈ＨＢＶＤＮＡ阳性，ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒弥漫沉积于肾小球毛细血管袢、系膜区、肾小管及肾间质，表现形式以浆核型、核型为主；此４例ＨＢｓＡｇ亦阳性，ＨＢｓＡｇ阳性颗粒的分布与ＨＢＶＤＮＡ基本一致。提示ＨＢＶ不仅可通过免疫介导引起肾脏损害，而且有可能直接侵犯肾脏导致肾脏病变。     

HBsAg、HBeAg和HBcAb三项阳性乙肝患儿的随访

我们对HBsAg、HBeAg及HBcAb三项同时阳性（简称大三阳）的乙肝患儿38例于出院0．5a～5a进行随访检测乙肝5项和肝功能,在随访时加测血清多聚白蛋白受体（PH－SA－R）．观察结果分析如下。临床资料一、一般资料随访患儿出院时乙肝型别：急性黄疽型11人（11／38．29％）,急性无黄疽型20人（20／38,52．4％）,慢性迁延型7人（7／38．18．4％）,年龄9a～14a。二、出院至随访检测相距时间：38例0．5a后随访检测见持续阳性33例（86．8％）,～la30例（77．3％）,～2a24例（63．正％）,～3a13例（35．7％）,～4a4例（l．7％）．～5a2…     

支气管哮喘患儿尿5项微量蛋白测定及其临床意义

目的　探讨支气管哮喘患儿肾脏受损情况。方法　采用速率免疫散射比浊法和化学显色终点法分别测定 6 6例轻、中、重度支气管哮喘急性发作期患儿的尿视黄醇结合蛋白 (RBP)、白蛋白 (Alb)、转铁蛋白 (TRF)、免疫球蛋白G(IgG)和N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶 (NAG)含量 ,并与 32例正常儿童对照组对照。 结果　轻、中、重度哮喘患儿尿RBP、Alb、TRF、NAG含量均高于对照组 (均P <0 0 1) ,尿IgG含量与对照组差别无显著性意义(P >0 0 5 )。尿RBP、NAG含量重度哮喘患儿高于轻、中度哮喘患儿 (均P <0 0 5 ) ,轻度与中度哮喘患儿差别无显著性意义 (均 P >0 0 5 )。尿TRF、Alb含量在轻、中、重度哮喘患儿差别均无显著性意义 (均 P >0 0 5 )。结论　支气管哮喘患儿急性发作期存在肾小球和肾小管轻度或早期损害。     

肥胖症患儿尿微量清蛋白及相关因素检测的意义

目的 了解肥胖症患儿尿微量清蛋白(MAU)的改变及其发生机制.方法 肥胖症患儿300例及健康对照儿童100例采用免疫比浊法测定晨起MAU,同时测定血压、血糖、血脂、胰岛素水平,并进行比较.结果 肥胖症患儿尤其是中、重度患儿较健康对照组MAU增高,差异显著(Pa＜0.01);血压、血糖、血脂、胰岛素较健康对照组亦增高,差异显著(Pa＜0.05).结论 检测MAU可早期发现肥胖造成肾损伤,其与肥胖儿高胰岛素血症、高脂血症、胰岛素抵抗、脂肪细胞因子增高有关.     

新生儿外周血单个核细胞乙型肝炎病毒DNA检测的临床意义

目的探讨HBsAg阳性产妇新生儿外周血单个核细胞(PBMC)乙型肝炎病毒(HBV)感染率、影响因素及检测的临床意义。方法50例HBsAg阳性产妇和其新生儿为研究组,另18例血清乙肝标志物均阴性者为对照组。采用套式聚合酶链反应(n-PCR)法分别检测产妇、新生儿血清及PBMCHBV-DNA。结果HBsAg阳性母亲血清及PBMCHBV-DNA检出率分别为60·0%和40·0%;其新生儿血清及PBMCHBV-DNA阳性率分别为46·0%及30·0%;其中仅血清阳性10例,仅PBMC阳性2例,血清和PBMC均阳性13例。对照组母儿血清及PBMC中未检出HBV-DNA。新生儿PBMCHBV-DNA阳性率在母血清HBeAg、HBV-DNA阳性组高于阴性组(P<0·05,P<0·01);母PBMCHBV-DNA阳性组高于阴性组(P<0·01);母血清和PBMCHBV-DNA均阳性组高于仅血清阳性组(P<0·01);新生儿血清HBV-DNA阳性组高于阴性组(P<0·05)。结论HBsAg阳性母亲新生儿HBV-DNA感染率为30·0%;其感染率与母、儿血清病毒血症水平及孕妇PBMCHBV-DNA状态有关,检测出新生儿PBMCHBV-DNA具有重要临床意义。     

乙型肝炎病毒相关性肾炎不同基因型患儿间临床及病理特征的差异分析

目的 研究乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)不同基因型患儿间临床及病理特征的差异。方法 随机选择同时行肝穿和肾穿的41 例HBV-GN 患儿作为研究对象,对其血清标本进行基因分型、乙型肝炎病毒(HBV)cccDNA 检测,分析HBV-GN 不同基因型患儿间临床、病理特征及HBV 复制的差异。结果 41例HBV-GN 患儿中,C 基因型29 例(71%),B 基因型10 例(24%),B/C 混合型2 例(5%)。C 基因型患儿的血尿、蛋白尿、补体C3 下降、谷丙转氨酶升高及肾功能不全发生率均显著高于B 基因型患儿;C 基因型患儿HBV cccDNA 阳性比例高于B 基因型患儿。但两种不同基因型患儿肾组织病理类型分布差异无统计学意义;两者肝组织炎症程度及纤维化程度差异亦无统计学意义。结论 HBV-GN 的基因型主要以C、B 基因型为主,且以C 基因型占优势。C 基因型患儿较B 基因型临床症状严重,但两者在病理学特征上无明显差异。     

新生儿缺氧缺血性脑病患儿尿白蛋白、IgG、β2－M的检测及其临床意义

本文测定了45例窒息后新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿的尿白蛋白(Alb)、IgG及β2－微球蛋白(β2-M)水平,以了解肾功能受损情况,现报告如下。 　　研究对象：HIE组为1997～1998年我科收治的HIE患儿共45例,其中男29例,女16例;日龄(2.2±0.9)天,胎龄(38.6±2.5)周,出生体重(3126.7±723.8)g;轻度35例,中重度10例。HIE患儿的诊断均符合文献诊断标准［中华儿科杂志,1997;35(2)：99］。 　　对照组：为31例同期出生的正常健康新生儿,日龄、胎龄、出生体重与HIE组有可比性。 　　方法：取上述新生儿生后4日内尿液,用放射免疫法测定尿Alb、IgG和β2-M。放射免疫测定药盒由北京中国原子能科学研究院提供。同时抽取轻度HIE患儿31例和中重度HIE患儿10例的静脉血用美国BECKMAN-CXT自动生化仪测血尿素氮(BUN)及肌酐(Cr)。     

检测原发性肾病综合征患儿尿足细胞标志蛋白的临床意义

目的：探讨检测尿液中足细胞标志蛋白podocalyxin(PCX)在儿童原发性肾病综合征（PNS）的临床诊断及病情评估中的作用。方法：采用透射比浊法对175例儿童晨尿PCX的表达水平进行检测,其中包括未经治疗的PNS患儿（活动期组）53例（单纯型肾病36例、肾炎型肾病17例）、PNS完全缓解期患儿（缓解组）56例(复发者42例,非复发者14例)、健康儿童66例（对照组）。测定53例PNS活动期患儿同期24 h尿蛋白的水平;绘制ROC曲线,确定尿PCX诊断PNS活动期及鉴别肾炎型肾病的最佳临界点。结果：活动期组与缓解组及对照组比较,尿PCX水平明显升高（P<0.01）。活动期组尿PCX水平与24 h尿蛋白水平呈正相关（r=0.39,P<0.01）。活动期组患儿中,肾炎型肾病患儿较单纯型肾病患儿尿PCX水平升高,差异有统计学意义（P<0.01）。缓解组中,复发者尿PCX水平较非复发者高,差异有统计学意义（P<0.05）。尿PCX诊断PNS活动期及肾炎型肾病的 ROC曲线下面积分别为0.915、0.784;诊断临界点分别为7.97 ng/mL、10.28 ng/mL,灵敏度分别为81.1％、94.1％,特异度分别为93.4％、52.8％。结论：利用PCX定量检测可动态观察尿足细胞的变化,对判断肾小球的损伤程度及疾病的活动情况、临床鉴别单纯型肾病与肾炎型肾病有一定的意义。     

新生儿外周血单个核细胞感染乙型肝炎病毒的机制及意义

目的探讨新生儿外周血单个核细胞（PBMC）感染乙型肝炎病毒（HBV）的机制及意义。方法选择84例HBsAg阳性、HBeAg阴性的孕妇及其分娩的新生儿为研究组。16例HBsAg阴性孕妇及其分娩的新生儿作为对照。ELISA检测新生儿HBV血清学标志物（HBVM）,巢式PCR（n-PCR）检测孕妇及新生儿血清和PBMC中HBV DNA。对血清HBsAg及HBV DNA阴性、仅PBMC中HBV DNA阳性的新生儿随访1年,观察HBsAb产生及PBMC中HBV DNA存在状况。结果（1）84例孕妇血清HBV DNA阳性45例（53．57％）;PBMC中HBV DNA阳性34例（40．48％）,两者相比差异无统计学意义（x^2=2．891,P〉0．05）。血清及PBMC中HBV DNA均为弱阳性。（2）研究组新生儿感染24例（28．57％）。其中仅血清HBV DNA阳性7例,仅PBMC中HBV DNA阳性11例,血清和PBMC中HBV DNA同时阳性6例,血清及PBMC中HBV DNA均为弱阳性;新生儿血清HBsAg均阴性。对照组无新生儿感染。两组新生儿感染差异有统计学意义（x^2=4．55,P〈0．05）。（3）研究组新生儿11例（13．10％）仅PBMC中HBV DNA阳性,均为弱阳性。其母亲仅血清HBV DNA阳性5例,仅PBMC阳性2例,血清及PBMC均阳性4例。对11例中7例仅PBMC中HBV DNA阳性的新生儿随访1年。其中4例血清HBsAb阳性,PBMC中HBV DNA阴性;3例HBsAb阴性,其中2例PBMC中HBV DNA仍为弱阳性。7例血清中HBsAg及HBV DNA均阴性。结论（1）孕妇血清或PBMC中HBV DNA阳性均可导致新生儿PBMC感染。（2）感染了HBV的PBMC可在血清HBsAg和HBV DNA阴性的新生儿体内长期存在,并影响新生儿免疫接种后HBsAb的产生。     

流行性乙型脑炎患儿血清C-反应蛋白与病情及预后的关系

目的　探讨血清C 反应蛋白 (CRP)水平对流行性乙型脑炎 (乙脑 )病情及预后判断价值。方法　采用散射速率比浊法检测 5 0例乙脑患儿血清CRP水平 ,同时检测外周血白细胞 (WBC) ,并与病情轻重及预后比较。结果　乙脑患儿急性期CRP及WBC明显升高 ,且CRP与病情轻重及预后呈正相关。结论　检测血清CRP水平对乙脑病情及预后的判断有重要参考价值 ;CRP明显升高者病情重 ,预后较差     

乙型肝炎病毒X蛋白通过激活细胞外蛋白调节激酶转导机制上调大鼠系膜细胞肿瘤坏死因子-α的表达

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因编码的蛋白(HBx)导致大鼠系膜细胞(MC)增殖及TNF-α高表达的细胞外蛋白调节激酶(ERK)1/2信号转导机制.方法 PCR扩增HBV X基因,然后与真核表达载体PCI-neo质粒连接,构成含有HBV X基因的质粒(PCI-neo-X),采用限制性内切酶法及测序证实.采用脂质体法将PCI-neo-x转染入体外培养的大鼠MC,采用抑制剂U0126阻断ERK1/2通路,观察培养细胞增殖、TNF-α及其mRNA表达,以不加抑制剂作为对照.Western blot检测HBx、ERK1/2及磷酸化ERK(p-ERK)1/2表达.半定量RT-PCR检测TNF-α mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液TNF-α表达.甲基噻唑摹四唑(MTT)法检测MC增殖.结果 无论是否加入UO126,在转染PCI-neo-X 36,48 h后,肾小球系膜细胞(GMC)明显表达HBx,细胞TNF-αmRNA的表达加入U0126较不加入U0126显著下降.不加入U0126组上清液TNF-α水平在转染后36 h和48 h分别为(189.0±18.1)ng/L和(172.3±24.3)ng/L;加入U0126组上清液中TNF-α水平在转染后36、48 h分别为(65.6±11.6)ng/L和(84.0±24.6)ng/L,组间不同时间点比较均有显著性差异(Pa<0.05).加入U0126后MC增殖也显著下降.结论 HBx可促使MC增殖,细胞TNF-α mRNA及上清液TNF-α表达均增高,这一作用可能是通过HBx激活ERK1/2信号通路实现的.实用儿科临床杂志,2009,24(10):738-740     

慢性活动性EB病毒感染患儿外周血单个核细胞EB病毒DNA及感染细胞类型检测的临床意义

目的 研究EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)慢性活动性感染(CAEBV)、急性感染(AEBV)以及正常儿童的外周血单个核细胞(PBMC)的EBV-DNA水平,以及EBV感染细胞类型的差异,探讨其与CAEBV临床表型的关系.方法 收集2004年3月至2008年4月在我院住院的CAEBV患儿10例,AEBV患儿13例,以及正常儿童12例的外周血单个核细胞,应用实时荧光定量PCR法检测EBV-DNA水平,并对EBV-DNA阳性的CAEBV和AEBV及正常儿童,用免疫磁珠法分选各种淋巴细胞后进行EBV编码的RNA-1(EBV encoding RNA-1,EBER-1)探针荧光原位杂交(FISH)确定EBV感染细胞的类型.结果 CAEBV组EBV-DNA载量为[(6.8×107)±(1.1 x 108)]/ml,AEBV组EBV-DNA载量为[(1.3×106)±(1.6×106)]/ml,两组比较差异有统计学意义,CAEBV组PBMC的EBV-DNA水平明显高于AEBV组(P＜0.01);7例CAEBV患儿做细胞分选及FISH后,发现EBV不仅可以引起B细胞感染,而且还引起NK细胞、CD4+和CD8+T细胞不同程度的感染,临床表现为反复或持续的传染性单核细胞增多症(IM)样症状.6例患儿以感染T细胞为主,其中1例以CD8+T细胞感染为主,临床表现除高热,肝脾淋巴结大,伴严重的血液系统一系或三系降低外,还并发了爆发性的致死性T淋巴细胞增殖综合征而死亡.1 例以NK细胞感染为主,临床表现还伴有对蚊虫叮咬高度敏感且IgE高达2500 U/ml.AEBV组7例患儿均显示感染B淋巴细胞,临床表现为可以痊愈的IM.6例正常儿童均为阴性.结论 CAEBV患儿体内存在更多的EBV复制和不同的EBV感染细胞类型,实时荧光定量PCR检测EBV-DNA水平并测定EBV感染的淋巴细胞类型有可能协助CAEBV临床个体化诊治和评估病情进展.

Abstract：

Objective To study the difference in the EBV-DNA level in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and the type of Epstein-Barr virus(EBV)-infected cells in pediatric patients with chronic active EBV(CAEBV) infection,acute EBV infection(AEBV)and healthy children,and to analyze the relationship between the above difference and the clinical manifestation of CAEBV.Method Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the EBV-DNA levels in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in 12 normal children, 10 pediatric patients with CAEBV infection and 13 pediatric patients with AEBV infection in our hospital between March 2004 and April 2008. Immunomagnetic bead cell fractionation and fluorescent in situ hybridization(FISH) by EBV encoding RNA-1(EBER-1) probe were used in the healthy children, EBV-DNA positive CAEBV patients and AEBV patients to detect the type of EBV-infected cells.Result The average EBV-DNA level in CAEBV patients'PBMC was(6.8×107±1.1×108)copies/ml, while the average EBV-DNA level of AEBV patients' PBMC was(1.3×106±1.6×106)copies/ml.The average EBV-DNA level of CAEBV infected patients' PBMC was significantly higher than that of AEBV infected patients' PBMC(P＜0.01).The cell fractionation and FISH in seven CAEBV patients showed that EBV in CAEBV patients infected not only B cells,but NK cells and CD4+ and CD8+ T cells to different degree, and these patients presented recurrent and persistent infectious mononucleosis(IM)-like symptoms.In 6 CAEBV patients infection mainly occurred to T cells, in one case,infection occurred mainly in CD8+T cells, and the patient died from fulminant and deadly T lymphocytes proliferative syndrome except presenting firstly high fever, enlargment of the liver, spleen, lymphnode and the severe decrease of one or three kinds of blood cells. In 1 CAEBV patient the infection was mainly found in NK cells, who presented with hypersensitivity to mosquito biting and high IgE level (2500 U/ml).But EBV in seven AEBV patients infection was found only in B cells who presented with only IM for one time and no EBV-infected PBMC were found in the remaining 6 healthy children. Conclusion There are much more EBV replications and different EBV-infected cell types in CAEBV patients. Detection of EBV-DNA level by real-time fluorescent quantitative PCR and the detection of the type of EBV-infected cells may help in diagnosis, treatment and development evaluation of children with CAEBV infection.     

过敏性紫癜患儿血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C和尿微量清蛋白检测的临床意义

目的：探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cyst-C)和尿微量清蛋白(mA1b)在过敏性紫癜（HSP）患儿早期肾损害中的检测意义。方法：选取48例血清肌酐正常的HSP患儿作为观察组,31例健康儿童作为对照组。均抽血后采用碱性苦味酸法检测血清肌酐（Scr）、酶联免疫吸附方法（ELISA)测定血清Cyst-C、免疫比浊法检测尿mA1b,同时对观察组做尿常规检测。并且随诊患儿1个月后复查血Cyst-C和尿mA1b含量。结果：观察组患儿急性期血清Cyst-C为2.24±0.81 mg/L,高于对照组的0.85±0.20 mg/L,急性期尿mA1b为20.04±10.32 mg/L,高于对照组的2.30±1.38 mg/L。两者比较差异有非常显著性意义（P＜0.01);HSP患儿急性期血清Cyst-C和尿mA1b与恢复期血清Cyst-C（1.70±0.30 mg/L）和尿mA1b（13.20±8.16 mg/L）比较,差异有非常显著性意义（P＜0.01);HSP患儿的尿常规异常率为33.3%(16/48),分别与尿mA1b异常率68.8%(32/48)、血清Cyst-C异常率72.9%(36/48)比较,差异有非常显著性意义（P＜0.01);HSP患儿的尿mA1b与血Cyst-C异常率两者相接近,差异无显著性。结论：血清Cyst-C联合尿mA1b检测是诊断HSP早期肾损害的灵敏指标,可作为临床早期诊断的可靠依据。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：346-348］     

上尿路感染患儿尿培养及多项肾影像学检查的评价与分析

目的分析小儿上尿路感染的临床特征及探讨尿路感染的定位方法。方法对收治住院的45例上尿路感染患儿进行回顾性分析。结果发热40例占89%,45例尿培养均阳性,其中大肠杆菌占41.7%,其它细菌占58.3%。B超在描述尿路积水及畸形方面与静脉肾盂造影(IVP)结果相接近,放射性99m锝-二巯基丁二酸肾静态显像(DMSA)检查对肾实质感染定位敏感度高,排泄性膀胱造影15例均有不同程度膀胱输尿管返流(VUR)。结论小婴儿首次尿路感染就要及早定位、全面评价,根据DMSA以及B超检查结果,选择进行排泄性膀胱造影,以尽早发现VUR,防止肾功能损害。     

心肌炎及扩张型心肌病患儿人类巨细胞病毒的检测及其临床意义

目的探讨巨细胞病毒与心肌炎、扩张型心肌病之间的关系。方法应用ＰＣＲ基因扩增技术对４８例心肌炎、４例扩张型心肌病患儿及６０例同期无心肌疾病患儿进行人类巨细胞病毒（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ）检测。结果心肌炎、扩张型心肌病组巨细胞病毒检出率明显高于对照组,差异有显著性（Ｐ＜００５）。结论巨细胞病毒与心肌炎、扩张型心肌病的发生有关