Leflunomide对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:检测Leflunomide对结肠癌细胞增殖和诱导凋亡作用。方法:实验采用结肠癌细胞株SW260,与不同浓度的Leflunomide药物(0、5、10、20、40、80μg/ml)共同培养,以MTT方法和流式细胞仪技术检测细胞的增殖状态,用TUNEL染色和流式细胞仪技术检测细胞的凋亡。结果:Leflunomide在对结肠癌细胞增殖具有双重影响,即在低浓度下(5μg/ml和10μg/ml)有轻度的促进结肠癌细胞SW620增殖的作用,而提高浓度后(>40μg/ml)则表现为明显的抑制细胞的增殖作用,并随着剂量增加和作用时间延长,抑制作用更为明显,即存在着时相性和量-效依赖性。结论:Leflunomide可抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡。可能对结肠癌病人有潜在的治疗作用。     

菊米提取液对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察菊米提取液对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用不同浓度的菊米提取液处理SW620细胞,MTT法检测菊米提取液对SW620细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;比色法测定Caspase-3/7酶和Caspase-6酶活性。结果:菊米提取液对SW620细胞增殖有抑制作用,IC50为0.012mg/mL,且呈一定的量效关系;随着药物浓度的增加(0.001、0.002、0.005、0.01mg/mL),细胞凋亡率分别为(6.46±0.02)%、(9.77±0.01)%、(13.11±0.04)%、(18.47±0.05)%,对照组细胞凋亡发生率为(4.83±0.01)%,显示菊米提取液诱导的细胞凋亡作用随浓度的增大而增加。同时Caspase-3/7酶和Caspase-6酶活性显著增强。结论:菊米提取液在能抑制体外培养的SW620细胞增殖并诱导其凋亡,Caspase-3、6、7活性增强可能是菊米提取液诱导SW620细胞凋亡的机制之一。     

cFLIP蛋白在大肠癌细胞中的表达及其对大肠癌细胞凋亡的影响

目的检测细胞型Fas相关死亡区域蛋白样β白细胞介素1转换酶抑制蛋白(cFLIP)在大肠癌细胞中的表达,探讨其在大肠癌细胞凋亡中的作用。方法应用Western蛋白印迹法检测3株人大肠癌细胞株中cFLIP蛋白的表达及大分子合成抑制剂放线菌素D(ActD,10μg/L)对SW620细胞cFLIP表达的影响,并运用四唑盐比色法(MTT法)检测cFLIP对SW620细胞凋亡的影响。结果SW1116及SW620细胞株cFLIP蛋白呈阳性表达,而LoVo细胞株呈阴性表达。ActD(10μg/L)可明显下调SW620细胞中cFLIP蛋白的表达水平,其作用1h以后,cFLIP表达水平开始下降(为0h的86%),作用24h后下降最明显(为0h的59%)。同时,抗Fas抗体(1mg/L)可最大程度地诱导28.8%的SW620细胞发生凋亡。结论cFLIP蛋白在大肠癌细胞中表达并可能在抑制大肠癌细胞凋亡中发挥重要作用。     

生长抑素施他宁对结肠癌SW480细胞生长抑制和凋亡作用的实验研究

目的:探讨应用生长抑素类似物施他宁对人结肠癌细胞株SW480细胞的生长抑制和凋亡作用,及细胞周期的影响.方法:采用MTT比色法测定不同浓度施他宁对SW480细胞增殖的抑制作用;漉式细胞仪洲定SW480细胞细胞周期分布、增殖指教、凋亡率.结果:生长抑素施他宁能够明显抑制人结肺癌细胞株SW480细胞增殖(P<0.01),且呈浓度和时间依赖性(P<0.01,P<0.01).结论:生长抑素施他宁可押制人结肠癌细胞株SW480的生长;生长抑素可能通过押制G1/G2期SW480细胞进入S期及促进细胞凋亡两种途径抑制人结肠癌细胞株SW480增殖,影响其凋亡.     

去泛素化酶 USP9X在 etoposide 促结肠癌细胞 SW620 凋亡中的作用研究

目的：探讨USP9X在etoposide促结肠癌细胞SW620凋亡中的作用和可能的机制。方法：设计并合成USP9X的shRNA和对照shcontrol,采用半定量RT-PCR和Western blot检测干扰效率。结肠癌细胞SW620分别转染USP9X-shRNA和shcontrol后用etoposide处理,检测MCL1的蛋白水平变化并通过c-PARP的水平检测细胞的凋亡水平。结果：半定量RT-PCR和Western blot检测显示在SW620细胞中USP9X-shRNA能够显著例氏USP9X的mRNA和蛋白的表达,抑制率达70％,该条shRNA可以作为有效干扰序列进行后续实验。20μg／mL etoposide处理24h后,经c-PARP的水平检测发现感染USP9X-shRNA的SW620细胞比对照组细胞的凋亡率显著增加。结论：以RNA干扰技术沉默USP9X基因可增加结肠癌细胞SW620对etoposide的敏感性,显著增加etoposide诱导的结肠癌SW620细胞的凋亡,推测USP9X基因可能成为结肠癌基因治疗的一个新靶点。     

C/EBPα在结肠直肠癌的表达及对癌细胞的作用

目的:检测C/EBPα在结肠直肠癌中的表达情况,探讨下调C/EBPα表达对结肠癌细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法:利用RT-PCR和免疫组织化学技术检测C/EBPα在结肠直肠癌组织及相邻正常组织中的表达,分析C/EBPα表达与临床病理特征的关系。用Western印迹法筛选C/EBPα,发现SW620为高表达C/EBPα肠癌细胞株。通过RNA干扰技术下调结肠癌细胞株SW620中C/EBPα表达后,利用CCK8和流式分析技术检测SW620细胞增殖、凋亡和细胞周期的变化。结果:C/EBPα在结肠直肠癌组织中高表达,且与肿瘤浸润深度有关(P<0.05),促进SW620细胞凋亡(P     

T-box3基因对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨T-box3基因(TBX3)对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响, 并初步探讨其机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹(Western blot)方法检测结肠癌患者及结肠癌细胞株TBX3的mRNA和蛋白表达。培养结肠癌SW620细胞株并进行干预, 分为小干扰RNA(siRNA)-TBX3转染组、siRNA-对照组转染组、空白组。转染48 h后噻唑蓝(MTT)实验检测SW620细胞活性, 流式细胞术检测细胞凋亡。RT-qPCR和Western blot检测各组细胞增殖、凋亡相关基因、蛋白表达。结果结肠癌患者肿瘤组织TBX3 mRNA和蛋白相对表达水平显著高于癌旁组织(3.77±0.92、0.66±0.14比0.90±0.22、0.18±0.03, t=25.02、28.21, P<0.01);结肠癌SW620细胞株TBX3 mRNA和蛋白相对表达水平显著高于HIEC(3.01±0.44、0.92±0.06比1.15±0.17、0.24±0.03), 差异均有统计学意义(t=9.68、24.08, P<0.01)。siRNA-TBX3转染组SW620...     

亚精胺对结肠癌的抗肿瘤效应及增强5-Fu敏感性的研究

目的 探讨亚精胺(SPD)对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响和对5?Fu敏感性的影响。方法 采用CCK?8实验、克隆形成实验、Transwell迁移侵袭、流式细胞技术检测细胞凋亡实验、裸鼠皮下移植瘤实验研究SPD对HCT15和SW620(KRAS突变型)细胞增殖能力、迁移和侵袭能力、细胞凋亡的影响和HCT15和SW620对5?Fu敏感性的变化。结果 体外实验证明SPD处理HCT15和SW620的IC₅₀分别为15.75±1.55μM和7.11±0.37μM，处理HT29和SW48(KRAS野生型)的IC₅₀分别为76.17±10.02μM和64.40±5.61μM;5μM的SPD处理的HCT15和SW620形成的细胞克隆数量较对照组减少，尚未发现SPD处理HT29和SW48形成的细胞克隆数量较对照组减少；1μM的SPD处理后的HCT15和SW620细胞穿过Transwell小室的数量较对照组显著减少；20μM的SPD处理HCT15和SW620的凋亡率均高于对照组。联合使用SPD和5?Fu处理HCT15和SW620比单独使用5?Fu处理H...     

姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及作用机制

目的:探讨姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法:体外培养人结肠癌SW480细胞株、人结肠癌SW620细胞株至对数生长期，选用不同浓度的姜黄素分别处理两种结肠癌细胞，采用MTT、克隆、流式细胞术、Transwell、Western blot等实验观察姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学作用的影响。结果:MTT实验和克隆实验结果表明姜黄素能够抑制结肠癌细胞的增殖，流式细胞术实验结果表明姜黄素可诱导结肠癌细胞的凋亡，Transwell实验结果表明姜黄素能够抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭，Western blot实验结果表明姜黄素可抑制P13K/AKT信号通路。结论:姜黄素可显著抑制结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移，诱导结肠癌细胞凋亡，其机制可能与抑制P13K/AKT信号通路有关。     

蓝莓花青素对HepG2细胞凋亡及组蛋白乙酰化修饰的影响

目的:探讨蓝莓花青素对人肝癌HepG2细胞凋亡及组蛋白乙酰化修饰的影响。方法:从贵州麻江蓝莓中提取花青素,用高效液相色谱法检测花青素的含量并鉴定。观察蓝莓花青素孵育后,HepG2细胞的形态变化、细胞增殖与凋亡情况,以及细胞组蛋白H3K9、H3K14、H3K18、H3K27乙酰化修饰的情况。结果:与无处理的对照组HepG2细胞比较,不同浓度蓝莓花青素(50、100、150、200、300μg/mL)处理HepG2细胞48 h后,HepG2细胞体积明显缩小,细胞增殖明显抑制(均P0.05),凋亡明显增加,且作用呈随浓度增加而增强;不同浓度蓝莓花青素(50、100、200μg/mL)孵育48 h后,HepG2细胞组蛋白H3K9、H3K14、H3K18、H3K27乙酰化修饰明显增加(均P0.05),且呈浓度依赖性。结论:蓝莓中花青素对HepG2有抑制增殖的作用,其机制可能通过增加组蛋白乙酰化修饰而促进细胞凋亡有关。     

miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达状况,以及miR-338-5p过表达对结肠癌细胞系HCT116和SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法使用实时定量PCR方法检测miR-338-5p在40例临床诊断为结直肠癌患者配对癌组织及癌旁组织中的表达情况。随后使用miR-338-5p-mimics转染结肠癌细胞系HCT116和SW620,确认过表达成功后,分别使用CCK-8法、FITC-AnnexinV．PI法及Propidiumiodide法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和细胞周期的改变。结果①miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达明显低于其在相应的癌旁组织中的表达（P〈0．01）。②与转染阴性对照比较,转染miR-338．5p．mimics后,HCT116和SW620细胞增殖能力明显减弱（P〈0．01）,凋亡率明显增加[HCT116细胞：（11．43±0．67）％比（7．98±0．36）％,P〈0．01;SW620细胞：（10．5±0．2）％比（7．93±0．5）％,P〈0．01],诱导HCT116和SW620细胞G1期阻滞[HCT116细胞：（80．41±1.34）％比（64．87±1．83）％,P〈0．01;SW620细胞：（68．76±0．41）％比（54．89±0．78）％,P〈0．01]。结论miR-338-5p可能作为抑癌基因在结直肠癌中发挥作用,并对细胞增殖、凋亡和周期有显著影响。     

TrkB影响结肠癌细胞SW620侵袭能力及与ERK信号通路活化关系的研究

目的:探讨干扰结肠癌细胞TrkB蛋白表达及抑制ERK活化对细胞增殖、凋亡和侵袭以及细胞内ERK磷酸化水平的影响。方法:应用特异性TrkB-siRNA瞬时转染及ERK特异性抑制剂处理SW620结肠癌细胞,观察SW620细胞增殖、凋亡和侵袭情况以及细胞内ERK磷酸化水平的变化。结果:特异性siRNA转染高表达TrkB的SW620细胞,TrkB蛋白表达减少,ERK的磷酸化水平降低,且转染组细胞数显著低于对照组(P=0.001),转染组的细胞凋亡率显著高于对照组(P=0.000 1),24 h后侵袭至下层小室的细胞数转染组显著低于对照组(P=0.001);ERK抑制剂明显降低SW620细胞ERK磷酸化水平(P=0.001),而对ERK蛋白表达没有影响,且应用ERK抑制剂作用SW620细胞,对照组和处理组中细胞数没有显著差异(P=0.544),对照组和处理组中SW620细胞的凋亡率差异无统计学意义(P=0.103),但对照组24 h后侵袭至下层小室的细胞数显著高于处理组(P=0.0001)。结论:干扰TrkB蛋白表达能够降低高转移结肠腺癌SW620细胞内ERK磷酸化水平,促进细胞凋亡并抑制细胞增殖和侵袭。同时应用ERK特异性抑制剂也显著抑制细胞侵袭。因此ERK信号转导通路可能与TrkB介导的结肠腺癌细胞抗凋亡和侵袭能力的增加相关,沉默TrkB表达可能成为阻断结肠癌转移的新靶点。     

重组人内皮抑素对结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的 观察重组人内皮抑素对结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响.方法 在培养液中加入梯度浓度的重组人内皮抑素(0.1、0.5、1.0,5.0、10.0、20.0mg/L)分别作用24、48、72 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,扫描及透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果 内皮抑素对SW620细胞的增殖有抑制作用.其中,作用48 h的抑制率分别为13.46%、15.38%、20.82%、24.71%、30.12%和37.44%,呈剂量依赖关系.给药后24 h和48 h,内皮抑素组细胞G0/G1期比例增高,而s期细胞比例降低(P＜0.05).72h两组差异无统计学意义(P＞0.05).24 h和48 h的凋亡率分别为(1.430±0.145)%和(1.760±0.054)%,均高于对照组(0.670±0.181)%和(1.260±0.138)%(P＜0.05).透射电子显微镜下,内皮抑素组细胞微绒毛减少,染色质厚薄不均,位于核膜下.结论 重组内皮抑素可以在体外直接抑制结肠癌细胞的增殖,诱导凋亡,影响细胞骨架等结构.

Abstract：

Objective To investigate the effect of endostatin on the proliferation of colon cancer SW620 cells. Methods The SW620 cells were treated by recombinant human endostatin(0. l ,0. 5,1.0,5.0,10.0,20.0 mg/L). The effect of endostatin on the proliferation, cell cycle, apoptosis and ultrastructure of SW620 cells were examined after 24,48 and 72 h. Results The proliferation of SW620 cells were inhibited by endostatin compared with the control group. The inhibiting rates were 13. 46% ,15. 38% ,20. 82% ,24. 71% ,30. 12% and 37.44% .respectively (P ＜0.05). Endostatin arrested SW620 cells at G0/G1 phase (P ＜ 0. 05); The apoptotic rates were (1.430 ± 0. 145) % and (1. 760 ± 0. 054) % in endostatin group after 24 and 48 h, respectively. This was a significant increase when compared with the control group after 24 and 48 h (0. 670 ±0. 181)% and (1.260 ±0. 138)% (P＜0. 05). Under TEM,both the number of protrusions and microfilaments of SW620 cells in the endostatin group decreased. Conclusion Recombination human endostatin inhibits the proliferation of SW620 cells,induce the apoptosis,and changes the skeleton of SW620 cells directly.     

BH3-only在奥沙利铂诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的研究BH3-only基因表达在奥沙利铂诱导人结肠癌细胞株凋亡中的作用及其机制。方法采用不同浓度（0．3、0．6、1．25、2,5、5、10和20mg／L）奥沙利铂处理人结肠癌细胞株SW480及HT29,应用MTT检测细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测凋亡情况;荧光定量PCR检测BH3-only基Bim和PUMA表达。结果不同浓度奥沙利铂分别作用于结肠癌细胞SW480后,出现不同程度的细胞生长抑制作用,呈剂量依赖性。5mg／L和10mg／L浓度的奥沙利铂作用于SW480细胞24h后,细胞凋亡率分别为（4．87±0．55）％和（12．10±1．04）％,作用48h后分别为（11．47±0．85）％和（30．07±2．01）％,作用72h后分别为（28．99±2．12）％和（38．32±3．15）％,均显著高于相应时间点对照组细胞的凋亡率[（0．30±0．10）％、（0．40±0．10）％和（0．50±0．20）％,均P〈0．01]。同时Bim和PUMAmRNA表达水平也显著高于对照组（P〈0．05）。而同样处理的HT29细胞其生长抑制率、细胞凋亡率及Bim和PUMAmRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论奥沙利铂具有抑制结肠癌细胞株SW480生长并诱导其凋亡的作用,其机制可能与促凋亡相关基因BH3-only（Bim和PUMA）表达增强有关。     

去甲二氢愈创木酸对前列腺癌PC-3细胞作用机制的实验研究

目的 观察脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响并探讨其相关机制. 方法以不同浓度(0、20、40,80和160 μmol/L)的NDGA干预体外培养的前列腺癌PC-3细胞.通过细胞形态学观察、四甲基偶氮唑盐比色法及TUNEL法检测NDGA对PC-3细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,流式细胞术检测其活化Caspase-3的表达情况.结果 40、80、160μmol/L NDGA对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,作用强度具有时间和剂量依赖性.0、20、40、80和160μmol/L NIX;A作用48 h后,PC-3细胞凋亡指数分别为(2.9±0.2)%、(3.2±0.3)%、(68.5±0.8)%、(86.2±0.3)%和(86.9±0.6)%,后3组与第1组比较差异有统计学意义(P<0.05).0、20,40、80和160/μmol/L NDGA作用PC-3细胞48 h后活化Caspase-3的阳性率分别为(3.9±0.0)%、(4.1±0.1)%、(55.5±0.8)%、(75.1±0.3)%和(76.3±0.7)%,后3组与第1组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 NDGA能抑制前列腺癌PC-3细胞增殖、诱导其凋亡,作用呈剂量和时问依赖性,其机制可能与PC-3细胞Caspase-3活化有关.     

Modification of gene products involved in resistance to apoptosis in metastatic colon cancer cells: roles of Fas, Apaf-1, NFkappaB, IAPs, Smac/DIABLO, and AIF

BACKGROUND: Colon cancer becomes resistant to apoptosis as it acquires metastatic potential. SW480 and SW620 colon cancer cells were established from the same patient at different stages of tumor progression. The stage III colorectal cancer cell line (SW620) is more resistant to apoptosis. In the present report, we investigated the apoptotic gene products that might account for colon cancer evasion of immune attack and chemoradioresistance-induced apoptosis. METHODS: SW480 and SW620 cells were used for this experiment. Type 1 apoptosis was induced by CH-11. Type 2 apoptosis was induced by cisplatin and ionizing radiation. Apoptosis was determined by caspase-3 activity and terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling. Gene products Fas, TRAIL, c-FLIP, Bid, BAX, Bcl-2, Bcl-xL, Apaf-1, nuclear factor-kappa B, Smac/DIABLO, apoptosis inducing factor, and the inhibitors of apoptosis were investigated by immunocytochemistry and Western blot analyses. RESULTS: SW620 cell lines were more resistant to both Type 1 and Type 2 apoptosis induced by CH-11, cisplatin, and ionizing radiation, respectively. Examination of the extrinsic pathway demonstrated Fas receptor to be down-regulated in SW620. Apaf-1 was decreased in SW620 cells; while other members of the mitochondrial pathway including Bax, Bid, Bcl-xL, and Bcl-2 demonstrated minimal alterations of protein levels in both cell lines. Survivin and XIAP protein levels were increased in SW620 cells, which correlated with nuclear expression of nuclear factor-kappa B in SW620 cells but not SW480. Mitochondrial-released factors including Smac/DIABLO and apoptosis inducing factor were increased in SW480 cells. CONCLUSIONS: SW620 cells have acquired genetic defects both in the intrinsic and extrinsic pathways of apoptosis, which may explain in part the ability of colon cancer cells to escape the immune system and to become chemoradioresistant. These genes may be potential targets for chemoradiosensitization in advanced colorectal cancer.     

核心蛋白聚糖对膀胱癌细胞生长抑制机制的研究

目的 探讨核心蛋白聚糖（DCN）对膀胱癌细胞生长的影响。方法 以膀胱癌T24细胞株为研究对象，采用MTT法检测不同浓度、不同时间的DCN对T24细胞存活率的作用，采用流式细胞术分析DCN对T24细胞周期及凋亡的影响，采用ELISA和Western blot法检测DCN对转化生长因子-β1（TGF-β1）和P21蛋白表达的影响。结果 与其他浓度相比，40、50 μg/mL DCN作用72 h时对T24细胞的抑制作用最强，差异有统计学意义（P<0.05），且G1期细胞达到最高值，S期细胞达最低值（P<0.001）。5、10、20、30、40、50 μg/mL DCN作用72 h后均能促进T24细胞凋亡，且在40 μg/mL时达到最大值(P<0.001)；与0 μg/mL相比，5、10、20、30、40、50 μg/mL DCN作用72 h对TGF-β1表达均有抑制作用, 最明显的抑制作用浓度为40 μg/mL(P<0.001)；与0 μg/mL相比，40 μg/mL DCN能促进P21蛋白上调（P<0.001）。结论 DCN在体外能够抑制膀胱癌T24细胞生长，诱导其凋亡，其可能的作用机制为下调TGF-β1及上调P2l蛋白表达。     

前列腺素E1抗大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的最佳浓度探讨

目的探讨在体外条件下前列腺素E1抗大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的最佳浓度。方法提取SD大鼠骨髓间充质干细胞,取P3-P5代的大鼠骨髓间充质干细胞在体外缺血清缺氧条件下进行培养,将前列腺素E1分别以0μg/L(对照组)、1μg/L、10μg/L、20μg/L、30μg/L、40μg/L、50μg/L、100μg/L的浓度作用于大鼠骨髓间充质干细胞,并设置48 h,72 h二个时间点,用流式细胞检测的方法测定每个时间点及每个浓度组的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡率,最后对数据进行统计分析。结果在各个时间点中,质量浓度为1μg/L、10μg/L、20μg/L、30μg/L、40μg/L、50μg/L、100μg/L的前列腺素E1均可减少大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡,其中20μg/L浓度组的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡率最低;前列腺素E1在作用48 h后,大鼠骨髓间充质干细胞凋亡率最低。结论体外缺血清缺氧条件下,前列腺素E1抗大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的最佳浓度是20μg/L,且其抗凋亡作用在48 h时达到高峰。