原代人绒毛滋养层细胞分离培养及其对巨细胞病毒的易感性研究

目的通过分离培养原代人绒毛滋养层细胞(HTCs)并检测其对人巨细胞病毒(HCMV)的易感性,探讨胎儿宫内感染HCMV的可能途径。方法将30例健康孕妇经负压真空吸引手术所得的流产早孕绒毛组织充分剪碎,用0.25%胰蛋白酶和0.2%DNA酶混合消化法制备细胞悬液,细胞悬液经200目不锈钢筛网过滤后用Percoll液密度梯度离心对HTCs进行初步纯化,细胞传代中应用反复胰酶消化法对HTC进行3～5次纯化,通过细胞学形态观察和免疫荧光染色方法对HTCs进行鉴定;用HCMV病毒株体外感染HTCs,应用PCR、Westernblot和免疫荧光方法对HCMV基因及蛋白进行检测,从而确定HTCs对HCMV的易感性。结果 Percoll分离联合胰酶、DNA酶消化法对原代HTCs有较好的分离效果,免疫荧光染色结果表明90%以上细胞表达CK-7相关抗原,HTCs体外感染HCMV 72h后形态学发生明显改变,病毒基因及蛋白均呈阳性表达。结论原代HTCs对HCMV易感,通过HTCs感染胎儿可能是HCMV宫内感染的重要传播途径之一。     

原代人脐静脉内皮细胞的分离培养及其对人巨细胞病毒的易感性研究

目的 通过检测原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对人巨细胞病毒(HCMV)的易感性,探讨胎儿宫内感染HCMV的可能途径.方法 无菌条件下取30例健康产妇正常娩出的胎盘端游离脐带,向脐静脉灌注0.1%胶原酶Ⅱ 37 ℃消化15 min,通过对细胞的形态学观察和免疫荧光染色方法对细胞进行纯度鉴定;用HCMV病毒株体外感染HUVEC,通过对HCMV基因及蛋白检测确定HUVEC对HCMV的易感性.结果 0.1%胶原酶Ⅱ、15 min的消化方法对HUVEC有较好的分离效果,免疫荧光染色结果表明HUVEC细胞内有Ⅷ因子相关抗原表达; HCMV体外感染HUVEC 72 h后形态学有明显改变,病毒基因及蛋白均有阳性表达.结论 原代HUEVC对HCMV易感,通过脐静脉的血液传播可能是胎儿宫内感染HCMV的重要途径之一.     

TNF-α、IL-10、bcl-2、bax与人巨细胞病毒导致胚胎停育的相关性

目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)导致胚胎停育的分子机制. 方法 采用荧光定量PCR(FQ-PCR)分别对41例胚胎停育妇女(病例组)及30例正常孕妇(对照组)的流产组织进行HCMV DNA检测;对HCMV阳性病例进行HE染色观察形态学的改变,采用免疫组织化学(IHC)检测其局部细胞因子1NF-α、IL-10、bd-2、bax的变化,并与对照组进行比较. 结果 病例组HCMVDNA的阳性检出率为41.46%,对照组的阳性检出率为13.33%,两组之间比较差异具有统计学意义(P<0.01);HCMV阳性病例胎盘绒毛水肿明显,炎细胞浸润,鲜见巨细胞形成;病例组IL-10较对照组升高(P<0.05),bcl-2较对照组降低(P<0.05),TNF-α、bax表达两组差异无统计学意义. 结论 HCMV可能是导致胚胎停育的病原之一,HCMV感染加重了孕妇"免疫抑制"引起胎盘绒毛及蜕膜组织的凋亡致使胎儿宫内发育受限最终导致胚胎停育.     

免疫学

950393绒毛组织免疫组织化学技术检测早孕期人巨细胞病班宫内感染的研究/董飞文…//生殖医学杂志一1994,3(2)一118 本文作者采用孕妇血清中抗体和早孕绒毛中人巨细胞病毒测定,对北京地区早孕妇女中的HCMv宫内感染进行了调查。结果表明:402名早孕妇女血清HCMv一坛M抗体阳性检出率为;万.HCMv一坛八抗体阳性检出率为2环;总检出率为5.5%。早孕绒毛标本HCMV的阳性检出率为10.(1/、高于新生几中的调式洁果(。5~2.5环),表明孕早明的HCMV感染比较严重.对402份绒毛标本中的招份绒毛组织用PCR技术检测HCMV.结果在16份绒毛DNA中检测到特异…     

地中海贫血高危妊娠胎儿产前绒毛、羊水中巨细胞病毒DNA的检测

目的:了解地中海贫血高危妊娠胎儿宫内人巨细胞病毒(HCMV)感染状况.方法:应用聚合酶链反应技术(PCR)对47例地中海贫血高危妊娠胎儿产前绒毛组织、羊水细胞DNA进行回顾性人巨细胞病毒DNA(HCMV-DNA)检测.结果:产前绒毛组织29例,检出HCMV-DNA 2例,阳性率为6.9%;羊水细胞18例,检出HCMV-DNA1例,阳性率为5.6%.结论:地中海贫血高危妊娠胎儿与本地区的正常人群一样,产前绒毛、羊水中HCMV感染率较低.     

孕妇体内人巨细胞病毒定量阈值与胎儿宫内感染的关系

目的 探讨孕妇体内人巨细胞病毒定量阈值与胎儿宫内感染的关系.方法 应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对53例HCMV感染的孕妇血液中HCMV DNA进行定量检测,并检测其胎儿血、新生儿血或胚胎绒毛中HCMV DNA含量.结果 胎儿发生宫内感染及妊娠不良结局与孕妇血中HCMV DNA含量有关,发生胎儿宫内感染的孕妇,其HCMV DNA含量达到105copies/mL以上,且随着血中HCMV DNA含量的增高,感染率呈显著增高趋势.结论 孕妇血中HCMV DNA含量升高是胎儿宫内HCMV感染及发生妊娠不良结局的重要因素之一,当孕妇血中病毒含量>105copies/mL时,其病毒含量可作为导致胎儿宫内感染的参考阈值.     

母乳喂养对先天性巨细胞病毒感染患儿巨细胞病毒-DNA及生长发育的影响

<正>巨细胞病毒(CMV)是一种常见的易导致孕妇宫内感染的病毒,主要通过先天性感染(母婴传播)和后天获得性感染(产道感染、母乳喂养)等途径进行传播。先天性巨细胞病毒感染是指感染人巨细胞病毒(HCMV)的母亲所生育的婴儿在出生14 d以内证实有HCMV感染,是由宫内感染所导致,可分为症状性感染和无症状性感染。宫内感染的胎儿发生死胎、流产、早产、发育迟缓的概率较大。10%～15%的先天性     

乙型肝炎病毒宫内感染相关因素的探讨

目的探讨孕妇乙型肝炎病毒感染状态及胎盘感染与宫内感染关系，进而分析乙型肝炎病毒宫内感染的危险因素。方法采用荧光定量PCR技术及酶联免疫吸附试验，对92例HBsAg阳性孕妇及其新生儿的外周血行HBV DNA及乙肝血清标志物检测。采用免疫组化S-P法，对92例HBsAg阳性孕妇分娩时胎盘组织行HBsAg及HBcAg的检测。结果（1）HBeAg阳性孕妇与HBeAg阴性孕妇HBV宫内感染率分别为21．2％（11／52）和0（0／40），差异有显著性（P〈0．01）；HBV DNA阳性孕妇与HBV DNA阴性孕妇HBV宫内感染率分别为18．64％（11／59）和0（0／33），差异有显著性（P〈0．025）。（2）92例HBsAg阳性孕妇的胎盘中共检测出43例HBsAg和（或）HBcAg阳性，阳性率由胎盘的母面至胎儿面有逐渐下降的趋势。由胎盘屏障的蜕膜细胞（DC）、滋养层细胞（TC）、绒毛间质细胞（VSC）和绒毛毛细血管内皮细胞（VCEC）感染而致的宫内传播的相对危险度比值比（0R）分别为4．53、7．15、9．33和24．33，0R值从胎盘的母面至胎儿面有逐渐上升的趋势。结论新生儿宫内感染与孕妇乙肝感染状态有关，HBV宫内感染以经胎盘感染为主，感染胎儿的途径可能是通过细胞转移方式实现的，胎盘屏障对胎儿有一定的保护作用。HBeAg阳性、HBV DNA阳性及绒毛毛细血管内皮细胞（VCEC）感染是新生儿宫内HBV感染的危险因素。     

间接血凝试验检测巨细胞病毒IgG和IgM抗体的方法学研究

人巨细胞病毒(HCMV)是新生儿和免疫缺陷患者的重要病原。通过胎盘、输血、器官移植和密切接触是 HCMV 传播的重要途径。输血和器官移植后发生HCMV 感染的危险性与供者 HCMV IgG     

ELISA法检测复方黄芪颗粒体外抗人巨细胞病毒作用

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染十分普遍。在妇产科,妊娠妇女孕早期原发HCMV感染可造成流产、早产、死胎、畸形、宫内生长迟缓、智力低下及听力损害等。目前。尚无对妊娠期HCMV活动性感染安全有效的治疗方法。本研究采用中药复方黄芪颗粒在细胞培养中干预HCMV感染细胞,观察了其对细胞病变的抑制情况,并探讨了其对HCMV的抑制作用。报告如下。     

Expression and its clinical significance of HLA-G in HCMV-infected placenta] villi at early pregnant stage

Objective:To study the expression and its clinical significance of HLA-G in HCMV intrauterine infected placental villi at early pregnant stage. Methods:PCR (polymerase chain reaction) was used to screen the peripheral blood for HCMV-DNA in 462 women who had willingly undergone induced abortion. Then immunohistochemistry was also used to detect expressions of mouse anti-HCMV early antigen (HCMV-EA) and mouse anti-HLA-G in HCMV-DNA positive cases' placental villi. The difference of HLA-G expressions between the intrauterine infection group (HCMV-EA positives), the intrauterine infection-free group(HCMV-EA negatives) and the normal control group (SO cases of healthy early placental villi) was compared. Results: Of the 78 cases, which were detected HCMV-DNA positive, 11 (14. 10%) were HCMV-EA positive. Compared with the other two groups, HLA-G expressions in the intrauterine infection group were both obviously decreased (both P<0. 001). HLA-G expression positions in all three groups were mainly located in the cytotrophoblast. Conclusion:Intrauterine HCMV infection at early pregnant stage is closely related to HLA-G expression at the maternal-fetal interface. The virogenetic products may affect the expression of HLA-G at the maternal-fetal interface and that of its immunological function, thus leading to different clinical outcomes.     

Expression and its clinical significance of HLA-G in HCMV-infected placental villi at early pregnant stage

Objective：To study the expression and its clinical significance of HLA-G in HCMV intrauterine infected placental villi at early pregnant stage. Methods：PCR （polymerase chain reaction） was used to screen the peripheral blood for HCMV-DNA in 462 women who had willingly undergone induced abortion. Then immunohistochemistry was also used to detect expressions of mouse anti-HCMV early antigen （HCMV-EA） and mouse anti-HLA-G in HCMV-DNA positive cases＇ placental villi. The difference of HLA-G expressions between the intrauterine infection group（HCMV-EA positives）, the intrauterine infection-free group（HCMV-EA negatives） and the normal control group （50 cases of healthy early placental villi） was compared. Results： Of the 78 cases, which were detected HCMV-DNA positive, 11 （14.10%） were HCMV-EA positive. Compared with the other two groups, HLA-G expressions in the intrauterine infection group were both obviously decreased（both P〈0. 001）. HLA-G expression positions in all three groups were mainly located in the cytotrophoblast. Conclusion：Intrauterine HCMV infection at early pregnant stage is closely related to HLA-G expression at the maternal-fetal interface. The virogenetic products may affect the expression of HLA-G at the maternal-fetal interface and that of its immunological function, thus leading to different clinical outcomes.     

HBV感染对胎盘表型及胎盘效率影响的临床观察*

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染的胎盘发生胎盘表型及胎盘效率的改变,寻找其中规律,为HBV母婴传播的早期诊断提供理论依据。方法 选取2016年10月—2017年5月延安大学附属医院132例HBsAg（+）足月妊娠孕妇临产前胎盘表型及分娩后的胎盘组织作为研究对象。于孕妇临产前B超下测量胎盘长轴长度（长）、短轴长度（宽）、厚度、估算胎盘重量及胎儿重量,并计算胎盘体积及其效率;采用化学发光微粒子免疫法（CMIA）及聚合酶链反应（PCR）检测分娩后胎盘组织HBsAg定性和/或HBV DNA定性。结果 132例HBsAg（+）孕妇分娩的132例胎盘中,HBsAg（+）和/或HBV DNA（+）11例,阴性121例。阳性率为8.33%（11/132）;HBV感染阳性的胎盘长度、体积及效率与HBV感染阴性比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,前者较后者小;两者宽度比较,差异无统计学意义（P?>0.05）。结论 HBV感染可使胎盘形态发生改变,且早在胎盘时期已经表型出来。HBV感染可使胎盘长度、体积减小,效率明显降低,从而影响胎盘功能,最后导致HBV宫内感染的发生。     

乙肝表面抗原阳性孕妇胎盘组织中bcl-2、bax和HBcAg的表达

目的 通过检测乙肝表面抗原（HBsAg）阳性孕妇胎盘组织细胞中bcl-2、bax基因及HBcAg的表达,探讨bcl-2、bax与HBcAg之间的关系。方法 46例HBsAg阳性孕妇足月产胎盘（排除其他疾病）为HBV组,25例HBsAg阴性（HBV-DNA阴性）足月产妇胎盘做为对照组。HBV组中根据HBcAg结果分为阳性组和阴性组。采用免疫组化法测定两组孕妇胎盘组织细胞中bcl-2、bax、HBcAg的表达。结果 （1）HBV组和对照组比较bcl02基因表达无统计学意义（P〉0．05）,bax基斟表达阳性率明显高于对照组,两者比较有统计学意义（P〈0．05）;（2）胎盘组织细胞中HBcAg的表达：HBcAg阳性信号表达于胎盘各层细胞中,滋养层细胞感染率为41．3％,绒毛问质细胞感染率为15．2％,绒毛毛细血管内皮细胞感染率为6．5％;（3）HBcAg阳性组与HBcAg阴性组中bcl-2基因表达比较无统计学意义（P〉0．05）,bax基因表达在HBcAg阳性组明显高于HBcAg阴性组,有统计学意义（P〈0．05）。结论 HBV感染孕妇胎盘组织中bax表达明显升高,提示bax可能参与了胎盘组织细胞凋亡的过程;HBsAg阳性孕妇胎盘中HBcAg可能是逐层感染胎盘各型细胞,且胎盘组织中HBcAg阳性者bax表达与HBcAg关系密切。     

贫困山区早孕期HCMV宫内感染与UL54基因突变的研究

目的:探讨贫困山区早孕期人巨细胞病毒(HCMV)宫内活动性感染与HCMVUL54基因突变的关系。方法:采用免疫组织化学(SABC)PCR-RFLP的方法检测人绒毛组织中HCMV早期抗原的存在及HCMVUL54基因密码子501是否发生突变。结果:贫困山区早孕期妇女HCMV宫内活动性感染率为18.91%;PCR-RFLP分析结果显示,在早孕期HCMV宫内感染者中UL54501密码子未发生突变。结论:贫困山区早孕期HCMV宫内感染与HCMVUL54基因密码子501突变无关,但不排除其他位点的突变或其他形式异常导致病毒致病性改变存在的可能性。     

乙肝病毒宫内传播与胎盘感染的关系

目的：母亲乙肝病毒（ＨＢＶ）感染在宫内即可造成其胎儿感染，但其机理尚不清楚，作者试图了解胎盘细胞中ＨＢＶ的感染情况，宫内传播的危险因素和母胎传播的可能途径。     

Diagnostic value of human cytomegalovirus late mRNA detection in active intrauterine infection

目的：探讨人巨细胞病毒晚期mRNA检测在宫内活动性感染中的应用价值。方法：采用逆转录-PCR法对42例HCMV-IgM阳性孕妇外周血及部分胎儿附属物进行HCMV晚期mRNA检测。结果：42例IgM阳性孕妇检出晚期mRNA23例,两符合率为54.7％。对其中13例mRNA阳性孕妇胎儿附属物进行检测发现7例阳性,母婴传播率为53.8％;而12例mRNA阴性HCMV-DNA阳性孕妇胎儿附属物中仅1例阳性,母婴传播率为8.3％;两有非常显性差异。结论：HCMV-IgM的阳性结果并不能完全准确地反映受检时HCMV的活动状态。HCMV的活动状态与母婴传播率密切相关,mRNA的检测不仅能够正确反映HCMV活动性感染时的宫内传播率,而且可以了解受检时胚胎或胎儿组织内HCMV的活动状态,并估计其愈后。     

In vitro transmission of HCMV between fibroblasts and peripheral blood leukocytes in the presence of IL-4

We demonstrated transmission of human cytomegalovirus (HCMV) from the human lung fibroblast MRC-5 to peripheral blood leukocytes (PBLs). mRNA of the HCMV immediately-early (IE) antigen was detected in PBLs cultured with IL-2 or IL-2 + IL-4 that made direct contact with HCMV-infected MRC-5, whereas it was not detected in PBLs prevented from making cell-to-cell contact. However, mRNA of HCMV IE was not detected in PBLs cultured with IL-2 and IFN-gamma that made direct contact with HCMV-infected MRC-5. Transmission of the pp65 antigen was increased in culture medium containing IL-4. At a higher viral infection titer, cell-free HCMV infected adherent PBLs cells. The subset, which did not adhere, did not infect cell-free viruses even at a very high multiplicity of infection. Moreover, the adhered subset of PBLs infected with HCMV was able to transmit HCMV to non-infected fibroblasts. Our results suggest that cell-to-cell contact (when PBLs make direct contact with HCMV-infected cells) is important in the mechanism of HCMV transmission and that the adherent cells of PBLs are one of the most important vehicles for HCMV infection. Moreover, we suggest that type 2 cytokines such as IL-4 enhance the transmission of HCMV to PBLs.     

乙型肝炎病毒宫内感染的机制

目的 探索乙型肝炎病毒（HBV）宫内传播的机制和时间。方法 孕妇和新生儿血清HBsAg和HBVDNA检测采用ELISA和PCR法,引产胎儿肝组织和胎盘的HBsAg,HＢt HBVDNA检测采用ＡＢＣ免疫组化染色和原位杂交。结果 母亲外周血HBV高浓度（≥0.02ug.L^-1)、先光早产和胎盘毛毛细血管内皮细胞HBV感染导致宫内感染发生的危险性比值比（OR）分别为7.06,13.08和16.15,胎盘HBV感染从孕早期、孕中期至足月分娩愈来愈严重且广泛,在足月分娩胎盘中,从母面蜕膜细胞至胎儿面绒毛毛细血管内皮细胞HBV感染率呈逐渐下降趋势,但胎儿宫内感染的OR值却越来越大,1例孕19wk引产胎儿肝组织中检出HBVDNA和抗原。结论 胎儿宫内感染的发生可经2条途径,即血源性和细胞性,宫内感染可发生孕9wk前,但主要时期是在孕晚期。