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1.
目的:探讨miR-1229-5p对SW480细胞生物学功能的影响和作用机制。方法:采用瞬时转染在SW480细胞中过表达miR-1229-5p,进行细胞克隆、EdU实验、MTT、细胞划痕、Transwell小室迁移及侵袭实验,检测miR-1229-5p mimics组与对照组结直肠癌细胞SW480生物学功能变化。转染过表达miR-1229-5p慢病毒后进行裸鼠皮下成瘤实验,观察miR-1229-5p在体内对细胞增殖能力的影响。通过预测软件TargetScan筛选出X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)作为miR-1229-5p的潜在下游靶基因,并检测miR-1229-5p对其蛋白表达的影响。在SW480细胞中转染XAF1过表达质粒,共转染miR-1229-5p后进行回复实验验证miR-1229-5p通过靶向XAF1促进SW480细胞增殖及侵袭。结果:miR-1229-5p mimics组较miR-NC组细胞的增殖、迁移及侵袭能力均提高(P<0.01);miR-1229-5p组瘤体体积高于miR-NC组(P<0.01);miR-1229-5p组对靶基因XAF1表达量低于miR... 相似文献
2.
目的:探讨微小RNA-216a-5p(miR-216a-5p)靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白(WASL)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法:收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物(miR-216a-5p)、模拟物阴性对照(miR-con)、沉默对照(si-con)、沉默WASL的小干扰RNA(si-WASL)、抑制物阴性对照(anti-miR-con)、miR-216a-5p抑制物(anti-miR-216a-5p)、miR-216a-5p及空载质粒(pcDNA)和miR-216a-5p及WASL过表达质粒(pcDNA-WASL)分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR(Real-time RT-qPCR)和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果:与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低(P<0.05),WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),两者呈负相关关系(r=-0.317,P<0.01)。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平(P<0.01)和细胞增殖活性均明显降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。 相似文献
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目的:探讨microRNA-9-5p (miR-9-5p)靶向肌细胞增强因子2C (MEF2C)对腺泡状横纹肌肉瘤(ARMS)细胞生物学行为的影响,为ARMS的分子诊断和靶向治疗提供依据。方法:qRT-PCR法检测ARMS组织和细胞中miR-9-5p和MEF2CmRNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因检测293T细胞中荧光素酶活性,Western blotting法检测细胞中MEF2C蛋白表达水平。结果:ARMS组织和细胞中miR-9-5p表达水平高于正常骨骼肌组织和HSKMC细胞(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-9-5p抑制剂组RH30细胞中miR-9-5p表达水平降低(P<0.01),细胞增殖率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞侵袭和迁移数降低(P<0.05)。加入miR-9-5p后,共转染MEF2C-3'-UTR-WT的293T细胞中荧光素酶活性降低(P<0.01);与miR-NC组比较,miR-9-5p抑制剂组RH30细胞中MEF2C mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。ARMS组织中MEF2C mRNA表达水平低于正常骨骼肌组织(P<0.01),且与ARMS组织中miR-9-5p表达呈负相关关系(r=-0.542,P<0.05);RH30细胞和PLA802细胞中MEF2CmRNA表达水平低于HSKMC细胞(P<0.01)。与转染对照质粒(EV)比较,转染MEF2C过表达质粒后RH30细胞中MEF2C mRNA表达水平升高(P<0.01),细胞增殖率降低(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞侵袭数降低(P<0.05),细胞迁移数降低(P<0.01)。与转染si-NC比较,转染MEF2CsiRNA后RH30细胞中MEF2C mRNA表达水平降低(P<0.05),细胞增殖率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞侵袭数升高(P<0.01),细胞迁移数升高(P<0.01)。结论:miR-9-5p通过直接靶向MEF2C mRNA的3'-UTR诱导mRNA降解而抑制MEF2C表达,从而促进RH30细胞的增殖、侵袭、迁移以及抗凋亡能力。 相似文献
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目的 探讨上调Mg2+/Mn2+依赖性蛋白磷酸酶1F(PPM1F)对鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移的影响,并阐明其作用机制。 方法 鼻咽癌HONE-1细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1质粒)和pcDNA3.1-Flag-PPM1F组(转染pcDNA3.1-Flag-PPM1F质粒)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞中PPM1F和E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测2组细胞增殖活性和克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中迁移细胞数。 结果 与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Flag-PPM1F 组细胞中PPM1F mRNA表达水平明显升高(P<0.01),且PPM1F蛋白表达量明显增加,细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),细胞增殖活性、克隆形成率和划痕愈合率明显降低(P<0.05或P<0.01),迁移细胞数明显减少(P<0.05)。 结论 上调PPM1F表达能够抑制鼻咽癌HONE-1 细胞增殖和迁移,其机制可能与细胞间的黏附作用有关。 相似文献
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目的 探讨长链非编码RNA PTENP1(以下简称“PTENP1”)在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法 选取2019年1月至2022年12月海南省妇女儿童医学中心诊断的54例的癌组织与癌旁组织,另选取宫颈癌细胞系(HeLa、SiHa、C33A、Caski)和正常宫颈上皮细胞系(H8),采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测PTENP1、miR-3611、PTEN基因、PTEN蛋白水平。选取合适的宫颈癌细胞系,比较PTENP1在细胞质和细胞核中的表达情况,并进一步将其分为空白组(无处理)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-PTENP1组(转染pcDNA3.1-PTENP1)、NC组(阴性对照,转染模拟物或抑制剂NC)、miR-3611抑制剂组(转染miR-3611 抑制剂)、pcDNA3.1-PTENP1+NC组(转染pcDNA3.1-PTENP1和NC)和pcDNA3.1-PTENP1+miR-3611 mimics组(转染pcDNA3.1-PTENP1和miR-3611模拟物)。比较空白组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-PTENP1组PTENP1、miR-3611、PTEN基因、PTEN蛋白及上皮间质转化的相关指标,采用细胞活力检测及流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况;比较空白组、NC组、miR-3611抑制剂组miR-3611、PTEN基因、PTENP1水平;比较pcDNA3.1-PTENP1+NC组和pcDNA3.1-PTENP1+miR-3611 mimics组的细胞增殖情况及上皮间质转化的相关指标。采用双萤光素酶报告基因及RNA下拉实验验证miR-3611与PTENP1、PTEN基因的靶向关系。 结果 癌组织PTENP1、PTEN基因、PTEN蛋白水平低于癌旁组织,miR-3611水平高于癌旁组织(P<0.05)。HeLa、SiHa、C33A、Caski细胞PTENP1、PTEN基因、PTEN蛋白水平低于H8细胞,miR-3611水平高于H8细胞(P<0.05),后续实验选择HeLa、Caski细胞进行,PTENP1在HeLa、Caski细胞质中高表达。pcDNA3.1-PTENP1组PTENP1、凋亡率、上皮钙黏素、PTEN基因高于空白组,细胞增殖活力(培养48、72、96 h)及ZEB1、Snail、波性蛋白、miR-3611低于空白组(P<0.05)。miR-3611抑制剂组miR-3611低于空白组,PTEN基因、PTENP1高于空白组(P<0.05)。pcDNA3.1-PTENP1+miR-3611 mimics组细胞增殖活力(培养48、72、96 h)、上皮钙黏素低于pcDNA3.1-PTENP1+NC组,ZEB1、Snail、波性蛋白高于pcDNA3.1-PTENP1+NC组(P<0.05)。野生型miR-3611转染生物素标记的HeLa、Caski细胞的PTENP1水平高于转染生物素标记的空白细胞和突变型miR-3611转染生物素标记的细胞,分别转染PTENP1或PTEN野生型和miR-3611模拟物的293T细胞的相对萤光活性低于仅转染PTENP1或PTEN野生型的293T细胞(P<0.05)。结论 PTENP1通过竞争性结合miR-3611调控PTEN表达影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。 相似文献
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目的:探讨miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其作用机制。方法:检测乳腺癌组织、癌旁组织、MCF-7细胞和MCF-10A细胞中miR-367相对表达水平。将miR-NC或miR-367-inhibitor转入MCF-7细胞作为阴性对照组和miR-367-inhibitor组,检测2组MCF-7细胞活性、细胞集落数、Ki67阳性表达率、细胞划痕愈合率、侵袭细胞数和KLF4相对表达水平。将miR-NC或miR-367-mimic转入MCF-7细胞作为阴性对照组和miR-367-mimic组,检测2组MCF-7细胞集落数、细胞划痕愈合率、侵袭细胞数和KLF4相对表达水平。结果:与癌旁组织或MCF-10A细胞比较,乳腺肿瘤组织和MCF-7细胞中miR-367相对表达水平均明显升高(P<0.01)。与阴性对照组比较,miR-367-inhibitor组MCF-7细胞中miR-367相对表达水平、细胞活性、细胞集落数、Ki67阳性表达率、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数均明显降低(P<0.01),KLF4相对表达水平明显升高(P<0.01);与阳性对照组比较,miR-367-mimic组MCF-7细胞中miR-367相对表达水平、细胞集落数、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数均明显升高(P<0.01),KLF4相对表达水平明显降低(P<0.01)。结论:miR-367可促进MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制KLF4的表达有关。 相似文献
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目的探讨miR-299-3p靶向调控OCT4B1对结直肠癌细胞SW480增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用。 方法将SW480细胞分为NC组、mimics组、inhibitor组,采用MTT法检测细胞活力,结晶紫染色检测单克隆形成数,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR测定细胞miR-299-3p和OCT4B1 mRNA,蛋白免疫印迹法测定OCT4B1蛋白表达。荧光素酶报告基因检测miR-556-3p对SW480细胞OCT4B1活性的调控作用。 结果与NC组比较,miR-299-3p水平、细胞凋亡率mimics组升高,inhibitor组降低,且mimics组高于inhibitor组(P<0.05);OCT4B1 mRNA和蛋白水平、细胞穿膜数、细胞存活率、单克隆形成数mimics组降低,inhibitor组升高,且mimics组低于inhibitor组(P<0.05)。 结论miR-299-3p过表达可抑制结直肠癌细胞SW480增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡,可能与miR-299-3p抑制OCT4B1 mRNA和蛋白表达有关。 相似文献
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目的:探讨miR-152通过靶向成纤维细胞生长因子2(FGF2)对肺癌A549细胞系的增殖和侵袭的作用机制。方法:通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549细胞中miR-152和FGF2的表达情况;采用转染技术,分别特异性表达肺癌A549细胞系中miR-152和FGF2基因的表达。将肺癌A549细胞系分为6组:miRNA 空转组(miR-NC组)、miR-152 过表达组(miR-152 mimics组)、miR-152 抑制组(miR-152 inhibitor组)、FGF2过表达空转组(pcDNA3.1-NC组)、FGF2过表达组(pcDNA3.1-FGF2组)和miR-152过表达+FGF2过表达组(miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组)。通过qPCR检测A549细胞系中miR-152和FGF2的表达水平;细胞克隆和Transwell小室实验分别检测A549细胞系的增殖和侵袭能力;采用双荧光报告基因法验证miR-152与FGF2结合情况;Western印迹法检测A549细胞系中FGF2、自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)Ⅱ/Ⅰ、beclin1和p62的表达量。结果:qPCR结果显示,与正常上皮细胞BEAS-2B比较,肺癌A549细胞中miR-152的表达量显著降低(P<0.01),而FGF2的表达量显著增加(P<0.01)。TargetScan生物信息学软件预测显示miR-152与FGF2的3′UTR结合,双荧光报告基因检测结果显示,miR-152与FGF2直接结合。细胞克隆和Transwell小室实验结果显示,与miR-NC组比较,miR-152 mimics组中的A549细胞系的增殖和侵袭能力显著减低(P<0.05),miR-152 inhibitor组的增殖和侵袭能力显著增加(P<0.05)。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FGF2组中的A549细胞系的增殖和侵袭能力显著增加(P<0.05)。与miR-152 mimics组比较,miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组中A549细胞系的增殖和侵袭能力显著增加(P<0.05)。Western印迹结果显示,与miR-NC组比较,miR-152 mimic组FGF2和p62蛋白表达显著降低(P<0.05),但LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1的表达量显著增加(P<0.05),而miR-152 inhibitor组结果与之相反。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FGF2组FGF2和p62蛋白表达显著增加(P<0.05),而LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1的表达量显著降低(P<0.05)。与miR-152 mimics组比较,miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组FGF2和p62蛋白表达显著增加(P<0.05),LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论:miR-152靶向FGF2抑制肺癌A549细胞系自噬,从而降低增殖侵袭能力,可成为肺癌临床治疗的新靶点。 相似文献
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目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA) MALAT1在YAP调控的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和迁移中的作用,并阐明其作用机制。方法:选择A549和H1299细胞系分为Scramble siRNA组(转染Scramble siRNA)、siYAP-1组(转染siYAP-1)和siYAP-2组(转染siYAP-2)。RT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中YAP和MALAT1mRNA及YAP蛋白表达水平;在A549和H1299细胞中分别转染pcDNA3.1-YAP质粒(pcDNA3.1-YAP组)、共转染pcDNA3.1-YAP质粒和siMALAT1-2(pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组)及对照质粒(pcDNA3.1-YAP+Scramble siRNA组),CCK-8法检测各组细胞增殖能力,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果:siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中YAP mRNA及蛋白表达水平均明显低于Scramble siRNA组(P<0.05),siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中MALAT1mRNA表达水平低于Scramble siRNA组(P<0.05);与pcDNA3.1-YAP组比较,pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组A549和H1299细胞增殖能力降低(P<0.05),H1299细胞迁移能力降低(P<0.05)。结论:在NSCLC细胞中,YAP通过调控lncRNA MALAT1的表达促进细胞的增殖和迁移。 相似文献
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目的::研究 microRNA-106a(miR-106a)对低转移性人结直肠癌 SW480细胞增殖和侵袭等恶性生物学行为的影响。方法:采用实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测20对结直肠癌组织及其癌旁组织中 miR-106a的表达,将 miR-106a mimics 转染到 SW480细胞中,用 qRT-PCR法检测 miR-106a的表达水平,并用CCK8实验、克隆形成实验和划痕法检测 SW480细胞的增殖、克隆形成以及体外迁移能力。结果:与癌旁组织相比较,结直肠癌组织中 miR-106 a 的表达水平升高(t=2.05,P=0.047);与mimics control转染组相比,miR-106a mimcs转染组miR-106a的表达水平显著升高(t=13.25,P=0.000),且细胞活力(72 h,t=4.52,P=0.000;96 h,t=6.17,P=0.000)和细胞克隆数明显升高(t=5.69,P=0.005),以及伤口愈合能力升高(48 h,t=5.44,P=0.032)。结论:过表达 miR-106a可显著促进低转移的人结直肠癌SW480细胞增殖和迁移能力,为结直肠癌的治疗提供了潜在的策略。 相似文献
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目的分析miRNA-451(miR-451)对结肠癌细胞SW480的影响,探讨miRNA-451对结肠癌细胞侵袭力的作用价值。方法化学合成miR-451mimics,脂质体包裹转染SW480细胞,分为miR-451转染组、无关序列转染组及对照组(未处理),荧光染料标记法检测转染效率,细胞计数试剂盒-8检测细胞增殖情况,流式分析检测细胞凋亡情况以及Transwell小室检测侵袭能力情况。结果 miRNA-451对结肠癌细胞SW480的增殖能力和凋亡情况无显著影响,但是对其侵袭力具有显著的抑制作用。结论 miR-451mimics对结肠癌细胞系SW480具有抑制作用,对结肠癌细胞侵袭力具有抑制效果,值得临床深入研究。 相似文献
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目的:探讨重组人白细胞介素17A (IL-17A)对结肠癌细胞生长的影响,并阐明其作用机制。方法:将结肠癌SW480细胞分为对照组和实验组,对照组细胞未经处理,实验组细胞加入50 μg·L-1重组人IL-17A。采用CKK-8法检测2组SW480细胞增殖活性,采用ELISA法检测2组细胞中IL-17A水平,Western blotting法检测2组SW480细胞中信号传导及转录激活因子3(STAT3)和磷酸化信号传导及转录激活因子3(p-STAT3)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,实验组细胞增殖活性明显升高(P<0.05)。与对照组比较,实验组SW480细胞中IL-17A水平、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:重组人IL-17A可刺激结肠癌细胞SW480细胞的生长,其作用机制可能与激活STAT3信号通路有关。 相似文献