地塞米松和川芎嗪对狼疮肾炎外周血单个核细胞白细胞介素—1 …

目的 探讨地塞米松、川芎嗪对活动期,静止期狼疮肾炎（ＬＮ）外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）表达的影响。方法 应用地塞米松,川芎嗪对ＬＮ患者ＰＢＭＣ培养,以正常人为对照,分别采用ＥＬＩＳＡ法和半定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测细胞上清液及细胞ＩＬ－２和ＩＬ－１２ Ｐ４０ｍＲＮＡ表达。结果ＬＮ活动期,静止期较正常对照组ＩＬ－１２蛋白,基因水平明显增高（Ｐ〈０．０１）。地塞米松明显抑制狼     

活动性狼疮肾炎患者外周血单个核细胞钙调神经磷酸酶活性的检测及白细胞介素-4表达变化

目的：检测活动性狼疮肾炎（LN）患者外周血单个核细胞（PBMC）白细胞介素-4（IL-4）表达及其与钙调神经磷酸酶（Calcineurin，CaN）活性的关系。方法：体外培养活动性LN患者PBMC，应用发色底物法检测胞浆CaN活性，逆转录PCR检测IL-4mRNA表达。结果：（1）在单纯培养情况下，正常对照组和LN组PBMC均出现一定量CaN活化，活动性LN组显著高于正常对照组[（46．08±5．58）mmol／mg．pr vs（8．81±3．61）mmol／mg．pr，P〈0．01]；在PMA＋Ionomyci刺激下，各组CaN活性均升高，活动性LN组CaN活性明显高于正常对照组[（69．34±12．59）mmol／mg．pr vs（37．12±11．57）mmol／mg．pr，P〈0．01]；（2）LN患者PBMC在单纯培养和PMA＋Ionomycin刺激时IL-4蛋白和mRNA表达均显著高于相应的对照组（P〈0．05）；（3）在单纯培养和PMA＋Ionomycin刺激时，FK506对LNPBMC表达IL-4蛋白和mRNA均有显著抑制作用（P〈0．01）。结论：LN患者PBMC存在CaN过度活化；LN患者PBMC高效表达IL-4与其CaN过度活化密切相关，通过阻断CaN活性可调控IL-4表达。     

从体外培养的外周血单个核细胞克隆人白细胞介素-10 cDNA

目的从体外培养的外周血单个核细胞克隆人白细胞介素(hlL)-10cDNA。方法淋巴细胞分离液自静脉血中分离出外周血单个核细胞(PBMCs)，含ConA的RPMI1640培养24h，提取总RNA，逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)扩增hIL-10cDNA，克隆入pUCm—T载体，转化感受态细胞DH5α，蓝白筛选，PCR及PvuⅠ、NotⅠ双酶切鉴定，重组DNA测序。结果RT—PCR扩增产物560bp，与预期片段大小一致，随机挑取白色菌落，小量提取的质粒经PCR、限制性内切酶酶切鉴定，目的条带与预期片段的大小均一致，测序结果与Genebank公布的hIL-10cDNA序列完全一致。结论从PBMC中扩增hIL-10cDNA，克隆至pUCm—T载体，方法较为简便，为进一步进行亚克隆及表达研究提供了可靠的前提条件。     

脆弱类杆菌脂多糖对正常人外周血单个核细胞分泌白细胞介素的影响

目的　通过研究脆弱类杆菌脂多糖 (LPS)对正常人外周血单个核细胞 (PBMC)分泌白细胞介素 2 (IL 2 )和白细胞介 4素 (IL 4 )的影响 ,探讨脆弱类杆菌感染的机制。　方法　采用脆弱类杆菌临床分离菌和标准菌株 (NCTC9343)提取的LPS ,以不同浓度作用于PBMC ,2 4h后收集培养细胞上清 ,运用ELISA法检测其IL 2和IL 4的含量变化。　结果　脆弱类杆菌LPS对正常人PBMC分泌IL 2有显著抑制作用 ,并呈明显的浓度依赖关系 (r=0 .80 2 4 ,P <0 .0 1)。脆弱类杆菌LPS对正常人PB MC分泌IL 4有显著刺激作用 (P <0 .0 5 ) ,但无浓度依赖关系。脆弱类杆菌临床分离菌与标准菌株LPS对正常人PBMC分泌IL 2和IL 4具有相同效应 ,两组之间无明显差异 (r =0 .10 95 ,P >0 .0 5 )。　结论　脆弱类杆菌LPS对正常人PBMC分泌IL 2有抑制作用 ,而对IL 4的分泌有刺激作用     

尿毒症血清对外周血单个核细胞IL-18表达及分泌水平的影响

目的 :探讨尿毒症血清对正常人和尿毒症患者外周血单个核细胞 (PBMCs)IL - 18表达及分泌水平的影响。方法 :用Ficoll密度梯度离心分离 17例非透析慢性肾衰竭患者 (尿毒症期 )和 16例正常人PBMCs,分别加入尿毒症血清或正常人血清共同培养 72h ,用酶联免疫吸附分析 (ELISA)法检测血清和培养上清IL - 18水平 ,反转录多聚酶链反应 (RT -PCR)检测PBMCsIL - 18mRNA的表达。结果 :(1)尿毒症血清IL - 18水平较正常人血清明显升高 ,分别是 (5 35 .6 2± 2 6 4 .6 9) pg/mL和 (90 .4 1± 96 .6 3)pg/mL ,有统计学差异 (P <0 .0 0 1)。 (2 )与正常人血清相比 ,尿毒症患者及正常人PBMCs经尿毒症血清刺激后其表达和分泌IL - 18的水平均明显增高 ,有统计学差异 (P <0 .0 5 )。(3)在同一种血清中培养 ,尿毒症患者PBMCs表达和分泌IL - 18的水平较正常人PBMCs高 ,但无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 :尿毒症患者PBMCs是预活化的 ,尿毒症血清可刺激PBMCs使IL - 18产生增加。     

尿毒症非透析患者外周血单个核细胞IL—1β,TNF—α与IL—6基…

目的 为了弄清尿毒症状态或环境是否激活外周血单个核细胞诱导ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α与ＩＬ－６基因表达。方法 选择了７名规律性铜仿膜血透患者、１１名尿毒症非透析患者及１０名正常对照者，采用反转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）与细胞原位杂效技术对外周血单个核细胞中ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６的基因表达进行观察。结果 正常对照者外周血单个核中ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６的表达检测不出，尿毒症非透析患     

狼疮肾炎患者血与尿白细胞介素-8测定的临床意义

目的　探讨血清和尿中白细胞介素８（ Ｉ Ｌ８） 水平变化在系统性红斑狼疮（ Ｓ Ｌ Ｅ） 及狼疮肾炎（ Ｌ Ｎ） 中的临床意义。方法　采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法对４７ 例 Ｓ Ｌ Ｅ 患者（ 含３７ 例 Ｌ Ｎ） 、１３ 例原发性慢性肾小球肾炎和１４ 例正常对照进行血清和尿中 Ｉ Ｌ８ 水平检测,比较分析其与 Ｓ Ｌ Ｅ 活动指数（ Ｓ Ｌ Ｅ Ｄ Ａ Ｉ） 、肾脏损害的相关关系。结果　 Ｓ Ｌ Ｅ 患者血清 Ｉ Ｌ８ 水平活动期为５５３ ｐｇ／ｍｌ（ 中位数,下同） 静止期为２６３８ ｐｇ／ｍｌ,明显高于正常对照组２０５４ ｐｇ／ｍｌ（ Ｐ ＜ ０００１） ,并且活动期高于静止期（ Ｐ ＜ ００５） ,血清 Ｉ Ｌ８ 水平与 Ｓ Ｌ Ｅ Ｄ Ａ Ｉ正相关（ ｒ ＝ ０６００３ , Ｐ ＜ ００５） ; Ｓ Ｌ Ｅ 患者尿 Ｉ Ｌ８ 显著高于正常对照组２０６７ｐｇ／ｍｌ（ Ｐ＜ ００５） ,且 Ｌ Ｎ 组２５２９ ｐｇ／ｍｌ 明显高于 Ｓ Ｌ Ｅ 无肾炎组为２１１ ｐｇ／ｍｌ 及原发性慢性肾小球肾炎组１９４１ ｐｇ／ｍｌ（ Ｐ 值均＜ ００５） ;肾脏组织病理狼疮活动指数（ Ａ Ｉ） 高者其血清、尿 Ｉ Ｌ８ 水平显著高于 Ａ Ｉ低者（ Ｐ ＜ ００５） 。结论　血清 Ｉ Ｌ     

狼疮肾炎患者外周血单核细胞表达有功能的Fas

目的 探讨狼疮肾炎（ＬＮ）患者单核细胞凋亡加速的机制。方法 对灯例ＬＮ患者进行观察及以 １５例正常人为对照。采用流式细胞仪检测单核细胞 ＦａＳ和 Ｆａｓ Ｌｉｇａｎｄ（ＦａｓＬ）的表达；单核细胞与重组人ＦａＳＬ共孵育，碘化丙啶染色、流式细胞仪检测单核细胞凋亡，四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法观察单核细胞体外存活率。结果ＬＮ患者单核细胞Ｆａｓ的表达较正常人明显上调（Ｐ＜０．０５）；处于狼疮活动期的ＬＮ患者与狼疮静止期的ＬＮ患者之间Ｆａｓ的表达差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。正常人和ＬＮ患者的单核细胞表面均未检测出ＦａｓＬ的表达。单核细胞与重组人ＦａｓＬ在体外共同培养２ｈ后，ＬＮ者单核细胞的凋亡较正常人明显增加（Ｐ＜０．０５），单核细胞与重组人 ＦａｓＬ在体外共同培养６ｈ后，ＬＮ患者单核细胞的存活率较正常人明显低下（Ｐ＜０．０５）。结论 ＬＮ患者单核细胞表面功能性Ｆａｓ表达上调是ＬＮ患者单核细胞凋亡加速的可能机制。     

雷公藤甲素对IgA肾病患者外周血单个核细胞炎性反应及凋亡的影响

目的 探讨IgA肾病(IgAN)患者外周血单个核细胞（PBMC）炎性因子分泌及自身凋亡状态,以及雷公藤甲素(TP) 对其调节的相关机制。 方法 取IgAN患者（n=29）及健康人（n=16）外周血,分别通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和硝酸还原酶法（Griess法）检测血浆肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和一氧化氮(NO)表达情况。体外培养IgAN患者PBMC,以不同浓度TP刺激PMBC,四唑盐比色间接法（MTT）检测TP对细胞生长的抑制效应。根据MTT结果,分别分为IgAN患者PBMC组、植物血球凝集素（PHA,10 mg/L,促细胞分裂原）模型组和PHA（10 mg/L）+TP（12.5 μg/L、25 μg/L）处理组。ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-6的分泌情况;Griess法检测上清液中NO含量;流式细胞仪分析细胞凋亡率;RT-PCR法、Western印迹法检测PBMC中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱天冬蛋白酶（caspase）-9、caspase-3基因和蛋白表达变化。 结果 IgAN患者血浆TNF-α[（131.57±50.61） ng/L比（30.24±18.93） ng/L,P < 0.01],IL-6[（76.36±25.21） ng/L比（35.08±16.59） ng/L,P < 0.01]和NO[（46.36±12.93） μmol/L比（26.61±10.87） μmol/L,P < 0.01]均显著高于健康人,PBMC凋亡率亦显著高于健康人[（16.88±5.66）%比（8.67±3.87）%,P < 0.01]。TP可抑制IgAN患者PBMC分泌 TNF-α、IL-6 和NO,诱导其凋亡;也可抑制Bcl-2表达,增加Bax、caspase-9、caspase-3表达。 结论 IgAN患者体内PBMC处于高度活化状态,并且凋亡率增高。TP能有效抑制IgAN患者PBMC的炎性活化状态,并可能通过线粒体途径改变Bcl-2蛋白家族抗凋亡因子和促凋亡因子平衡而诱导IgAN患者PBMC凋亡。     

狼疮肾炎患者白细胞介素13的血浆水平和基因表达

目的探讨狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)中白细胞介素13(IL-13)mRNA表达及IL-13血浆水平变化及其意义.方法选择10名正常对照者和16名LN患者.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,对LN患者PBMCIL-13mRNA表达量进行分析.同时应用IL-13特异的酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-13血浆水平.结果LN患者PBMC中IL-13mRNA表达量及IL-13血浆水平均较正常对照组增高(IL-13mRNA表达量为1.99±0.29比0.68±0.15,P＜0.001IL-13血浆水平为68.8±14.65比25.92±7.60,P＜0.001).IL-13血浆水平与抗-dsDNA抗体滴度、血清C3浓度、血浆γ球蛋白水平、肾小球活动性指数(GAI)及肾小管间质活动性指数(IAI)均呈一定的等级相关关系(rs分别为0.757、-0.809、0.652、0.854和0.846,P均＜0.01).结论IL-13可能参与LN发病机制.IL-13基因表达及蛋白质分泌水平增高在LN活动性病变中起一定的作用.     

川芎嗪对活动期狼疮性肾炎外周血单个核细胞 B7-1和B7-2 mRNA表达的影响

目的：探讨川芎嗪对活动期狼疮肾炎（LN）外周血单个核细胞（PBMC）的B7－1（CD80）和B7－2（CD86）mRNA表达的,影响,为临床使用川芎嗪治疗LN提供理论依据。方法：取活动期LN患PBMC培养,分别以川芎嗪,地塞米松和川芎嗪＋地塞米松进行处理,以PBS对照,采用半定量反转录PCR的方法,检测PBMC的B7－1和B7－2mRNA表达,结果：与对照组相比,川芎嗪组和地塞米松组均能明显抑制B7－2mRNA表达（P＜0．05）,而川芎嗪＋地塞米松组对B7－2mRNA表达的抑制更加明显（P＜0．01）,各组对B7－1mRNA表达均无显影响（P＞0．05）,结论：川芎嗪能下调活动期LN外周血单个核细胞B7－2mRNA表达,合并使用地塞米检能更好地抑制B7－2mRNA表达。     

淋巴细胞功能相关抗原1共刺激作用在活动性狼疮肾炎中的作用

目的探讨淋巴细胞功能相关抗原(LFA)1及其信号分子在狼疮肾炎发病机制中的作用。方法 利用免疫沉淀、免疫印迹和RTllPCR技术检测了LFA-1共刺激对19例活动性狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)P13-K磷酸化产物、IL-10 mRNA表达的影响。以14例健康献血员作为对照。结果 在CD3 mAb30 ng/ml存在的情况下,LFA-1mAb共刺激明显提高了活动性LN患者PBMC P13-K磷酸化产物表达(P<0.01),伴有IL-10 mRNA表达和蛋白含量增加(P<0.01),抗lFA-1抗体(5μmol/L)加入后明显抑制了P13-K磷酸化产物表达(P<0.01)。在CD3 mAb和LFA-1mAb协同刺激的情况下,P13-K特异抑制剂Wortamannin的加入明显抑制了LN患者PBMCIL-10 mRNA水平和蛋白含量(P<0.01)。结论 LFA-1作为共刺激分子过度活化P13-K可能介导了活动性狼疮肾炎IL-L 10的高效表达。     

凝血酶对狼疮肾炎末梢血单个核细胞分泌Th1/Th2细胞因子的影响

目的探讨狼疮肾炎(LN)患者凝血活性对其Th1/Th2平衡的影响。方法LN患者20例,按红斑狼疮病情活动指数(SLEDAI)分为稳定组11例(SLEDAI<9分),活动组9例(SLEDAI≥9分)。健康对照组8例。采集末梢血单个核细胞(PBMC),进行高、低浓度凝血酶刺激下体外培养。ELISA法检测培养液上清IL-10、IFN-γ水平。RT-PCR检测IL-10和IFN-γmRNA表达。结果凝血酶呈浓度依赖性上调LN患者PBMCIL-10表达,但不影响IFN-γ表达,故增加IL-10/IFN-γ比值。结论凝血酶加重狼疮肾炎患者PBMC分泌Th1/Th2细胞因子的平衡紊乱。     

库存红细胞增强脂多糖诱导的外周血单个核细胞炎症反应机制的研究

目的：研究库存红细胞对内毒素（LPS）诱导的外周血单个核细胞（PBMC）释放炎性细胞因子的影响及其机制。方法：分离健康献血员的PBMC,分为PBMC组、PBMC＋SN50组、PBMC＋LPS组、PBMC＋LPS＋SN50组、PBMC＋d1组、PBMC＋d1＋SN50组、PBMC＋d1＋LPS组、PBMC＋d1＋LPS＋SN50组、PBMC＋d35组、PBMC＋d35＋SN50组、PBMC＋d35＋LPS组、PBMC＋d35＋LPS＋SN50组和PBMC＋d21＋LPS组。取保存第1、21、35天（d1、d21、d35）的悬浮红细胞,离心,取上清,与新鲜分离的PBMC混合孵育20h（不加库存红细胞各组用完全1640培养基培养）,库存红细胞上清的体积为PBMC培养体系总体积的20％。加SN50各组于培养体系中加入核因子-κB特异性抑制剂SN50,培养4h后,加LPS各组加入100ng／L LPS刺激24h,收集各组细胞培养上清,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）浓度的变化;收集PBMC与库存红细胞上清及LPS共同孵育各组的PBMC,免疫印迹法检测核因子-κB抑制剂-α（IκB-α）的蛋白水平及磷酸化水平的变化,以PBMC和PBMC＋LPS组作为对照。结果：随库存红细胞保存时间的延长,PBMC中IκB-α的磷酸化水平逐渐升高,而蛋白水平随之逐渐下降;悬浮红细胞上清能增强LPS诱导下PBMC分泌TNF-α的作用,但能被SN50抑制。结论：NF-κB信号通路参与了库存红细胞增强LPS诱导的PBMC炎症反应的作用,阻断NF-κB的活化可以抑制这一增强作用。     

狼疮性肾炎尿毒症可逆性的长期观察报告

目的 探讨狼疮性肾炎尿毒症的可逆性。方法 在15年中,对37例狼疮性肾炎已开始进行透析的患者,给予积极的激素和环磷酰胺治疗。结果 83.8％的患者脱离了透析,停止透析的平均时间为40.6±21.5个月,停止透析半年以上的血肌酐值平均为179.36±88.24μmol/L。结论 需要透析的狼疮性肾炎患者,并不等于终末期肾病,在有适应症时,经积极治疗,肾衰有逆转的可能。     

Comparison of osteoclast precursors in peripheral blood mononuclear cells from rheumatoid arthritis and osteoporosis patients

Osteolytic disorders cause serious problems for quality of life with aging. Osteolysis is performed by osteoclasts of the hematopoietic lineage that share some characteristics with monocytes and macrophages. As osteoclast precursors (pOCs) are present in peripheral blood, their characterization in osteolytic diseases may help us to understand risk factors. Although essential factors for osteoclastogenesis have been reported, the effective induction from pOCs in human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) to mature osteoclasts in culture requires further improvement. The aim of this study was development of an efficient culture system for human osteoclastogenesis and providing a simple system for the enrichment of pOCs from PBMCs. We employed coculturing of human PBMCs with a mouse stromal cell line. Significant numbers of tartrate-resistant acid phosphatase-positive (TRAP⁺) multinucleated osteoclasts (MNCs), which could resorb dentine slices, were efficiently induced in this culture condition. pOCs were enriched in an anti-CD16 antibody column-passed anti-CD14 antibody-bound cell population isolated by magnetic cell sorting. We compared the percentage of the CD14^high CD16^dull cell population, which mainly contained pOCs in PBMCs, from age-matched patients with rheumatoid arthritis (RA) and osteoporosis (OP), but it was comparable. However, the mean number of TRAP⁺ MNCs generated in cultures from PBMCs of RA was higher. In contrast, the frequency of pOCs in PBMCs from OP was relatively higher. These results suggest the characteristics of pOCs from RA and OP may be different, because single pOCs from OP gave rise to lower numbers of osteoclasts than those from RA.     

外周血单个核细胞宫腔内灌注治疗对反复种植失败患者妊娠结局的影响

目的探讨自体外周血单个核细胞（PBMCs）宫腔内灌注治疗对反复种植失败（RIF）患者胚胎种植率和临床妊娠率的影响。方法按随机数字表法将纳入的39例拟行冷冻胚胎移植的RIF患者随机分为治疗组（20例）和对照组（19例）,治疗组在移植前3d抽取外周血20ml,应用淋巴细胞分离液分离PBMC后行宫腔灌注。对照组移植前未行自体PBMC宫腔灌注。结果两组患者年龄、血清卵泡刺激激素（FsH）、取卵周期数、移植周期数、移植胚胎数和单周期移植优质胚胎数均无统计学差异（P〉0．05）。两组胚胎种植率（22．8％VS．6．4％）和临床妊娠率（50．0％VS．17．6％）比较,治疗组均显著高于对照组（P％0．05）。两组单周期活婴出生率（45．0％VS．17．6％）比较无统计学差异（P〉0．05）。结论自体PBMC宫腔内灌注治疗可以提高RIF患者胚胎种植率和临床妊娠率,故可作为RIF患者胚胎移植前提供可选择的处理方案。     

恩替卡韦对肝移植受者血清及外周血单个核细胞内HBV DNA的抑制作用

目的 研究恩替卡韦对乙型肝炎相关性终末期肝病患者肝移植术后血清及外周血单个核细胞（PBMC）内HBV DNA的抑制作用. 方法 选取从2007年8～12月的20例HBsAg阳性肝移植受者作为研究对象（围手术期组）,给予口服恩替卡韦每天0.5 mg联合肌注乙肝免疫球蛋白作为HBV再感染的预防方案,分别于术前1 d和术后1、4、12周采用实时荧光定量PCR法检测血清及PBMC内HBV DNA定量.同时回顾性分析2006年8月至2007年8月共34例行同种异体原位肝移植,术后长期使用恩替卡韦联合肌注乙肝免疫球蛋白的患者（随访组）,随访时间4.0～22.5个月,同样的方法检测血清及PBMC内HBV DNA定量.结果 20例受者血清HBV DNA在恩替卡韦治疗12周时全部转阴.术前1 d和术后1、4、12周PBMC内HBV DNA阳性率分别为85.0%（17/20）和45.0%（9/20）、45.0%（9/20）、40.0%（8/20）,术后1周与术前比较差异有统计学意义（P=0.004）,但1周以后阳性率无显著变化;围手术期PBMC内HBV DNA定量均值分别为104.07±2.07和101.69±1.96、101.51±1.72、101.30±1.63拷贝/106细胞,同样术后1周与术前比较差异有统计学意义（P=0.01）,但随术后时间的延长,下降趋缓,术后4周后定量值的下降差异无统计学意义（P〉0.05）.随访组平均随访13.6个月,均未发现HBV再感染（血清HBV DNA均阴性）,PBMC内HBV DNA阳性率为32.4%（11/34）,定量均值101.03±0.26拷贝/106细胞.结论 恩替卡韦对肝移植术后血清及PBMC内HBV DNA均具有较好的抑制效果,但PBMC内HBV DNA下降趋势在术后4周后即维持在相对稳定状态,不能完全被清除.