心肌细胞与胶原材料复合再造组织工程心肌移植心肌梗死大鼠的心肌电生理变化

背景：组织工程化心肌组织移植可修复大鼠心肌梗死。目的：心用微电极阵标测技术分析心肌细胞与胶原材料复合组织工程再造心肌移植心肌梗死大鼠的心肌电生理特性。方法：将成年SD大鼠随机分组：假手术组、模型组、移植组。后2组制作心肌梗死动物模型,假手术组仪开胸不结扎冠状动脉,移植组造模后移植心肌细胞与胶原材料复合组织。应用微电极阵标测技术记录心室肌场电位振幅,激活-恢复时间及激动传导时间。结果与结论：①心室肌场主波振幅：与模型组相比,移植组梗死区、对立区及周围区部位增高（P〈0．05）。②激活-恢复时间：模型组与移植组梗死区与梗死周边区均明显延长,且梗死周边区小于梗死区（P〈0．05）。与模型组相比,移植组梗死区、对立区及周围区部位激活-恢复时间缩短（P〈0．05）。③心窒前壁激动传导时问：移植组高于假手术组,但低于模型组（P〈0．05）。表明移植的心肌细胞,胶原复合体能改善心肌梗死人鼠心室肌收缩功能及电传导时间,部分修复心脏功能。     

电刺激小脑顶核对缺血心脏神经递质释放的影响

目的：观察预先电刺激小脑顶核对心肌梗死大鼠心脏去甲肾上腺素水平和乙酰胆碱释放的影响。 方法：实验于2003-07／11在重庆医科大学附属第一医院心血管疾病研究所完成。取健康Wistar大鼠98只，随机分为4组：①心肌梗死组（n=30）：结扎左冠状动脉前降支。②电刺激组（n=30）：预先电刺激小脑顶核1h再予以左冠状动脉结扎。③小脑顶核毁损组（n=30）：毁损小脑顶核5d后电刺激小脑顶核1h，再行左冠状动脉结扎。以上3组又分别分为心肌梗死后1，7，21d3个时相组，每组10只。④假手术组（n=8）：开胸术后仅在左冠状动脉前降支下穿线但不结扎，电极插入小脑顶核，但不与予以刺激。各组分别于相应时间点处死大鼠后，取心肌梗死区和非梗死区组织标本，测定心脏去甲肾上腺素含量应用高效液相色谱法；检测心脏乙酰胆碱酯酶活性应用生化方法，表示乙酰胆碱释放量。 结果：去除死亡、心肌未梗死、小脑顶核电刺激或毁损失败的大鼠，最终54只大鼠进入结果分析，心肌梗死组、电刺激组、小脑顶核毁损组、假手术组分别为13，20，13和8只。①各组大鼠心肌梗死病程中左室非梗死区及梗死区心肌去甲肾上腺素含量的比较：心肌梗死第1天，心肌梗死组及小脑顶核毁损组大鼠心肌组织中去甲肾上腺素水平均较假手术组升高（q=12．080-15．396，P〈0．01），电刺激组大鼠心肌去甲肾上腺素含量显著低于心肌梗死组（q=9．934，10．82l，P〈0．01）。心肌梗死第21天，小脑顶核毁损组大鼠非梗死区心肌去甲肾上腺素含量显著低于假手术组及心肌梗死组（q=5．283，3．780，P〈0．05-0．01）。②各组大鼠心肌梗死病程中左室非梗死区及梗死区心肌乙酰胆碱酯酶活性的比较：心肌梗死第1天，心肌梗死组及小脑顶核毁损组大鼠心肌组织中乙酰胆碱酯酶活性均显著低于假手术组（q=4．339-5．318，P〈0．01），电刺激组大鼠心肌乙酰胆碱酯酶活性显著高于心肌梗死组（q=5．449，4．465，P〈0．01）。心肌梗死第21天，小脑顶核毁损组大鼠非梗死区心肌的乙酰胆碱酯酶活性显著低于假手术组（q=3．843，P〈0．05）。 结论：电刺激小脑顶核可降低心肌梗死大鼠早期心脏梗死区或非梗死区去甲肾上腺素水平，增加乙酰胆碱释放。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性心肌梗死后心功能及bcl-2和caspase-3mRNA表达水平的影响

目的观察急性心肌梗死大鼠应用骨髓间充质干细胞（MSCs）移植前后心功能及凋亡相关蛋白bcl-2和caspase-3 mRNA的变化,以期了解骨髓间充质干细胞移植治疗心梗的机制。方法40只SD大鼠,雌雄各半,随机分为对照组、假手术组、心梗组、移植组,每组各10只。心梗组和移植组大鼠分别结扎前降支造成心梗模型。取大鼠骨髓,体外分离扩增培养MSCs。术前4组大鼠进行超声心动图检测心功能,结扎后移植组立即予MSCs多点注射到大鼠心肌梗死区周边,而梗死组和假手术组注射同剂量培养液,对照组不注射。饲养8周后,分别予超声心动图心功能检测。取梗死周边区心肌行RT-PCR检测bck2和caspase-3mRNA的表达。结果术前4组大鼠心功能指数无显著差异（P〉0．05）;而MSCs移植后,梗死组大鼠心肌LVESD、LVEDD较其它3组明显增高,差异具有显著性（P〈0．05）;而移植组又较对照组和假手术组明显增高（P〈0．05）;而对照组和假手术组在上述指标中无显著差异（P〉0．05）;梗死组大鼠EF较其它3组明显降低（P〈0．05）;而移植组又较对照组、假手术组明显降低（P〈0．05）;而对照组与假手术组之间无显著差异（P〉0．05）。bd-2mRNA在对照组和假手术组表达较少,而在梗死组表达增加,差异有显著性（P〈0．05）;在移植组表达更多,与梗死组相比有显著性（P〈0．05）;caspase-3在对照组和假手术组表达较少,在梗死组表达增加,有显著差异（P〈0,05）;在移植组表达又较梗死组表达减少,有显著差异（P〈0．05）;但与对照组和假手术组相比,表达增加（P〈0．05）。结论急性心肌梗死移植MSCs后,心功能得到改善,心肌凋亡得到抑制。     

螺内酯对心肌梗死大鼠梗死区和非梗死区醛固酮的影响

目的观察螺内酯对大鼠心肌梗死后不同阶段梗死区（Iz）和非梗死区（NIz）醛固酮水平（ALD）的影响。方法雌性Wistar大鼠,通过结扎左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型。术后24h、l周、2周及4周随机从各组中各取7～12只大鼠,分别行病理组织学检查,计算左室截面直径,检测Iz和NIZ心肌的ALD含量。结果手术1周后,心梗组左室截面直径增大,用螺内酯4周时,上述指标明显改善（P〈O．05）。心肌ALD水平在Iz于术后1周开始升高（P〈0．05）,在NIZ于术后2周开始升高（P〈0．001）,均于用螺内酯后2周开始回落（P〈O．05）,但仍高于假手术组（P〈0．05）。结论梗死区心肌醛固酮水平上升较早,非梗死区心肌醛固酮水平上升稍晚;螺内酯对梗死区和非梗死区心肌的醛固酮水平均有明显抑制作用;大鼠心梗l周后即发生左心室重构改变,长期使用螺内酯可逆转心室重构。     

行为学训练对大鼠海马梗死后齿状回区神经干细胞迁移能力的影响

目的 研究行为学训练对大鼠海马梗死后齿状回区多聚唾液酸神经细胞黏附分子（PSA-NCAM）表达及对神经干细胞迁移能力的影响。方法 将68只SD大鼠随机分为训练组（32只）、制动组（32只）及正常对照组（4只）。采用光化学法将训练组及制动组大鼠制成单侧海马区梗死模型，训练组大鼠于造模1 d后给予水迷宫训练，制动组大鼠于造模1 d后给予制动处理，观察各组大鼠海马齿状回区及梗死灶周围PSA-NCAM在不同时间点（实验后3，7，14，21，28，35，42及49 d）的表达情况。结果 正常对照组大鼠海马齿状回区PSA-NCAM有一定程度表达；与正常对照组比较，训练组在3，7，21及28 d时及制动组在14 d时其梗死侧齿状回区PSA-NCAM表达均有显著增高（P〈0．05）；而且训练组大鼠3，7，21及28 d时的PSA-NCAM表达显著高于制动组（P〈0．05）。训练组梗死灶对侧齿状回区PSA-NCAM表达在28 d及35 d时均明显高于正常对照组（P〈0．05），并且在第28天时也明显高于同期制动组（P〈0．01）。制动组及训练组大鼠脑梗死灶周边区均未见PSA-NCAM表达。结论 行为学训练能显著增强PSA-NCAM在脑梗死大鼠海马齿状回区的表达，而且还可增强神经干细胞的迁移能力，促进神经功能恢复。     

急性心肌梗死后CD34^＋干细胞自体动员的意义

目的：已有理论提出急性心肌梗死后骨髓和外周血中的CD34^＋干细胞具有自身动员的潜能，观察这一潜能的变化特征及其对心肌梗死组织再生能力的影响。方法：实验于2004-09／2005-02在阜外心血管病医院完成。①实验动物：雄性SD大鼠40只。随机数字表法分为心肌梗死组、假手术组，20只/组。②实验方法：心肌梗死组大鼠采用冠状动脉结扎法建立心肌梗死模型。心电图ST段抬高或有室性心律出现，前壁心肌呈苍白色为造模成功。假手术组仅作开胸手术，前降支不予结扎。③实验评估：于心肌梗死后3,7，14，28d，流式细胞仪检测骨髓和外周血中CD34^＋干细胞的含量。用免疫组化方法检测梗死心肌组织中的Ki67细胞和毛细血管数量。结果：①外周血及骨髓CD34^＋干细胞含量的变化：心肌梗死组外周血中的CD34^＋干细胞数量于造模后3d开始上升，7d后明显高于假手术组（P〈0.01），至14,28d时逐渐回落至假手术组水平（P〉0.05）。心肌梗死组骨髓中的CD34^＋干细胞数量于造模后各时间点始终无明显变化（P〉0.05）。②组织学评定：心肌梗死组梗死区Ki67细胞和毛细血管数量于造模后3d开始增多，7d时明显多于非梗死区（P〈0.05）；至14，28d梗死区Ki67细胞数量明显少于造模后7d（P〈0.05），毛细血管数量的减少不明显（P〉0.05）。免疫组化染色显示少数Ki67细胞分化为血管内皮细胞，未见向心肌细胞分化。③相关性分析：梗死区Ki67细胞、毛细血管数量于造模后7d与外周血中CD34^＋干细胞数量呈显著正相关（r=0.913，P=0.021；r=0.887，P=0.035）。结论：机体CD34^＋干细胞的自体动员、增殖反应的潜能随急性心肌梗死时间的延长而逐渐减弱，自体动员的干细胞功能尚不足以达到修复梗死心肌组织的效果。     

大鼠心肌梗死后心室重构信号转导机制的研究及培哚普利对其的影响

目的：探讨大鼠心肌梗死后心室重构的信号转导机制及培哚普利干预的影响。方法：结扎大鼠左冠状动脉前降支建造心肌梗死模型，成功后随机分为心肌梗死组（A组，n=14）和培哚普利干预组（B组，n=14），另设假手术组为对照（C组，n=14）。术后24h起各组分别予培哚普利（B组）和蒸馏水（A、C组）灌胃，6周后放免法测定各组大鼠非梗死区心肌组织中AngⅡ含量、免疫组化法测定各组大鼠非梗死区心肌组织中ERK1／2的含量、实时荧光定量PCR法测定各组大鼠非梗死区心肌组织中原癌基因cfosmRNA含量的变化。结果：6周后A、B组的心肌组织中AngⅡ，ERK1／2，C—fos mRNA含量及左室重量指数与C组相比均显著升高（P均〈0．05）；与A组相比，B组中6周后心肌组织中AngⅡ，ERK1／2，c—fos mRNA含量及左室重量指数均显著下降（P均〈0．05）。结论：大鼠心肌梗死后心肌组织中AngⅡ与ERK1／2含量及原癌基因c-fos mRNA的表达显著升高，左室重量指数明显升高；培哚普利能降低AngⅡ，ERK1／2，c—fos mRNA的表达，改善左室重构。     

大鼠急性心肌梗死后ACE、ACE2基因异常表达的意义及福辛普利干预的影响

目的研究急性心肌梗死（AMI）后左室梗死区及非梗死区ACE、ACE2 mRNA的表达以及福辛普利对ACE、ACE2 mRNA表达的影响。方法结扎冠状动脉前降支诱导大鼠急性心肌梗死，AMI后24h存活的24只大鼠随机分为AMI组、福辛普利组，每组8只。另设8只假手术组；术后24h开始直接灌胃给药，AMI及假手术组大鼠灌等量生理盐水；用药28d后，用RT-PCR法检测左心室梗死区及非梗死区心肌ACE和ACE2 mRNA表达的情况。结果大鼠AMI 28d后左心室梗死区及非梗死区心肌ACE、ACE2 mRNA表达均较假手术组明显升高（P〈0．01），福辛普利组梗死区及非梗死区ACE mRNA表达较心梗组均显著降低（P〈0．05），但仍高于假手术组（P〈0．05）；福辛普利对ACE2 mRNA的表达几乎无影响，心梗组及福辛普利组梗死区及非梗死区ACE2 mRNA表达无明显差异（P〉0．05）。结论AMI后ACE2 mRNA表达增多在心肌损伤后肾素血管紧张素系统有关的血管紧张素肽的产生与降解的负性调节中起着重要的作用。     

洛沙坦对大鼠心肌梗死后心肌间质基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2表达的干预作用

目的：观察大鼠心肌梗死后心肌间质基质金属蛋白酶2及金属蛋白酶组织抑制因子2的表达和心室重塑、心功能变化的关系及洛沙坦干预的影响。 方法：实验于2004-09／2005-08在华中科技大学协和医院心血管研究所实验室进行。①取180只SD大鼠，随机取8只为假手术组（不结扎冠状动脉），其余172只大鼠结扎冠状动脉前降支复制急性心肌梗死模型。②将造模成功的67只大鼠随机分成洛沙坦组[灌胃洛沙坦30mg／（kg&;#183;d），1次／d]和模型组（灌胃等量生理盐水），两组分为术后1，7，14，28d4个亚组。③应用反转录-聚合酶链反应法及免疫组化方法检测基质金属蛋白酶2，金属蛋白酶组织抑制因子2及Ⅰ/Ⅲ胶原的表达，超声心动图评价大鼠心功能变化和心室重塑的过程。 结果：75只大鼠进入结果分析。①基质金属蛋白酶2及金属蛋白酶组织抑制因子2蛋白表达：模型组除术后1d基质金属蛋白酶2表达与假手术组无差异外，其他各时间点表达均高于假手术组（P〈0．05）；洛沙坦组术后7，14，28d金属蛋白酶2表达均低于模型组（P〈0．05）。②基质金属蛋白酶2及金属蛋白酶组织抑制因子2mRNA表达：模型组各时间点均高于假手术组（P〈0.05），洛沙坦组术后1，14，28d基质金属蛋白酶2mRNA表达均低于模型组（P〈0．05）。③心肌Ⅰ/Ⅲ胶原比例：术后14，28d，模型组显著高于假手术组（P〈0．05），洛沙坦组低于模型组（P〈0．05）。④超声心动图显示模型组大鼠在术后7，14，28d时心功能明显低于假手术组（P〈0．01），洛沙坦组14，28d时心功能指标均较模型组明显改善（P〈0．05）。 结论：大鼠心肌梗死后心肌间质金属蛋白酶2、金属蛋白酶组织抑制因子2表达增高，非梗死区Ⅰ／Ⅲ胶原比例升高可能是心室重塑和心力衰竭发生发展的原因之一。洛沙坦可通过抑制金属蛋白酶2表达，逆转Ⅰ／Ⅲ胶原比例改善心肌梗死后心室重塑及心力衰竭。     

冠脉侧支循环与心肌细胞凋亡关系的实验研究

目的：探讨心肌梗死后侧支循环形成与心肌细胞凋亡的关系。方法：建立大鼠急性心肌梗死模型。采用放射性微球法测量局部心肌血流量，HE染色计数血管数，TUNEL法检测细胞凋亡。观察结扎后3d、7d、14d和28d侧支循环与心肌细胞凋亡的一系列演变过程，采用相关分析两者的关系。结果：梗死周边区凋亡心肌细胞数随时间逐渐降低。梗死区和周边区的局部心肌血流量在结扎后3d最低，以后逐渐增加，与血管计数的增加相平行。梗死周边区的侧支血流量和血管计数与该区域的凋亡心肌细胞数呈负相关（r分别为-0．961和-0．805，P〈0．01）。结论：梗死周边区侧支血管的生长可减少该区域心肌细胞凋亡的发生。