湿法超微粉碎-超滤法快速提取浓缩全蝎蛋白可行性考察

目的:考察湿法超微粉碎-超滤法快速提取浓缩全蝎蛋白的可行性。方法:利用大鼠体内抗凝血、抗血栓药效试验比较湿法超微粉碎-超滤法、胃蛋白酶酶解法2种提取工艺所得全蝎蛋白的药效差异,以考察湿法超微粉碎-超滤法用于全蝎蛋白提取浓缩的可行性。结果:2种提取方法所得全蝎蛋白均能明显延长大鼠凝血时间、血浆活化部分凝血酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间,并对大鼠动静脉血栓干、湿重均有明显减轻作用,与生理盐水对照组比较,均有统计学差异。结论:经大鼠体内抗凝血、抗血栓药效试验验证,采用湿法超微粉碎-超滤法快速提取浓缩全蝎蛋白是可行的。     

水蛭的湿法超微粉碎提取及其工艺优化

目的 优选湿法超微粉碎提取水蛭的最佳工艺.方法 在单因素试验基础上,以料液比、浸泡时间、提取温度和粉碎时间为自变量,根据Box-Behnken原理采用4因素3水平的响应面分析法,以抗凝血酶活性为响应值,对湿法超微粉碎提取条件进行优化.结果 湿法超微粉碎提取水蛭的最佳工艺条件:料液比为1∶12,浸泡时间为4.9h,提取温度为6.5℃,粉碎时间为12 min,其抗凝血酶活性达到20.13 U/g.结论 湿法超微粉碎提取技术适用于水蛭的提取,本实验优选的提取工艺稳定可行,适于进一步推广应用.     

响应面分析法优化湿法超微粉碎地龙蛋白的提取工艺

目的:优选采用湿法超微粉碎法提取地龙蛋白的工艺.方法:在单因素试验基础上,以浸泡时间、料液比、提取温度、粉碎时间为影响因素,蛋白质得率为响应值,根据中心组合试验设计原理采用四因素三水平的4.7h分析法,对湿法超 微粉碎提取地龙蛋白条件进行优化.结果:湿法超微粉碎提取地龙蛋白的最佳工艺条件为浸泡时间4.7 h,料液比1∶11,提取温度17℃,粉碎时间10 min.在此条件下蛋白质得率3.46％.结论:湿法超微粉碎提取技术适用于地龙蛋白提取.该试验优选提取工艺稳定可行,适于工业化推广.     

湿法超微粉碎法与回流法提取延胡索的比较研究

目的 比较研究湿法超微粉碎法与回流法提取中药延胡索的有效成分.方法 使用湿法超微粉碎法和回流法提取延胡索中的延胡索乙素.通过激光光散射与扫描电镜观察了湿法超微粉碎提取的微粒;HPLC指纹图谱比较了湿法超微粉碎法与回流法提取物的成分差异.结果 湿法超微粉碎法可使延胡索组织结构大量破坏,是有效成分快速溶出的主要原因.HPL...     

超微粉碎云芝子实体对云芝多糖提取的影响

目的:探讨超微粉碎云芝子实体的云芝多糖提取工艺条件.方法:采用超微粉碎技术对云芝进行预处理,所得微粉(5μm)与云芝子实体进行多糖提取的对比试验,然后对云芝微粉提取多糖进行正交实验,优化提取工艺.结果:云芝微粉的多糖提取收率比云芝子实体的多糖得率平均高出61%,云芝超微粉碎处理后最优提取工艺为:100℃,80 min,提取3次.结论:超微粉碎有利于云芝多糖的提取.     

超微粉碎技术对三七药材粉碎效果及有效成分含量的影响

该实验主要研究了超微粉碎技术对三七药材粉碎效果及有效成分含量的影响。以三七微粉粒径大小为指标,利用马尔文粒径测定仪测定粉碎不同时间所得到三七微粉的粒径并采用HPLC-ELSD对三七超微粉碎前后,人参皂苷Rg₁,Rb₁和三七皂苷R₁的含量进行了测定。结果显示超微粉碎2 h的药材粉末粒径均一,达到了细胞级粉碎,D₅₀约为9.599 μm,粒径分布为单峰,粉碎0.5,1,1.5 h的粒径分布均为双峰;超微粉碎0.5,1,1.5,2 h所得三七微粉中3种皂苷类成分总量分别为7.7%,7.5%,7.5%,8.3%,普通粉碎所得三七药粉中的3种皂苷总量约为5.0%,通过以上实验可以看出：超微粉碎与否对三七粉粒径均匀度及其主要成分含量有很大影响;与普通粉碎药粉相比,超微粉碎2 h药粉粒径较为均一,3种皂苷含量明显增加,为临床减少三七用药剂量及合理利用资源提供依据;但其皂苷总量与粉碎时间不成正比关系,可以结合粒径大小需求选择不同的粉碎时间。     

超微粉碎对白附子中草酸钙针晶形态和数量的影响

目的 比较超微粉碎法与常规粉碎法的白附子粉末中草酸钙针晶的形态和数量的差别.方法 对白附子中草酸钙针晶进行光学显微镜、扫描电镜观察比对分析及显微数量分析.结果 超微粉碎使白附子粉未中草酸钙针晶碎断,数目减少.超微粉碎粉末草酸钙针晶碎片较常规粉碎粉末可减少1/8～1/2.扫描电镜观察超微粉碎的草酸钙针晶晶体出现纵向断裂,晶体呈扁的长方体,见不到草酸钙针晶圆柱体和针尖.结论 超微粉碎方法对白附子中草酸钙针晶的形态、数量和存在的方式有所改变.     

酒制及超微粉碎对当归散中黄芩甙溶出效果的影响

目的 :比较酒制及超微粉碎对当归散中黄芩甙溶出量的影响。方法 :高压液相色谱法。色谱柱为 ODS-C1 8柱 ,流动相为甲醇 -水 -冰醋酸 (4 7∶ 5 3∶ 0 .1) ,检测波长 2 80 nm,流速为 0 .8ml· min- 1 ,柱温为室温。结果 :酒制对当归散中黄芩甙溶出几乎无影响 ,超微粉碎可增加黄芩甙的溶出。结论 :对当归散中黄芩甙溶出量而言 ,酒制意义不大 ,超微粉碎有重要意义。     

水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

为确定水蛭传统炮制的科学性,分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分,以活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定,并采用考马斯亮蓝法,测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。对比发现,采用水提取法时,APTT,PT,TT,抗凝血酶活性4种指标结果均显示,滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低,活性顺序为清水吊干品酒浸闷烘品滑石粉烫制品,此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致;而采用仿生提取法时,除滑石粉烫制后APTT缩短外,其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高,且活性顺序为酒浸闷烘品滑石粉烫制品清水吊干品。仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程,结果更具科学性。所以,传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭,还可增强水蛭的抗凝活性作用。     

不同提取法炮制对水蛭体外溶栓活性的影响

目的:研究炮制对水蛭体外溶栓活性的影响。方法:采用水提取法和仿生提取法对水蛭净制品、烫制品、酒制品进行提取,选用纤维蛋白平板法和纤维蛋白原平板法,以平板上透明圈面积为指标进行纤溶活性测定;并建立体外血栓模型,通过血凝块的失重比进一步评价水蛭不同炮制品的溶栓活性。结果:水蛭在炮制前后均能在纤维蛋白平板上产生透明圈。采用水提取法时,烫制品和酒制品的溶圈面积减小,炮制后纤溶活性降低,活性顺序为:净制品酒制品烫制品。而采用仿生提取法时,显示烫制和酒制后水蛭纤溶活性升高,活性顺序为:烫制品酒制品净制品。体外血栓模型中,血凝块失重比结果与纤溶活性测定结果一致,采取水提取法时,炮制使溶栓活性降低,而采用仿生提取法时显示炮制使溶栓活性增加。结论:与水提取法比较,仿生提取法更符合水蛭经口服后在人体内的消化吸收过程,其结果更有说服力。传统炮制可增强水蛭溶栓活性。     

粉碎程度对仙人掌多糖得率及抗氧化活性的影响

目的:探讨粉碎工艺对仙人掌多糖得率及抗氧化活性的影响。方法:将仙人掌干粉粉碎至不同碎度后,比较其仙人掌多糖(Opuntia dillenii Haw.polysaccharides,ODPs)的得率、纯度、糖醛酸含量及抗氧化活性。结果:随着粉碎程度增加,ODPs得率、纯度及对O-2·和·OH的清除作用显著增加,表现出粗粉级、60目与100目级、200目与300目级3个等级(等级之间两两比较P0.05),但是糖醛酸含量无差异;300目碎度与粗粉比较,多糖得率、含量及对O-2·清除作用分别提高了100%、25%和150%。结论:结果提示,粉碎技术有助于提高仙人掌多糖的释放量,保持其品质及功效活性。     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

超微粉碎对虎杖膏透皮吸收和流变性的影响

目的研究超微粉碎对虎杖膏透皮吸收和流变性的影响。方法采用普通粉碎和超微粉碎工艺制备虎杖普通粉和虎杖超微粉,再分别制成虎杖膏和超微虎杖膏;以离体小鼠皮肤为屏障,采用改良Franz扩散池法进行透皮吸收实验,以虎杖苷、白藜芦醇、大黄素为考察指标比较虎杖膏和超微虎杖膏体外经皮渗透性的差异;以表观黏度、屈服应力为指标,采用旋转流变仪测定,比较虎杖膏和超微虎杖膏流变性的差异。结果虎杖普通粉和超微粉的d_(0.9)分别为(210.011±3.468)、(63.496±2.570)μm,径距分别为5.412±0.055、2.913±0.117。虎杖膏中虎杖苷、白藜芦醇和大黄素的累积透过量分别为(2.100 3±0.154 5)、(2.114 5±0.341 6)、(6.210 4±0.750 0)μg/cm~2,透皮速率分别为(0.175 3±0.022 6)、(0.234 0±0.020 2)、(0.337 4±0.051 6)μg/(cm~2·h);超微虎杖膏中虎杖苷、白藜芦醇和大黄素的累积透过量分别为(14.247 9±4.875 0)、(4.399 3±0.628 7)、(6.768 6±0.728 6)μg/cm~2,分别比虎杖膏提高6.8、2.1、1.1倍,透皮速率分别为(0.815 9±0.277 1)、(0.313 2±0.043 0)、(0.393 7±0.042 6)μg/(cm~2·h),分别比虎杖膏提高4.7、1.3、1.2倍。虎杖膏和超微虎杖膏的表观黏度分别为34.940、8.865 Pa·s,屈服应力分别为41.211、7.381 Pa。结论超微虎杖膏与虎杖膏相比透皮吸收效果更优,且膏体细腻,黏稠度和屈服应力更小,涂展性更好。     

中药鼠妇片联合替勃龙对老年女性骨质疏松患者TRACP-5b、25-OH-VD和E_2的影响

目的观察中药鼠妇片联合替勃龙对老年女性骨质疏松患者血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP-5b)、活性维生素25-羟基维生素D(25-OH-VD)和雌二醇(E2)水平的影响。方法将35例老年女性骨质疏松患者随机分为2组,研究组17例给予中药鼠妇片联合西药替勃龙治疗,对照组18例单纯采用替勃龙治疗,观察2组治疗前后血清TRACP-5b、25-OH-VD和E2水平及腰椎疼痛评分。结果治疗后2组血清TRACP-5b、25-OH-VD和E2水平及腰椎疼痛评分均较治疗前明显改善(P均0.05),且研究组改善情况明显优于对照组(P均0.05)。结论中药鼠妇片联合西药替勃龙治疗老年女性骨质疏松能显著改善患者临床症状,增加血清TRACP-5b、25-OH-VD和E2水平,做到标本兼治,值得临床推广。     

益脑康胶囊对脑梗死大鼠溶栓后血脑屏障的保护作用及对ZO-1蛋白表达的影响

目的:观察益脑康胶囊(YC)配伍对急性脑梗死大鼠重组组织型纤溶酶原激活剂rt-PA溶栓后血脑屏障通透性及紧密连接的附着蛋白(ZO-1)蛋白表达的影响.方法:将SD大鼠随机等分为假手术组、溶栓组、益脑康胶囊低剂量组(1 g·kg-1)、益脑康胶囊高剂量组(3 g·kg-1),连续口服3d.建立大鼠自体血栓栓塞大脑中动脉闭塞模型,采用分光光度计法及Western blot法分别检测大鼠脑组织伊文思蓝含量及ZO-1蛋白的表达.结果:与假手术组相比,各组脑内EB含量均显著增高,ZO-1蛋白水平明显降低;与溶栓组相比,YC低剂量组脑内EB含量差异不显著,高剂量组脑内EB含量显著下降,高、低剂量组ZO-1蛋白表达水平均显著增加;与YC低剂量组相比,高剂量组脑内EB含量显著下降,ZO-1蛋白表达水平显著增加.结论:益脑康胶囊可以减轻溶栓后血脑屏障破坏,可能与其上调ZO-1蛋白的表达有关.     

地鳖纤溶活性蛋白对荷瘤小鼠肿瘤微血管密度及血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的:研究地鳖纤溶活性蛋白(EFP)对H22和S180荷瘤小鼠肿瘤组织微血管密度(MVD)及血液中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,以判定EFP是否具有抗肿瘤新生血管生成作用。方法:建立H22荷瘤小鼠动物模型,采用免疫组化方法标记CD34,检测了EFP对小鼠H22和S180肿瘤组织MVD的作用情况,采用双抗体夹心ELISA法检测H22和S180荷瘤小鼠血清中VEGF含量。结果:与对照组相比,EFP可显著降低MVD及VEGF的表达。结论:EFP有抑制肿瘤新生血管形成的作用。     

地鳖纤溶活性蛋白含药血清对人肺癌A549细胞凋亡及凋亡相关表达的影响

目的 研究地鳖纤溶活性蛋白(EFP)含药血清对人肺癌A549细胞凋亡的影响及凋亡相关基因的表达.方法 制备不同浓度EFP小鼠含药血清;采用MTT法检测EFP对A549细胞的增殖抑制效果;采用Annexin V-FITC/PI双荧光染色观察细胞凋亡情况;应用流式细胞术检测EFP对A549细胞周期的影响;采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bax表达水平的改变.结果 EFP含药血清各组对A549细胞有明显抑制作用;EFP使A549细胞发生细胞凋亡,细胞周期发生改变;随着药物浓度的增加,Bax表达逐渐增强,Bcl-2表达逐渐减弱.结论 EFP有较强的体外抗肿瘤活性;EFP可能通过调控Bcl-2,Bax基因表达而诱导凋亡.     

穴位刺激联合COX-2抑制剂对乳腺癌骨转移大鼠镇痛、NK细胞活性及PK2蛋白水平的影响

目的：探究穴位刺激联合COX-2抑制剂对乳腺癌骨转移大鼠镇痛、NK细胞活性及PK2蛋白的作用机制。方法：选取50只SPF级SD雌性大鼠,随机数字表法分为正常(A)组、模型(B)组、穴位刺激(C)组、COX-2抑制剂(D)组与穴位刺激联合COX-2抑制剂(E)组,每组10只,对B、C、D与E组采用胫骨内注射乳腺癌细胞建立乳腺癌骨转移模型,A组不建立该模型,建模成功后,对C组给予穴位刺激治疗,对D组给予灌胃25 mg/kg的塞来昔布,对E组给予穴位刺激联合塞来昔布治疗,A组、B组同期给予灌胃同体积生理盐水,观察并记录大鼠疼痛情况,双能线骨密度仪检测大鼠骨密度及骨矿物质含量,HE染色法检测骨组织病理形态,免疫印迹法检测NK细胞活性,免疫组化法检测PK2蛋白表达。结果：与A组比较,B组50%PWT、TWL显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),双侧后肢负重差值显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05),与B组比较,C组、D组与E组50%PWT、TWL明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),双侧后肢负重差值显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),且D组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05),E组比D组变化明显,差异具有统计学意义(P<0.05);A组大鼠骨组织形态完整,骨小梁排列整齐,骨皮质连续,无坏死区域,骨髓腔内充满深染的血细胞,B组骨组织形态遭到破坏,骨皮质出现连续性中断,并可见大量肿瘤细胞浸润,瘤细胞形态不规则,且排列紊乱,细胞核大,异型性明显,与B组比较,C组、D组与E组病理形态明显改善;与A组比较,B组BMD、BMC显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),与B组比较,C组、D组、E组BMD、BMC显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05),且D组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05),E组比D组升高显著,差异具有统计学意义(P<0.05);与A组比较,B组大鼠胫骨组织中NKp30、NKp44、NKp46蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),与B组比较,C组、D组与E组大鼠胫骨组织中NKp30、NKp44及NKp46蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05),且D组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05),E组比D组升高显著,差异具有统计学意义(P<0.05);与A组比较,B组大鼠胫骨组织中PK2蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),与B组比较,C组、D组与E组大鼠胫骨组织中PK2蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05),且D组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05),E组比D组升高显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：穴位刺激联合COX-2抑制剂对乳腺癌骨转移大鼠具有显著的镇痛作用,并可显著改善NK细胞活性,促进PK2蛋白表达。     

马兜铃酸I和马兜铃内酰胺I对大鼠肾小管损伤机制及其对肾脏水通道蛋白1表达的影响

目的 研究马兜铃酸I(AA-I)和马兜铃内酰胺I(AL-I)在亚急性毒性条件下对大鼠肾小管损伤的毒性机制及其对肾脏水通道蛋白1(AQP1)表达的影响。方法 AA-I及AL-I以高、中、低剂量(9.0,4.5,2.25 mg/kg)连续腹腔注射给药7d,在给药第5天后,收集24h尿液,对各组总尿量进行比较,并用ELISA方法检测尿液中β2-微球蛋白（β2-MG）含量。给药7d后,取全血检测血生化,并用HE法染色观察肾脏病理组织学变化;用ELISA和免疫组织化学方法分析AA-I及AL-I在高、中、低剂量时肾脏组织AQP1的表达变化。结果 AA-I及AL-I在给药第5天即出现β2-MG排泄量增加,血生化中血浆离子浓度出现异常。AA-I及AL-I在9.0、4.5、2.25 mg/kg的剂量下均能明显抑制AQP1的表达,且存在一定的剂量依赖关系。结论 AA-I及AL-I 均能导致肾脏毒性,且AL-I的肾毒性作用强于AA-I。AA-I及AL-I在肾小管损伤早期均可抑制AQP1表达,这与其早期导致大鼠尿量增加的利尿作用有关。     

通腑法开通玄府对大鼠脑缺血再灌注损伤血脑屏障及脑组织水通道蛋白4 mRNA的影响

目的 研究通腑醒神胶囊(简称TFXSJN)通腑法开通玄府对大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,简称MCAO)再灌注损伤模型血脑屏障(blood brain barrier,简称BBB)通透性及脑组织水通道蛋白4(Aquaporin-4,简称AQP4)mRNA表达的影响.方法 采用线栓法制作大鼠MCAO模型,2 h后拔线造成缺血再灌注损伤.大鼠处死前2 h经股静脉注射伊文思蓝(Evans Blue,简称EB)并测量各组大鼠1,3 d及7 d时脑EB含量,以及拔线后12 h,1,2,3 d及7 d时间点大鼠神经行为评分、脑组织AQP4mRNA的表达水平.结果 TFXSJN治疗后能明显减轻大鼠在1,2,3d及7 d时的神经功能评分,与模型组相比有明显差异(P<0.05或P<0.01);造模后TFXSJN组、模型组脑EB含量在1,3,7 d时均明显高于假手术组(P＜0.05),1 d时开始升高,3 d时达高峰,7 d时有所下降,但仍高于正常,其中3 d时TFXSJN组EB含量明显低于模型组(P＜0.05),1,7 d时TFXSJN组EB含量均数亦低于模型组,但无统计学意义(P>0.05);TFXSJN组及模型组大鼠脑组织损伤侧AQP4mRNA的表达在12 h时已经明显升高,与健侧、假手术组及正常组相比均具有显著性差异(P<0.01);模型组在3 d时达高峰,TFXSJN组在2 d时达高峰,3 d时已有所下降,与模型组损伤侧相比有明显差异(P<0.05),但仍高于健侧(P<0.05).7 d时两组损伤侧的AQP4 mRNA表达水平基本恢复正常,与健侧、假手术及正常组相比无明显差异(P>0.05).假手术组在各时点内其损伤侧AQP4 mRNA表达水平与健侧及正常组相比均无明显差异(P>0.05).结论 脑急性缺血再灌注损伤时存在BBB通透性的增高和AQP4 mRNA基因表达的上调.而TFXSJN通腑法开通玄府法能够调节缺血再灌注损伤后BBB通透性增高与AQP4 mRNA表达的失衡,减轻缺血再灌注损伤,从而起到神经保护作用.其调节BBB通透性与AQP4mRNA基因的异常表达可能是通腑法开通玄府治疗缺血性中风的分子机制之一.因此推测玄府与BBB及细胞膜上通道蛋白(如AQP4等)之间可能存在共同的实质内涵.