人胎儿卵巢组织异种移植的实验研究

目的探讨人胎儿卵巢组织异种移植后的卵泡生长发育情况。方法28只裸鼠行去势手术后分为3组:O组为对照组;A组为新鲜胎儿卵巢组织移植组;B组为冻融人胎儿卵巢组织移植组。A、B两组均于移植1个月后开始隔天注射5 IU的PMSG持续2个月,获取移植物36h前注射HCG。将获取胎儿卵巢组织进行光学显微镜的观察并测各组血清雌二醇(E2)的浓度。结果A、B两组血清E2水平明显高于O组,差异有显著性(P<0.01),A、B两组间无显著性差异(P>0.05)。移植后存活的卵巢组织中有40%~50%的原始卵泡丢失。A、B两组织中均以原始卵泡为主,可见少量初级卵泡和次级卵泡,未见窦卵泡的生长。移植后人胎儿卵巢组织中初级卵泡和次级卵泡的比例较移植前显著增加(P<0.01),A、B两组相比各级卵泡比例无显著性差异(P>0.05)。结论冻融人胎儿卵巢组织移植于裸鼠的背部皮下能存活,其卵泡处于良好的生长发育状态。     

冻融人胎儿卵巢组织异种移植后早期血管生成的实验观察

目的 石观察冻融人胎儿卵巢组织异种移植后1个月内移植物形态学改变,动态了解微血管情况. 方法 将难免流产胎儿的卵巢组织经过冻融,异种移植至18只裸鼠肾被膜下,分别于移植后2d、7d和28d回收移植物.将新鲜、冻融以及移植后不同时间的卵巢组织进行光镜、电镜观察,RT-PCR检测血管相关基因的表达. 结果 移植后2d卵巢组织的微血管密度显著上升,部分血管处于扩张状态;移植后7d微血管密度达到相对高峰且扩张的血管腔消失,微小血管恢复正常形态;移植后28d微血管密度出现轻微下降.电镜观察发现,移植卵巢内多数原始卵泡结构完整;移植后2d间质水肿,血管内红细胞淤积;移植后7d及28d的间质水肿逐渐消退,大量微小血管生长.移植卵巢的人血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素2(Ang-2)mKNA表达均呈双向改变,即在移植后2d上升到高值.此后表达下降. 结论 冻融人胎儿卵巢组织移植后的血管重建在移植后1个月内基本完成,移植后l周是采取措施提高冻融人胎儿卵巢移植效果的关键时期.     

枸杞多糖对小鼠淋巴细胞信号系统的效应

对枸杞多糖发挥免疫调节效应的信号传导系统进行探讨，结果显示，５０￣４００μｇ／ｍＬ ＬＢＰ可剂量依赖性的升高小鼠淋巴细胞内ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ的水平，５０μｇ／ｍｌ可升高ＰＭＡ活化的脾淋巴细胞内ｃＧＭＰ的水平，另外，１００μｇ／ｍｌ ＬＢＰ可增加ＣｏｎＡ活化后的小鼠脾淋巴细胞膜上的ＰＫＣ活性，说明ＬＢＰ的作用途径可能是通过影响ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ系统以及促进的ＰＫＣ活性来发挥免疫调节效应的。     

以胎儿为供体卵巢移植的应用解剖

本文观察了60例女性7个月～足月胎儿尸体的卵巢血供和卵巢的大小,输卵管的长度和峡部外径及子宫动脉升支在子宫角处外径。讨论了供体的戴取方法、受区及其血管的选择和手术切口的设计等。为胎儿为供体的吻合血管卵巢移植提供解剖学资料。     

枸杞多糖对小鼠胸腺细胞程序化死亡的影响

采用电镜、ＤＮＡ琼脂糖电泳和ＦＡＣＳ分析的方法，对枸杞多糖（ＬＢＰ）对小鼠胸腺细胞凋亡的效应进行了研究。结果发现１００μｇ／ｍｌ和４００μｇ／ｍｌＬＢＰ可明显抑制小鼠胸腺细胞培养７小时和２４小时自发出现的细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ），而对１０－７ｍｏｌ／Ｌ地塞米松诱导的细胞凋亡则没有影响。说明ＬＢＰ具有抑制小鼠胸腺细胞自发凋亡的作用，显示出枸杞多糖的一种新的免疫调节效应。     

枸杞多糖对胰岛素抵抗型多囊卵巢综合征大鼠的改善作用及LKB1/AMPK通路的调节作用研究

目的 研究枸杞多糖对多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的改善作用及对LKB1/AMPK通路的调控效果。方法 72只大鼠随机分为空白对照组,模型组,枸杞多糖25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg组及二甲双胍组（12只/组）,采用来曲唑联合高脂饲料喂养方法建立多囊卵巢综合征大鼠模型,枸杞多糖各剂量组分别灌胃给予25 mg/kg、50 mg/kg、100mg/kg的枸杞多糖,二甲双胍组灌胃200 mg/kg的二甲双胍,1次/d,连续28 d。全自动生化分析仪测定大鼠空腹血糖、空腹胰岛素水平,并计算胰岛素抵抗指数;使用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒测定血清睾酮、雌二醇、促卵泡生成素及促黄体生成素水平;苏木精-伊红（H-E）染色法检查卵巢组织病理改变;实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定卵巢组织LKB1、AMPK mRNA水平;免疫印迹法（Western blot）测定卵巢组织LKB1、AMPK蛋白水平。结果 与模型组比较,枸杞多糖各剂量组及二甲双胍组空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数、血清睾酮及促黄体生成素水平均显著降低（P<0.05）,血清雌二醇及促卵泡生成素水平、...     

MicroRNAs对胎儿血红蛋白表达的调控作用

正微小RNA(microRNAs,miRNAs,miRs)是指一群小于22个核苷酸的非编码单链RNA分子,它们可以在转录后水平调节靶基因、染色体构象改变、细胞增殖、分化以及凋亡~([1])。这些单链RNA分子在细胞质中与其它蛋白结合形成miRNA诱导沉默复合物(miRNA-induced silencing complex,miRISC),再结合到靶基因mRNA的3’-UTR抑制其翻译,通过这种     

枸杞多糖对免疫抑制小鼠红细胞免疫功能的影响

目的:探讨枸杞多糖对阿霉素化疗小鼠红细胞免疫功能的影响。方法:取BALB/ c 小鼠给予阿霉素化疗以制备免疫抑制模型,并灌服枸杞多糖(62.5、125、250 mg/ kg)干预处理7 d,实验同时设置正常对照组和模型组。采用流式细胞术检测红细胞膜CD59 表达水平;采用考马斯亮蓝染色法观察红细胞膜Band鄄3 蛋白表达;采用Western blot 法检测红细胞NKEF-A、NKEF-B 表达水平;流式细胞术检测脾NK 细胞杀伤H22 细胞的能力。结果:阿霉素化疗后小鼠红细胞Band-3 蛋白、NKEF-A、NKEF-B 表达水平和NK 细胞杀伤活力均显著降低,而CD59 分子表达未见显著变化。枸杞多糖对化疗小鼠红细胞Band-3蛋白表达、NKEF-A 和NKEF-B 表达水平均有显著恢复作用,并能恢复化疗小鼠NK 细胞杀伤活性。结论:枸杞多糖可以改善化疗小鼠红细胞免疫功能。     

枸杞多糖干预糖尿病大鼠颌下腺组织中核因子κB的表达

背景：核因子κB是一种广泛存在于体内多种细胞的核转录因子,能介导多种炎性递质转录表达,也参与细胞凋亡的调控。 目的：观察枸杞多糖对糖尿病大鼠颌下腺组织中核因子κB表达的影响。 方法：60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、补枸杞多糖组,后2组用四氧嘧啶诱发糖尿病大鼠模型。造模成功后补枸杞多糖组灌胃50%枸杞多糖水溶液,糖尿病组和对照组灌胃等容量生理盐水,连续灌胃8周。 结果与结论：灌胃8周后糖尿病组和补枸杞多糖组体质量低于正常对照组(P < 0.05),补枸杞多糖组体质量高于糖尿病组(P < 0.05)。灌胃8周后糖尿病组、补枸杞多糖组血糖高于正常对照组(P < 0.05),补枸杞多糖组血糖低于糖尿病组(P < 0.05)。核因子κB在正常颌下腺中无表达或仅有少量表达;糖尿病时表达量明显增多,而补枸杞多糖组表达量则明显减少。结果可见枸杞多糖能够抑制核因子κB的活化与表达,对糖尿病大鼠颌下腺组织起到一定的保护作用。     

卵巢组织玻璃化冷冻保存和移植的研究进展

背景：卵巢组织玻璃化冷冻技术作为一种快速、简便、经济的冷冻方式被逐渐应用于卵巢组织的保存。 目的：综述国内外关于卵巢组织玻璃化冷冻保存及移植的研究进展。 方法：由第一作者检索1995/2011 PubMed数据库及清华同方数据库有关卵巢组织玻璃化冷冻保存以及卵巢组织移植技术等方面的文献。 结果与结论：玻璃化冷冻是一个超高速的冷冻过程,形成高黏度的“玻璃样凝固状态”,可以避免由于冰晶形成所造成的细胞损伤。但至今玻璃化冷冻仍缺乏统一的标准化程序。影响卵巢组织玻璃化冷冻保存效果的主要因素有卵巢组织块的大小、冷冻保护剂的种类、渗透平衡的时间和温度、冷冻载体等。随着低温生物学的发展和卵巢组织冷冻保存效果的提高,卵巢组织的移植已经具备了一定的临床应用可行性。到目前为止,全世界已有一系列关于冻存卵巢组织移植后成功妊娠及分娩的报道,移植成功的关键在于减少缺血再灌注损伤和促进新生血管的形成。关键词：卵巢组织;玻璃化冷冻;移植;保存;综述 缩略语注释：SSV：solid-surface vitrification,固体表面;NIV：needle immersed vitrification,针浸润玻璃化冷冻法;DCV：direct cover vitrification,直接覆盖玻璃化方法 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.18.039     

枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响

背景：精原干细胞移植对不育具有潜在的临床应用价值,体外建立精原干细胞的培养系统获得数量较多的精原干细胞,仍是目前研究中亟待解决的问题。 目的：观察枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响。 方法：采用两步酶消化法获取出生4~6 d雄性C57BL/6小鼠睾丸Sertoli细胞与精原干细胞,将精原干细胞接种在Sertoli细胞饲养层上,再加入枸杞多糖或联合细胞因子添加到细胞培养液中。1周后以流式细胞仪检测细胞周期及细胞活性率,并检测各组精原干细胞GFRa-1、Thy-1、c-kit的阳性率。 结果与结论：单独加入枸杞多糖后精原干细胞数量明显增加,增殖明显,联合加入胶质细胞源性神经营养因子与白血病抑制因子精原干细胞增殖更加明显(P < 0.05)。并发现体外培养1周后的精原干细胞仍保持其睾丸组织内的精原干细胞特征,大多仍维持在未分化状态。表明在枸杞多糖或枸杞多糖联合胶质细胞源性神经营养因子及白血病抑制因子作用下,可促进精原干细胞体外增殖。     

Effects of mouse ovarian tissue cryopreservation on granulosa cell-oocyte interaction

BACKGROUND: Current ovarian tissue cryopreservation protocols have yet to be assessed in terms of somatic-germ cell interaction. Accordingly, post-thaw analysis of antral follicles can yield relevant data on the disruption of the granulosa-oocyte interface. METHODS: We compared fresh mouse ovarian tissue with tissues that had been either cryopreserved using dimethylsulphoxide (DMSO) or glycerol as cryoprotectants, or exposed to such cryoprotectants without freezing. The assessed parameters were: number of immature oocytes retrieved per ovary, allocation of the oocytes to different classes regarding antral follicle size and oocyte-granulosa cell adhesion, and the relative density of transzonal processes containing filamentous actin (TZPs-Act). RESULTS: Although cryopreservation reduces the average number of oocytes retrieved per ovary, it increases the relative distribution of granulosa-free oocytes while decreasing that of granulosa-enclosed ones. Additionally, a post-thaw decrease in TZPs-Act density was recorded. This decrease was also observed after cryoprotectant exposure without freezing, although at a lower level. For the assessed parameters, DMSO was more effective than glycerol as a cryoprotectant. CONCLUSIONS: In situ cryopreservation of granulosa-oocyte complexes with current protocols disrupts the granulosa-oocyte interface. The different patterns of granulosa cell adhesion and interaction in oocytes derived from different-sized antral follicles further suggests that the granulosa-oocyte interface may be developmentally regulated.     

枸杞多糖对氯化甲基汞诱导海马神经干细胞损伤的保护作用

目的 观察分析枸杞多糖对氯化甲基汞所诱导神经干细胞(NSCs)损伤的影响.方法 取孕16 d SD大鼠胚胎的海马组织,分离纯化得到海马NSCs.将纯化后的海马NSCs增殖、生长10 d后,按随机分组方法 将其分为空白对照组(DMEM/F12培养基);枸杞多糖组(DMEM/F12培养基+枸杞多糖);氯化甲基汞组(DMEM/F12培养基+氯化甲基汞);氯化甲基汞+枸杞多糖组(DMEM/F12培养基+氯化甲基汞+枸杞多糖).分别测定各组生长环境中的海马NSCs分化、生长的情况,观察分析氯化甲基汞对海马NSCs的损伤作用,以及枸杞多糖干预后对海马NSCs的影响.结果 氯化甲基汞组和空白对照组比较,加入氯化甲基汞后的海马NSCs分化后的神经元比例(3.63%±0.62%)和神经元的周长(63.36μm ±5.57 μm)都较空白对照低;枸杞多糖组和其他各组比较,海马NSCs分化后的神经元比例(7.75%±0.59%)和神经元的周长(253.3μm ±11.21μm)都较其他各组高;氯化甲基汞+枸杞多糖组和氯化甲基汞组比较,前者生长环境下的海马NSCs分化后的神经元比例(5.92%±0.98%)和神经元的周长(111.9μm ±6.07μm)较氯化甲基汞组高.结论 氯化甲基汞对海马NSCs的分化、生长具有损伤作用;枸杞多糖可以减轻氯化甲基汞对海马NSCs的损伤作用,并能促进海马NSCs向神经元的分化及神经元的生长.     

枸杞多糖体外对正常及衰老小鼠免疫细胞功能的作用及作用机理的初步研究

目的：探讨枸杞多糖（ＬＢＰ） 对免疫细胞功能的直接作用及其机理。方法：应用淋巴细胞增殖、溶血空斑和Ｆｕｒａ２ＡＭ 双波长荧光测定等方法。结果：ＬＢＰ体外应用对正常小鼠及快速老化模型ＳＡＭＰ８ 和抗快速老化模型ＳＡＭＲ１ 脾细胞增殖反应具有直接促增殖作用,明显增加正常小鼠脾抗体形成细胞（ＰＦＣ） 数目,迅速诱导脾细胞和腹腔巨噬细胞内［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 的增加,并有一定剂量依赖性关系。结论：枸杞多糖对免疫活性细胞的功能有直接促进作用,这可能与其增加细胞［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 有关。     

Indications for cryopreservation of ovarian tissue

For patients who are planning to have chemotherapy, radiotherapyor to undergo bilateral oophorectomy, loss of ovarian functionwill result in premature ovarian menopause and loss of fertility.For these women, although there is no successful method forthe cryopreservation of human oocytes, ovarian tissue cryobankingis proposed with a view to its autotransplantation at a laterdate or the isolation and in-vitro maturation of oocytes. Embryopreservation is indeed not an option for single women and evenfor married women because delaying treatment for at least 2months of in-vitro fertilization cycles is inappropriate andlife-threatening. Following the success of animal experiments,there have been reports of ovarian cryopreservation for womenhaving to receive chemotherapy and/or radiotherapy. We presentfour case reports of ovarian tissue cryobanking and review theconsequences of chemotherapy and radiotherapy on gonadal function,as well as the indications for freezing ovarian tissue.     

卵巢组织冷冻保存的研究进展

卵巢冷冻技术可保存卵巢中大量的生殖细胞,将冷冻的卵巢组织解冻移植后可恢复卵巢的内分泌功能和生育能力,是癌症患者保存生育能力的一个理想途径。在该技术中诸多因素,如冷冻保护剂(CPA)、冷冻载体、皮质块大小以及冷冻方法等均影响着卵巢冷冻保存的效果;且目前尚缺乏高效、统一和标准的技术程序,因而限制了该技术在临床和科研中的广泛使用。为优化该技术程序,改善冷冻后卵巢功能的恢复情况,本文对影响该技术使用效果的一些因素进行了论述。     

玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞和颗粒细胞的影响

目的探讨玻璃化冷冻法保存小鼠卵巢组织对卵泡内卵母细胞和颗粒细胞的影响。方法分别应用两种玻璃化冷冻方案(ED20和EE40)冷冻小鼠卵巢组织,常规组织学检测新鲜和复苏卵巢组织内卵泡形态,同时应用TUNEL方法观察冻融前后卵泡内卵母细胞和颗粒细胞凋亡情况。结果ED20组和EE40组卵泡存活率分别为78.99±5.99%和71.50±5.81%,明显低于新鲜卵巢组织。冻融组织卵泡凋亡率较冷冻前显著升高。ED20组、EE40组和新鲜对照组颗粒细胞凋亡的卵泡比例分别为8.30±2.14%、11.98±2.34%和4.95±1.62%,差异有显著性;而冷冻前后卵母细胞凋亡的卵泡比例无明显差异。结论玻璃化冻融过程对小鼠卵泡中颗粒细胞的损伤较大,而对卵母细胞的影响较小。     

不同冷冻方案保存人类卵巢组织的活性比较

背景：卵巢组织冷冻保存被认为是保存女性生殖内分泌功能安全、有效的方法,但目前尚无统一确定的方案。目的：探讨3种冷冻方案对人类卵巢组织保存冷冻效果及卵泡活性的影响。方法：采用丙二醇慢速程序冷冻法、二甲基亚砜玻璃化冷冻法、液氮直投法对20例人类卵巢组织进行冷冻保存,复苏后采用细胞存活/死亡荧光分析法计数有活性的细胞,体外培养测定培养液雌二醇浓度及各级卵泡计数,判断3种不同冷冻方案对人类卵巢组织活性的影响。结果与结论：不同冷冻方案冻融后卵巢组织块的活性卵泡率均低于新鲜卵巢组(P < 0.05),二甲基亚砜组最低,液氮直投法组与慢速程序冷冻法组差异无显著性意义。体外培养各冷冻组分泌的雌二醇水平比较,第4天时二甲基亚砜组低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组(P < 0.05),至第8天时各冷冻组雌二醇水平与新鲜卵巢组一致。培养14 d组织学观察,各组卵巢组织内生长期卵泡比例增多,始基卵泡仍然占最主要的。新鲜卵巢组织正常卵泡的总数高于冷冻组(P < 0.05),二甲基亚砜组的正常卵泡数低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组(P < 0.05)。提示冷冻保存对卵巢组织卵泡有一定的损伤,但仍能保存大部分始基卵泡的活性,经体外培养后可进一步发育并具有分泌功能,在3种冷冻方案中,慢速程序冷冻法和液氮直投法的冷冻效果优于二甲基亚砜玻璃化冷冻法,液氮直投法操作简便,冷冻效果稳定。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

Human ovarian tissue cryopreservation: indications and feasibility

BACKGROUND: The cryopreservation of ovarian tissue may enable women exposed to gonadotoxic treatments to have children at a later date. METHODS: Between April 1998 and October 2000, we evaluated the feasibility of long-term ovarian tissue cryopreservation in 51 women who were all at risk of becoming sterile following treatment. RESULTS: Ovarian tissue was not cryopreserved in 20 cases because of the woman's age or premature ovarian failure. In 31 patients, ovarian tissue was frozen by a slow cooling technique using DMSO and sucrose as cryoprotectants. The patients were aged 2.7-34 years and 16 of them were <18 years old. Cryopreservation could be performed in all cases. Ovarian cortex histology was performed for all patients to evaluate the concentration of follicles. The mean number of primordial and primary follicles per mm(2) was 20.36 +/- 19.03 before 10 years of age, 4.13 +/- 2.9 between 10 and 15 years of age and 1.63 +/- 3.35 after 15 years of age. An average mean number of 26 +/- 8.2 ovarian fragments (range 13-50) were cryopreserved per patient for future autografts or for in-vitro growth of follicles. CONCLUSION: Cryopreservation of ovarian tissue may be systematically proposed to young women and girls at risk of becoming sterile as a result of gonadotoxic treatment.     

快速深低温冻存对新生大鼠卵巢组织免疫原性的影响

目的:探讨快速冻存法冻存新生大鼠卵巢器官的效果,以及冻存对卵巢抗原性的影响。方法:采用快速冻存法冻存出生1 d的鼠(新生鼠)卵巢组织,移植入同系去卵巢成年雌性大鼠的肾被膜下,利用免疫组织化学方法及Western blot检测观察移植物内CD8 和CD4 T淋巴细胞的浸润情况。结果:新生鼠卵巢组织移植后动情周期恢复率(66.67%)低于新鲜移植组(90.51%),但无显著性差异。各移植物内毛细血管丰富;有正常发育阶段的各级卵泡、间质腺及闭锁卵泡;CD8 和CD4 阳性细胞计数值及其蛋白表达明显低于新鲜移植组。结论:快速冻存法可有效地冻存新生鼠的卵巢;冻存降低新生鼠卵巢组织抗原性。