裸小鼠人大肠癌淋巴道转移模型的建立

 目的建立一种人大肠癌简便、可行、稳定的淋巴道转移研究动物模型。方法裸鼠爪垫皮下注射人结肠癌HCT-116细胞,接种后在1~6周及8周不同时间段取材;收集腹股沟、腘窝,髂血管旁,肾门淋巴结以及肝肺脏器;进行HE染色及CEA免疫组化检测。观察种植瘤的成瘤率、生长情况以及淋巴结转移规律。结果爪垫种植1周后成瘤率100%。3周后淋巴结开始转移,到6周时第一级腹股沟腘窝淋巴结完全转移,转移率100%,其中腹股沟淋巴结转移阳性率76.9%(10/13);第二级髂血管旁淋巴结部分转移,转移率40%(2/5);未见第三级肾门淋巴结转移。到8周时见髂血管旁淋巴结转移率60%(3/5),肾门淋巴结开始转移(1/5),但均未见肝肺远处转移。HE染色及CEA免疫组化染色发现淋巴结有弥漫性癌细胞浸润。结论裸鼠爪垫皮下注射可成功建立人大肠癌淋巴道转移模型。此模型快速简便、转移集中、转移率高,可为研究结直肠癌淋巴道转移机制,药物干预等抗转移治疗提供理想的动物模型。     

裸鼠转基因结肠癌肝转移模型的建立

目的 探讨裸鼠转基因结肠癌肝转移模型的建立方法。方法 应用体外转染法和体内转染法建立裸鼠转基因结肠癌肝转移的动物模型。观察肝脏转移率和自然生存期;瘤组织作病理切片;实时荧光定量（Real-Time RT-PCR）检测CD基因表达,Western blot检测目的基因蛋白表达。结果 体外转染法与体内转染法裸鼠肝脏转移率、自然生存期比较差异无统计学意义[100％(15/15),100％(15/15); (40.60±2.2297)d, (41.73±2.4919)d; P>0.05]。实时荧光定量PCR进行相对定量比较,体内转染法CD基因的表达活性低于体外转染法（P＜0.05,t=2.758）。体内转染法瘤组织CD基因蛋白表达低于体外转染法。结论 体外转染法建立裸鼠转基因结肠癌肝转移模型,目的基因在瘤组织中能更稳定、持续表达。     

人结肠癌裸鼠肝转移模型的建立

目的 建立人结肠癌裸鼠肝转移模型,用于肿瘤转移防治的实验研究。方法 30只裸鼠随机分为两组,分别用肝脏注射法和脾脏注射法建立结肠癌肝转移模型, 术后待裸鼠濒临死亡或自然死亡时,观察其生存天数,解剖裸鼠,观察腹腔内转移情况和肝脏成瘤的情况。结果 两组裸鼠的肝脏成瘤率均为100%,生存期无明显差异。肝脏注射组裸鼠均于注射部位出现单一的巨大瘤结节,脾脏注射组裸鼠肝脏表面及切面见多发散在的转移瘤结节。两组的肝脏瘤组织细胞形态学相似,符合低分化腺癌的特征。结论 经脾注射法建立裸鼠结肠癌肝转移模型比较符合结肠癌体内肝转移过程的规律,是一种简便有效的、重复性好的方法。     

EGFP标记的人肺癌裸鼠原位移植模型的建立

背景与目的 小鼠活体分子成像模型可以连续实时监测活体肿瘤的变化.本研究拟通过外科原位移植法建立表达绿色荧光蛋白的肺癌裸鼠原位移植模型并探讨其肿瘤生物学特性,从而建立一个良好的肺癌动物实验研究平台.方法 利用逆转录病毒转染法将增强型绿色荧光蛋白基因导人人肺癌大细胞系NCI-H460,采用外科原位移植法建立肺癌原位移植模型.定期通过小动物活体荧光成像系统观察肿瘤生长,利用相关性检验分析荧光面积和肿瘤体积之间的相关关系,并观察原位移植术后裸鼠的生存期和肿瘤转移情况.结果 模型建立后1周通过皮瓣在荧光体视镜下可观察到肺部肿瘤的绿色荧光,成瘤率为100%.荷瘤裸小鼠平均生存期为34.2天.解剖裸鼠观察到肿瘤侵及对侧肺、纵隔及肺门淋巴结、胸膜和膈肌,转移率分别为87.596、75%、25%和12.5%.肿瘤体积和荧光面积具有相关性(r=0.873,P=0.001).结论 外科原位移植法建立的表达EGFP的裸鼠肺癌原位模型是肺癌临床前研究的理想的实验工具.应用小动物活体荧光成像系统能够定量客观评价肿瘤在动物体内的生长、侵袭和转移,该模型可应用于肺癌的基础研究和新药开发.     

肿瘤转移相关基因 TMSG-1编码蛋白的定位

目的　明确肿瘤转移相关基因TMSG 1编码蛋白在细胞内的定位。方法　计算机分析TMSG 1的跨膜区 ,构建GFP与TMSG 1融合蛋白表达载体pEGFP C1 TMSG 1,以LipofectAMINE介导转染人前列腺癌细胞PC 3M 1E8,荧光显微镜与共聚焦显微镜下观察。结果　计算机分析表明所示 ,TMSG 1有四个跨膜区 (aa33～ 4 8,aa6 4～ 79,aa114～ 130 ,aa15 8～ 174 ) ,推测其为跨膜蛋白。PSORTⅡ软件分析TMSG 1蛋白定位于胞浆 (可靠性 94 .1% ) ,具体位置为内质网 6 6 .7%、线粒体 11.1%、质膜 11.1%、高尔基体 11.1%。显微镜下观察TMSG 1 GFP融合蛋白表达于胞浆 ,呈不均匀的颗粒状、环状分布 ;而对照的GFP蛋白则在胞核和胞浆呈弥漫性分布。结论　TMSG 1蛋白定位于细胞内膜系统 ;利用GFP进行的亚细胞定位具有精确、快速、可重复等优点 ,是研究基因与蛋白定位的有效方法。     

Orthotopic Transplant Mouse Models with Green Fluorescent Protein-expressing Cancer Cells to Visualize Metastasis and Angiogenesis

There have been major efforts in metastasis research in recent years, especially on the role of angiogenesis in the metastatic process. Much of the information in this area has been obtained from model systems that are not representative of clinical cancer. The technique of surgical orthotopic implantation (SOI) has allowed the development of clinically relevant metastatic models of human cancer in immunodeficient rodents such as the nude and SCID mouse. In order to allow direct visualization of the metastatic process, we took advantage of the green fluorescent protein (GFP) of the jellyfish, Aequorea victoria. A series of cancer cell lines have been stably transfected with vectors containing humanized GFP cDNA. To utilize GFP expression for metastasis studies, fragments of subcutaneously growing tumor, which were comprised of GFP-expressing cells, were implanted by SOI in nude mice. Subsequent metastases were visualized in systemic organs by GFP fluorescence in the lung, liver, bones, brain and other organs down to the single-cell level. With this fluorescent tool, we detected and visualized for the first time tumor cells at the microscopic level in fresh viable tissue in their normal host organs even in the live animal. Angiogenesis is readily visualized in the transplanted GFP-expressing tumors in real time in situ in the live animal using simple laparotomy and fluorescent techniques. The results with the GFP-transfected tumor cells, combined with the use of SOI, demonstrate a fundamental advance to visualize and study cancer metastasis and the role of angiogenesis and other factors in the metastatic process. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

尿液中尿膀胱癌抗原和钙网蛋白联合检测对原发性膀胱癌的诊断价值

目的评价尿液中尿膀胱癌抗原（UBC）和钙网蛋白（CRT）联合检测对原发性膀胱癌的诊断价值。方法 76例膀胱癌患者、50例泌尿系统良性疾病患者均在膀胱镜检查前留取尿液,用ELISA法进行UBC、CRT定量检测,同时进行尿液中脱落细胞学检测。结果 UBC和CRT诊断膀胱癌的敏感性分别为89.47%和82.89%,高于脱落细胞学的51.32%（P〈0.05）;3种诊断方法对膀胱癌的诊断特异性分别为92.00%、78.00%和94.00%。联合检测UBC和CRT诊断膀胱癌的敏感性和特异性高达94.74%、94.00%。结论尿液中UBC和CRT是早期诊断膀胱癌较好的肿瘤标志物,而两者联合检测能进一步提高诊断效率。     

乳腺癌移植转移模型的建立与应用

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,而转移是乳腺癌患者死亡的主要原因。乳腺癌转移模型是筛选乳腺癌转移相关基因、探讨肿瘤转移分子机制和评价抗转移实验性治疗疗效的重要工具。乳腺癌转移模型主要包括自发性转移模型、诱发性转移模型、转基因肿瘤转移模型和移植性转移模型。移植性肿瘤转移模型以其操作简单、重复性好和生物学性状稳定等优点应用最为广泛。乳腺癌移植性转移模型按建立方法可分为实验性转移模型和自发性转移模型。乳腺癌实验性转移模型是直接将瘤细胞注入血液循环系统后在远处驻留增殖形成转移灶,实验周期短、转移发生率高,费用低,但缺少原发灶的形成和肿瘤细胞从原发灶逃逸的过程。乳腺癌自发性转移模型是将瘤细胞或瘤块接种于皮下、肌肉和乳腺脂肪垫组织,在局部形成原发癌后自发转移,涉及了从原发灶产生到转移灶形成的乳腺癌转移的完整过程,是较好的研究乳腺癌转移机制的工具。近年来对移植转移模型转移灶的检测有了较大进展,采用活体动物成像技术不但能在肿瘤发生早期探测到各组织器官内的微小转移灶,还可以动态监测肿瘤细胞在动物体内的转移状态。本文对乳腺癌移植性转移模型的分类、模型建立方法、转移灶的检测,以及该类模型在乳腺癌转移分子机制和抗转移治疗研究中的应用进行综述。     

NG-Nitro-L-arginine Methyl Ester Inhibits Bone Metastasis after Modified Intracardiac Injection of Human Breast Cancer Cells in a Nude Mouse Model

We investigated the effects of N^G-nitro-L-arginine-methyI ester (L-NAME), a nitric oxide synthase (NOS) inhibitor, on hone metastasis of human breast cancer, MDA-231 cells. Tumor cells (2 × 10⁵ cells in 0.2 ml of phosphate-buffered saline; PBS) were injected through the diaphragm into the left ventricle of the heart of laparotomized nude mice (male 5-week-old ICR- nu/nu ). L-NAME (2 mg/ mouse/injection in 0.1 ml of PBS) was given intraperitoneally to mice 6 h and 3 h before and immediately, 3 h, 6 h, 18 h and 21 h after the intraeardlac injection of tumor cells. As a control, 0.1 ml of PBS was injected instead of L-NAME. The effect of N^G-nitro-D-arginine-methyl ester CD-NAME; 2 mg/mouse/injection), an inactive analogue of L-NAME, was also investigated to evaluate the specificity of L-NAME action. Radiographical examination 31 days after the tumor-cell injection showed that the incidence and number of osteolytic bone metastases and the number of bones with metastasis in L-NAME-treated mice were significantly reduced compared with those in PBS-treated mice (P<0,05). The differences between PBS-treated and D-NAME-treated mice were not significant. Our findings suggest that specific and appropriate NOS inhibitors may represent a new pharmacological approach to therapy for cancer patients at risk of developing osteolytic bone metastases.     

人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及生物学性状的鉴定

目的　建立人卵巢上皮性癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,为人卵巢癌的诊断及治疗诸方面提供理想的在体研究工具。方法体外培养人卵巢上皮癌细胞株SKOV 3 ,采用皮下注射方式接种至裸小鼠 ,待肿瘤直径达 0 .8cm～ 1.0cm时 ,将其切下剪成直径为1mm～ 2mm小块 ,再接种至另一裸鼠皮下进行传代。病理组织学检查或透射电镜观察肿瘤 ,并观察染色体特征 ,检测裸鼠血清和肿瘤组织中肿瘤标志物CA12 5、CEA、AFP的浓度。结果　成功地建立了人卵巢上皮性癌细胞株SKOV 3裸小鼠皮下移植瘤模型 ,并传至第二代 ,原代接种成功率为 69.2 % (2 7/ 3 9) ,鼠间传代移植成功率为 10 0 .0 % ,具备人肿瘤生物学特点 ,但未观察到转移行为。裸鼠血清CA 12 5浓度低 ,但在肿瘤冻融产物中较高。结论　建立的人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型具有人卵巢癌特征 ,可用于研究卵巢癌的生物学特性 ,为卵巢癌临床诊断及治疗研究提供有用工具。     

丝裂霉素C白蛋白磁性微球用于裸鼠人肝癌模型疗效观察

观察了自制丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）白蛋白磁性微球用于裸鼠人肝癌模型的疗效。结果显示：ＭＭＣ白蛋白磁性微球不仅是安全的，而且在体外磁场作用下可较长时间内沉积于靶区。分组试验显示：治疗组肿瘤体积缩小，与生理盐水对照组和ＭＭＣ对照组具有显著差异（第２、３周Ｐ＜０．０１，第１、４周Ｐ＜０．０５）；治疗组平均生存时间比上述两组对照组明显延长（Ｐ＜０．０５）。ＭＭＣ白蛋白磁性微球直接瘤内注射外加磁场的方法治疗裸鼠人肝癌模型有显著疗效。     

裸鼠原位膀胱癌放射性核素内照射治疗的实验研究

目的探讨膀胱内灌注125Ⅰ-脱氧尿嘧啶核苷（125IUdR）对裸鼠原位膀胱癌治疗的有效性与可行性。方法裸鼠原位膀胱癌模型设立对照组、MMC组、125IUdR组和联合组,通过流式细胞仪分析、实时定量PCR检测、病理学检查、caspase-3蛋白检测和生存分析比较各组的治疗情况。结果 MMC组、125IUdR组和联合组裸鼠的膀胱肿瘤重量均明显小于对照组,抑瘤率分别为33.45%、31.46%和50.27%;流式细胞仪检测显示125IUdR组和联合组肿瘤细胞的S期百分比较对照组明显降低,[分别为（3.9±0.7）%和（0.18±0.03）%],而凋亡指数明显高于对照组[分别为（3.367±1.629）%和（25.767±11.875）%];治疗组肿瘤细胞p21基因mRNA表达水平明显高于对照组;Caspase-3检测治疗组凋亡细胞数明显多于对照组;治疗组裸鼠的生存时间较对照组明显延长。结论膀胱内灌注125IUdR对裸鼠膀胱癌的治疗安全有效;125IUdR能选择性杀伤DNA合成S期的肿瘤细胞,显著抑制膀胱癌细胞的增殖,干扰膀胱癌细胞的DNA合成;氨甲喋呤联合125IUdR具有协同效应,可增强疗效。     

Marimastat对裸鼠原位种植人胃癌生长和转移抑制的实验研究

目的 探讨基质金属蛋白酶抑制剂Marimastat对胃癌生长和转移的抑制作用。方法 采用人胃腺癌细胞株SGC—7901完整组织块棵鼠原位种植，建立胃癌转移模型。移植7天后开始腹腔内注射Marimastat，隔天1次，剂量为0mg/kg(对照组)、10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg(治疗组)，共用8周，第9周处死动物，测量原位肿瘤大小、抑瘤率、肿瘤微血管密度(MVD)、MMP—9的高表达率、观察肿瘤转移情况。结果 治疗组原位肿瘤瘤重明显较对照组轻，肿瘤肝脏转移、腹膜转移、肿瘤组织微血管密度和肿瘤组织MMP—9高表达率与对照组比较，均有显著性差异(P＜0．05)，且与Marimastat剂量呈正相关。结论 Marimastat对体内胃癌的生长及转移均有抑制作用。     

人ACHN肾癌裸鼠荷瘤模型建立及相关特性研究

[目的]探讨建立肾癌ACHN细胞系裸鼠皮下移植瘤及转移瘤模型的适宜条件。[方法]MTT法观察细胞生长情况。将裸鼠分组，分别用2、0×10^6／100μl（A组）、3．0×10^6／100μl（B组）和4．0×10^6／100μl（C组）的细胞接种浓度．注入裸鼠后项中间皮下：用4．0×10^6／100μl的细胞接种浓度，分别接种于裸鼠后项中间（C组）、背部（D组）和前肢腋窝皮下（E组）；分别用第20代（F组），第30代（G组）和第10代（C组）的肿瘤细胞4．0×10^6／100μl，注入裸鼠后项中间，观察各组成瘤情况。尾静脉注射瘤细胞1.0×10^6／ml建立转移模型。[结果]第4天细胞进入对数生长期。A组成瘤率为33.3％、B组和C组的成瘤率均为100％，但C组的成瘤速度明显高于B组：C组、D组和E组的成瘤率均为100％，注射肿瘤细胞后第10天，C组、D组和E组的肿瘤生长平均相对体积，各组间尚无明显差异；注射后第30天，C组的肿瘤生长平均相对体积显著高于D组和E组（P〈0．05）；G组的成瘤率为83.3％，F组的成瘤率为100％，与C组相比，无显著性差异（P〉0．05）。尾静脉注射组全部出现转移灶。[结论]使用ACHN细胞株，控制好浓度、接种部位以及传代次数后能获得较理想的裸鼠肾癌皮下移植瘤模型：使用传统尾静脉注射法可以建立裸鼠转移模型。     

大肠癌裸小鼠原位移植肝转移模型的建立与比较

目的:建立符合人大肠癌肝转移生长过程及特点、操作简便可行、结果稳定的人大肠癌裸小鼠原位移植肝转移模型.方法:以人结肠癌HCT-8、HCT-116细胞株对裸鼠分别行盲肠组织块包埋种植、盲肠浆膜下和直肠粘膜下瘤细胞注射构建大肠癌原位移植模型.比较三种方法的成瘤效果、荷瘤鼠生存期及肝转移形成情况.结果:HCT-8细胞盲肠组织块包埋种植法成瘤率83% (10/12),荷瘤鼠平均生存期134天(102天～174天);盲肠浆膜下注射法成瘤率16%(2/12),荷瘤鼠平均生存期80天(67天～93天),直肠粘膜下注射法成瘤率75%(9/12),荷瘤鼠平均生存期72天(58天～86天);本组没有观察到肝转移发生.HCT-116细胞盲肠组织块包埋种植时,成瘤率90%(18/20),6周时开始出现肝转移(1/4,25%),8周时肝转移率进一步增加(3/4,75%),部分裸鼠同时出现肺转移(1/4,25%).结论:利用人结肠癌HCT-116细胞行盲肠组织块包埋种植成瘤效果稳定,肝转移率高,是理想的大肠癌原位移植肝转移造模方法.     

Establishment and Characterization of a New Spontaneous Metastasis Model of Human Gastric Carcinoma in Nude Mice

A poorly differentiated medullary carcinoma of human stomach, designated HY–1, was successfully transplanted to nude mice by either the subcutaneous or intramuscular route for five generations. The transplanted tumor showed spontaneous lung metastases in nearly 100% of KSN and Balb/c female nude mice. There were over 20 visible lung metastatic nodules in KSN and Balb/c nude mice bearing tumors for over SO days. Immunostaining of type IV collagen and electron microscopy revealed that tumor cells were often in direct contact with basement membrane (BM) of tumor blood vessels in the primary tumor tissue. At the site of contact between tumor cells and vascular BM, focal disappearance of the BM, disruption of endothelial cells and entry of tumor cell clusters into vascular lumen were observed. Immunostaining of 72 kDa gelatinase/type IV collagenase demonstrated that tumor cells expressed this enzyme in their cytoplasm. These results suggest that spontaneous metastasis of this tumor may be partly due to a marked tendency to vascular invasion involving the following sequential events: tumor cell contact with vascular BM, BM degradation possibly by 72 kDa gelatinases and endothelial disruption. This model could be a useful tool for understanding the mechanism of hematogenous metastasis of human gastric cancer.     

裸小鼠人宫颈癌组织模型的建立及其生物学特性初探

目的 建立人宫颈癌HeLa细胞在裸小鼠的体表肿瘤模型,并研究其成瘤性及生物学特性。方法 以不同浓度人宫颈癌HeLa细胞悬液在裸小鼠皮下接种建立人宫颈癌裸小鼠模型,观察荷瘤鼠的成瘤率及肿瘤的一般特性,病理检查其组织学特性,流式细胞术检测其生长、凋亡情况,免疫组织化学法检测肿瘤组织中Survivin,Caspase-3和JAK-STAT3蛋白的表达情况。结果 成瘤率为100%,肿瘤生长以局部浸润为主,未见转移瘤,所有新生肿瘤组织符合人宫颈癌细胞组织特点,绝大多数肿瘤细胞处在增殖分化期,标本宫颈癌组织中有Survivin,Caspase-3和STAT3蛋白的阳性表达。结论 成功建立了裸小鼠人宫颈癌组织模型,该模型较好地模拟了人宫颈癌的生物学特性,为进一步研究针对诱导细胞凋亡治疗的新方法提供了理想的动物模型。初步观察了不同浓度HeLa细胞悬液接种生长的肿瘤组织在生长方面的区别。     

人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤模型的研究

将1例人食管癌手术切除组织移植于NIH裸小鼠皮下，建立了人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤模型（Eca910709），已传25代，历时2年余传代移植成功率100％。该移植瘤病理组织学的结构与原人体肿瘤的形态相似．电镜形态属鳞状细胞癌。用地高辛标记的Alu探针及DNA－DNA原位杂交方法，证实移植癌中有Alu序列存在，表明移植瘤来源于人类组织。该移植瘤的建立将有助于食管癌病因、发病机理及治疗的研究．     

原位红色荧光标记骨肉瘤肺转移裸鼠模型的建立

目的 利用红色荧光蛋白（RFP）基因建立原位骨肉瘤肺转移裸鼠模型,为体内监测骨肉瘤的生长及抗肿瘤药物的药效评价建立一种肿瘤动物模型。方法 以包含逆转录病毒pLNCX DsRed 2的PT67包装细胞转染人骨肉瘤细胞系143B,在裸鼠胫骨近端原位接种使其成瘤,活体荧光成像系统观察骨肉瘤的生长及肺转移情况。结果 获得稳定表达红色荧光蛋白的人骨肉瘤细胞株,原位接种的肿瘤发生率达100％,肺转移率为80％。通过活体荧光成像系统于移植1周观察到肿瘤形成,移植4周肿瘤呈梭形膨胀,移植6周肿瘤呈分叶状球形,发光强度亦逐渐增加。结论 通过建立原位骨肉瘤肺转移裸鼠模型可以观察原位骨肉瘤的不同生长过程以及肺转移情况,是研究骨肉瘤生长及肺转移相关因素的一种重要工具。