华蟾素介导miR-497-5p/VEGFA通路调控肺癌细胞的增殖、凋亡及血管生成

目的:探讨华蟾素介导miR-497-5p/VEGFA通路对肺癌细胞增殖、凋亡及血管生成的影响。方法:选取肺癌细胞株A549、H460为研究对象,以不同浓度华蟾素（0、25、50、75、100、125、150 μg/mL）作用细胞株,采用MTT检测细胞活力。随后,设置组别为空白组、华蟾素组（100 μg/mL华蟾素）、华蟾素+inhibitor NC组、华蟾素+miR-497-5p inhibitor组,通过MTT检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中VEGF、VEGFA蛋白表达;RT-qPCR检测细胞中miR-497-5p表达;并采用荧光素酶报告实验确定miR-497-5p靶向VEGFA。结果:随着华蟾素浓度的升高,A549、H460细胞增殖活力明显下降（P＜0.01）;与空白组相比,华蟾素组A549、H460细胞克隆形成能力明显降低、细胞凋亡明显增加、VEGF和VEGFA蛋白表达明显降低、miR-497-5p mRNA表达明显升高（P＜0.01）;荧光素酶报告实验显示miR-497-5p靶向VEGFA;与华蟾素+inhibitor NC组相比,华蟾素+miR-497-5p inhibitor组A549、H460细胞中miR-497-5p mRNA表达明显降低、VEGF和VEGFA蛋白表达明显升高、细胞克隆形成能力明显增加、细胞凋亡明显被抑制、细胞增殖活力明显增加（P＜0.05）。结论:华蟾素可能通过调控miR-497-5p/VEGFA通路从而抑制肺癌细胞增殖和血管生成,并诱导细胞凋亡。     

姜黄素通过下调miR-186*促进人肺腺癌细胞 A549/DDP凋亡

背景与目的姜黄素是从姜黄科植物的根茎中提取的一种天然化合物。体内外的临床前研究表明,其具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种作用。miR-186*是通过microarray芯片技术发现的在人肺腺癌细胞A549/DDP细胞中高表达的基因。本研究旨在阐明姜黄素是否可通过调控miR-186*的表达而促进A549/DDP细胞的凋亡。方法mi-croarray芯片技术检测经姜黄素、DMSO分别处理后A549/DDP细胞中microRNAs(miRNAs)表达量的变化;实时定量PCR验证从microarray芯片中筛选出来的明显差异表达的miRNAs;最后,流式细胞仪法检测明显差异表达的miR-NAs调控的细胞凋亡,MTT法检测细胞存活率。结果microarray芯片技术结果显示:与DMSO对照组比较,姜黄素处理后miR-186*的表达明显下调。实时定量PCR验证了microarray芯片技术检测的结果。流式细胞仪法检测miR-186*调控的细胞凋亡,MTT法检测细胞存活率:姜黄素处理后,与对照组比较,miR-186*的表达明显下调,从而加速A549/DDP细胞的凋亡,细胞存活率下降;转染miR-186*的mimetics和其对...     

miRNA-186-3p对子宫颈癌CaSki细胞功能影响及与转化生长因子β-Smad信号通路关系的研究

目的探讨miRNA-186-3p(miR-186-3p)对子宫颈癌CaSki细胞凋亡、迁移、侵袭的影响及与转化生长因子β(TGF-β)-Smad信号通路的关系。方法将载有miR-186-3p抑制基因、miR-186-3p模拟物的质粒分别转染至子宫颈癌CaSki细胞, 分别为miR-186-3p-I组、miR-186-3p-M组;另将转染空载质粒的CaSki细胞作为对照, 为miR-186-3p-C组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率, 采用Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力;采用蛋白质印迹法检测各组细胞TGF-β-Smad信号通路相关蛋白表达水平;采用Starbase软件预测miR-186-3p靶基因, 并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果 miR-186-3p-M组细胞凋亡率均低于miR-186-3p-I组和miR-186-3p-C组[(7.5±3.2)%比(13.9±0.7)%、(12.7±0.6)%, 均P<0.05]。miR-186-3p-M组迁移细胞数[(218±25)个比(168±13)个、(175±13)个, 均P<0.001]和侵袭细胞数均多...     

miR-130a-3p通过HGF/MET信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7 侵袭

目的：探究miR-130a-3p 通过HGF/MET信号通路调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）影响乳腺癌细胞侵袭转移的分子机制。方法：收集承德医学院附属医院2018 年1 月至10 月收治的22 例乳腺癌患者癌组织和配对癌旁组织标本,乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-453）和正常乳腺上皮细胞MCF10A来自承德医学院基础研究所,然后采用qPCR检测组织和细胞系中miR-130a-3p 的表达情况;将实验分为对照组、miR-130a-3p mimics 组、miR-130a-3p inhibitor组、PHA665752（MET小分子抑制剂）转染组及共转PHA665752+miR-130a-3p inhibitor 组,然后采用CCK-8 法和Transwell 实验分别检测MCF-7 细胞增殖活力、侵袭和迁移能力;WB实验检测MCF-7 细胞EMT和HGF/MET信号通路相关蛋白的表达情况;此外,采用双荧光素酶报告基因检测miR-130a-3p 与MET之间的靶向关系。结果：miR-130a-3p 在乳腺癌组织和细胞系中呈低表达;过表达miR-130a-3p 可抑制MCF-7 细胞增殖、侵袭、迁移和EMT;而抑制miR-130a-3p 出现相反的结果。双荧光素酶报告基因结果证实miR-130a-3p 靶向下调MET的表达水平,且miR-130a-3p 负调控HGF/MET信号通路的表达;进一步实验证明,miR-130a-3p 通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7 细胞增殖、侵袭、迁移和EMT。结论：miR-130a-3p 通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7 细胞EMT过程,进而抑制MCF-7 细胞侵袭转移。     

miR-640通过抑制SLIT1介导Wnt/β-catenin通路促进脑胶质瘤对替莫唑胺的耐药

摘 要：［目的］评价miR-640介导Wnt/β-catenin通路对脑胶质瘤耐药细胞增殖、侵袭及替莫唑胺(temazolamide,TMZ)敏感性的影响。［方法］ 利用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）测定脑胶质瘤细胞内miR-640的表达。U87/TMZ细胞分为NC inhibitor组、 miR-640 inhibitor组和miR-640 inhibitor+si-SLIT1组。用不同浓度（15、30、60、120、240 、480和960 μmol/L）TMZ处理细胞,检测细胞对TMZ的耐药性;运用细胞计数试剂盒8（CCK-8）、Transwell实验检测U87/TMZ细胞增殖活力和侵袭力;用双荧光素酶报告基因实验验证miR-640与SLIT1的靶向关系。采用Western blot检测Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达水平。［结果］ miR-640在脑胶质瘤细胞中高表达,转染后miR-640 inhibitor组的miR-640表达水平、侵袭细胞数目（57±23 vs 153±31）、IC50值（131.61±8.97 vs 293.33±11.28）、增殖率（18.48±4.23 vs 43.84±8.94）均比NC inhibitor组低（P<0.05）。miR-640靶向调控SLIT1的表达,miR-640 inhibitor+si-SLIT1组β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白表达水平均高于miR-640 inhibitor组（P<0.05）。［结论］miR-640通过SLIT1介导Wnt/β-catenin通路促进脑胶质瘤增殖、侵袭及对替莫唑胺的耐药性。     

miR-186通过下调垂体瘤转化基因1的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖侵袭并诱导其凋亡

目的:探讨miR-186对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响,并探讨其可能机制.方法:实时荧光定量PCR检测骨肉瘤细胞HOS、U2-OS、Saos-2及成骨细胞NHOst中miR-186表达,并运用人工合成的miR-186模拟片段及对照scramble mimic转染至人骨肉瘤HOS及U2-OS细胞内,运用实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-186的表达水平;分别运用CCK-8法、流式细胞检测技术及Transwall体外侵袭实验检测过表达miR-186对HOS及U2-OS细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响;运用Westem blotting及实时荧光定量PCR检测miR-186过表达对细胞中垂体瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的蛋白及mRNA表达水平的影响.结果:骨肉瘤细胞中miR-186呈现低表达;转染人工合成的miR-186片段可上调HOS及U2-OS细胞中miR-186的表达;miR-186过表达组细胞的增殖能力较scramble组明显下降(P＜0.01),转染组HOS[(16.9±2.1)％ vs(10.4±1.6)％,P＜0.05]及U2-OS[(22.6±2.9)％ vs (14.1±2.2)％,P＜0.05]细胞的凋亡比例明显高于scramble组,转染组HOS及U2-OS细胞的穿膜数明显低于scramble组(P＜0.01);转染组细胞中PTTG1的蛋白及mRNA表达水平均明显下降(P＜0.01),而scramble组无明显变化(P＞0.05);结论:miR-186能够抑制骨肉瘤细胞的增殖及侵袭并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PTTG1表达相关.     

LncRNA SNHG6调控miR-186表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究SNHG6通过调控miR-186表达对人肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测57名肝癌患者癌组织和肝癌细胞系中SNHG6和miR-186的表达;双荧光素酶报告实验验证SNHG6和miR-186的靶向调控关系;将SNHG6的小干扰RNA（si-SNHG6组）、阴性无意义对照序列（si-con组）、si-SNHG6与anti-miR-186抑制剂（si-SNHG6+anti-miR-186组）、si-SNHG6与miR-186抑制物阴性对照（si-SNHG6+anti-miR-con组）,均以脂质体法转染至肝癌HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖;Transwell检测肝癌细胞迁移和侵袭;Western blot实验检测肝癌细胞CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9及EMT的标志物（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达。结果:与癌旁正常组织或正常肝细胞相比,SNHG6在肝癌患者和肝癌细胞系中的表达升高,而miR-186表达降低,两者存在负相关性。与si-con组比较,si-SNHG6组HepG2细胞活力明显下降,迁移和侵袭细胞数明显减少,CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达增加。SNHG6靶向负调控miR-186表达,抑制miR-186表达可部分逆转下调SNHG6对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:下调SNHG6可能通过负调控miR-186表达和调控细胞EMT过程抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

MiRNA-21抑制物对人肺腺癌PC9/GR细胞吉非替尼耐药性的影响

目的:观察miR-21抑制物对人肺腺癌PC9/GR细胞株增殖、凋亡及迁移能力的影响,探讨miR-21抑制物在PC9/GR细胞吉非替尼耐药的生物学行为中的作用.方法:实验分为miR-21 inhibitor组、阴性对照组和正常细胞对照组3组.MiR-21 inhibitor组转染miR-21抑制物抑制其细胞内miR-21表达,阴性对照组转染microRNA inhibitor NC.加入吉非替尼处理后,采用MTT比色实验测定3组细胞第1、2、3、4、5天的吸光度(OD值),绘制生长曲线.采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移.结果:两对照组间细胞的增殖速度无明显差异(P＞0.05),与对照组相比,实验组细胞增殖速度明显减慢(P＜0.05).实验组细胞凋亡率为(40.06 ±2.32)％,明显增高(P＜0.05);阴性对照组[(7.39±0.79)％]和空白对照组[(6.96±0.68)％]之间细胞凋亡无明显差异(P＞0.05).实验组细胞迁移力受到明显抑制(P＜0.05).空白对照组与阴性对照组细胞迁移力相比无明显差异(P＞0.05).结论:在PC9/GR细胞中,下调miRNA-21的表达后,PC9/GR细胞对GR的敏感性提高,凋亡程度增强,部分逆转了肺癌PC9/GR细胞对GR的耐药性.为miRNA-21与化疗联合治疗肺癌提供了实验依据.     

LncRNA IQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴抑制孕激素耐药的子宫内膜癌细胞增殖

目的:探讨LncRNA IQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴对孕激素耐药的子宫内膜癌(EC)细胞增殖、凋亡的影响。方法:体外培养Ishikawa细胞,构建EC孕激素耐药细胞株Ishikawa/醋酸甲羟孕酮(MPA),MTT法验证Ishikawa/MPA细胞的耐药性;qRT-PCR法检测Ishikawa细胞和Ishikawa/MPA细胞中孕激素受体(PR)、LncRNA IQCH-AS1、miR-494-3p和ARID1A mRNA表达。双荧光素酶报告基因实验、RNA pull-down实验验证Ishikawa/MPA细胞中LncRNA IQCH-AS1、miR-494-3p和ARID1A间靶向关系。Ishikawa/MPA细胞分为Ad-NC组、Ad-IQCH-AS1组、Ad-IQCH-AS1+miR-NC组和Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p组,qRT-PCR法检测LncRNA IQCH-AS1、miR-494-3p、ARID1AmRNA、PR mRNA表达;MTT检测细胞增殖活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测ARID1A、PR...     

MiR-202靶向调节EGFR介导的PI3K/AKT信号通路在紫杉醇治疗卵巢癌中的机制研究

摘 要：［目的］ 探讨miR-202靶向调节EGFR介导的PI3K/AKT信号通路在紫杉醇治疗卵巢癌中的作用机制。［方法］ 以人卵巢癌细胞株A2780细胞作为研究对象,分别转染miR-NC、miR-202 mimics及shEGFR。采用MTT和Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移及侵袭能力。采用qRT-PCR检测细胞中miR-202和EGFR mRNA表达量。采用Western blot检测EGFR、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白水平。［结果］ qRT-PCR结果显示,与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,miR-202在卵巢癌细胞A2780/WT 及A2780/PTX中明显低表达（P<0.05）;EGFR mRNA水平显著性上调（P<0.05）。转染miR-202 mimics后,卵巢癌细胞中miR-202相对表达量显著性高于miR-NC组和shEGFR组（P<0.05）;而miR-202 mimics组和shEGFR组EGFR mRNA含量显著性低于miR-NC组（P<0.05）。过表达miR-202及转染shEGFR后,miR-202 mimics组和shEGFR组细胞增殖能力较miR-NC组均显著性降低（P<0.05）;迁移细胞和侵袭数目也随之减少（P<0.05）;且对紫杉醇的半数抑制浓度IC50降低（P<0.05）。免疫印迹测定结果显示,miR-202 mimics组和shEGFR组中EGFR蛋白、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT磷酸化水平较miR-NC组明显下调（P<0.05）。［结论］ miR-202能靶向调节EGFR表达,并且影响卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭过程,其作用机制是通过抑制EGFR下游PI3K/AKT信号通路从而发挥抑癌作用,为临床治疗提供了新方向。     

miR-613通过下调Wnt/β-catenin信号通路活性抑制前列腺癌细胞的增殖与侵袭

目的:研究miR-613在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-613是否通过下调Wnt信号通路活性抑制前列腺癌细胞系细胞的增殖和侵袭能力。方法:收集临床前列腺癌组织及配对癌旁组织20例,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组组织中miR-613的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-613 mimic和miR-NC至离体培养的PC-3、DU-145细胞中,随后,采用MTT法、平板克隆实验检测细胞增殖和Matrigel侵袭实验测定前列腺癌细胞的侵袭情况,采用荧光素酶分析方法评估Wnt信号通路活性变化,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因的转录(包括Cyclin D1和c-Myc),WB法检测细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达量。结果:相比配对癌旁组织,miR-613在前列腺癌组织中的表达降低(P<0.01);在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-613 mimic后,PC-3、DU-145细胞增殖能力下降(P<0.05),PC-3、DU-145细胞的迁移侵袭能力下降(P<0.01);miR-613的过表达显著降低Wnt信号通路活性、β-catenin蛋白表达及Wnt信号下游靶基因Cyclin D1和c-Myc的转录及蛋白表达。结论:miR-613通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来影响前列腺癌细胞的增殖与侵袭,为前列腺癌的潜在治疗靶点之一。     

微小RNA-766对肝细胞癌细胞生物学行为和PI3K/AKT/FOXO1通路的影响

目的 探讨微小RNA-766(miR-766)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为和磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号/叉头盒O1(PI3K/AKT/FOXO1)通路的影响。方法 实时定量PCR(qPCR)检测HCC细胞的miR-766表达；向SMMC-7721细胞转染miR-766抑制剂来下调其表达，随后采用MTT和流式细胞术检测miR-766表达抑制对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响，划痕和Transwell小室实验检测miR-766表达抑制对SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响，qPCR或Western blot检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(CC3)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)的表达，双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-766和FOXO1的靶向关系。结果 MiR-766在HCC细胞中的表达异常增高(P<0.05),下调miR-766明显抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力且促进细胞凋亡(P<0.05)。MiR-766直接靶向调控FOXO1表达，下调miR-766表达能够增加FOXO1和CC3表达，...     

miR-502对宫颈癌Hela细胞增殖和转移的影响

目的 探讨miR-502对宫颈癌患者预后及其对宫颈癌Hela细胞增殖和转移的影响。方法 通过数据库分析miR-502表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系及其对预后的影响。在Hela细胞中过表达miR-502-3p后,采用CCK-8检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果 数据库分析结果显示,高表达miR-502的宫颈癌患者总生存期更长,但与TNM分期无明显相关性。CCK-8检测结果显示,miR-502-3p类似物组细胞增殖率低于miR-502-3p抑制剂组[(78.82±1.41)% vs (124.06±7.72)%,P<0.05];Transwell 实验检测结果显示,miR-502-3p类似物组细胞迁移率较miR-502-3p抑制剂组低[(85.39±7.19)% vs (121.17±8.20)%,P<0.05],细胞侵袭率亦较低[(85.32±7.12)% vs (117.13±7.37)%,P<0.05]。结论 高表达miR-502的宫颈癌患者预后较好,可能与其抑制宫颈癌细胞增殖和转移有关。     

miR-429通过下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨耐药

目的:探讨miR-429 靶向PTEN并通过PI3K/AKT信号通路调控胰腺癌PANC-1 细胞对卡培他滨的耐药性及其作用机制。方法：建立胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP后,采用qRT-PCR和Western blotting 实验检测miR-429 和PTEN在胰腺癌细胞中的表达情况,平板克隆形成实验、CCK-8 法和Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测敲降miR-429 对胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP 细胞增殖、凋亡和卡培他滨耐药性的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-429 与PTEN 的靶向关系,Western blotting 实验进一步检测miR-429 对PTEN-PI3K/AKT信号通路的调控作用。结果：miR-429 在胰腺癌PANC-1 细胞和PANC-1/CAP细胞中的表达水平高于人胰腺导管上皮细胞（HPDE6-C7）（P<0.05 或P<0.01）,敲降miR-429 可显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力、促进细胞凋亡及下调细胞卡培他滨耐药性,且双荧光素酶报告基因证实miR-429 靶向作用PTEN并下调其表达水平（P<0.05 或P<0.01）;敲降miR-429 可通过靶向上调PTEN并阻断PI3K/AKT信号通路进而显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力,从而下调PANC-1/CAP细胞对卡培他滨的耐药性（P<0.05 或P<0.01）。结论：miR-429/PTEN-PI3K、AKT信号通路与胰腺癌卡培他滨耐药性存在调控关系,且敲降miR-429 可逆转PANC-1/CAP对卡培他滨的耐药性。     

miR-181通过Wnt/β-catenin信号通路调控对B-ALL细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究miR-181在急性B淋巴细胞白血病Nalm-6细胞中表达及其过表达对细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量PCR检测miR-181在急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中的表达水平,利用慢病毒转染技术使miR-181过表达,利用CCK-8实验检测过表达miR-181对人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6增殖的影响,利用流式细胞仪检测过表达miR-181对Nalm-6细胞凋亡的影响,利用蛋白印迹实验检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白的表达水平。结果:实时荧光定量PCR结果显示,与正常人相比,急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平显著下调;CCK-8检测细胞增殖结果显示,过表达miR-181显著抑制了人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,过表达miR-181显著促进了Nalm-6细胞的凋亡;Western blotting 结果显示,miR-181过表达,Wnt1、β-catenin、cyclin D1 和c-myc蛋白的表达均显著下调。结论:急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平下调,过表达miR-181抑制Nalm-6细胞增殖、促进Nalm-6细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号转导通路的受抑有关。     

miR-429靶向调控SIAH1基因对结直肠癌细胞LOVO增殖的影响

目的 探讨miR-429靶向SIAH1基因对结直肠癌细胞系LOVO细胞增殖的影响。方法 采用qRT-PCR检测正常结肠黏膜上皮细胞系NCM460和结直肠癌细胞系SW480、LOVO、HT-29中miR-429的表达。将miR-429 mimic和miR-429阴性对照序列（NC）转染至LOVO细胞,同时设置Control组。预测miR-429的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。采用Western blot检测SIAH1蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布情况。结果 qRT-PCR检测结果显示,相对于NCM460细胞,miR-429在各结直肠癌细胞系中的表达均降低（均P<0.001）。双荧光素酶报告基因实验证实了SIAH1与miR-429的靶向关系。与NC组相比,过表达miR-429能抑制LOVO细胞中SIAH1蛋白的表达（P<0.001）,细胞被阻滞在G0G1期,细胞增殖能力降低（P<0.001）。结论 miR-429通过靶向SIAH1基因表达抑制LOVO细胞增殖。     

MiR-152在膀胱癌中的表达以及对ERBB3/AKT2信号通路的调节作用

摘 要：［目的］ 探讨miR-152对ERBB3/Akt信号通路的靶向调控作用以及对膀胱癌细胞UM-UC-3增殖、侵袭和迁移活性的影响。［方法］ 收集2016年7月至2018年6月接受手术治疗的56例膀胱癌患者的肿瘤组织及相应的癌旁组织,提取总RNA,检测miR-152表达水平。体外培养UM-UC-3细胞,转染miR-152 mimics（模拟物组）,同时设置空白对照组（CTL）和空转染组（NC）,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测miR-152的表达。采用MTT法、划痕实验和transwell小室侵袭实验观察CTL组、NC组和模拟物组细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用双荧光素酶报告基因方法验证ERBB3与miR-152的关系。采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹（Western blot）法检测UM-UC-3细胞中Snail、ERBB3、Akt2、p-Akt、c-myc表达量。［结果］ MiR-152在肿瘤组织中的表达量明显低于癌旁组织（P<0.05）。与膀胱上皮永生化细胞株SV-HUC-1相比,miR-152在膀胱癌细胞T24、UM-UC-3和J82中的表达量明显降低（P<0.05）,其中在UM-UC-3细胞中表达量最低。经qRT-PCR法检测,模拟物组UM-UC-3细胞miR-152的表达量明显低于CTL组和NC组细胞（P<0.05）。模拟物组UM-UC-3细胞的增殖率、迁移活性以及划痕愈合率均明显低于CTL组和NC组细胞（P<0.05）。经双荧光素酶基因报告分析,ERBB3是miR-152的下游靶基因。模拟物组UM-UC-3细胞Snail、ERBB3、Akt2、p-Akt、c-myc mRNA和蛋白表达水平均低于CTL组和NC组细胞（P<0.05）。且miR-152表达量与ERBB3呈负相关性（r=-0.875,P<0.05）。［结论］ 上调miR-152可抑制ERBB3/Akt/c-myc和ERBB3/Akt/Snail信号通路的异常激活,逆转膀胱癌UM-UC-3细胞上皮—间质转化,从而降低膀胱癌生长、侵袭和迁移的风险。     

circ_0001429 靶向miR-139-5p/TGIF1 分子轴调控膀胱癌T24 细胞恶行生物学行为

目的：探究circ_0001429 通过调控miR-139-5p/ 转录生长因子影响因子1（TGF-interacting factor 1,TGIF1）分子轴对膀胱癌T24 细胞恶性生物学行为的影响。方法：采用qPCR实验检测circ_0001429 在膀胱癌细胞系SW780、T24、5637 和人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1 中的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p、circ_0001429 与TGIF1 之间的靶向调控关系;将T24 细胞分为NC组、sh-circ_0001429 组、miR-139-5p mimics 组、sh-TGIF1 组、pcDNA-circ_0001429+sh-TGIF1 组、miR-139-5p mimics+pcDNA-TGIF1 组以及sh-circ_0001429+miR-139-5p inhibitor 组,Western blotting 检测各组细胞中TGIF1 的表达水平,CCK-8 法、Transwell 实验和流式细胞术分别检测circ_0001429、miR-139-5p 和TGIF1 对T24 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果：circ_0001429 在3 珠膀胱癌细胞系中呈高表达（均P<0.01）,敲降circ_0001429 可以显著抑制T24 细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）;双荧光素酶报告基因验证结果显示,circ_0001429 与miR-139-5p、miR-139-5p 与TGIF1 存在靶向关系;过表达miR-139-5p 显著抑制T24 细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡（均P<0.01）。回复实验进一步证实circ_0001429 和TGIF1 竞争性结合miR-139-5p 促进T24 细胞增殖、侵袭、迁移且抑制细胞凋亡（均P<0.01）。结论：circ_0001429 与TGIF1 竞争结合miR-139-5p 促进膀胱癌细胞T24 的增殖、侵袭、迁移且抑制细胞凋亡。     

黄芪多糖通过调控miR-20a/TGFBR2 分子轴降低结直肠癌HT-29/DDP细胞的顺铂耐药性

[摘要] 目的：探讨黄芪多糖（APS）通过调控miR-20a/TGFBR2 分子轴对结直肠癌（CRC）顺铂耐药细胞HT-29/DDP增殖、侵袭、凋亡和耐药性的影响及其机制。方法：以人CRC HT-29 细胞、HT-29/DDP细胞为亲本和耐药细胞模型,将HT-29/DDP细胞随机分为4 组：对照组、APS 处理组、过表达miR-20a + APS 组、沉默TGFBR2 + APS 组。用不同质量浓度的APS（0、0.5、1.0、1.5 和2.0 mg/ml）处理HT-29/DDP细胞后,以qPCR和Wb实验检测细胞中miR-20a 和TGFBR2 的表达水平;用CCK-8、Transwell 和Annexin V-FITC/PI 染色流式细胞术检测对HT-29/DDP细胞增殖、侵袭和凋亡的影响;用双荧光素酶报告基因验证miR-20a 与TGFBR2的靶向作用关系。构建裸鼠皮下CRC HT-29/DDP细胞移植瘤模型,观察APS对移植瘤生长的影响及其机制。结果：APS显著抑制HT-29/DDP 细胞的增殖（P<0.01）,且呈剂量依赖性。miR-20a 在经APS 处理后的HT-29/DDP 细胞中低表达（P<0.01）、TGFBR2 的表达水平显著上调（P<0.01）。双荧光素酶报告基因证实miR-20a 靶向作用TGFBR2 并下调其表达水平。体内外实验证实APS通过靶向下调miR-20a 对TGFBR2 的抑制作用,提高HT-29/DDP细胞的药物敏感性,进而抑制该细胞增殖、侵袭和促进凋亡（均P<0.01);同时发现,该作用与抑制PCNA、Bcl-2 蛋白而促进Bax、Caspase-3 蛋白表达有关联。结论：APS通过下调miR-20a对TGFBR2 表达的抑制作用,从而逆转HT-29/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

miR-409-3p通过抑制LHX2调控VEGF/VEGFR2信号通路促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖

目的:探讨微小RNA-409-3p（microRNA-409-3p,miR-409-3p）对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR与Western blot平行检测前列腺癌细胞中miR-409-3p与LIM同源框基因2（LIM-homeobox gene 2,LHX2）的表达;CCK-8实验检测miR-409-3p过表达对前列腺癌细胞增殖能力的影响,以及LHX2过表达对前列腺癌细胞增殖能力的恢复作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测miR-409-3p与LHX2的靶向作用关系;Western blot检测细胞中LHX2、CyclinD1、CDK4、Cleaved-caspase-3及VEGF/VEGFR2信号通路相关蛋白表达。结果:miR-409-3p在前列腺癌细胞中的表达水平显著低于正常前列腺上皮细胞（P＜0.05）,LHX2的表达水平高于正常前列腺上皮细胞（P＜0.05）;miR-409-3p过表达可显著抑制前列腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡（P＜0.05）,并可上调Cleaved-caspase-3的表达（P＜0.05）,下调CyclinD1、CDK4、VEGF、t-VEGFR2、p-VEGFR2的表达（P＜0.05）;双荧光素酶实验证明miR-409-3p与LHX2存在靶向关系,miR-409-3p可负性调控LHX2的表达;LHX2过表达可部分逆转miR-409-3p对前列腺癌细胞增殖、凋亡及VEGF/VEGFR2信号通路的影响。结论:miR-409-3p可通过下调LHX2的表达而促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖,其作用机制可能与抑制VEGF/VEGFR2信号通路激活有关。