基质细胞衍生因子1对骨关节炎软骨Ⅱ型胶原及分泌基质金属蛋白酶的影响*

背景：基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4信号通路在骨关节炎的发病中起关键作用。 目的：观察外源性基质细胞衍生因子1对骨关节炎软骨Ⅱ型胶原及分泌基质金属蛋白酶的影响。 方法：分别取因骨关节炎行膝关节置换患者软骨组织块40块,作为实验组;取因创伤性截肢患者膝关节的正常软骨块40块,作为对照组;置入DMEM培养液中,加入79,392 μg/L外源性基质细胞衍生因子1,分别培养48 h和96 h。 结果与结论：实验组与对照组培养48,96 h后,各时间段Ⅱ型胶原免疫组织化学染色皆呈阳性,但高浓度基质细胞衍生因子1培养液条件下时间越长Ⅱ型胶原降解越严重;实验组与对照组同一时间段同浓度基质细胞衍生因子1培养液条件下基质细胞衍生因子1水平无明显差异(P > 0.05);高浓度基质细胞衍生因子1培养液条件下同一时间段实验组比对照组中促使软骨释放基质金属蛋白酶多(P < 0.05)。提示基质细胞衍生因子1可通过基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4信号通路调节骨关节炎软骨基质金属蛋白酶表达并致软骨Ⅱ型胶原降解。     

依托考昔抑制SDF-1/CXCR4信号通路影响骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎性因子表达

为探讨依托考昔对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡、炎性因子表达的影响及其对基质细胞衍生因子1 (stromal cell derived factor 1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)信号通路的调控作用,原代分离培养人骨关节炎软骨细胞,分别加入浓度为12....     

软骨损伤后基质细胞衍生因子1的表达

背景：研究表明基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞的迁移、聚集有影响。 目的：观察软骨损伤后不同时间损伤修复区组织基质细胞衍生因子1的表达以及与骨髓间充质干细胞迁移的关系。 方法：建立兔软骨损伤模型,分别于建模后2,5,7,10,14,28 d取损伤灶及边缘区组织,检测基质细胞衍生因子1表达和体外细胞迁移实验,观察基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞、软骨细胞的迁移影响。 结果与结论：基质细胞衍生因子1的表达呈现出时间变化的趋势,软骨损伤后第7天达到高峰(P < 0.05)。体内移植的骨髓间充质干细胞主要聚集在软骨损伤灶周围,但在封闭CXC趋化因子受体4后,此聚集现象逐渐减弱(P < 0.05)。结果证实,局部组织中基质细胞衍生因子1的表达在软骨损伤早期明显升高,对骨髓间充质干细胞向软骨损伤修复区迁移有重要作用。     

心肌梗死后单个核细胞促间充质干细胞迁移的作用

背景:心肌梗死后间充质干细胞定向心肌迁移的机制尚不甚明了。目的:探讨基质细胞衍化因子1和趋化因子受体4生物轴在心肌梗死后单个核细胞促间充质干细胞迁移中的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞及SD大鼠间充质干细胞。12只SD大鼠其中6只建立心肌梗死模型,6只行假手术处理,分离循环血单个核细胞,采用三室共培养模型,分别将DAPI标记的间充质干细胞、心肌细胞和单个核细胞培养于三室模型的上、中、下室内,设立心肌梗死组、趋化因子受体4受体阻断剂AMD3100组、假手术组和空白对照组。培养48 h后,荧光显微镜下观察并比较迁移细胞数目,免疫细胞化学和免疫荧光染色分别检测心肌细胞基质细胞衍化因子1和迁移细胞趋化因子受体4的表达。结果与结论:除空白对照组外,各组中室内均可见迁移细胞,迁移细胞阳性表达趋化因子受体4,心肌梗死组迁移细胞数目显著高于其他各组,加入肿瘤坏死因子α中和抗体和趋化因子受体4受体阻断剂AMD3100后,迁移细胞数目明显减少(P0.05)。各组心肌细胞阳性表达基质细胞衍化因子1,心肌梗死组及AMD3100组心肌细胞基质细胞衍化因子1表达灰度值显著高于假手术组及空白对照组(P0.05)。表明基质细胞衍化因子1/趋化因子受体4生物轴在心肌梗死后大鼠单个核细胞促间充质干细胞向心肌细胞迁移中发挥了一定作用。     

基质细胞衍生因子1α预处理大鼠骨髓间充质干细胞的迁移

背景：骨髓间充质干细胞移植过程中只有少量细胞能定向迁移到损伤组织,因此如何提高细胞定向迁移的数量是干细胞移植的关键因素。 目的：观察基质细胞衍生因子1α预处理对大鼠骨髓间充质干细胞定向迁移的影响。 方法：体外分离培养骨髓间充质干细胞,予以传代。使用Transwell体外迁移体系,观察不同浓度的基质细胞衍生因子1α趋化骨髓间充质干细胞定向迁移,选取最佳浓度值趋化细胞。在基质细胞衍生因子1α预处理、CXCR 4型受体阻断剂AMD3100和Akt通路阻断剂LY294002的干预下观察骨髓间充质干细胞的趋化迁移情况,检测基质细胞衍生因子1α预处理对骨髓间充质干细胞中CXCR 4型受体 mRNA、蛋白水平及AKT磷酸化的影响。 结果与结论：0.2 mg/L的基质细胞衍生因子1α孵育细胞10 h具有最佳趋化细胞迁移效应。骨髓间充质干细胞的定向趋化迁移作用随着基质细胞衍生因子1α预处理细胞浓度的增加而增强,预处理时间为6 h;而AMD3100和LY294002可阻断基质细胞衍生因子1α预处理的促迁移作用;基质细胞衍生因子1α预处理可上调骨髓间充质干细胞CXCR 4型受体的表达并促进Akt蛋白磷酸化。提示基质细胞衍生因子1α预处理可通过增加骨髓间充质干细胞表面的CXCR 4型受体数量,从而增强基质细胞衍生因子1α/CXCR4型受体介导的骨髓间充质干细胞定向迁移,该预处理效应可能与Akt信号途径有关。     

脉冲磁场与前软骨干细胞向成熟软骨细胞的增殖与分化:与Ihh/PTHrP信号通路活性有关吗?

背景:前期研究证实脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖具有促进作用,但其作用机制不明确。目的:进一步探讨脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖分化的影响,并观察其对前软骨干细胞Ihh/PTHrP信号通路活性的影响。方法:采用免疫磁珠分选法获取并纯化SD大鼠前软骨干细胞,使用频率为50MHz,电场强度为1mT的脉冲电磁场进行干预,0.5h/次,2次/d,干预2,4,6d后收集细胞,以不给予磁场刺激的为空白对照。通过RT-PCR法检测细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的基因表达水平,再通过Western-blot法测定各组细胞印度刺猬蛋白、甲状旁腺激素相关肽蛋白的表达水平。结果与结论:RT-PCR结果显示,Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达随磁场刺激时间延长而增高,且经磁场刺激前软骨干细胞的聚集蛋白聚糖明显高于空白对照组(P0.05,P0.01)。Western-blot结果显示,印度豪猪蛋白及甲状旁腺激素相关肽蛋白表达均随磁场刺激时间的延长增加,不同时间磁场刺激组印度刺猬蛋白表达高于空白对照组(P0.01);甲状旁腺激素相关肽的表达量也随之上升,但当磁场刺激4,6d后的甲状旁腺激素相关肽蛋白表达与空白对照组差异有显著性意义(P0.05,P0.01)。提示强度为1mT,频率为50MHz的脉冲电磁场能促进前软骨干细胞向成熟软骨细胞增殖分化,其作用机制可能与改变Ihh/PTHrP信号通路活性有关。     

Akt与ERK1/2在人骨关节炎软骨细胞中的表达

目的: 观察蛋白激酶B(Akt)与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在正常和骨关节炎(OA)软骨细胞中的表达,探讨Akt与ERK1/2在OA病程中的意义。方法: 手术中取5例正常和18例OA人膝关节软骨组织,包埋制备切片,免疫组织化学技术观察 p-Akt及p-ERK1/2在正常和OA 软骨组织中的表达;培养人软骨细胞,甲苯胺蓝染色、免疫组化鉴定并观察聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原在正常和OA软骨细胞中的表达; Western blotting技术检测Akt、p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2、磷酸化70 kD核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白在正常和OA软骨细胞中表达水平; 实时荧光定量PCR技术检测聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原在正常和OA软骨细胞中mRNA表达水平。结果: 与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞内p-Akt和p-p70S6K蛋白表达明显降低(P<0.05),且聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原mRNA和蛋白在OA软骨细胞中的表达水平降低(P<0.05),而 p-ERK1/2和PCNA蛋白表达明显提高(P<0.05)。结论: Akt可能通过p-p70S6K来调控OA软骨细胞外基质聚集蛋白聚糖及II型胶原的合成,ERK1/2可能通过PCNA来调控OA软骨细胞增殖;Akt与ERK1/2可能参与了OA的病理过程。     

GDF-5和Dex通过Wnt/β-catenin信号通路促进rBMSCs体外成软骨分化

目的利用生长分化因子(GDF-5)联合地塞米松(Dex)诱导大鼠BMSCs成软骨分化,并探讨Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用。方法用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,取P3代细胞随机分成6组:BMSCs组、BMSCs+Dex组、BMSCs+GDF-5组、BMSCs+GDF-5+Dex组、BMSCs+GDF-5+Dex+SB216763组和BMSCs+GDF-5+Dex+XAV-939组。连续诱导培养14 d,倒置相差显微镜观察细胞形态,Alcian blue染色检测细胞的蛋白聚糖,RT-PCR检测成软骨分化相关基因aggrecan、Col2、Sox9、Col1,Wnt/β-catenin信号通路相关基因Dvl1、Gsk3β、β-catenin mRNA表达,Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白和β-catenin蛋白表达。结果与BMSCs组相比,BMSCs+GDF-5+Dex组能够使诱导的细胞蛋白聚糖分泌明显增加;Aggrecan、Col2、Sox9基因表达明显增加(P0.05);Ⅱ型胶原蛋白表达增加(P0.05);β-catenin mRNA及蛋白表达水平也增加(P0.05)。与BMSCs+GDF-5+Dex组相比,添加SB216763组蛋白聚糖,Ⅱ型胶原基因和蛋白表达增加(P0.05);相反,添加XAV-939组相应的成软骨分化基因及蛋白表达下降(P0.05)。结论 GDF-5联合地塞米松(Dex)可诱导大鼠BMSCs成软骨分化,Wnt/β-catenin信号通路可能在其中发挥促进作用。     

玻璃酸钠与膝骨关节炎患者关节液中基质细胞衍生因子1和基质金属蛋白酶3，9，13水平的相关性*☆

背景：膝关节内滑液和软骨中玻璃酸钠在骨关节炎的发生发展中起重要作用,近来有研究表明基质细胞衍生因子1、基质金属蛋白酶3,9,13对骨关节炎软骨退变均存在影响。 目的：探讨关节腔注射玻璃酸钠后对膝骨关节患者关节液中基质细胞衍生因子1和基质金属蛋白酶3,9,13水平的影响及两者之间的相关性。 方法：20例膝骨关节炎并有关节积液患者于注射玻璃酸钠前及注射后1,2,3,4周抽取关节液,应用双抗体夹心ELISA法测定基质细胞衍生因子1,基质金属蛋白酶3,9,13水平并进行相关性分析。 结果与结论：注射玻璃酸钠后关节液中基质细胞衍生因子1,基质金属蛋白酶3,9,13水平均有所下降, 基质细胞衍生因子1、基质金属蛋白酶3,9组注射前与注射后1周,注射后1周与注射后2周比较、基质金属蛋白酶13组注射前与注射后1周比较,差异无显著性意义(P > 0.05),其余各组两两相比差异均有显著性意义(P < 0.05)。相关性分析结果显示基质细胞衍生因子1与基质金属蛋白酶3,9,13水平变化呈正相关。 关键词：基质细胞衍生因子1;骨关节炎;玻璃酸钠;基质金属蛋白酶3;基质金属蛋白酶9;基质金属蛋白酶13 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.07.043     

白藜芦醇对新生大鼠神经元缺血缺氧时SDF-1/CXCR4通路抗凋亡作用的调控机制

目的:探究白藜芦醇(RSV)对缺血缺氧诱导的新生大鼠脑神经元凋亡及基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)通路的作用和机制。方法:体外培养新生大鼠皮质神经元,给予氧糖剥夺(OGD)模拟新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)模型。首先将细胞随机分成4组:对照(control)组、HIE组、HIE+RSV低剂量(10μmol/L)组和HIE+RSV高剂量(50μmol/L)组。OGD处理2 h后加入相应剂量的RSV继续培养24 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白及SDF-1和CXCR4的蛋白表达水平,real-time PCR检测SDF-1和CXCR4的mRNA表达水平。然后使用CXCR4抑制剂AMD3100与RSV共同处理OGO损伤的细胞24h,检测SDF-1/CXCR4通路阻断后RSV对细胞凋亡和凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果:RSV能够抑制OGD诱导的神经元凋亡,下调活化的caspase-3和细胞色素C的水平,上调Bcl-2/Bax比值(P0.05)。与对照组相比,OGD导致SDF-1和CXCR4表达增加;与模型组相比,RSV能够上调SDF-1和CXCR4的表达(P0.05);使用AMD3100阻断SDF-1/CXCR4通路减弱了RSV抑制OGD诱导的细胞凋亡的作用。结论:RSV可抑制缺血缺氧诱导的新生大鼠神经元凋亡,其机制可能是通过上调SDF-1/CXCR4通路发挥作用的。     

塞来昔布抑制凝血酶诱导的大鼠软骨细胞退变

背景：骨关节炎患者血清中凝血酶含量显著高于正常人,且凝血酶可以诱导大鼠软骨细胞退变,提示抑制凝血酶功能可能成为治疗骨关节炎的一种方法。塞来昔布为临床治疗骨关节炎的常见药物,是否可以抑制凝血酶的促炎作用而改善大鼠软骨细胞退变尚未可知。目的：探讨塞来昔布对凝血酶诱导软骨细胞退变的影响。方法：使用ELISA试剂盒检测骨关节炎患者与正常人血清中凝血酶含量。体外提取、培养SD乳鼠关节软骨细胞,使用第一代细胞进行实验,将软骨细胞分对照组、凝血酶组和塞来昔布组。显微镜下观察3组细胞形态,并使用Edu试剂盒检测细胞增殖情况;qRT-PCR检测软骨细胞外基质成分(聚集蛋白聚糖、弹性蛋白、软骨寡聚基质蛋白)、炎症因子(白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α)、炎症趋化因子(单核细胞趋化蛋白2、单核细胞趋化蛋白7、粒细胞趋化蛋白6)的表达;免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1的表达;Western Blot检测分解代谢基因如基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13和环氧化酶2等蛋白的表达。结果与结论：(1)与正常人相比,骨关节炎患者血清中凝血酶含量显著增高;(2)塞来昔布可明显抑制凝血酶诱导的软骨细胞纤维样形态改变;...     

补肾健脾活血中药干预膝骨关节炎模型大鼠软骨细胞IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路的变化

文题释义：膝骨关节炎：是一种以膝关节软骨退变、破坏和骨质增生为主要特征的慢性关节病，多患于中老年人群，主要表现为膝关节疼痛，上下楼梯时疼痛加重，休息后缓解，局部肿胀，活动受限，晚期膝关节畸形，严重影响患者的生活质量。 雌激素：主要由卵巢分泌，分泌的雌激素进入血液循环发挥生物学效应，妇女绝经后卵巢功能衰退，雌激素分泌减少从而诱发膝骨关节炎。 背景：膝骨关节炎是最常见的退行性关节疾病，其发病率和致残率高，已严重影响患者的生活质量。研究发现，补肾健脾活血中药能够改善膝骨关节炎临床症状，但其具体机制仍未阐明。 目的：通过膝骨关节炎去势大鼠模型研究补肾健脾活血中药调节IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法：6月龄SD雌性大鼠，随机分为空白对照组、模型组、实验组和阳性对照组，模型组、实验组和阳性对照组摘除卵巢及切除交叉韧带和内侧半月板制作去势大鼠膝骨关节炎模型，术后2周实验组采用补肾健脾活血中药灌胃，阳性对照组采用塞来昔布胶囊灌胃，空白对照组和模型组以生理盐水灌胃。连续灌胃6周后取血清及膝关节软骨组织，采用ELISA检测血清雌二醇含量，分别采用荧光定量PCR和Western blot检测关节软骨组织中IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路表达水平。结果与结论：与空白对照组比较，模型组白细胞介素1β表达量明显升高，雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显降低(P < 0.05)；与模型组比较，实验组白细胞介素1β表达量明显降低(P < 0.05)，雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P < 0.05)；与阳性对照组比较，实验组白细胞介素1β、雌激素受体相关受体α及Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P < 0.05)，SRY相关蛋白9表达量明显降低(P < 0.05)。实验结果表明，IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路参与膝骨关节炎软骨病变，补肾健脾活血中药可通过该机制发挥治疗作用。 ORCID: 0000-0002-5449-3942(霍少川) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程     

关节软骨损伤后体外培养软骨细胞的功能变化

背景：关节软骨损伤可以影响软骨细胞功能,诱发创伤性骨关节炎。 目的：观察关节软骨损伤后体外培养的软骨细胞功能的变化。 方法：通过酶消化法分离培养高能量、低能量撞击后和正常兔膝关节透明软骨细胞,观察创伤能量对软骨细胞生存能力的影响;检测软骨细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原能力,检测细胞中白细胞介素1β和核转录因子κB mRNA表达水平,检测细胞合成白细胞介素1β和基质金属蛋白酶1的表达。 结果与结论：高能量和低能量关节软骨损伤后,软骨细胞的存活率下降,原代细胞的贴壁细胞数量减少,贴壁时间延长,生长曲线下移,细胞甲苯胺蓝染色异染反应减弱,Ⅱ型胶原免疫组化染色强度减弱,软骨细胞中白细胞介素1β和核转录因子κB mRNA表达水平上升,细胞培养液中白细胞介素1β和基质金属蛋白酶1的质量浓度升高,其中高能量组效果更为显著(P < 0.05)。说明关节软骨损伤后软骨细胞的功能受到影响,受损程度与创伤强度及炎性细胞因子的表达相关。     

张应力刺激大鼠髁突软骨细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达*

背景：研究表明软骨细胞外基质合成的变化反映了外力对于颞下颌关节的影响和机体对于外力的适应性。 目的：观察周期性张应力对髁突软骨细胞主要细胞外基质合成的影响。 方法：采用FX-5000T应力加载系统对第3代大鼠髁突软骨细胞分别施加0,1,6,12和24 h的周期性张应力,应力刺激强度为10% 1 Hz。加力完成后收集加力细胞,提取总RNA反转录成cDNA,应用RT-PCR技术检测软骨细胞主要细胞外基质Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达变化情况。 结果与结论：与对照组(0 h组)相比,加力   6 h时Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达均显著增加(P < 0.05);加力12 h时Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达均开始下降;当加力至24 h时二者表达量均显著降低(P < 0.05)。结果表明：周期性张应力可以影响髁突软骨细胞主要细胞外基质的合成,随加力时间的延长基质合成逐渐增强;进一步延长加力时间,基质的合成受到明显抑制。      

早期骨关节炎软骨下骨趋化因子信号通路的表达

背景：趋化因子广泛存在于炎症反应组织当中,起诱导炎症细胞趋向炎症组织参与免疫应答的作用,大量的实验研究表明,趋化因子在骨关节炎致病过程中起了重要作用。 目的：分析早期骨关节炎软骨下骨的趋化因子信号通路表达改变情况,为阐述其在骨关节炎致病机制中的重要作用提供依据。 方法：30只SD大鼠随机均分为实验组和对照组。实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带,对照组仅切开关节囊。于造模后1,2,4周取右膝关节标本,采用全基因表达谱芯片技术研究软骨下骨全基因表达,利用差异基因分析、信号通路分析的方法分析趋化因子信号通路的表达改变情况。 结果与结论：①发现一系列与趋化因子信号通路相关的差异表达基因。②实验组与对照组相比较,趋化因子信号通路在造模后1周差异有显著性意义(P < 0.05),造模后2,4周差异无显著性意义(P > 0.05)。说明趋化因子信号通路在极早期膝关节骨关节炎的软骨下骨改变中起重要作用。     

基质金属蛋白酶和胶原在创伤关节软骨组织中的表达

背景：研究发现,基质金属蛋白酶和胶原参与关节软骨组织机体生理重建及病理破坏。 目的：观察膝关节骨软骨缺损及表面软骨缺损动物模型关节软骨组织中胶原及基质金属蛋白酶的表达变化。 方法：雌性SD大鼠48只随机分为3组：骨软骨缺损组在双膝关节制作骨软骨缺损模型,表面缺损组在双膝关节制作表面软骨缺损,对照组双膝关节制作关节囊切开。分别于术后4、8、12周取股骨髁标本,行苏木精-伊红染色,免疫组化检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶3的表达。 结果与结论：骨软骨缺损组术后4周缺损中有少量新生组织生成,8及12周可见到纤维组织填充,修复组织细胞外基质Ⅰ型胶原免疫组化染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阴性,关节软骨组织中基质金属蛋白酶3表达增高。表面缺损组表面软骨缺损4及8周未见修复迹象,12周可见微量纤维组织填充,细胞外基质Ⅰ型胶原免疫组化染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阴性,术后表面缺损组关节软骨组织基质金属蛋白酶3表达增高。对照组关节软骨组织Ⅰ型胶原免疫组化染色阴性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,基质金属蛋白酶3低表达,无形态学异常改变。说明机械性损伤可以导致关节软骨细胞外基质成分发生改变,丧失其原有的生物学特性而退变,基质金属蛋白酶3在损伤后的软骨组织中表达增高,使细胞外基质的降解增加,是导致关节软骨退变的重要因素。     

基质细胞衍生因子1预处理抑制大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡

背景：研究发现基质细胞衍生因子1除参与趋化干细胞定向迁移途径,还具有抗凋亡作用。 目的：观察基质细胞衍生因子1预处理后对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。 方法：以不同浓度H₂O₂诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,取最适宜浓度100 μmol/L用于实验。不同质量浓度基质细胞衍生因子1干预100 μmol/L H₂O₂诱导后的大鼠骨髓间充质干细胞,选择0.2 mg/L最佳保护质量浓度用于实验。取第3代大鼠骨髓间充质干细胞,随机分组：正常对照组不进行任何处理;损伤组在培养液中加入H₂O₂作用24 h;基质细胞衍生因子1预处理组于H₂O₂损伤细胞前6 h加入基质细胞衍生因子1;基质细胞衍生因子1+AMD3100(基质细胞衍生因子1受体CXCR4的阻断剂)组于H₂O₂细胞损伤前6 h加入基质细胞衍生因子1与AMD3100共孵。 结果与结论：H2O2能体外模拟缺血缺氧环境诱导骨髓间充质干细胞凋亡,且作用呈剂量依赖性。与损伤组比较,加入基质细胞衍生因子1预处理后细胞凋亡明显减轻(P < 0.01),细胞E2F6基因表达增强(P < 0.05),E2F1基因表达减少(P < 0.05),线粒体细胞色素C转位减少(P < 0.05),Caspase-3活性降低(P < 0.05),AMD3100可阻断基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞的保护作用。提示基质细胞衍生因子1可能通过增强E2F6基因,负性调控E2F1基因抑制线粒体损伤导致的骨髓间充质干细胞凋亡。     

黄芪多糖抑制Toll样受体4/核因子κB p65通路治疗大鼠膝骨关节炎

背景：黄芪多糖治疗骨关节炎具有一定的作用,Toll样受体4/核因子κB通路在膝骨关节炎发病机制中发挥重要作用。目的：探讨黄芪多糖对膝骨关节炎的干预作用及其机制。方法：40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄芪多糖低剂量组、黄芪多糖高剂量组和脂多糖组(n=8),除对照组之外,其余各组均建立膝骨关节炎模型。造模成功1周后,黄芪多糖低、高剂量组分别向大鼠膝关节腔内注射质量浓度为0.1,0.5 g/L的黄芪多糖生理盐水溶液0.2 mL,脂多糖组注射0.5 g/L黄芪多糖0.2 mL+500μg/kg脂多糖0.2 mL;模型组和对照组同法注射等量生理盐水;均3 d注射1次,干预6周。干预结束后,苏木精-伊红、番红O-固绿染色观察软骨、滑膜组织病理学变化,采用Mankin’s评分和国际骨关节炎研究协会评分进行评估;ELISA法检测滑膜组织中白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、一氧化氮、丙二醛、超氧化物歧化酶表达水平;Western blot检测软骨组织中聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶3及核因子κB p65、Toll样受体4、MyD88表达。结果与结论：(1)与模型组相比,黄芪多糖...     

NONHSAT248596.1内源性竞争miR-146a-5p调控骨关节炎软骨退变的机制

背景：目前已有针对lncRNAmiRNAmRNA的共表达网络对骨关节炎发生发展调控机制的研究，课题组前期研究已通过数据库筛选出符合条件的NONHSAT248596.1和miR-146a-5p，尚缺乏体内实验来验证上述调控机制。目的：探究NONHSAT248596.1在基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴介导体内骨关节炎软骨退变进程中对miR-146a-5p发挥的竞争性内源性RNA调控作用。方法：取36只新西兰兔，通过向右侧后肢膝关节注射基质细胞衍生因子1溶液建立骨关节炎模型，采用随机数字表法分4组，lncRNA组、mi RNA组、ce RNA组、对照组分别向造模膝关节内注射NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体、mi R-146a-5p过表达的慢病毒载体、mi R-146a-5p+NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体及空慢病毒载体。造模第4,8,12周，取膝关节软骨组织和软骨下骨组织进行相关检测。结果与结论：(1)苏木精-伊红与番红O固绿染色显示，4组软骨组织都有不同程度的退变表现，造模第4周时，lncRNA组软骨组织中的软骨细胞肿胀、细胞极性消失，细胞外基质破...     

黄芪甲苷对EPCs中SDF-1α/CXCR4的调控作用

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对内皮祖细胞(EPCs)中CXC趋化因子受体4(CXCR4)和基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的调控作用及其作用机制。方法:体外培养大鼠骨髓源性EPCs,观察应用AS-IV及CXCR4的特异性阻断剂AMD3100后EPCs的增殖、黏附、迁移、凋亡和管状结构形成能力的变化,并分析AS-IV对EPCs中SDF-1α及CXCR4的mRNA和蛋白,以及p-CXCR4蛋白水平变化的影响。结果:AS-IV可以显著提升EPCs的增殖、黏附、迁移和管状结构形成能力,减轻EPCs的凋亡,上调EPCs中SDF-1α和CXCR4的mRNA和蛋白及p-CXCR4蛋白的水平(P0.05);AMD3100可以阻断AS-IV对CXCR4的mRNA和蛋白及p-CXCR4蛋白水平的上调作用,但不影响AS-IV对SDF-1α的mRNA和蛋白水平的上调作用。结论:AS-IV可能通过调控EPCs中SDF-1α/CXCR4的表达而增强EPCs的生物学作用。