泛连接蛋白1参与炎症调控及细胞焦亡的研究进展

<正>1泛连接蛋白1(pannexin 1, Panx1)通道及其调控1.1 Panx1概况Panx1作为泛连接蛋白家族成员之一,激活后可在细胞膜上形成通道,释放10 kD以内的物质于细胞外,如腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)、尿苷三磷酸(uridine triphosphate, UTP)、K⁺和Ca²⁺等。细胞内物质作为炎症介质,经Panx1释放到细胞外,诱导失控性炎症反应发生^[1]。     

反复力竭运动大鼠心脏窦房结细胞T-型钙离子通道的变化

背景：目前,运动医学领域关于运动对窦房结细胞T-型钙离子通道(T-Ca²⁺通道)的影响鲜见报道。 目的：分析2周力竭跑台运动对大鼠心脏窦房结T-Ca²⁺通道亚基Cav3.1 mRNA表达及通道电流密度的影响。 方法：健康雄性SD大鼠50只共分5组。对照组10只大鼠不进行任何运动训练,一次力竭组20只大鼠在正常饲养2周后,进行一次速度25 m/min,坡度为0°跑台训练至力竭;反复力竭组20只大鼠运动方式及强度同一次力竭组,跑台训练1次/d,每周运动6 d,休息1 d,共训练2周。运动组大鼠分别于运动后0 h及 24 h (各10只)取材,应用实时荧光定量PCR技术测定T-Ca²⁺通道亚基Cav3.1 mRNA表达变化,应用细胞急性分离及全细胞膜片钳技术测定通道电流密度变化,以观察跑台训练运动对大鼠心脏窦房结细胞膜上T-Ca²⁺通道的影响。 结果与结论：与对照组相比,反复力竭运动0 h和反复力竭运动24 h组Cav3.1 mRNA表达明显下降(P < 0.01)。反复力竭运动0 h和反复力竭运动24 h组T-Ca²⁺通道ICa,T电流密度明显低于对照组及一次力竭组(P < 0.01)。结果表明,2周反复力竭跑台训练可引起窦房结细胞膜T-Ca²⁺通道亚基Cav3.1 mRNA表达及ICa,T电流密度减少,这可能引起窦房结细胞舒张期自动除极及自律活动减慢,提示反复力竭运动对于T-Ca²⁺通道的影响可能成为运动引发窦房结功能障碍及运动性心律失常的离子通道机制之一。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

坐骨神经损伤模型大鼠神经传导速度及损伤运动神经元内生长相关蛋白43表达与磁刺激干预

背景：磁刺激可促进损伤神经的修复。 目的：观察磁刺激对大鼠损伤坐骨神经神经传导速度及相应水平脊髓运动神经元内生长相关蛋白43表达的影响。 方法：将60只SD大鼠随机分为实验组(n=24)、模型组(n=24)和假手术组(n=12),用一新的长17 cm的止血钳钳夹坐骨神经至第二扣,以21.95×10³ Pa维持10 s制备损伤模型。造模后24 h,实验组每天给予0.09 T的磁刺激。 结果与结论：造模后第2,4,8,12周,免疫组织化学染色显示实验组脊髓L4~5运动神经元生长相关蛋白43的表达较模型组相应时间点明显增高( P < 0. 05);造模后12周,电生理检测发现,与模型组比较,实验组再生神经传导速度加快,波幅升高,潜伏期缩短(P < 0.05)。说明磁刺激能提高损伤坐骨神经的传导速度,增加其对应脊髓节段运动神经元中生长相关蛋白43的表达,对大鼠损伤坐骨神经的修复起促进作用。     

臂丛损伤脊髓运动神经元与神经根GAP-43 mRNA表达

目的：探讨臂丛根性撕脱伤后脊髓腹角运动神经元胞体及其神经根GAP-43 mRNA的表达变化及其影响因素,为臂丛损伤的修复治疗提供理论依据.方法：本实验创立三种臂丛根性撕脱伤模型：C7前根撕脱（Ⅰ组）;C7前根撕脱＋切断同侧C5～T1后根（Ⅱ组）;C7前根撕脱＋C5和C6之间作同侧脊髓半横断（Ⅲ组）.术后2周按CBS评分标准检查动物神经缺失症状,用SYBR Green荧光定量RT-PCR方法检测脊髓腹角运动神经元胞体及其神经根GAP-43 mRNA的表达改变.结果：根据CBS评分标准,对照组计为0分,Ⅰ组计分较低、Ⅲ组计分最高.对照组C7神经元胞体和C7神经根中GAP-43 mRNA表达量相近,但三种损伤组术后2周神经元胞体内GAP-43 mRNA表达均上调,而神经根内表达却下调.结论：（1）臂丛根性撕脱伤后脊髓腹角运动神经元胞体GAP-43 mRNA表达受突触前机制的调控;（2）臂丛损伤2周时神经元胞体内GAP-43 mRNA表达呈现高峰期,此时进行神经移位术将显著提高神经修复的效果.     

Piezo1通道激活促进大鼠冠脉平滑肌细胞内钙浓度升高的机制研究

目的：探讨机械敏感性离子通道Piezo1激活促进冠状动脉平滑肌细胞(CASMCs)内Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)升高的机制。方法：采用原代成年大鼠CASMCs为研究对象,用细胞免疫荧光技术观察Piezo1在CASMCs中的表达与亚细胞定位情况;利用Western blot检测用si RNA敲减CASMCs中Piezo1和基质相互作用分子1(STIM1)后CASMCs中的蛋白表达情况;利用激光共聚焦显微镜,通过基于Flou-4 AM负载的细胞内Ca²⁺成像技术,测量CASMCs[Ca²⁺]_i的变化。结果：细胞免疫荧光染色结果显示,Piezo1在原代大鼠CASMCs中表达;Piezo1与肌浆/内质网Ca²⁺-ATP酶2(SERCA2)、线粒体外膜蛋白TOM20和核膜蛋白lamin B1共定位程度较高。Western blot结果表明,si RNA转染后STIM1和Piezo1蛋白表达下调(P<0.05)。激光共聚焦显微镜检测[Ca...     

原卟啉Ⅸ介导的声动力疗法对S180 肿瘤细胞膜损伤研究

探讨频率为1.1 MHz、强度为3 W/cm2的聚焦超声,结合1 μg/mL的原卟啉Ⅸ（PpⅨ）对S180肿瘤细胞膜结构和功能的损伤作用。超声联合PpⅨ作用于S180肿瘤细胞后,通过酸性磷酸酶活力检测细胞生长活力;扫描电子显微镜观测细胞膜表面超微结构;生化分析方法检测Na⁺-K⁺-ATPase、Ca²⁺-ATPase活性,细胞膜唾液酸 (SA)及细胞内谷胱甘肽（GSH）含量;通过荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位及细胞色素C氧化酶含量。实验结果显示：与对照组（Control）、原卟啉Ⅸ组（PpⅨ）、超声组相比,超声联合PpⅨ处理组的细胞生长明显受到抑制,其酸性磷酸酶活力（OD值）由对照组063±003下降至0.34±0.01;细胞膜结构严重破坏,表现为微绒毛消失和胞质部分成分流失;膜表面重要成分如Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-ATPase活性明显下降（P<0.05）,细胞膜唾液酸含量及胞内GSH水平急剧降低（P<0.01）。研究表明：超声联合PpⅨ作用于S180肿瘤细胞后,细胞膜蛋白受到严重破坏,部分膜蛋白流失。研究结果还提示：声动力处理后细胞线粒体膜电位水平显著降低（Rhodamin 123平均荧光强度由对照组14 082.78 ± 840.44下降至7 801.53± 409.15）;细胞色素C氧化酶活性由对照组的（0.015 6 ± 0.002 0）U/min/mg降低至（0.008±0.000 0）U/min/mg,提示线粒体也可能是超声联合PpⅨ对S180肿瘤细胞的作用靶点。     

二乙酰吗啡干预离体乳鼠心肌细胞动作电位和钙离子电流的变化

文题释义：二乙酰吗啡：半合成的阿片受体纯激动剂,由吗啡和醋酸酐为原料经化学反应制成,其镇痛作用强于吗啡,镇痛效果为吗啡的4-8倍,其成瘾速度快,戒断难度大。长期使用后不仅会对人体的免疫功能造成严重破坏,还可导致心、肝、肾等重要脏器的功能损害。钙离子：作为细胞内第二信使,主要负责维持细胞膜正常电生理功能,以及确保机体多种生物信号转导途径正常进行。在心肌缺血缺氧过程中,当缺血引起心肌异常的L型钙电流逐渐恢复正常,钾通道活性程度降低,导致动作电位时程相对延长,L型钙电流在激活和失活的重叠区形成“窗流”,导致心肌细胞膜电位不稳而形成电震荡;当细胞内Ca2+大量积聚,增加 Ca2+-CaM复合物生成,心肌细胞易造成早期和晚期后除极,导致室性心律失常概率增加。 背景：阿片类药物可调控心肌细胞膜电位和Ca²⁺电流的变化,但是目前二乙酰吗啡是否诱导心肌节律、细胞动作电位和钙离子电流改变尚未见报道。 目的：探讨二乙酰吗啡对离体SD乳鼠心肌细胞动作电位和钙离子电流的影响。方法：①体外培养SD乳鼠心肌细胞,采用5个浓度二乙酰吗啡(0,10^-2,10^-3,10^-4,10^-5 mol/L)和20 mol/L维拉帕米作用于心肌细胞;②将细胞分为对照组、二乙酰吗啡组、二乙酰吗啡+维拉帕米组。后2组分别以二乙酰吗啡、二乙酰吗啡+维拉帕米(浓度20 μmol/L)联合干预心肌细胞;对照组加入等量PBS。实验于2018-05-21经新疆医科大学第一附属医院动物实验医学伦理委员会批准,批准号IACUC201805-K1。 结果与结论：①当不同浓度二乙酰吗啡干预心肌细胞24 h后,心肌细胞形态异常数量亦随其浓度的改变而明显增加,呈剂量依赖性改变。当二乙酰吗啡浓度逐渐升高,细胞存活数量亦逐渐减少,细胞胞质体积缩小,胞膜收缩,伪足减少,细胞核结构模糊。②与对照组相比,当加入二乙酰吗啡干预心肌细胞后,心肌细胞自发性搏动频率和节律差异有显著性意义。静息膜电位负值降低,动作电位中动作电位时程显著增加,动作电位幅度显著减小。③与对照组相比,二乙酰吗啡组中心肌膜电位改变数量明显增加,当加入维拉帕米后,心肌膜电位改变细胞数量有所降低。与对照组相比,心肌膜电位改变细胞数量有所升高。④提示二乙酰吗啡可致离体SD乳鼠心肌细胞形态异常,心肌自发性搏动频率和节律显著增加,心肌细胞膜电位和动作电位发生改变,钙通道阻滞剂维拉帕米对二乙酰吗啡引起的心肌细胞节律异常有一定改善作用。  ORCID: 0000-0002-5113-6050(苏丽萍) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

改构型酸性成纤维细胞生长因子干预慢性衰老模型大鼠脑及肝组织和血液ATP酶的活力

背景：有研究表明改构型酸性成纤维细胞生长因子是多功能生长因子,但其抗衰老作用至今尚未有报道。 目的：观察改构型酸性成纤维细胞生长因子对D-半乳糖致衰老大鼠脑组织、肝组织及红细胞膜Na⁺-K⁺-ATP酶活力和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活力的影响。 方法：将Wistar大鼠采用皮下注射D-半乳糖建立衰老模型,建模成功后随机分为模型组、生理盐水对照组和改构型酸性成纤维细胞生长因子组,另设正常对照组。改构型酸性成纤维细胞生长因子组按12 µg/kg剂量肌肉注射改构型酸性成纤维细胞生长因子,生理盐水对照组肌肉注射等量的生理盐水,模型组不干预。 结果与结论：与正常对照组相比,模型组大鼠脑组织、肝组织及红细胞膜Na⁺-K⁺-ATP酶活力和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活力均明显著降低(P < 0.01)。改构型酸性成纤维细胞生长因子组脑组织、肝组织及红细胞膜Na⁺-K⁺-ATP酶活力和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活力均明显高于模型组和生理盐水对照组(P < 0.05)。结果提示,改构型酸性成纤维细胞生长因子能提高衰老大鼠脑组织、肝组织及红细胞膜Na⁺-K⁺-ATP酶活力和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活力,具有延缓衰老作用。     

坐骨神经损伤后相应脊髓节段Nogo-A的表达变化

目的通过切断坐骨神经,观察相应脊髓节段中Nogo-A表达的变化及了解脊髓中Nogo-A在周围神经损伤过程中的作用规律。方法选用健康成年SD大鼠120只,随机分为切断坐骨神经组、切除坐骨神经组和假手术对照组。各组大鼠术后每一组随机分为5组,分别于术后24h、48h、1周、2周、32d处死。经左心室-升主动脉插管灌注固定,然后迅速取出相应节段脊髓进行处理后,光镜观察并对脊髓前角运动神经元行光密度测定。结果光镜下可见,Nogo-A在脊髓前角运动神经元胞浆内有明显表达,而细胞核内未见表达。平均光密度(MOD)测定显示,脊髓灰质前角坐骨神经损伤侧Nogo-A表达阳性的运动神经元MOD较未损伤侧明显增高,于伤后1、2 d即出现增高,1周时达高峰,之后逐渐降低,32d时趋向正常。结论坐骨神经损伤后,脊髓相应节段损伤侧前角运动神经元胞浆内Nogo-A的表达较未损伤侧明显增强,且随时间不同,其增强的幅度有一定的变化规律。     

BDNF经TrkB-PKC-Ca2+信号通路调控气道ASMC炎症反应

目的：探讨脑源性神经营养因子(BDNF)经TrkB-PKC-Ca²⁺信号影响气道细胞收缩及炎症反应的分子机制。方法：建立TNF-α诱导的气道平滑肌细胞(ASMC)炎症模型，采用BDNF-siRNA和BDNF重组蛋白对模型进行干预，测定各组ASMC炎症因子IL-17、Eotaxin水平及BDNF、TrkB浓度、PKC活性变化及Ca²⁺、三磷酸肌醇(IP3)浓度变化。结果：与正常组相比，模型组细胞异常增殖，细胞内炎症因子IL-17、Eotaxin增加，BDNF、TrkB蛋白和转录水平明显升高，同时引起其下游PKCIP3-Ca²⁺信号上调。结论：BDNF可能通过激活下游PKC信号通路诱发气道重塑，参与气道高反应形成。     

Requirement of neural activity for the maintenance of dopaminergic neurons in rat midbrain slice cultures

Chronic treatment of organotypic midbrain slice cultures with L-type Ca²⁺ channel blocker nicardipine (3–10 μM) or verapamil (10 μM) for 18 days resulted in a drastic decrease in the number of dopaminergic neurons. A voltage-dependent Na⁺ channel blocker tetrodotoxin (1 μM) was also effective in decreasing the number of dopaminergic neurons. Concurrent application of forskolin (20 μM) or dibutyryl cyclic AMP (1 mM) counteracted the effects of nicardipine and tetrodotoxin. These results suggest that spontaneous neuronal activity within midbrain slice cultures, causing Ca²⁺ influx through L-type Ca²⁺ channels that maintains intracellular cyclic AMP levels, is required for the maintenance of dopaminergic neurons.     

Optical identification of calcium-dependent action potentials transiently expressed in the embryonic rat brainstem

Using multiple-site optical recording of transmembrane potential changes, we have found a new type of calcium-dependent action potential expressed transiently in the embryonic rat dorsal motor nucleus of the vagus nerve. Slice preparations with vagus nerve fibers attached were dissected from 12- to 16-day-old embryonic (E12–E16) rat brainstems, and they were stained with a voltage-sensitive merocyanine–rhodanine dye (NK2761). Electrical activities in response to vagal stimuli were optically recorded simultaneously from many sites using 1020- or 128-element photodiode array measuring systems. In brainstem preparations, two types of action potential-related optical signals were identified. One was detected from the dorsolateral region, and was related to sensory nerve activity (Type I). The other was detected from the dorsomedial region, and corresponded to the action potential in the dorsal motor nucleus of the vagus nerve (Type II). We found a difference in the ionic basis of the Type I vs Type II signals. The Type I signal was not altered in Ca²⁺-free bathing solution and was eliminated by tetrodotoxin, suggesting that the sensory nerve activity is mediated by Na⁺ currents. The Type II signal at early developmental stages (E12–E13, and some preparations in E14) was also independent of Ca²⁺. However, the Type II signal in later developmental stages (E15–E16, and some preparations in E14) did depend upon Ca²⁺: it was eliminated in Ca²⁺-free Ringer's solution, blocked by Cd²⁺, Ni²⁺ or Mn²⁺, and elicited in Sr²⁺-containing Ringer's solution, where CaCl₂ was replaced with SrCl₂. These results suggest that the cation which dominates the motoneuron action potential changes from Na⁺ to Ca²⁺ during development, and this change occurs around E14. With pharmacological analysis using Ca²⁺ channel blockers, we show that the Ca²⁺ channel mediating the motoneuron action potential is distinct from T-, L-, N-, P- or Q-type channels.

Because the vagal action potential in adult mammals is mainly mediated by Na⁺, we suggest that a Ca²⁺ action potential mediated by a new type of Ca²⁺ channel is expressed transiently in the rat dorsal motor nucleus of the vagus nerve at particular stages of development.     

臂丛损伤后脊髓前角运动神经元超微结构改变

目的探讨大鼠臂丛损伤导致脊髓前角运动神经元死亡的机制。方法成年雄性SD大鼠24只,其中对照组6只,损伤组18只。建立3种臂丛损伤模型:右C7前根撕脱(A组);右C7前根撕脱+同侧C5～T1后根离断(B组);右C7前根撕脱+右C5与C6之间脊髓半横断(C组)。术后14d取C7节段脊髓,采用尼氏染色方法和透射电镜技术,观察脊髓前角运动神经元的存活率及其超微结构改变。结果术后2周A组脊髓前角运动神经元的存活率最高,B组居中,C组最低。3个臂丛损伤组C7前角均可见凋亡特征性改变:运动神经元内核染色质聚集靠边,核固缩、碎裂、核膜皱褶并内陷,并有染色质团块形成的凋亡小体。细胞体积缩小,胞浆内细胞器密集,线粒体轻度肿胀,核周粗面内质网减少,游离核糖体增多,胞浆内可见较多的空泡。神经元胞体周围的有髓神经纤维和无髓神经纤维呈轻度肿胀,髓鞘的板层结构消失。结论臂丛损伤诱导脊髓运动神经元死亡途径中存在凋亡和坏死两种机制,运动神经元可形成凋亡小体。     

活性氧簇介导血管紧张素Ⅱ对延髓神经元胞内游离Ca~(2+)水平的调节作用

目的:探讨活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)介导血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)对延髓神经元胞内游离Ca~(2+)的调节作用及其机制。方法:原代培养延髓神经元;免疫荧光双标法鉴定培养神经元的特征;给予Ang Ⅱ处理后,用二氢乙啶荧光探针法测定神经元ROS水平;同时或单独给予Ang Ⅱ和NADPH氧化酶抑制剂apocynin或自由基清除剂TEMPOL后,Fura-2/AM钙瞬变法记录神经元胞内游离Ca~(2+)的水平;CCK-8法检测神经元活性。结果:原代培养的延髓神经元多数为谷氨酸阳性的神经元;Ang Ⅱ(5μmol/L)可在10 min内显著升高神经元ROS水平(P0.01);给予Ang Ⅱ处理后延髓神经元胞内Ca~(2+)水平显著升高(P0.01);给予apocynin/TEMPOL预处理后,Ang Ⅱ引起的延髓神经元胞内Ca~(2+)的升高则被抑制(P0.05)。实验浓度的Ang Ⅱ对神经元无毒性作用。结论:ROS介导Ang Ⅱ诱导的延髓神经元胞内Ca~(2+)的升高作用,可能是Ang Ⅱ在中枢诱导氧化应激作用的潜在细胞内信号机制。     

别孕烯醇酮对6-羟基多巴胺损伤的细胞系SH-SY5Y的保护作用

目的 明确别孕烯醇酮(APα)对6-羟多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞系的保护作用,并阐明可能的分子机制.方法 向体外培养的SH-SY5Y细胞系中分别加入6-OHDA、APα、γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)拮抗剂荷包牡丹碱(Bic)和电压门控L型Ca2+通道拮抗剂硝苯地平(nifedipine),采用...     

Ion channels and the control of swimming in the Xenopus embryo

The Xenopus embryo has been well studied and the circuitry underlying motor pattern generation largely elucidated. We have extended this analysis by determining the roles of individual voltage- and ligand-gated ion channels in controlling the motor pattern for swimming and two mechanisms that control rundown of this pattern.

Xenopus embryo spinal neurons possess at least six classes of ion channel: a fast Na⁺ channel; a mixture of kinetically similar Ca²⁺ channels; a fast K⁺ channels; a slow K⁺ channel; a Na⁺-dependent K⁺ channel; and a slowly activating Ca²⁺-dependent K⁺ channel.

The roles of the voltage-gated currents in determining neuronal firing properties and operation of the locomotor circuitry have been examined both pharmacologically and in realistic computer simulations.

Model neurons fire repetitively in response to current injection. The Ca²⁺ current seems essential for repetitive firing. The fast K⁺ current appears mainly to control spike width, whereas the slow K⁺ current exerts a powerful influence on repetitive firing. These predictions from the model have been confirmed by the use of specific pharmacological blockers of the fast and slow K⁺ currents.

Both the model network and the real spinal locomotor circuit appear to tolerate a wide variation in the relative strengths of the component synapses but are very sensitive to the magnitudes of the voltage-gated currents. In particular the slow K⁺ current, despite being a small component of the total outward current, plays a critical role in stabilizing the motor pattern.

Like many other rhythmic motor patterns, swimming in the Xenopus embryo is episodic; it undergoes run-down and self-termination even in the absence of sensory inputs. The slow Ca²⁺-dependent K⁺ current appears to play a role in the self-termination of swimming. However, intrinscic modulation mediated by the release of ATP and production of adenosine in the extracellular space appears to be a very powerful determinant of run-down of the motor pattern.     

Molecular characterization of L-type calcium channel splice variants expressed in human T lymphocytes

Calcium (Ca²⁺) influx is a fundamental intracellular signal that is required to initiate and sustain T lymphocyte activation. Dihydropyridine-sensitive, L-type Ca²⁺ channels appear to play a significant role in Ca²⁺ mobilization during T cell activation, but very little is known about the molecular structure of these channels in T lymphocytes. Here we identify two novel splice variants of the Ca_V1.4 (_1F) L-type Ca²⁺ channel that are expressed in human T lymphocytes, and also demonstrate expression of the Ca_V1.4 protein in the human Jurkat T cell leukemia line and human peripheral blood T lymphocytes (PBTs). The carboxy-termini of both Ca_V1.4 splice isoforms contain unique exon usages distinct from the Ca_V1.4 channel isolated from human retina that may render these channel variants insensitive to changes in membrane depolarization. Additional evidence of the importance of these new splice variants comes from the demonstration that the mRNA expression of the Ca_V1.4 splice isoforms is regulated by TCR-induced activation in Jurkat T cells, and to a lesser extent in human PBTs. Overall these results provide the first evidence that structurally unique L-type Ca²⁺ channels exist in T lymphocytes, which can contribute to a Ca²⁺ influx during T lymphocyte activation.     

NCA对受磷蛋白敲除小鼠心肌兴奋-收缩偶联的作用

 目的: 硝酰基(HNO)在轻微增加细胞内钙的基础上可以显著增加心肌肌丝对钙离子的反应性。本研究中,我们应用崭新的HNO供体乙酸1-亚硝基环己酯(NCA)来观察HNO对受磷蛋白敲除(PLB-KO)小鼠心室梳状肌的作用。方法: 小鼠右心室的完整梳状肌被连接在张力换能器与刺激电极之间,肌小节长度设定在2.2~2.3μm之间,K-H液表面灌流后,Fura-2经玻璃微电极负载进行离子透入法检测[Ca²⁺]_i,同时测定心肌收缩张力的变化。结果: PLB-KO小鼠心室梳状肌比野生型(WT)小鼠具有更高的钙瞬变及收缩力,同时展示负性收缩力-收缩频率相关性(FFR)。NCA(2.5μmol/L)在不同浓度细胞外钙([Ca²⁺]_o)条件下增加PLB-KO及WT小鼠心肌收缩力,但并不影响PLB-KO小鼠的负性FFR。稳态条件下2组小鼠去肌膜梳状肌的收缩力-钙离子相关性无显著性差异,NCA则增加去肌膜梳状肌的钙离子的反应性。结论: NCA提供的HNO通过增加PLB-KO及WT小鼠心肌肌丝对钙离子的反应性而增强心肌收缩力;心肌细胞内钙瞬变的增加伴随收缩力的增强表明HNO可改善钙离子活性,进一步证实HNO作为正性肌力药物的作用效果。     

维拉帕米逆转乳头状甲状腺癌对多柔比星抗性中的L-Ca~(2+)/calpain信号转导机制

目的:探讨维拉帕米逆转乳头状甲状腺癌对多柔比星抗性的L型钙离子通道/钙蛋白酶(L-Ca~(2+)/calpain)信号转导通路机制。方法:以培养2 d的人乳头状甲状腺癌TPC-1细胞为实验对象,首先以CCK-8分析法测定细胞存活率对维拉帕米和多柔比星进行配伍试验,确定合适的药物作用浓度及时间。然后将细胞分为空白对照组、多柔比星组、维拉帕米组和多柔比星+维拉帕米组。以全细胞膜片钳技术记录TPC-1细胞的L-Ca~(2+)通道电流,以Western blot法测定蛋白calpain 1及LC3的表达水平。结果:多柔比星组、维拉帕米组与空白对照组相比,LCa~(2+)通道电流密度减小(P0.05);多柔比星+维拉帕米组与多柔比星组相比,L-Ca~(2+)通道电流密度减小(P0.01)。多柔比星组、维拉帕米组与空白对照组相比,calpain 1蛋白表达减弱(P0.05);多柔比星+维拉帕米组与多柔比星组相比,calpain 1蛋白表达减弱(P0.05)。多柔比星组和维拉帕米组与空白对照组相比,LC3蛋白表达增强(P0.05);多柔比星+维拉帕米组与多柔比星组相比,LC3蛋白表达增强(P0.01)。结论:TPC-1细胞抗多柔比星可能与其自噬活性增强有关;维拉帕米能进一步增强细胞自噬活性,致自噬性细胞死亡,从而对抗TPC-1细胞对多柔比星的抗性,其机制可能与自噬的L-Ca~(2+)/calpain 1信号转导通路有关。     

损伤性C类初级感觉神经元膜上唾液酸对其兴奋性的影响

 目的:研究坐骨神经损伤后,大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)C类初级感觉神经元膜表面唾液酸含量变化对其电生理特性的影响。方法:制作大鼠慢性压迫性神经损伤(chronic constriction injury,CCI)痛觉模型,以正常大鼠为对照,采用胞内电生理记录法检测损伤及正常C类神经元的电生理特性,随后用Ca²⁺去中和损伤及正常C类神经元膜表面唾液酸所带负电荷或用唾液酸酶(neuraminidase,NA)分解膜表面唾液酸,观察电生理特性的变化。结果:损伤性C类神经元的静息电位(rest potential,RP)较正常C类神经元移向去极化方向,诱发动作电位(action potential,AP)发生率增加,所需阈强度减小,兴奋性增加;使用Ca²⁺和唾液酸酶使损伤性C类神经元膜电位向超极化方向移动,诱发AP所需阈强度增加,兴奋性降低。而Ca²⁺和唾液酸酶对正常C类神经元的电生理特性及兴奋性无影响。结论:损伤C类神经元膜表面唾液酸含量增加,导致其RP 去极化且兴奋性增加。