肌肉注射脐带间充质干细胞对扩张型心肌病大鼠相关细胞因子的影响

背景：已有研究表明,在一定的剂量范围内,健康大鼠肌肉注射异种脐带间充质干细胞安全可靠,也证实了这一途径对扩张型心肌病大鼠心力衰竭同样安全有效。目的：探讨肌肉注射脐带间充质干细胞对扩张型心肌病大鼠相关细胞因子表达的影响。方法：雄性SD大鼠160只,随机抽取20只作为正常组,余大鼠通过阿霉素腹腔注射方式建立扩张型心肌病模型。造模成功大鼠随机分为模型组、上清液祖、低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别经四肢肌肉注射人脐带间充质干细胞培养液、上清液及不同剂量的人脐带间充质干细胞,注射后观察大鼠一般情况,并于首次注射后4周再次给予相同剂量的培养液、上清液或脐带间充质干细胞。结果与结论：ELISA检测结果显示,肌注前后模型组大鼠血清肝细胞生长因子、白血病抑制因子、粒细胞集落刺激生物因子及血管内皮生长因子水平均较正常组增高(P < 0.05),肌注后低剂量组肝细胞生长因子、白血病抑制因子、血管内皮生长因子和粒细胞集落刺激生物因子较肌注前显著升高(P < 0.05),且较模型组明显升高(P < 0.05),中剂量组白血病抑制因子较肌注前明显升高(P < 0.05),高剂量组肝细胞生长因子、血管内皮生长因子和粒细胞集落刺激生物因子较肌注前无明显差异(P > 0.05)。免疫组化及RT-PCR结果均显示,各肌肉注射组大鼠心肌细胞胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子、肝细胞生长因子均较正常组表达增强,中剂量组呈强阳性表达,较其他各组增强明显。以上结果表明中、低剂量人脐带间充质干细胞肌肉注射可使扩张型心肌病大鼠血清肝细胞生长因子、白血病抑制因子、粒细胞集落刺激生物因子及血管内皮生长因子水平增高,并增加心肌组织胰岛素样生长因子1、肝细胞生长因子、血管内皮生长因子表达。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

血管内皮生长因子165转染可促进脂肪间充质干细胞增殖

背景：血管内皮生长因子是目前最重要的促血管新生因子之一,在脂肪移植中可促进移植物的血运重建,提高成活率。 目的：探讨血管内皮生长因子165基因转染促进脂肪间充质干细胞增殖的作用。 方法：利用目的片段重组血管内皮生长因子165基因入腺病毒pAdEasy-1系统,包装病毒并测定滴度,同理包装空病毒。将包装成功的两种病毒液分别以100的最佳感染复数转染入脂肪间充质干细胞内,以未转染细胞为空白组。采用RT-PCR和Western blot法检测各组转染细胞中血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞的增殖情况。 结果与结论：实验组血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白表达量高于对照组和空白组(P < 0.05);实验组转染脂肪间充质干细胞后分裂增殖程度显著增加,与对照组和空白组比较差异有显著性意义(P < 0.05),结果表明腺病毒介导的血管内皮生长因子165基因转染脂肪间充质干细胞后可以持续表达目的蛋白,同时也能促进脂肪间充质干细胞的显著增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人脐带血干细胞抑制大鼠肺纤维化及肺巨噬细胞TGF-β1的表达

目的 研究人脐血间充质干细胞对博来霉素所致的大鼠肺纤维化及TGF-β1的影响.方法 取清洁级健康雄性SD大鼠60只随机分为博来霉素组(P组)、干细胞治疗组(M组)、地塞米松治疗组(D组)和阴性对照组(N组),取第2代人脐血间充质干细胞培养至第4代;P组、M组和D组分别经气管注入博来霉素制造肺纤维化模型,M组造模后立即经鼠尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的干细胞,D组造模后第2天开始连续7d腹腔注射地塞米松,N组经气管注入等量生理盐水,在第7、14、28天处死各组大鼠,行HE、Masson染色,免疫组织化学法观察TGF-β1表达及标记细胞情况.结果 M组第7、14、28天肺组织均可见标记的干细胞;HE及Masson染色后观察,与N组相比,P组7d时肺泡炎最明显,28 d肺纤维化程度最重,M、D组较P组轻且病理切片可见M组较D组肺泡炎及纤维化程度稍轻;肺组织中TGF-β1在P组7d时最高,M、D组明显少于P组,M组减少更明显,组间差异有统计学意义.结论 人脐血间充质干细胞可以定植于肺组织中,在肺纤维化早期通过抑制TGF-β1的表达,可能减轻肺泡炎及肺纤维化.     

人脐带间充质干细胞防治新生大鼠急性肺损伤的作用

背景：研究发现间充质干细胞对成年动物急性肺损伤具有一定的防治作用。 目的：进一步验证人脐带间充质干细胞对内毒素所致的新生大鼠急性肺损伤的防治作用。 方法：选取7 d龄新生SD大鼠120只,随机分为3组。模型组和干细胞组大鼠腹腔注射内毒素3 mg/kg建立新生鼠急性肺损伤模型;生理盐水组大鼠腹腔注射0.1 mL生理盐水。30 min后干细胞组腹腔注射0.1 mL人脐带间充质干细胞(1×10⁶),生理盐水组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水作对照。分别于6 h、1 d、2 d、4 d、7 d留取新生大鼠肺组织及血清标本,观察肺组织病理变化,ELISA方法测定血清中肿瘤坏死因子α及白细胞介素10的浓度及肺组织中髓过氧化物酶活性。 结果与结论：肺组织苏木精-伊红染色及髓过氧化物酶活性均提示模型组呈急性肺损伤改变,干细胞组造模后4 d及7 d时肺损伤比模型组轻。与模型组比较,干细胞组的抗炎因子白细胞介素10水平显著升高,而促炎因子肿瘤坏死因子α则明显减低,差异有显著性意义(P < 0.05)。说明用人脐带间充质干细胞早期细胞干预新生SD大鼠急性肺损伤,可以减轻肺部炎性病变,其主要机制可能为人脐带间充质干细胞通过免疫调节,平衡抗炎因子及促炎因子的表达,减轻肺损伤。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

人端粒酶反转录酶转染的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠糖尿病

背景：人端粒酶反转录酶是调控增殖及定向分化的首选生长因子之一,具有多重生物学效应。 目的：观察人端粒酶反转录酶表达的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠糖尿病的效果。 方法：体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,经反转录病毒PLXSN 为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染骨髓间充质干细胞,在转染前后用RT-PCR检测骨髓间充质干细胞人端粒酶反转录酶基因的表达。60只雌性SD大鼠中随机取15只作为正常对照组,一次性注射生理盐水,余45只按45 mg/kg的剂量注射链脲霉素建立糖尿病模型后,随机分为3组,分别通过大鼠尾静脉注射移植人端粒酶反转录酶基因转染的骨髓间充质干细胞0.2 mL、骨髓间充质干细胞0.2 mL、生理盐水0.2 mL。 结果与结论：转染48 h后发现,骨髓间充质干细胞有人端粒酶反转录酶mRNA的表达,且重点集中于胞核内。移植后14 d,糖尿病组大鼠空腹血糖维持在较高水平,且高于正常对照组(P < 0.05);与糖尿病组相比,各移植组大鼠空腹血糖水平显著下降(P < 0.05);与骨髓间充质干细胞移植组相比,人端粒酶反转录酶基因转染的骨髓间充质干细胞移植组大鼠空腹血糖水平显著下降(P < 0.05),接近正常对照组水平(P > 0.05)。结果提示人端粒酶反转录酶表达的骨髓间充质干细胞移植能有效治疗大鼠糖尿病。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死***

背景：骨髓间充质干细胞可以分化为心肌细胞,促进血管再生,但在移植早期其自身分泌的细胞因子不足以维持良好的分化和再生。 目的：验证腺病毒介导的肝细胞生长因子和血管内皮生长因子双基因转染新西兰兔骨髓间充质干细胞移植对新西兰兔梗死心肌组织的修复重建和血管再生的影响。 方法：腺病毒介导肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染BrdU标记的新西兰兔骨髓间充质干细胞。取新西兰兔50只建立急性心肌梗死模型,4周后随机分为5组,分别于梗死心肌内注射：①骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子。②骨髓间充质干细胞/Ad. 肝细胞生长因子。③骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子。④骨髓间充质干细胞。⑤对照组注射等量无血清IMDM培养液。移植4周后观察移植细胞的分化和新生血管的形成,并通过超声多普勒检测心功能变化。 结果与结论：除对照组外,其余4组兔心功能都较移植前有明显改善(P < 0.05),其中移植双基因转染骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子组兔的心功能改善程度要明显高于其他3组。部分BrdU染色阳性的细胞可以分化成为内皮细胞,参与构成了梗死区域的新生毛细血管。与对照组比较,其余4组都有明显的血管新生(P < 0.05),而以骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子组最显著。提示肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染新西兰兔骨髓间充质干细胞移植于梗死心肌可以促进心肌再生和新生血管的形成,明显改善心功能。 关键词：基因转染;骨髓间充质干细胞;血管内皮生长因子;肝细胞生长因子;移植 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.029     

氯化钴模拟低氧环境下人脐带间充质干细胞增殖及基因蛋白的表达

背景：氯化钴可促进人脐带源性间充质干细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,并对其基因蛋白表达具有调控作用。 目的：研究氯化钴模拟的低氧环境对人脐带源性间充质干细胞的增殖及基因蛋白表达的影响,旨在建立高效的间充质干细胞体外培养扩增体系。 方法：采用组织块法提取人脐带间充质干细胞,氯化钴模拟化学低氧环境,在不同浓度(0,100,150,200,250 μmol/L)和不同时间(0,1,2,3,4 d)条件下,用流式细胞仪进行细胞表面相关抗原的鉴定及细胞周期检测;CCK-8法测定细胞增殖情况;RT-PCR测定缺氧诱导因子1α、诱导型一氧化氮合酶、基质细胞衍生因子1、白细胞介素6、转化生长因子β mRNA的表达;Western blot测定缺氧诱导因子1α蛋白的表达。 结果与结论：人脐带间充质干细胞表面相关抗原CD29、CD73、CD90、CD105表达阳性,CD31、CD14、CD34、CD45、CD11b、HLA-DR呈阴性表达,且不受氯化钴模拟的低氧环境影响。氯化钴模拟的化学性低氧可促进人脐带间充质干细胞增殖,且具有一定时间及浓度依赖性。RT-PCR检测到低氧组缺氧诱导因子1α、诱导型一氧化氮合酶、基质细胞衍生因子1 mRNA表达上调,而白细胞介素6及转化生长因子β mRNA表达下调,差异有显著性意义(P < 0.05)。低氧组中缺氧诱导因子1α蛋白表达增高。结果表明氯化钴模拟的体外低氧环境能促进人脐带间充质干细胞增殖,最佳浓度为200 μmol/L,但过高浓度(250 μmol/L)时反而抑制其增殖,机制可能与缺氧诱导因子1α基因与蛋白表达增加相关。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

Wnt信号途径促进脂肪间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞分化

背景：脂肪间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞定向分化的能力以及调节机制尚未完全阐明。 目的：观察脂肪间充质干细胞在体外分化为Ⅱ型肺泡上皮的能力以及Wnt途径对分化的调节作用。 方法：取大鼠脂肪组织,体外分离培养脂肪间充质干细胞并通过流式细胞术进行鉴定。实验分为对照组、小气道生长液组和Wnt3a组,对照组用普通DMEM培养基培养,小气道生长液组和Wnt3a组均使用小气道生长液培养,且Wnt3a组加入Wnt信号通路激动剂Wnt3a培养。诱导10 d后分别通过qRT-PCR和免疫荧光检测Ⅱ型肺泡上皮标志物肺表面活性蛋白B,C,D的表达,并于诱导5 d和10 d时通过Western blot检测磷酸化β-catenin和GSK-3β。 结果与结论：大鼠脂肪组织中可成功分离出纯度较高的脂肪间充质干细胞,可表达CD44和CD29,不表达CD11b和CD45;经小气道生长液诱导后,脂肪间充质干细胞中肺表面活性蛋白B,C,D蛋白和mRNA表达均上调(P < 0.01),表明其可被诱导为Ⅱ型上皮细胞;加入Wnt3a后,经诱导的脂肪间充质干细胞中肺表面活性蛋白B,C,D蛋白和mRNA表达均高于小气道生长液组(P < 0.01),且在诱导过程中磷酸化β-catenin表达随时间逐渐上调而GSK-3β表达逐渐下调(P < 0.01)。结果证实,Wnt信号通路在脂肪间充质干细胞诱导分化为Ⅱ肺泡上皮细胞过程中激活并促进干细胞的定向分化。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程      

骨髓间充质干细胞联合还原型谷胱甘肽对肺损伤小鼠的保护

背景：大量实验证明骨髓间充质干细胞治疗肺部疾病或改善肺损伤方面具有良好的效果,其治疗作用主要以减少炎性反应为主。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植联合还原型谷胱甘肽对博来霉素诱导的小鼠肺损伤的保护效果。 方法：取1只雄性NOD/SCID小鼠制备骨髓间充质干细胞,并观察其形态、表型。将64只雌性NOD/SCID小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、骨髓间充质干细胞组和骨髓间充质干细胞+还原型谷胱甘肽组,每组16只。对照组气管内注入生理盐水,模型组气管内注入博来霉素,骨髓间充质干细胞组气管内注入博来霉素2 h后尾静脉内注入培养的骨髓间充质干细胞,骨髓间充质干细胞+还原型谷胱甘肽组气管内注入博来霉素2 h后尾静脉注入培养的骨髓间充质干细胞与还原型谷胱甘肽,7 d后处死动物,按照试剂盒说明测定肺组织匀浆肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、丙二醛水平,同时留取肺组织进行病理检查,确认骨髓间充质干细胞联合还原型谷胱甘肽对肺损伤的保护效果。 结果与结论：雄性小鼠骨髓间充质干细胞呈上皮细胞样,其CD34、CD45阴性表达,CD10、CD13、CD44阳性表达。雌性小鼠中,与对照组相比,模型组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β及丙二醛水平上升,骨髓间充质干细胞组和骨髓间充质干细胞+还原型谷胱甘肽组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β及丙二醛水平下降(P < 0.05),骨髓间充质干细胞+还原型谷胱甘肽组较骨髓间充质干细胞组下降更明显(P < 0.05)。病理切片显示,骨髓间充质干细胞+还原型谷胱甘肽组肺损伤较模型组及骨髓间充质干细胞组轻。以上结果表明骨髓间充质干细胞联合还原型谷胱甘肽能更有效保护博来霉素诱导的肺损伤。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

不同生长因子诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型转化的机制

背景：关节软骨损伤后,自身修复能力十分有限,以往医学手段无法对其进行再生修复,利用干细胞治疗软骨损伤彻底扭转了这一局面。 目的：探讨不同生长因子诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型的转化机制。 方法：取第5代大鼠骨髓间充质干细胞,利用不同的生长因子及生长因子组合对大鼠骨髓间充质干细胞进行诱导,分别为TGF-β1组、TGF-β1+IGF-1组、BMP-2+IGF-1组、TGF-β1+BMP-2组、TGF-β1+IGF-1+BMP-2组、空白对照组。诱导后21 d进行阿尔新蓝染色和茜素红染色,RT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA表达。 结果与结论：阿新蓝染色观察可见细胞胞浆与间质存在异染情况,蛋白多糖呈绿色表达,经茜素红染色未见橘红色钙结节。初步推断,骨髓间充质干细胞已分化形成软骨细胞,不表达骨细胞表型。空白对照组Ⅱ型胶原mRNA表达呈阴性。与TGF-β1组比较,BMP-2+IGF-1组Ⅱ型胶原mRNA表达显著偏低,TGF-β1+BMP-2组和TGF-β1+IGF-1+BMP-2组Ⅱ型胶原mRNA表达显著偏高(P < 0.05);且TGF-β1+IGF-1+BMP-2组Ⅱ型胶原mRNA表达显著高于其他各组(P < 0.05)。结果表明,转化生长因子β1具备单独诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化的能力,采用胰岛素样生长因子1、骨形态发生蛋白2、转化生长因子β1在诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化时具有协同作用,可以发挥出最大的诱导软骨分化效应。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

大黄酸通过抑制miR-21而干预TGF-β1/Smad通路并减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化

目的:观察大黄酸(rhein,RH)对博莱霉素所致肺纤维化大鼠微小RNA-21(miR-21)表达以及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad通路的影响。方法:博莱霉素一次性气管内注射复制大鼠肺纤维化模型,随机分为RH低、中、高剂量组及模型(model)组;正常对照组大鼠气管内注射生理盐水。用药28 d后,HE染色观察各组大鼠肺组织形态学的变化;测定肺系数、肺组织羟脯氨酸含量;real-time PCR检测肺组织中miR-21和TGF-β1/Smad7m RNA表达;Western blot法分析TGF-β1和Smad7蛋白的表达。结果:与model组相比,RH用药组大鼠的肺泡炎及肺纤维化程度有明显降低,肺系数及肺组织羟脯氨酸含量也显著减少,肺组织中miR-21表达下降,TGF-β1的m RNA和蛋白表达水平也明显下降,Smad7的mRNA及蛋白表达水平明显增高(P0.05)。结论:RH抗肺纤维化的作用可能与抑制miR-21的表达,从而干预TGF-β1/Smad信号通路,减少细胞外基质沉积有关。     

Effect of IL-2-Bax, a novel interleukin-2-receptor-targeted chimeric protein, on bleomycin lung injury

The role of lymphocytes in the pathogenesis of lung fibrosis is not clear, but the weight of the evidence supports a pro-fibrotic effect for lymphocytes. The high-affinity interleukin-2 receptor (haIL-2R) is expressed on activated, but not quiescent, T lymphocytes. This selective expression of haIL-2R provides the basis for therapeutic strategies that target IL-2R-expressing cells. We hypothesized that elimination of activated lymphocytes by IL-2R-targeted chimeric proteins might ameliorate lung fibrosis. We investigated the effects of IL-2-Bax, a novel apoptosis-inducing IL-2R-targeted chimeric protein, on bleomycin-induced lung injury in mice. Treatment groups included (i) a single intratracheal instillation of bleomycin and twice-daily intraperitoneal injections of IL-2-Bax; (ii) intratracheal bleomycin and intraperitoneal IL-2-PE66(4Glu), an older-generation chimeric protein; (iii) intratracheal bleomycin/intraperitoneal PBS; (iv) intratracheal saline/intraperitoneal PBS. Lung injury was evaluated 14 days after intratracheal instillation by cell count in bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, semi-quantitative and quantitative histomorphological measurements and by biochemical analysis of lung hydroxyproline. Bleomycin induced a BAL lymphocytosis that was significantly attenuated by IL-2-Bax and IL-2-PE66(4Glu). However, morphometric parameters and lung hydroxyproline were unaffected by the chimeric proteins. These results show that IL-2-Bax reduces the lymphocytic infiltration of the lungs in response to bleomycin, but this effect is not accompanied by a decrease in lung fibrosis.     

转化生长因子β1刺激改良培养小鼠原代肝星状细胞的活化

背景：肝星状细胞是肝内分泌细胞外基质的关键细胞类型,因此在肝纤维化研究中很重要。 目的：实验改良了肝星状细胞原代培养方法,获得充足的细胞量,用转化生长因子β1刺激活化,研究致纤维化的相关因子表达情况。 方法：氯胺酮麻醉小鼠后采用门静脉穿刺原位灌注肝脏的方法分离肝脏,采用密度梯度离心获得肝星状细胞,利用形态学、免疫荧光染色等方法对原代肝星状细胞进行鉴定;将培养24 h肝星状细胞用质量浓度10 μg/L转化生长因子β1刺激48 h,同时设PBS组进行对比。 结果与结论：通过原位灌注肝脏并且酶消化的方法可以成功获得小鼠原代肝星状细胞,并且锥虫蓝染色活率为(97.2±0.8)%,免疫荧光染色纯度为(90.4±1.2)%,细胞计数总量约2.5×106/只。实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与PBS组比较,转化生长因子β1刺激组的肝星状细胞平滑肌肌动蛋白α、Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β受体1、转化生长因子β受体2 mRNA表达水平明显升高(P < 0.05)。结果证实,实验采用的改良的培养方法可更高效高质量的获得原代肝星状细胞,转化生长因子β1刺激可导致肝星状细胞活化,分泌致纤维化因子。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程      

肾间质纤维化模型大鼠转化生长因子β/Smads信号传导通路变化与温阳活血方的干预**

背景：转化生长因子β/Smad信号转导通路在肾纤维化的发生发展中起重要作用。 目的：探讨温阳活血方对肾纤维化转化生长因子β/Smads信号传导通路的影响。 方法：选用清洁级雄性SD大鼠28只,随机分为假手术组和模型组,模型组行左侧输尿管结扎术,单侧输尿管梗阻模型。假手术组大鼠打开腹腔后分离左侧输尿管但不结扎,随即关闭腹腔。造模后第2天开始分别给予温阳活血方、血管紧张素转化酶抑制剂或生理盐水灌胃,1次/d,各组均连续灌胃14 d。 结果与结论：温阳活血组转化生长因子β1、Smads3的表达显著低于模型组(P < 0.01), Smad7表达显著高于模型组       (P < 0.01),与福辛普利组相当。推测温阳活血方可能通过抑制转化生长因子β1、Smads3的表达,上调Smad7的表达,进而影响转化生长因子β/Smad信号传导通路,对肾间质纤维化起防治作用。     

吉非替尼抑制博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化

目的:观察吉非替尼对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的抑制作用。方法:将40只SPF级雌性BALB/c小鼠分为4组:对照组(气管滴入生理盐水)、单纯口服吉非替尼组(吉非替尼灌胃200 mg/kg)、纤维化组(气管滴入博莱霉素3 mg/kg)、纤维化吉非替尼干预组(气管滴入博莱霉素+吉非替尼灌胃20 mg/kg)。实验第14 d杀鼠取肺,左肺石蜡切片行HE染色与Masson染色,免疫组化检测总表皮生长因子受体(EGFR)及磷酸化EG-FR;取右肺检测羟脯氨酸含量。结果:纤维化吉非替尼干预组肺病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积及肺羟脯氨酸含量减少(P0.05),气道上皮及肺间质细胞磷酸化EGFR表达评分下降(P0.05)。单纯口服吉非替尼组小鼠气道上皮下未见明显胶原沉积,肺羟脯氨酸含量及磷酸化EGFR表达评分与对照组相比无显著差异(P0.05)。结论:吉非替尼灌胃能显著抑制博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化,大剂量(200 mg/kg)吉非替尼灌胃未引起明显肺纤维化。     

博来霉素致大鼠肺纤维化模型肺组织的动态病理变化及其发生机制

目的： 了解博来霉素（BLM）致大鼠肺纤维化模型肺组织的动态病理变化,探讨BLM致肺纤维化的作用机制。方法：60只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为正常对照组（N组）和肺纤维化模型组（B3、B7、B14、B28、B56组）,每组10只。除N组外,其余各组采用气管内注入BLM致大鼠肺纤维化模型, 分别于3、7、14、28、56 d处死各组大鼠,右肺行苏木精-依红（HE）、Masson胶原及天狼猩红染色,测定左肺羟脯氨酸（HYP）的含量。 RT-PCR法半定量测定转化生长因子-1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）mRNA在肺内的表达。免疫组化法观察TGF-β1、MMP-9及TIMP-1蛋白在大鼠肺组织的表达。结果：(1) 模型组大鼠肺组织HYP含量显著高于N组（P<0.05）,模型组大鼠肺组织肺泡炎症的程度也明显重于N组,B14、B28和B56组大鼠肺纤维化的程度明显重于N组,大鼠在灌注BLM后不同时点其肺组织有着不同的病理变化。 (2) TGF-β1、MMP-9及TIMP-1在正常组大鼠肺脏中即有表达,但表达较弱,灌注BLM后它们的表达均增强,不同时点它们在肺组织内的分布有不同的特点。结论：给予后不同时点大鼠肺组织有着不同的病理变化特点,TGF-β1、MMP-9和TIMP-1在BLM诱导的肺纤维化形成过程中起着重要的调节作用。     

Transforming growth factor-alpha deficiency reduces pulmonary fibrosis in transgenic mice

Despite evidence that implicates transforming growth factor-alpha (TGF-alpha) in the pathogenesis of acute lung injury, the contribution of TGF-alpha to the fibroproliferative response is unknown. To determine whether the development of pulmonary fibrosis depends on TGF-alpha, we induced lung injury with bleomycin in TGF-alpha null-mutation transgenic mice and wild-type mice. Lung hydroxyproline content was 1.3, 1.2, and 1.6 times greater in wild-genotype mice than in TGF-alpha-deficient animals at Days 10, 21, and 28, respectively, after a single intratracheal injection of bleomycin. At Days 7 and 10 after bleomycin treatment, lung total RNA content was 1.5 times greater in wild-genotype mice than in TGF-alpha-deficient animals. There was no significant difference between mice of the two genotypes in lung total DNA content or nuclear labeling indices after bleomycin administration. Wild-genotype mice had significantly higher lung fibrosis scores at Days 7 and 14 after bleomycin treatment than did TGF-alpha-deficient animals. There was no significant difference between TGF-alpha-deficient mice and wild-genotype mice in lung inflammation scores after bleomycin administration. To determine whether expression of other members of the epidermal growth factor (EGF) family is increased after bleomycin-induced injury, we measured lung EGF and heparin-binding- epidermal growth factor (HB-EGF) mRNA levels. Steady-state HB-EGF mRNA levels were 321% and 478% of control values in bleomycin-treated lungs at Days 7 and 10, respectively, but were not significantly different in TGF-alpha-deficient and in wild-genotype mice. EGF mRNA was not detected in normal or bleomycin-treated lungs of mice of either genotype. These results show that TGF-alpha contributes significantly to the pathogenesis of pulmonary fibrosis after bleomycin-induced injury, and that compensatory increases in other EGF family members do not occur in TGF-alpha-deficient mice.     

帕立骨化醇抑制糖尿病肾病大鼠肾小管间质纤维化

目的:探讨帕立骨化醇(paricalcitol,P)对糖尿病肾病(DN)肾小管间质纤维化的干预作用及可能机制。方法:大鼠禁食后,采用单次无菌腹腔注射链脲佐菌素建立DN模型。将DN大鼠随机分为:(1)帕立骨化醇干预组(P组):帕立骨化醇溶于丙二醇中,于造模成功后第2天以0.4μg/kg的剂量腹腔注射,每周3次;(2)糖尿病肾病组(D组):给予等体积的丙二醇腹腔注射。设置正常对照组(C组)。帕立骨化醇连续干预12周后,测血、尿生化指标;进行肾脏病理学检查;利用免疫组化及Western blotting检测肾组织TGF-β1、Wnt-4、β-catenin及Klotho蛋白的表达;并进行指标间的相关分析。结果:(1)与C组比较,D组大鼠SCr、BUN及24 h尿蛋白水平均升高,而P组均较D组降低(P0.05)。(2)与C组比较,D组大鼠肾小管间质纤维化面积增加,而P组较D组减小(P0.05)。(3)D组大鼠肾组织Klotho蛋白表达低于C组,而P组高于D组(P0.05);与C组比较,D组大鼠肾组织TGF-β1、Wnt-4及β-catenin蛋白表达增加,而P组表达均较D组减少(P0.05)。(4)Klotho与纤维化面积、TGF-β1、Wnt-4及β-catenin均呈负相关(P0.05)。结论:帕立骨化醇可抑制DN大鼠肾小管间质纤维化,其作用可能与增加肾组织Klotho表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,同时减少TGF-β1合成相关。     

结缔组织生长因子在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用探讨

目的:检测结缔组织生长因子(CTGF)在小鼠肺内的表达,并探讨其在肺纤维化中的意义。方法:通过向气管内滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型。用免疫组化染色方法检测不同时期肺组织中CTGF蛋白的表达;用RT PCR检测CTGFmRNA的表达;用酸水解法测定肺羟脯氨酸的含量。结果:在正常小鼠肺组织中,CTGF蛋白和其mRNA几乎不表达;而在模型组的肺组织中表达明显升高(P<0.01)。CTGF蛋白表达于支气管/细支气管上皮细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞和肺成纤维细胞,表达量与肺组织中羟脯氨酸的含量呈显著的正相关(r=0.92,P<0.001)。结论:CTGF与肺纤维化的形成关系密切,CTGF检测可作为评价肺纤维化发生、发展的一种灵敏的指标。     

FGF-21和Nrf2对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的影响

目的:研究成纤维细胞生长因子21(FGF-21)对博莱霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化炎症应答及氧化应激的影响,并探讨其抗肺纤维化的作用机制。方法:建立BLM诱导的小鼠肺纤维化的模型,40只小鼠随机分为对照组、BLM组及FGF-21(1、2及5 mg/kg)+BLM组。Western blot检测I型胶原蛋白(collagen I)、纤连蛋白(fibronectin)和核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达水平。DCFH-DA染色检测活性氧簇(ROS)的生成。ELISA用于测定肺组织炎症因子的表达。试剂盒检测各组小鼠肺组织中的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性和羟脯氨酸(HYP)含量。结果:FGF-21处理显著降低BLM诱导的肺组织炎症介质肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6的表达水平,减少ROS及MDA的含量,并增加抗氧化酶系统SOD和GPx的活性(P 0. 05)。同时,FGF-21下调BLM诱导的collagen I和fibronectin,并减少TGF-β1及HYP的含量。Nrf2沉默能够逆转FGF-21的抗纤维化作用。结论:FGF-21通过激活Nrf2信号抑制炎症应答进程,减轻氧化损伤,减少细胞外基质沉积,从而缓解BLM诱导的肺纤维化。这可能为肺间质纤维化治疗提供新的靶点。