血小板衍化生长因子BB对体外培养肌腱细胞增殖的影响

背景：细胞增殖和组织修复是一个复杂的过程,这期间有大量生长因子参与,并且这些因子在发挥本身功效时,还相互影响和制约,从而更好的促进细胞增殖和组织修复。 目的：了解不同质量浓度的血小板衍化生长因子BB对体外培养肌腱细胞增殖的影响。 方法：体外培养并鉴定大鼠肌腱细胞,根据培养液中血小板衍化生长因子BB质量浓度的不同分为对照组(0 μg/L)和实验组(1,5,10,20,50,100,150,200,250 μg/L),以MTT法检测细胞增殖能力。 另外检测对照组与20 μg/L血小板衍化生长因子BB组培养12-72 h时肌腱细胞的吸光度值,以观察其增殖量效与时间的关系。 结果与结论：分离培养的细胞Ⅰ型胶原染色呈阳性, Ⅲ型胶原染色呈阴性,证明为大鼠肌腱细胞。与对照组相比,除 250 μg/L 血小板衍化生长因子BB组外,其他各实验组细胞的吸光度值均升高(P < 0.05或P < 0.01);并且随血小板衍化生长因子BB质量浓度的增加,其吸光度值先逐渐增大,达一定浓度(20 μg/L)后,又逐渐减小。在20 μg/L血小板衍化生长因子BB组,肌腱细胞数量从培养12 h开始增加,至48 h达高峰,在培养24-72 h的吸光度值均显著高于对照组(P < 0.01)。结果可见血小板衍化生长因子BB在一定质量浓度和时间范围内具有促进肌腱细胞增殖的作用。     

血小板衍化生长因子β对体外人牙周膜细胞增殖分化的影响

背景：牙周支持组织破坏及附着丧失是导致失牙的最主要原因,细胞因子能促进牙周组织再生形成新附着。 目的：观察血小板衍化生长因子β在人牙周膜成纤维细胞增殖过程中的作用。 方法：体外利用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,对传代后细胞进行组织来源鉴定,通过波丝蛋白、角蛋白免疫组化染色进行定性分析,并加入生物因子血小板衍化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞进行增殖诱导,采用MTT法测定吸光度值。 结果与结论：加入质量浓度为10 μg/L的血小板衍化生长因子β后,细胞增殖加速,在加入生长因子血小板衍化生长因子β后,实验组的吸光度显著高于对照组,说明血小板衍化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞的增殖具有明显的促进作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙周膜细胞的作用

背景：碱性成纤维细胞生长因子是具有多功能的细胞生长因子,对来源于中胚层及神经外胚层的细胞有明显的促进增殖作用。 目的：观察碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙周膜细胞的作用。 方法：将第5代人牙周膜细胞,以1×108 L-1的浓度分别接种到96孔板,随机分成4组,分别加入含0,1,10,100 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子、体积分数为15%胎牛血清的α-MEM培养基进行培养。在第1,3,5,7天测定细胞的增殖情况,在第1,7天检测碱性磷酸酶活性。 结果与结论：4组之间人牙周膜细胞增殖情况的差异有显著性意义(F=6.586,P=0.024),随着碱性成纤维细胞生长因子质量浓度的增大,吸光度值均增大,其中100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子组的吸光度值均大于其他组(P < 0.05);碱性成纤维细胞生长因子各组的碱性磷酸酶活性均低于对照组(P=0.000),浓度越大,活性越低(P < 0.05)。结果显示碱性成纤维细胞生长因子在1-100 μg/L范围内质量浓度越高,促进人牙周膜细胞增殖和抑制碱性磷酸酶活性的作用越强。     

血小板衍化生长因子DD刺激大鼠肾成纤维细胞增殖及向肌成纤维细胞的转化

背景：血小板衍化生长因子可诱导肾小球系膜细胞及肾间质多种细胞增殖、迁移、转化及细胞外基质的过表达。目的：观察血小板衍化生长因子DD/血小板衍化生长因子βR信号通路激活对大鼠肾成纤维细胞细胞增殖及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。方法：体外培养正常大鼠肾成纤维细胞(NRK-49F),按照血小板衍化生长因子DD刺激质量浓度分为对照组、1 μg/L组、10 μg/L组、50 μg/L组、100 μg/L组,然后根据50 μg/L 血小板衍化生长因子DD刺激不同时间分为对照组、12 h组、24 h组、48 h组。CCK8检测不同血小板衍化生长因子DD质量浓度及血小板衍化生长因子DD作用不同时间对NRK-49F增殖的影响;Real-time PCR检测各质量浓度组血小板衍化生长因子βR、α-平滑肌肌动蛋白mRNA变化;Western blot检测各浓度组血小板衍化生长因子βR、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达变化。结果与结论：与对照组相比,血小板衍化生长因子DD可明显刺激NRK-49F细胞增殖,呈现剂量依赖性及时间依赖性。血小板衍化生长因子DD可剂量依赖性刺激其相应血小板衍化生长因子βR及α-平滑肌肌动蛋白在mRNA水平及蛋白水平上的表达增加。提示血小板衍化生长因子DD/血小板衍化生长因子βR信号通路的激活可显著刺激NRK-49F细胞的增殖及向肌成纤维细胞的转化。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

肝细胞生长因子在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用下对原代肝星状细胞增殖及凋亡的影响**☆

背景：活化的肝星状细胞是肝纤维化的关键因素,研究表明肝细胞生长因子能促进星状细胞凋亡,其具体机制可能与增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导星状细胞凋亡有关。 目的：观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用下,肝细胞生长因子对原代肝星状细胞增殖、凋亡的影响并初步探讨其可能机制。 方法：将SD大鼠原代肝星状细胞复苏、传代,细胞增殖明显时用于实验。实验分为4组：空白对照组为单纯肝星状细胞培养;肝细胞生长因子组：将100 μg/L肝细胞生长因子作用于肝星状细胞;TRAIL组：将2 mg/L的TRAIL作用于肝星状细胞;肝细胞生长因子+TRAIL组：将肝细胞生长因子预先刺激肝星状细胞24 h,再加入2 mg/L TRAIL。 结果与结论：MTT检测显示肝细胞生长因子及TRAIL分别在50~200 μg/L、0.5~1.5 mg/L各浓度下对肝星状细胞增殖抑制率无影响,TRAIL在2 mg/L作用下对肝星状细胞有抑制作用。流式细胞仪检测肝细胞生长因子+TRAIL组的中晚期凋亡率明显高于空白对照组及肝细胞生长因子组(P < 0.05);肝细胞生长因子+TRAIL组DR5荧光强度明显高于其他3组(P < 0.01)。提示在TRAIL作用下,肝细胞生长因子能促进肝星状细胞的凋亡、抑制其增殖。可能与肝细胞生长因子上调活化肝星状细胞表面DR5表达有关。      

rhHGF/cHGF体外抑制SMMC-7721人肝细胞癌细胞生长

目的:观察重组人肝细胞生长因子(rhHGF)和天然小牛肝细胞生长因子(cHGF)对SMMC-7721人肝细胞癌细胞株的生长效应。方法:传代后处于指数生长期的SMMC-7721细胞经过(HGF处理组)或不经(对照组)rhHGF/cHGF处理培养1-4d,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞数。并通过流式细胞仪对rhHGF处理细胞作细胞周期分析。结果:rhHGF(5-20μg/L)和cHGF(25-100mg/L)对SMMC-7721细胞增殖具有类似的剂量依赖性抑制作用。在实验浓度内,使用最高浓度时(rhHGF为20μg/L、cHGF为100mg/L)对细胞增殖抑制作用最强。使用不同浓度(5μg/L、10μg/L、20μg/L)rhHGF处理3d的培养细胞均有一半以上停留在G₀/G₁期。结论:rhHGF和cHGF对SMMC-7721人肝细胞癌细胞的体外生长都有强烈的抑制效应。这是由于受HGF的作用细胞生长易于终止在G₀/G₁期。     

川芎嗪可影响肿瘤坏死因子α刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达

背景：川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚。 目的：观察川芎嗪对肿瘤坏死因子α刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB及其相关基因产物白细胞介素6表达的影响。 方法：体外培养HSC-T6细胞株,取对数生长期的细胞用于实验。实验分为4组：对照组仅加入细胞;TNF-α组加入10 μg/L TNF-α;川芎嗪干预组先加入终浓度为10 μg/L的TNF-α作用30 min后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600, 1 000 mg/L;PDTC组先加入终浓度为10 μg/L的TNF-α作用30 min后,再加入终浓度18 μmol/L的核因子κB阻断剂PDTC。 结果与结论：MTT结果显示100,200,400,600,1 000 mg/L的川芎嗪均能抑制HSC-T6增殖,且呈剂量依赖性。免疫细胞化学染色及Western blot检测发现10 μg/L的肿瘤坏死因子α刺激后,HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达明显增多(P < 0.01或P < 0.05),200,400,600 mg/L的川芎嗪及18 μmol/L的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子α刺激后HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达(P < 0.01),且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显。相关性分析结果显示HSC-T6细胞结缔组织生长因子和核因子κB的表达呈正相关(r=0.980,P < 0.01)。说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达,抑制肝星状细胞的增殖。     

羧甲基壳聚糖温敏凝胶对人牙周膜细胞增殖活性的影响

目的通过观察羧甲基壳聚糖温敏凝胶作用于人牙周膜细胞的增殖活性来确定最佳作用浓度,为羧甲基壳聚糖温敏凝胶应用于牙周组织工程提供理论依据。方法人牙周膜细胞原代及传代培养。将灭菌后的羧甲基壳聚糖（CMCS）和甘油磷酸盐（GP）按一定比例配制成不同浓度梯度的羧CMCS温敏凝胶。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测其对人牙周膜细胞增殖的作用,测定加药后48h、72h、96h的吸光度值（OD值）,并进行统计学分析。结果加样培养48h时,15％浓度组0D值高于其它4个实验组及对照组;加样72h、96h后,5个实验组0D值均高于对照组;15％浓度组OD值高于它4个实验组;10％、20％浓度组OD值高于2％、50％浓度组;以上差异均有统计学意义。结论羧甲基壳聚糖温敏凝胶在2％～50％浓度范围内均可有效促进人牙周膜细胞的增殖,浓度为15％时促进效果最佳,越接近最佳浓度,促进增殖和分化的效果越明显。     

羧甲基壳聚糖温敏凝胶诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化北大核心

背景:壳聚糖生物材料能够诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,壳聚糖衍生物羧甲基壳聚糖是否也能够诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化尚不清楚。目的:探讨羧甲基壳聚糖温敏凝胶对骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响及其可能的机制。方法:取传至3代的大鼠骨髓间充质干细胞用不同质量浓度(0,50,100,150,200,500 g/L)羧甲基壳聚糖温敏凝胶浸提液培养,对照组不添加羧甲基壳聚糖温敏凝胶浸提液。MTT法检测不同质量浓度羧甲基壳聚糖温敏凝胶浸提液对骨髓间充质干细胞增殖的影响,Western blot检测150 g/L羧甲基壳聚糖温敏凝胶浸提液对骨髓间充质干细胞NSE、Nestin、GAFP、Vimentin、NF-M、MAP-2、β3-tubulin以及Notch通路信号分子Notch1,Jag1表达水平的影响。结果与结论:(1)羧甲基壳聚糖温敏凝胶浸提液促进骨髓间充质干细胞增殖,在质量浓度为150 g/L时,增殖率达到最高水平;(2)150 g/L羧甲基壳聚糖温敏凝胶组NSE、Nestin、GAFP、Vimentin、NF-M、MAP-2、β3-tubulin的蛋白表达水平明显高于对照组,表明羧甲基壳聚糖温敏凝胶能够诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化;(3)羧甲基壳聚糖温敏凝胶组Notch1和Jag1的蛋白表达水平明显低于对照组,表明其在诱导分化过程中能抑制Notch信号通路的活性。     

血管内皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子联合应用对自体游离脂肪颗粒移植成活的影响

背景：微血管的生成是脂肪细胞成活的关键。研究显示血管内皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子分别对血管生长有促进作用。 目的：观察联合应用血管内皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子对脂肪颗粒移植成活的影响。 方法：50只SD大鼠随机分为5组,将自体大网膜脂肪颗粒移植于背部,然后分别加入生理盐水,50 μg/L血管内皮生长因子,50 μg/L碱性成纤维细胞生长因子,50 μg/L血管内皮生长因子+50 μg/L碱性成纤维细胞生长因子,100 μg/L血管内皮生长因子+100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子。于移植15,30 d处死大鼠取出移植物。 结果与结论：100 μg/L血管内皮生长因子+100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子实验组移植物的残余质量和微血管密度明显高于其他组,差异有显著性意义(P < 0.05),其他各组间差异无显著性意义(P > 0.05)。结果可见血管内皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子联合应用可促进移植的脂肪颗粒成活。     

羧甲基壳聚糖温敏凝胶对人牙周膜细胞骨向分化的影响

目的将羧甲基壳聚糖温敏凝胶作用于人牙周膜细胞,通过观察细胞的碱性磷酸酶活性来确定促进其骨向分化的最佳浓度,为羧甲基壳聚糖温敏凝胶应用于牙周组织再生领域提供理论依据。方法人牙周膜细胞原代及传代培养。将灭菌后的羧甲基壳聚糖（CMCS）和甘油磷酸盐（GP）按一定比例配制成2％、10％、15％、20％、50％5个浓度梯度的羧CMCS温敏凝胶。采用动力学方法（ALP法）检测不同浓度的CMCS温敏凝胶浸提液对NIH3T3细胞骨向分化的影响,测定加药后24h、48h、72h的吸光度值（OD值）,并进行统计学分析。结果24h后,实验组间及与对照组相比较,差异无统计学意义（P〉O．05）。加样48h、72h后,15％浓度组OD值最高,其次分别为10％、2％浓度组,差异均有统计学意义（P〈O．05）;15％浓度组OD值与20％、50％浓度组相比较,差异无统计学意义（P〉O．05）。结论羧甲基壳聚糖温敏凝胶在2％～50％浓度范围内均可有效促进人牙周膜细胞的增殖和骨向分化,浓度为15％时促进效果最佳,越接近最佳浓度,促进细胞骨向分化的效果越明显。     

复合胰岛素样生长因子1壳聚糖胶原支架与人牙周膜细胞的增殖

背景：胰岛素样生长因子1具有促进成纤维细胞有丝分裂的作用,同时具有促进牙周细胞生长、分化及合成细胞外基质的作用。 目的：观察负载胰岛素样生长因子1的壳聚糖胶原支架对于人牙周膜细胞增殖的作用。 方法：将人牙周膜细胞分别接种于负载胰岛素样生长因子1的壳聚糖胶原支架与普通胶原支架上,于接种的1 h、24 h及1周检测重组人转化生长因子β1的释放,于第1,7,28天检测两组细胞的黏附和增殖情况。 结果与结论：负载胰岛素样生长因子1的壳聚糖胶原支架组第1,24小时和第1周的重组人转化生长因子β1释放率明显低于普通胶原支架组(P < 0.01)。两组接种第1天的细胞黏附和增殖检测比较差异无显著性意义  (P > 0.05),负载胰岛素样生长因子1的壳聚糖胶原支架组接种第7,28天的细胞黏附和增殖情况优于普通胶原支架组(P < 0.01)。表明负载胰岛素样生长因子1的壳聚糖胶原支架可显著促进人牙周膜细胞的增殖。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

重组人IL-10抑制TNF-α和PDGF-BB所致大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察重组人白介素10(rhIL-10)对SD大鼠血管平滑肌细胞及血管损伤后新生内膜增殖的影响。方法:培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态,应用流式细胞术测定细胞周期。利用大鼠血管损伤模型,观察rhIL-10对新生内膜增殖的影响。结果:与对照组相比,rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响(P>0.05)。rhIL-10可抑制在TNF-α和血小板源性生长因子分别刺激下的血管平滑肌细胞的生长(P<0.05)。流式细胞术测定的结果显示rhIL-10分别可以使TNF-α和PDGF-BB作用下的VSMC大部分处于G₀/G₁期,与对照组相比有明显差异(P<0.01)。大鼠颈动脉损伤后,rhIL-10治疗组的动脉血管新生内膜/中层面积比低于对照组约45%(P<0.01)。结论:抗炎细胞因子rhIL-10可抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

联合应用生长因子促骨髓间充质干细胞向韧带样细胞分化

背景：利用生长因子诱导骨髓间充质干细胞定向分化成韧带样细胞并促其分泌胶原蛋白是构建组织工程化韧带的关键。生长因子碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1在细胞定向分化过程中都起着十分重要的作用。 目的：采用转化生长因子β1和碱性成纤维细胞生长因子诱导体外培养的兔骨髓间质干细胞,转化为韧带样细胞,并研究此种韧带样细胞的生物特性。 方法：自幼兔四肢骨抽取骨髓分离纯化骨髓间充质干细胞并培养、增殖。采用10 μg/L转化生长因子β1和25 μg/L碱性成纤维细胞生长因子对骨髓间质干细胞进行诱导分化,分为空白组、转化生长因子β1组、碱性成纤维细胞生长因子组、转化生长因子β1+碱性成纤维细胞生长因子组。观察生长因子对骨髓间质干细胞生长、形态的影响,使用MTT法绘制细胞生长曲线,使用天狼腥红染色法定量对比骨髓间质干细胞分泌胶原蛋白量。把转化生长因子β1+碱性成纤维细胞生长因子联合诱导的骨髓间质干细胞使用BrdU荧光染色标记,然后移植到脱细胞真皮基质上,观察细胞增殖分布情况,并与空白组对照。 结果与结论：转化生长因子β1+碱性成纤维细胞生长因子联合组,细胞形态优于空白组及单一因子组,细胞增殖率、胶原分泌量也较高。脱细胞真皮基质上,转化生长因子β1+碱性成纤维细胞生长因子组细胞增殖分布情况明显优于空白组。提示联合使用生长因子转化生长因子β1和碱性成纤维细胞生长因子刺激兔骨髓间质干细胞,能够促使兔骨髓间质干细胞定向转化为韧带样细胞,对组织工程前交叉韧带的构建具有积极意义。     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人牙周韧带细胞的作用

背景：主要来源于因正畸或阻生拔除的健康牙培养而成的人牙周韧带细胞已成为牙周组织工程理想的种子细胞来源之一。 目的：了解采用重组腺相关病毒作为载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染对体外培养的人牙周韧带细胞增殖及细胞周期的影响。 方法：体外培养人牙周韧带细胞, 经重组腺相关病毒作为载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染,分为3组：对照组、空载病毒组、碱性成纤维细胞生长因子转染组。用RT-PCR,Western blot检测人牙周韧带细胞在转染前后碱性成纤维细胞生长因子基因和蛋白的表达。应用细胞生长曲线、四甲基偶氮唑蓝比色法观察细胞生长的优化作用;采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化。 结果与结论：对照组、空载病毒组未检测到碱性成纤维细胞生长因子mRNA和蛋白表达;碱性成纤维细胞生长因子转染组碱性成纤维细胞生长因子mRNA和蛋白水平均有表达,细胞的生长速度明显增快,细胞周期G₀/G₁期减少,S期细胞数增多。各组间比较差异有显著性意义(P < 0.05)。     

人牙周膜干细胞来源外泌体干预成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化

背景:人牙周膜干细胞具有较强的成骨分化能力,人牙周膜干细胞来源外泌体作为牙周膜干细胞分泌的主要成分,对成骨细胞MC3T3-E1增殖和成骨分化的影响尚不明确。目的:探讨人牙周膜干细胞来源外泌体对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响。方法:采用酶消化法分离及培养人牙周膜干细胞,超速离心法提取人牙周膜干细胞来源外泌体,通过透射电镜、粒径分析及Western blot方法对人牙周膜干细胞来源外泌体进行鉴定;CCK8法检测不同质量浓度人牙周膜干细胞来源外泌体对MC3T3-E1细胞增殖的影响,茜素红染色观察100 mg/L人牙周膜干细胞来源外泌体对MC3T3-E1细胞成骨矿化的影响,Western blot检测100 mg/L人牙周膜干细胞来源外泌体干预前后MC3T3-E1细胞内MEK和ERK的磷酸化水平。结果与结论:①透射电镜观察可见外泌体为脂质双分子层形成的囊泡结构,粒径检测显示外泌体直径分布在50-120 nm,集中在79.86 nm,Western blot检测结果显示提取的外泌体中含有CD81,CD63,TSG101的表达;②与对照组相比,人牙周膜干细胞来源外泌体对MC3T3-E1细胞的增殖具有促进作用,且作用呈剂量依赖性;③与对照组相比,人牙周膜干细胞来源外泌体组MC3T3-E1细胞能够形成更多的钙结节;与对照组相比,人牙周膜干细胞来源外泌体组MC3T3-E1细胞内p-MEK及p-ERK蛋白表达量升高;④结果表明,人牙周膜干细胞来源外泌体可以显著促进MC3T3-E1增殖和成骨分化,推测可能与其激活MEK/ERK信号通路有关。