全反式维甲酸对人肺癌细胞诱导凋亡的作用

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对肺癌细胞生长的影响及其凋亡作用.方法:应用MTT法检测ATRA对体外培养人肺癌细胞株细胞A549的抑制率,光镜及透射电镜、流式细胞仪等检测ATRA对A549细胞诱导凋亡的作用.结果: 不同浓度的ATRA对A549细胞的增殖均有抑制作用,且量效关系明显.但大剂量主要导致细胞死亡,以10-5mol*L-1的ATRA作用效果最好,经10-5mol*L-1 ATRA作用7d后,A549细胞增殖抑制率达到60%.光镜及透射电镜下可见细胞恶性表型向正常表型发生逆转,并可观察到凋亡小体.流式细胞仪分析结果显示,ATRA处理组细胞周期延迟,G1期比例明显升高,S、G2期比例下降.结论:ATRA可抑制肺癌细胞的增殖,并诱导癌细胞凋亡.     

雄黄抑制卵巢癌细胞株COC1增殖和诱导凋亡的体外研究

目的:研究雄黄对卵巢癌细胞株COC1的抑制增殖及诱导凋亡作用。方法:用不同浓度的雄黄溶液作用于人卵巢癌细胞株COC1,于不同时间点收集细胞,MTT法检测肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期的变化;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态学特征。结果:不同浓度雄黄溶液对COC1细胞有不同程度的生长抑制作用。其生长抑制率具有浓度和时间依赖性。并有明显周期特异性生长抑制作用。结论:雄黄溶液对于COC1细胞具有诱导凋亡、抑制增殖的作用,诱导肿瘤细胞发生G1期阻滞是雄黄抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

新城疫病毒7793株对人结肠癌细胞的杀伤作用

目的:研究新城疫病毒NDV7793对人结肠癌细胞的体外杀伤作用,为结肠癌的生物疗法奠定基础。方法:通过蚀斑实验纯化病毒并测定纯化的NDV7793株的感染力;用乳酸脱氢酶微量释放法测定纯化病毒对人LoVo和Ls174t结肠癌细胞株的杀伤作用并且通过血凝实验测定病毒在不同细胞中的增殖力。结果:NDV7793在感染细胞96h后出现直径约为0.5mm左右的空斑,PFU为1.25×107个/ml,为弱毒株;NDV7793对LoVo和Ls174t人结肠癌细胞株有明显的杀伤作用,而且杀伤作用的强度与病毒作用的时间和病毒的浓度呈正相关的关系;NDV7793可以在肠癌细胞中生长复制,该病毒株在人结肠癌细胞株LoVo的复制能力强于Ls174t。结论:NDV7793具有较强的选择性杀伤人结肠癌细胞的作用,且为弱毒株,这株病毒具备肿瘤生物治疗的潜能。     

氧化砷诱导结肠癌细胞凋亡及其分子机制

 目的　观察不同浓度As2O3对结肠癌Lovo、LS-174T细胞株生长的影响。方法　0.125～2μ mo1/L的As2O3与结肠癌细胞株Lovo、LS-174T共同孵育,观察不同浓度As2O3作用不同时间对结肠癌细胞的生长抑制作用、细胞形态学改变、DNA的变化。结果　1～2μ mol/L As2O3作用的结肠癌细胞呈凋亡特征性改变：细胞膜不发生破裂,细胞核出现核浓缩、核碎裂和凋亡小体形成;流式细胞仪检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞DNA抽提琼脂糖凝胶电泳呈凋亡特征性条带。结论　1～2μ mol/L As2O3可诱导结肠癌细胞凋亡,肿瘤细胞凋亡与Fas、Fas-L表达有关。     

自发及诱导性过氧化氢生成增强胃肠道肿瘤细胞与血管内皮粘附作用的研究

目的探讨胃肠道肿瘤细胞内活性氧生成在肿瘤进展中的作用.方法选择三种胃癌细胞系SGC-7901、MKN-45、MKN-28及三种结肠癌细胞系LS174T、LoVo、HCT-8,以过氧化物酶-荧光法检测癌细胞自发的过氧化氢生成量,以及癌细胞在佛波酯刺激后,诱导的过氧化氢生成,同时观察癌细胞与血管内皮粘附作用的变化特点.结果胃、结肠癌细胞不同程度地自发生成过氧化氢,平均浓度为0.9 nmol@L-1@10-6细胞,在佛波酯的作用下,这种生成被诱导性增加,平均浓度为2.1nmol@L-1@10-6细胞.常规培养的肿瘤细胞与内皮细胞均有粘附作用,当以过氧化氢酶作用后,SGC-7901、MKN-45的粘附力有明显的下降(P＜0.05);癌细胞在佛波酯作用后,SGC-7901、MKN-45、LS174T及LoVo在过氧化氢生成增加的同时,与内皮细胞的粘附力均比作用前为高,并可被过氧化氢酶所抑制.结论胃、结肠癌细胞组成性及诱导性过氧化氢生成可能有利于癌细胞转移的实现.     

新城疫病毒7793株对人结肠癌细胞的杀伤作用

目的：研究新城疫病毒NDV7793对人结肠癌细胞的体外杀伤作用,为结肠癌的生物疗法奠定基础。方法：通过蚀斑实验纯化病毒并测定纯化的NDV7793株的感染力;用乳酸脱氢酶微量释放法测定纯化病毒对人LoVo和Ls174t结肠癌细胞株的杀伤作用并且通过血凝实验测定病毒在不同细胞中的增殖力。结果：NDV7793在感染细胞96h后出现直径约为0.5mm左右的空斑,PFU为1.25×107个/ml,为弱毒株;NDV7793对LoVo和Ls174t人结肠癌细胞株有明显的杀伤作用,而且杀伤作用的强度与病毒作用的时间和病毒的浓度呈正相关的关系;NDV7793可以在肠癌细胞中生长复制,该病毒株在人结肠癌细胞株LoVo的复制能力强于Ls174t。结论：NDV7793具有较强的选择性杀伤人结肠癌细胞的作用,且为弱毒株,这株病毒具备肿瘤生物治疗的潜能。     

IFNγ联合全反式维甲酸对白血病细胞株NB4、MR2增殖和分化的影响

背景与目的:全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)的应用,使90%以上的急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)患者获得了完全缓解,但维甲酸耐药的快速发生成为ATRA治疗APL的一大缺憾。许多研究表明ATRA耐药与缺乏干扰素合成的某些蛋白质有一定的关系,本研究拟探讨干扰素联合ATRA作用抑制ATRA耐药APL细胞增殖和分化的可能性及其机制。方法:γ干扰素(interferonγ,IFNγ)、ATRA单独或联合作用于ATRA敏感细胞株(NB4)及ATRA耐药细胞株(MR2)后,采用MTT法检测细胞的增殖,用光镜观察和NBT还原实验检测细胞的分化,间接免疫荧光法观察早幼粒细胞白血病(promyelocyticleukemia,PML)蛋白表达的情况。结果:第8天时,IFNγ组、ATRA组和(IFNγ ATRA)组NB4细胞的生长抑制率依次为68.0%、85.0%和95.2%;MR2细胞的生长抑制率依次为24.1%、4.3%和51.5%。联合用药组NB4细胞、MR2细胞的生长抑制率明显高于单独用药组(P<0.05)。第3天时,IFNγ组、ATRA组和(IFNγ ATRA)组NB4细胞的NBT阳性率依次为19.3%、74.7%和93.3%,MR2细胞的NBT阳性率依次为16.8%、5.2%和31.5%,联合用药组NB4细胞、MR2细胞的NBT阳性率明显高于单独用药组(P<0.05)。IFNγ作用后,NB4细胞和MR2细胞核内的荧光颗粒较对照组明显增多。结论:IFNγ与ATRA具有协同作用,二者联合应用不仅能够增强ATRA对NB4细胞和MR2细胞的增殖抑制作用,而且能够部分诱导对ATRA耐药的MR2细胞发生分化。     

全反式维甲酸对结肠癌Lovo细胞VEGF及其受体表达的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对结肠癌Lovo细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体的影响,为其临床应用提供理论依据.方法 MTT法观察不同浓度ATRA对结肠癌Lovo细胞株生长的抑制作用以及对外源性VEGF刺激Lovo细胞生长的抑制作用.流式细胞仪分析ATRA作用后Lovo细胞周期变化以及细胞凋亡情况.ELISA法检测ATRA作用前后细胞培养上清液中VEGF含量变化.流式细胞仪测定Lovo细胞VEGF受体表达.结果 ATRA对Lovo细胞的生长具有抑制作用,呈时间与剂量依赖性.外源性VEGF165能刺激Lovo细胞生长,ATRA能够抑制VEGF165对细胞生长的刺激作用.随ATRA作用浓度增加,细胞周期G0/G1期细胞比例从(60.10±1.27)%增加至(84.80±1.40)%;细胞凋亡率增加至(39.79±3.96)%.ATRA能抑制Lovo细胞表达VEGF及VEGF受体,呈时间与剂量依赖性.结论 ATRA具有抑制结肠癌Lovo细胞株VEGF及其受体表达的作用,抑制肿瘤细胞的生长,可能机制为阻断VEGF自分泌及旁分泌,与促进肿瘤细胞凋亡及阻滞细胞周期有关.     

全反式维甲酸联合细胞因子对NB_4细胞增殖分化作用的体外研究

目的 :探讨新的药物协同 ATRA诱导早幼粒白血病细胞分化作用 ,降低临床 ATRA剂量 ,提高ATRA疗效。方法 :NB4细胞株为实验模型 ,采用细胞生物学研究方法 ,体外研究 IFNγ、TNF和 G- CSF各结合ATRA对 NB4细胞增殖和分化的作用。结果 :在诱导分化和抑制白血病克隆增殖中 ,IFNγ和 TNF具协同作用 ,以IFNγ作用最明显 ,在 ATRA浓度为 10 - 8mol/ L 时 ,比较各细胞因子联合 ATRA对 NB4细胞作用后 NBT的变化 ,发现联合 IFNγ组 NBT仍达 92 % ,高于其它各组 (P<0 .0 1) ,细胞周期变化 :联合 IFNγ作用后使 G0 / G1 期积聚最明显 ,由对照的 5 0 .5 %增至 86 .2 % ,半固体克隆增殖抑制实验显示 ,ATRA与 IFNγ联合用药组具明显抑制 NB4细胞克隆增殖活性作用。结论 :细胞因子 IFNγ与 ATRA联合具较强协同诱导 NB4细胞分化和抑制克隆增殖作用 ,这对临床联合 IFNγ诱导早幼粒白血病分化治疗提高 ATRA疗效有一定价值。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响.方法:采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达.结果:NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol/L的NDGA处理后G0/G1期细胞减少(P＜0.05)、S期细胞增多(P＜0.05),G2/M期细胞无明显变化;细胞经100μmol/L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调(P＜0.01)、bax蛋白与对照组相比表达上调(P＜0.01).结论:NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关.     

Doxycycline抑制大肠癌LS174T细胞侵袭的体外实验研究

目的：观察多西环素（Doxycycline）在体外对LS174T侵袭能力的抑制作用，并尝试探讨该抑制作用的分子机制。方法：1）M1Tr法观察Doxycycline对LS174T细胞粘附力的影响；Transwell小室法检测不同浓度Doxycycline对细胞侵袭和运动能力的抑制作用；2）RT—PCR法检测不同浓度Doxycycline作用48h后，MMP2的inRNA表达情况，同时明胶酶谱法检测MMP2分泌。结果：1）Doxycycline能够以剂量依赖方式抑制大肠癌LS174T细胞的体外运动和侵袭能力，但不影响其粘附能力；2）Doxycycline能够抑制LS174T细胞MMP2的mRNA表达。结论：Doxycycline在体外能够有效地抑制大肠癌LS174T细胞的侵袭、转移，其中MMP2是抑制大肠癌细胞LS174T的一个有效靶点。     

多西环素抑制大肠癌细胞侵袭的实验研究

目的观察多西环素（Doxycycline）对人大肠癌LS174T细胞体外侵袭的作用。方法以人工重组基底膜（Matrigel）体外侵袭实验观察药物对细胞体外侵袭能力的影响;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（明胶酶谱法）观察对金属蛋白酶分泌的影响。结果多西环素抑制LS174T大肠癌细胞体外侵袭,在多西环素浓度为5mg／L,10mg／L,20mg／L时,每100倍视野穿过的细胞数分别为（101．3±6．7）个,（83．7±5．7）个和（42．0±2．0）个,与对照组有显著差异,抑制率分别为17．9％、32．0％和65．9％,呈现剂量依赖性;在5mg／L的低浓度下多西环素即可抑制基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的分泌。结论多西环素能够抑制人大肠癌LS174T细胞的侵袭,在低于抗菌浓度下即可抑制基质金属蛋白酶-2的分泌,具有成为抗肿瘤侵袭药物的潜力。     

Introduction of antisense CD44S CDNA down-regulates expression of overall CD44 isoforms and inhibits tumor growth and metastasis in highly metastatic colon carcinoma cells

We created antisense CD44 transfectants using LS174T, a colon adenocarcinoma cell line and assessed the effects of overall CD44 down-regulation on colorectal tumor growth and metastasis. The expression of antisense CD44s (the standard form of CD44) cDNA markedly inhibited the overall expression of CD44 variants. In vitro studies showed a significantly reduced ability of the stable antisense transfectants (LS174TAS1 and LS174TAS2) to bind hyaluronate and osteopontin, ligands for CD44. These cells developed tumors more slowly than controls (parental LS174T and mock transfectants) when the cells were subcutaneously injected into SCID mice. However, in vitro proliferation assays demonstrated no significant difference between the antisense transfectants and the controls on a hyaluronate-coated surface, suggesting the participation of ligands other than hyaluronate in tumor growth in vivo. Intrasplenic injection of parental LS174T cells produced colonies in the liver in 10 of 11 mice, whereas mice injected with the antisense transfectants were completely free of metastasis. In peritoneal dissemination, the weight of nodules and amount of ascites were significantly reduced in LS174TAS1 and AS2 compared with the controls. In vitro adhesion assays between the transfectants or controls and human peritoneal mesothelial cells revealed that the binding of LS174T cells to mesothelial cells was partly mediated by CD44-hyaluronate interaction. These data suggest that CD44-hyaluronate interaction plays a crucial role in peritoneal dissemination in colorectal carcinoma. The results of our study demonstrate the possible application of antisense CD44s to the treatment of colorectal carcinoma.     

全反式维甲酸对结肠癌细胞XIAP相关因子1表达的影响

目的了解全反式维甲酸对结肠癌lovo细胞XIAP相关因子1(XAF1)表达及细胞增殖的影响。方法以不同浓度的ATRA刺激lovo细胞,RT-PCR检测XAF1的mR-NA水平变化,Westernblot分析XAF1蛋白水平的表达;MTT法检测ATRA对lovo细胞生长抑制率。构建含有XAF1启动子序列荧火虫荧光素酶报告质粒,分析ATRA作用对XAF1启动子活性的影响。结果经ATRA作用,lovo细胞mRNA和蛋白的表达水平上调,细胞生长受到抑制。上述效应均具有药物浓度依赖性。报告基因分析结果显示,ATRA使含有XAF1启动子序列荧火虫荧光素酶报告质粒的虫荧光素酶的活性增加。结论ATRA通过促进启动子转录活性上调XAF1的mRNA和蛋白表达水平,并抑制结肠癌细胞的生长。     

右旋柠烯对人结肠癌LS174T细胞p-ERK和p-Akts表达的影响

目的研究右旋柠烯(D-limonene)对人结肠癌细胞(LS174T)中信号传导分子ERK1/2、Akt及其磷酸化蛋白(p-ERK和p-Akts蛋白)表达的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测右旋柠烯对LS174T细胞增殖的抑制作用;采用Western blot方法检测不同浓度右旋柠烯对LS174T细胞中ERK1/2、Akt及其磷酸化蛋白表达情况的影响。结果 右旋柠烯作用LS174T细胞48h后,呈剂量依赖性抑制细胞增殖;Western blot结果显示右旋柠烯对细胞中ERK1/2、Akt蛋白的表达没有明显影响,但显著下调p-ERK1/2蛋白和p-Akts的表达。结论 右旋柠烯抑制LS174T细胞增殖可能与其抑制p-ERK1/2和p-Akts表达有关。     

人大肠癌细胞蛋白质组中免疫球蛋白重链可变区和B7-1的表达

目的 分析人大肠癌LS174T及SW480细胞株的蛋白质表达谱。方法 通过固相pH梯度双向凝胶电泳分离人大肠癌LS174T及SW480细胞总蛋白质,经基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）获得肽质量指纹图（PMFs）,通过Mascot软件查询蛋白质数据库进行蛋白质的初步鉴定。结果 获得了分辨率较高的人大肠癌LS174T及SW480细胞的双向电泳图谱,初步鉴定了一批蛋白质,包括免疫球蛋白重链可变区（IgVH）和共刺激分子B7-1,并通过电喷雾离子阱串联质谱（ESI-MS／MS）分析和免疫细胞化学染色得到进一步证实。结论 在人大肠癌LS174T和SW480细胞中存在IgVH和B7-1的表达,这一发现有助于进一步阐明肿瘤的免疫逃逸机制。     

Transglutaminase activity in human colorectal carcinomas of differing metastatic potential.

Transglutaminase (TGA) activity in four human colorectal carcinoma cell lines of differing metastatic potential, and the effects of mild proteolysis on this activity, was investigated. Rank order of metastatic activity measured in nude mice (intrasplenic injection) was found to be LS174T greater than SW620 greater than WiDr greater than SW480. Rank orders of TGA activity were SW480 greater than WiDr greater than SW620 greater than LS174T. Proteolysis of cell lysates increased LS174T TGA activity 42-fold, SW620 2-fold without affecting WiDr or SW480 activity. Hence a negative association exists between metastatic potential and TGA activity in human colorectal carcinoma cells. Furthermore, a positive association exists between proteolytic activation of TGA and metastatic potential.     

5’-脱氧氟尿苷联合干扰素对转染TP基因结肠癌细胞株裸鼠实验模型的影响

背景与目的：人结直肠癌细胞基本无胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)表达。本实验主要探讨人结肠癌细胞株LS174T转染TP基因后,在裸鼠肿瘤组织中对抗癌药物5’-脱氧氟尿苷(5’-deoxy-5-fluorouridine,5’-DFUR)、氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)和干扰素-α2a(interferon-α2a,INF-α2a)干预效果的影响。方法：以慢病毒为载体转染TP基因至结肠癌细胞株LS174T,得到稳定传代的高TP表达株。将96只BALB/c裸鼠分成2组,分别应用野生型及转染TP基因后的LS174T细胞株接种裸鼠背部皮下,制成结肠癌TP低、高表达模型。每组再随机分为6组,分别应用0.9%NaCl溶液、INF-α2a、5-FU、5-FU+INF-α2a、5’-DFUR和5’-DFUR+INF-α2a干预5 d,2周后处死裸鼠,分离肿瘤称重后,分别应用鼠抗人CD34、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和抗PD-ECGF单克隆抗体进行免疫组织化学染色。判定是否有TP表达及对微血管进行计数。结果：在野生型LS174T裸鼠荷瘤模型中,使用抗肿瘤药物的3~6组肿瘤质量与对照组相比均明显降低,抑癌率分别为48%、27%、48%和57%,差异有统计学意义(P<0.05)。其中5’-DFUR组(48%)与5’-DFUR+INF-α2a组(57%)、5-FU+INF-α2a组与5’-DFUR+INF-α2a组(27%与57%)相比,抑癌率差异有统计学意义(P<0.05)。在LS174T-TP细胞株裸鼠模型中,5’-DFUR组和5’-DFUR+INF-α2a组抑癌率分别为27%和48%,而使用5-FU的两组未显示出良好的抗肿瘤效果(7%和3%)。免疫组织化学染色显示,野生型LS174T接种形成的肿瘤组织中TP表达阴性,微血管数目较少,而转染TP基因后,肿瘤组织中TP表达明显上升,微血管密度明显增多(P<0.05)。结论：结肠癌细胞株LS174T转染TP基因后,在裸鼠实验肿瘤模型中,TP表达明显增加,使细胞内激活抗癌药物5’-DFUR的抗癌作用明显增强,联合应用INF-α2a能进一步增强这种抗癌作用。而转染TP基因或联合应用INF-α2a对常规抗癌药物5-FU的抗癌效果无明显影响。     

Growth factor requirements of human colorectal tumour cells: Relations to cellular differentiation

Human colorectal tumour lines that exhibit different degrees of differentiation were studied to define their growth requirements. The poorly differentiated cell lines SW620, SW480, SW48 and SW837 proliferated in Dulbecco's modified Eagle's medium without exogenously added growth factors. In contrast, the moderately differentiated cell lines SW1222, HT29, PC/JW and LS174T proliferated only in medium supplemented with growth factor. SW1222 and HT29 cells required transferrin for growth, which was improved by other growth-promoting factors including epidermal growth factor (SW1222) and sodium selenite (HT29). PC/JW and LS174T required both insulin and transferrin for optimal growth. The tumour cell lines could be passaged continuously in serum-free medium supplemented with growth factor and in some cases they grew better than in serum-supplemented medium. The serum-free growth conditions should prove useful for studies on differentiation in colorectal cell lines and their interactions with growth factors.     

Suppression of human hepatoma growth in vivo by a monoclonal antibody against a Mr 45,000 protein

The monoclonal antibody T2-2 was originally raised against the colorectal carcinoma cell line LS174T and was found to bind to several other human carcinomas, including hepatoma and ovarian cancer. The goal of this study was to investigate the antitumor activity of mAb T2-2 in human tumor models and further characterize the antigen. mAb T2-2 inhibited the growth of human hepatocellular cell line SMMC 7721 in vivo and in vitro. Western blot analysis revealed that this mAb recognizes an unique Mr 45,000 band from tissue extracts of human hepatocellular carcinoma (HCC), which localizes to the cell periphery. In vitro cell assays indicate that T2-2 decreases cell adhesion to laminin, implying the functional role of T2-2 antigen in cell-matrix interaction and cell migration.