葡聚糖硫酸钠致溃疡性结肠炎小鼠模型的建立

目的 建立小鼠溃疡性结肠炎模型。方法 给小鼠自由饮用5%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液7d后，改为蒸馏水自由饮用10d，如此进行4个循环，每天观察症状。在第1个循环和第4个循环后剖杀小鼠，取出整段结肠行实体显微镜观察及切片组织学研究。结果 所观察的症状，实体显微镜像，组织学病理改变均与人类溃疡性结肠炎类似。结论 此模型制作方法简便，重复性良好，可应用于多种实验研究。     

葡聚糖硫酸钠致溃疡性结肠炎小鼠模型的建立

目的　建立小鼠溃疡性结肠炎模型。方法　给小鼠自由饮用5％葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液7d后,改为蒸馏水自由饮用10d,如此进行4个循环,每天观察症状。在第1个循环和第4个循环后剖杀小鼠,取出整段结肠行实体显微镜观察及切片组织学研究。结果　所观察的症状、实体显微镜像、组织学病理改变均与人类溃疡性结肠炎类似。结论　此模型制作方法简便,重复性良好,可应用于多种实验研究。     

葡聚糖硫酸钠致溃疡性结肠炎动物模型研究进展

溃疡性结肠炎(UC),病变主要以溃疡为主且局限于结肠黏膜,临床表现多为腹痛腹泻和黏液血便的炎性肠病(IBD).目前,葡聚糖硫酸钠结肠炎模型作为一种较普遍、更类似于人类溃疡性结肠炎表现的模型之一,受到很多研究者的推崇.采用葡聚糖硫酸钠(DSS)造模方法相对而言操作较为方便,损伤也易于复制,而且其临床表现及病理特征更加接近人类溃疡性结肠炎实际表现,并且可以通过选择恰当的给药浓度、时间及药品相对分子量或含硫量,甚至动物种系来实现可控制的模型制造.     

葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠NF-kB活性及其对ICAM-1表达的调控

目的探讨葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎小鼠NF-kB活性、ICAM-1蛋白表达变化及NF-kB对其调控作用。方法取健康雄性BABC／L小鼠20只，采用5％DSS溶液结肠炎小鼠模型和0．9％盐水溶液州S）为正常对照组。免疫组化方法检测细胞间粘附分子（ICAM-1）和NF-kBp65表达水平，凝胶滞留迁移试验（EMSA）测定NF-kB的DNA结合活性。结果DSS组较NS组NF-kBDNA结合活性显著升高，具统计学意义（P〈0．01），NF-kBp65成份主要表达于粘膜下层的炎症细胞及部分血管内皮细胞，出现核移位现象，正常对照组仅少数细胞表达p65，ICAM-1。相关性分析提示NF-kB活性与ICAM-1表达呈正相关性。结论DSS诱导结肠炎小鼠结肠粘膜的NF-KB明显活化，可能上调了ICAM-1基因的表达，参与肠道炎症的发生发展。     

肠炎清治疗葡聚糖硫酸钠结肠炎的实验研究

[目的]验证具有清热燥湿、健脾益气、理气活血作用的中药制剂肠炎清(主要由黄连、黄芪、蒲黄、白芨、元胡等中药组成)对溃疡性结肠炎的治疗效果并探讨其疗效机制。[方法]以葡聚糖硫酸钠(DSS)饮水法复制结肠炎小鼠模型，观察该药对结肠炎小鼠疾病活动指数(DAI)和肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性的影响。[结果]肠炎清可降低DAI和MPO活性，与柳氮磺胺吡啶(SASP)疗效相当。[结论]肠炎清对DSS结肠炎有较好的治疗效果，降低MPO的活性可能是其疗效机制之一。     

葡聚糖硫酸钠致溃疡性结肠炎大鼠模型的建立

目的: 建立大鼠溃疡性结肠炎(UC)模型. 方法: 给SD大鼠饮用40 g/L DSS溶液7 d,然后改正常饮水10 d. 每日进行疾病活动指数(DAI)评分. 于实验8,13和18 d分别处死4～5只,行组织学大体评分、组织病理评分及透射电镜观察. 计算盲肠、回盲部至肛门段结肠、胸腺、脾脏质量指数并测直肠髓过氧化物酶(MPO)含量. 结果:大鼠饮用40 g/L的DSS 7 d均出现腹泻、隐血试验阳性. 可见炎症主要累及黏膜和黏膜下层,部分表面上皮脱落,上皮内杯状细胞减少,隐窝破坏,浸润的炎症细胞以中性粒细胞为主. 伴有MPO升高[(8.84±3.67) nkat/g vs (127.19±27.84) nkat/g, P<0.01]及脾脏增大[(3.45±1.00) mg/g vs (5.07±1.31) mg/g, P<0.05]. 停药后症状及结肠病变逐渐恢复, MPO活性显著降低(P<0.05). 结论:此模型病理改变类似人UC.     

DPP-4抑制剂治疗小鼠溃疡性结肠炎的疗效

目的 探讨DPP-4抑制剂单独及联合SASP治疗溃疡性结肠炎(UC)小鼠的疗效。方法 30只雄性BALB/c小鼠随机平均分为5组：空白对照组、模型对照组、DPP-4抑制剂治疗组、SASP治疗组、DPP-4抑制剂和SASP联合治疗组(联合治疗组)。除空白对照组外,其他各组均用5%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠UC模型,空白对照组和模型对照组给予0.5%羧甲基纤维素(CMC)灌胃,DPP-4抑制剂治疗组、SASP治疗组和联合治疗组分别给予西格列汀、SASP、西格列汀和SASP两者联合灌胃治疗,1次/d,连续6d。每天观察小鼠的临床症状,称量小鼠体质量,观察大便形状,检测大便隐血,计算疾病活动指数(DAI)。6d后处死小鼠,分离结肠组织,测量结肠长度,进行病理组织学观察,采用ELISA法检测小鼠血清胰高血糖素样肽-2(GLP-2)水平。结果 与模型对照组相比,DPP-4抑制剂治疗组、SASP治疗组和联合治疗组均明显改善UC小鼠临床症状, DAI评分显著降低(P<0.05),结肠长度明显增加(P<0.05),结肠病理损伤明显缓解;DPP-4抑制剂治疗组和联合治疗组血清GLP-2水平显著升高(P<0.01)。与DPP-4抑制剂治疗组比较,联合治疗组小鼠DAI评分显著降低(P<0.05),结肠长度明显增加(P<0.05)。结论 DPP-4抑制剂对UC小鼠有显著的治疗作用,与SASP联合用药可达到协同的效果。     

四神丸改善TNBS及DSS诱导小鼠实验性结肠炎的研究

目的 观察四神丸对三硝基苯磺酸(TNBS)和低分子量硫酸葡聚糖钠(DSS)诱导的小鼠实验性结肠炎的防治作用.方法 小鼠麻醉后直肠内灌注含1.5 mg TNBS的50％乙醇溶液制备TNBS结肠炎模型;小鼠自由饮用含3％ DSS的蒸馏水5d制备DSS结肠炎模型.各模型均在造模第2天开始灌胃给四神丸,连续8d.观察小鼠的一般状态和结肠炎疾病活动度指数(DAI)评分、结肠组织学及结肠中髓过氧物酶(MPO)变化.结果 TNBS及DSS模型小鼠DAI评分及结肠组织中MPO活性显著高于对照组,模型小鼠可见结肠黏膜上皮脱落、大量炎细胞浸润及腺管扭曲等.经四神丸治疗后能显著改善TNBS及DSS结肠炎小鼠的一般状况及DAI评分,并能改善结肠的组织学损伤、减轻炎细胞的浸润.结论 四神丸对TNBS及DSS所诱导的小鼠结肠炎均有显著的改善作用.     

结肠炎小鼠模型的病理机制研究

目的 研究右旋葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate,DSS）诱导小鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）模型引发的病理、免疫机制,以期为UC的治疗提供新的线索。方法 将24只8周大的C57BL/6J清洁级子鼠分为DSS水溶液喂食1、3、5 d组以及无DSS水溶液对照组4组,每组6只。免疫组织化学检测小鼠结肠病理特征;应用实时定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）验证免疫因子在小鼠UC组织的表达状态。结果 随着小鼠饮用DSS水溶液时间的增加,其体质量逐渐下降,结肠长度逐渐缩短,脾增大。小鼠肠黏膜组织HE染色结果显示,DSS水溶液喂食5 d组的小鼠肠黏膜有肠溃疡的症状,髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）染色可观察到中性粒细胞广泛浸润;此外,与对照组相比,炎性反应因子及炎性反应相关因子包括肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素-1α（interleukin-1α,IL-1α）、IL-1β、IL-6、趋化因子配体-1［chemokine （C-X-C motif） ligand 1,CXCL-1］、CXCL-2和环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）表达水平显著增高。结论 DSS水溶液喂食5 d可形成UC模型,并伴随炎性反应因子、趋化因子大量浸润,提示UC的发生发展与炎性反应因子浸润密切相关,可能通过抑制其免疫因子的释放而控制UC疾病的进展。     

粪菌移植通过改善肠黏膜屏障功能治疗硫酸葡聚糖诱导的小鼠结肠炎

目的 研究粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)对硫酸葡聚糖(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用.方法 将92只7周龄雌性C57 BL/6小鼠,按照随机数字表法分为4组,每组23只:对照组正常饮水,模型组饮用2％ DSS7d,在第8天时换成不含DSS的灭菌纯净水饮用7d,FMT预防组在饮用DSS建模的同时给予FMT灌胃处理,FMT治疗组在饮用7dDSS模型建成后进行FMT灌胃处理7d.记录各组小鼠体质量变化和疾病活动度,并收集每日粪便进行肠道菌群分析.在第7、14天末分别处死10只小鼠,采集血液标本进行TNF-α和D-乳酸测量,留取结肠组织分别进行HE染色、透射电镜观察,免疫组化染色检测紧密连接相关蛋白ZO-1和Occludin的表达.结果 FMT治疗组小鼠体质量、疾病活动程度和结肠长度较DSS诱导结肠炎小鼠模型组显著改善(P＜0.01).FMT治疗组血清D-乳酸和TNF-α水平较模型组明显降低(P ＜0.05,0.01).透射电镜可见FMT治疗组结肠上皮的损害及细胞间紧密连接结构和上皮完整性较模型组显著改善.FMT治疗及预防处理后ZO-1和Occludin的表达较模型组明显增高(P＜0.C5,P＜0.0I).FMT预防及治疗都能显著改善DSS引起的肠道菌群改变,促进乳杆菌属增殖而抑制拟杆菌属和颤螺菌属的生长.结论 FMT预防及治疗都能显著改善硫酸葡聚糖引起的肠道菌群改变,促进乳杆菌属增殖而抑制拟杆菌属和颤螺菌属的生长.     

Toll样受体4基因-299位点A/G多态性与溃疡性结肠炎及大肠腺癌的关系

目的:研究Toll样受体4(ToLL like receptor 4,TLR4)基因-299位点A/G多态性在中国浙江汉族人群中的分布,探讨其与溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)及大肠腺癌的相关性,旨在阐明疾病的遗传易感性。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RELP)方法,检测68例UC患者,114例大肠腺癌(46例结肠癌,68例直肠癌)与152例正常对照TLR4基因Asp299Gly基因型及等位基因分布,并分析该基因多态性与UC及大肠腺癌之间的关系。结果:(1)在UC组、大肠腺癌组和正常对照组中均未发现TLR4基因Asp299Gly位点的突变,其基因型频率及等位基因频率及携带者频率总体分布无显著性差异。(2)中国汉族人与日本人均未发现TLR4基因Asp299Gly位点的突变,且等位基因频率及基因型频率的分布无明显差异,而与荷兰人(8.93%)、德国人(5.6%)、英国人(6.23%)的突变频率相比存在明显差异性。亚洲人该等位基因频率及基因型频率分布较欧洲白种人显著减低。结论:TLR4基因Asp299Gly多态性与中国汉族人UC及大肠腺癌的遗传易感性无关,该等位基因频率及基因型频率在不同种族人群中的分布有显著性差异。     

Protective effect of total alkaloids of Sophora alopecuroides on dextran sulfate sodium-induced chronic colitis

Objective  

To investigate the effect of total alkaloids of Sophora alopecuroides (TASA) on dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis in mice.     

基于TLR4-Ig融合蛋白探究TLR4信号在溃疡性结肠炎中的关键作用

目的 探究Toll样受体4（TLR4）表达水平与溃疡性结肠炎（UC）发生发展的关系,利用TLR4-Ig融合蛋白阻断TLR4信号,验证TLR4信号对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠急性结肠炎的保护作用。 方法 收集UC患者结肠活检组织样本（n=63）,采用盲法,根据组织病理学评分和炎症程度分为五组,利用免疫组织化学法检测各组样本TLR4表达情况;利用FreeStyle 293表达系统制备TLR4-Ig融合蛋白并纯化。体外培养健康者来源的外周血单核细胞（PBMCs）,在培养基中添加100ug/ml LPS刺激或加入100ug/ml TLR4-Ig干预,检测10种炎性细胞因子分泌水平;动物实验方面,第一阶段设置五组：空白对照组、生理盐水组、IgG组、20mg/kg TLR4-Ig组、40mg/kg TLR4-Ig组;第二阶段设置六组：空白对照组、生理盐水组、IgG组、抗生素+IgG组、40mg/kg TLR4-Ig组、抗生素+40mg/kg TLR4-Ig组,抗生素处理组均于实验前4周至实验结束期间饮用“抗生素鸡尾酒”;除空白对照组外,各组小鼠均饮3%DSS溶液,两阶段实验均于第1、3、5、7天腹腔注射相关药物,每天记录小鼠体重变化、疾病活动指数（DAI）、生存率;分别于第9天和第7天处死所有小鼠,测量结肠长度,进行结肠的组织病理学评估。 结果 UC患者结肠组织TLR4表达水平与病变程度正相关;TLR4-Ig融合蛋白能够以高亲和力结合TLR4配体,阻断TLR4信号介导的PBMCs活化和炎性细胞因子的分泌;TLR4-Ig融合蛋白对TLR4信号的阻断加重了DSS诱导的小鼠急性结肠炎,给予小鼠抗生素处理对TLR4信号缺失造成的损伤加重有缓解作用。 结论 TLR4信号与肠道菌群的信号交流是UC发生早期的重要保护机制,TLR4信号的缺失不利于缓解急性炎症和修复肠黏膜。     

Th1／Th2细胞炎性因子在大鼠溃疡性结肠炎治疗模型中的表达

目的：探讨Th1／Th2细胞因子IL-2,干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）,IL-4和IL-10在葡聚糖酸钠（dextran sulfate sodium,DSS）诱导的大鼠实验性溃疡性结肠炎治疗模型中的表达。方法：雄性SpragueDawley大鼠40只,随机均分为正常组、模型组、柳氮磺嘧啶治疗组（SASV组）、结肠宁治疗组（结肠宁组）,每组各10只。对各组大鼠进行疾病活动指数评分（diseas eactivity index,DAI）及结直肠组织损伤学评分,运用酶联免疫吸附测定（enzyme-1inked immunosorbent assay,ELISA）及real．timePcR检测血清及肠黏膜组织中细胞因子IL-2,IFN-γ,IL-4和IL--10含量水平。结果：与模型组比较,结肠宁组大鼠的DAI及结直肠组织损伤学评分均明显下降（均P〈0．05）;但与SASP组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。血清和组织中IL-2表达在治疗前后的各组间比较,差异均无统计学意义（均P〉0．05）。SASP组和结肠宁组血清及肠黏膜组织IFN-γ水平较模型组下调,血清中差异均有统计学意义（均P〈0．05）,肠黏膜组织中仅结肠宁组差异均有统计学意义（均P〈0．05）。SASP组和结肠宁组血清IL-4水平较模型组均上调,但只有结肠宁组差异有统计学意义（P〈0．05）;而肠黏膜组织中差异均无统计学意义（均P〉0．05）。SASP组和结肠宁组血清及肠黏膜组织IL-10水平较模型组上升,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。SASP组和结肠宁组血清及肠黏膜组织中细胞因子IL-2,IFN-γ,IL-4和IL-10含量水平比较,差异均无统计学意义（均P〉0．0S）。结论：DSS造模破坏Thl／Th2在结肠中的表达平衡。结肠宁能改善DSS所致的实验性溃结大鼠模型炎症,通过上调血清和肠黏膜组织IL-10水平、下调IFN-γ水平可保持Th1／Th2细胞间平衡,从而改善免疫功能。