Nrf2基因敲除对小鼠蛛网膜下腔出血后小胶质细胞／巨噬细胞活化的影响

目的：脑内小胶质细胞／巨噬细胞（ microglia／macrophage, M／M）在蛛网膜下腔出血（ subarachnoid hemor-rhage, SAH）脑组织损伤和修复中具有重要作用。文中研究小鼠 SAH后 M／M活化及Nrf2基因敲除对M／M活化的影响。方法野生型ICR小鼠70只,来源于ICR的Nrf2基因敲除小鼠35只,采用小鼠视交叉注射自体血建立SAH模型。假手术组行同样抽血、钻孔及置针,但不行注血。实验分为4组,野生型假手术组、野生型SAH组、基因敲除假手术组、基因敲除SAH组。 SAH术后第1、3、5天取标本,用Western blot法和免疫组化法检测M／M特异性蛋白Iba1的表达;同时Western blot检测SAH后第3天Iba1蛋白表达,免疫荧光染色检测SAH后第3天CD16／32＋Iba1＋细胞数量。结果 Western blot检测结果显示野生型假手术组、野生型SAH 组第1、3、5天 Iba1蛋白表达灰度值分别为0．491±0．039、0．657±0．069、0．930±0．046和0．926±0．046,而 Iba1蛋白免疫组织化学染色平均光密度值为0．412±0．122、0．625±0．135、0．963±0．213和0．978±0．224,野生型SAH组第1、3、5天Iba1蛋白表达均较野生型假手术组明显增加（P＜0．05）,但野生型SAH组第3天与第5天Iba1表达差异无统计学意义（P＞0．05）;Western blot结果示野生型假手术组、基因敲除假手术组、野生型 SAH 组、基因敲除 SAH 组 SAH 后第3天 Iba1蛋白表达灰度值分别为1．157±0．080、1．162±0．073、1．580±0．171和1．913±0．220,CD16／32＋Iba1＋细胞数量分别为0、0、30．200±6．300和42．800±6．260（个／HP）, SAH后第3天基因敲除SAH组Iba1蛋白表达较野生型SAH组增加（P＜0．05）,且基因敲除SAH组CD16／32＋Iba1＋细胞数较野生型SAH组明显增多（P＜0．05）。结论小鼠SAH后M／M活化增加,Nrf2基因敲除促进了SAH后M／M的活化和M1极化。     

小胶质细胞极化在脑出血中的研究进展

<正>脑出血是指原发性非外伤性脑实质内出血,约占急性脑血管病的20%～30%,年发病率为(60～80)/10万人,急性期病死率约为30%～40%^[1],其高发病率、死亡率及致残率严重危害人类身心健康,给患者家庭及社会带来巨大经济负担。小胶质细胞是中枢神经系统重要的免疫细胞之一,在脑出血后生理病理反应中发挥着重要作用。目前一致认为小胶质细胞在脑出血后可能发挥着双重作用,其具体机制可能与小胶质细胞的不同表型相关。     

高糖活化小鼠小胶质细胞BV-2模型的建立

目的 观察高糖（Glu）对小鼠神经小胶质细胞BV-2活化的影响。方法 将BV-2细胞分成：正常对照组（25mmol/L Glu）,脂多糖组（1μg/ml LPS）,高糖组（75mmol/L Glu）,培养24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT检测细胞活力,激光扫描共聚焦显微技术、Western blot法及实时荧光定量PCR技术检测BV-2活化的标志物CD11b的表达。结果 高糖组、LPS组细胞活力与正常对照组相比差异均无统计学意义（P >0.05）;高糖组BV-2 CD11b蛋白含量较正常对照组显著升高（P<0.01）,与LPS组类似（P >0.05）;高糖组BV-2 CD11b-mRNA值较正常对照组显著升高（P<0.01）,且显著高于LPS组（P<0.01）。结论 75mmol/L高糖培养BV-2 24h,在不影响细胞活力的条件下,可显著上调BV-2活化标志物CD11b蛋白及mRNA表达,作用与LPS相当。     

瘦素受体敲除引起大鼠脑组织小胶质细胞活化

目的 本文利用瘦素受体(LEPR)敲除大鼠,分析瘦素受体基因敲除后大鼠脑中小胶质细胞形态与功能的改变,探究瘦素受体在小胶质细胞中的功能作用.方法 采用RT-PCR,蛋白印迹法,免疫组化法和免疫荧光法,观察大鼠瘦素受体敲除后体内外小胶质细胞活化状态.结果 瘦素受体在小胶质细胞表达,基因敲除可以完全剔除小胶质细胞中LEPR...     

Ⅰ型大麻素受体对脊髓损伤小鼠和小胶质细胞活化的影响

目的:探讨Ⅰ型大麻素受体(CB1R)对脊髓损伤小鼠和小胶质细胞活化的影响。方法:36只SPF级C57BL/6雌性小鼠,随机分为对照组、模型组和药物组,通过改良Allen’s法,构建小鼠脊髓损伤模型。分别于术后第1天、第7天和第14天,进行行为学评价。术后第14天处死小鼠,Western blotting法检测脊髓组织髓鞘碱性蛋白(MBP)、脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)蛋白表达。酶联免疫吸附法测定小鼠血清IL-6、IL-17和TNF-α含量。免疫荧光双染检测脊髓组织钙离子结合调节因子(IBA)-1和ED-1阳性细胞表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠术后BMS评分和斜板倾斜度明显降低,血清IL-6、IL-17和TNF-α含量、脊髓组织MBP、BNDF和NGF蛋白含量及IBA1/ED1双阳性细胞均明显升高(P<0.05);与模型组比较,药物组小鼠术后BMS评分、斜板倾斜度、脊髓组织MBP、BNDF和NGF蛋白含量均明显升高,血清IL-6、IL-17和TNF-α含量以及脊髓组织IBA1/ED1双阳性细胞均明显降低(P<0.05)。结论:CB1R通过抑制小...     

短链脂肪酸对大鼠脊髓缺血再灌注损伤时小胶质细胞M1/M2型极化的影响

目的 探讨短链脂肪酸（SCFA）对大鼠脊髓缺血再灌注损伤（IRI）时小胶质细胞M1/M2型极化的影响。方法 SPF级健康雄性SD大鼠72只,6～8周龄,体重200～250 g,采用随机数字表法分为假手术组（S组）、IRI组、SCFA组和SCFA+游离脂肪酸受体2型（FFAR2）阻滞剂GLPG0974组（GLPG组）,每组18只。SCFA组和GLPG组饮水中含有25.9 mmol/L乙酸钠、40.0 mmol/L丙酸钠和67.5 mmol/L丁酸钠,S组和IRI组饮水中含有133.4 mmol/L氯化钠;4周后IRI组、SCFA组和GLPG组建立脊髓IRI模型,S组实施假手术;GLPG组于再灌注即刻和再灌注第1～6天时腹腔注射2 mg/kg GLPG0974,再灌注期持续供应相应饮水。再灌注1、3、5、7 d时行后肢行为学评分,再灌注7 d时检测血-脊髓屏障（BSCB）通透性、脊髓神经元存活率,粪便和脑脊液乙酸、丙酸、丁酸浓度,脊髓小胶质细胞分化簇（CD）86、CD206及脊髓肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-1β、IL-4、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p...     

脂多糖活化小鼠大脑小胶质细胞后炎性细胞因子的表达

目的采用细菌脂多糖（LPS）对原代培养的BALB/c小鼠大脑皮质小胶质细胞进行刺激,检测小胶质细胞IL-1bI、L-6和TNF-α等细胞因子的基因表达情况。方法分离纯化小胶质细胞,采用1μg/ml LPS刺激24h,再采用RT-PCR检测IL-1bI、L-6和TNF-a mRNA表达水平。结果体外培养的小胶质细胞经LPS刺激后,细胞因子IL-1bI、L-6和TNF-a mRNA表达水平明显上调。结论 LPS活化的小胶质细胞可产生大量的炎性细胞因子。     

米诺环素介导小胶质细胞形态转换减轻缺血性脑卒中早期脑损伤的机制研究

目的 观察大鼠缺血性脑损伤早期的病理生理特点,探讨米诺环素在缺血性脑损伤早期的神经保护效应及可能机制.方法 线栓法制备大鼠缺血性脑损伤(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,在MCAO 6、24 h分别给予米诺环素腹腔注射,通过TTC染色观察脑梗死面积,TUNEL染色及尼氏染色检测神经元凋亡情况;免疫荧光染色了解小胶质细胞形态变化以及Western blot检测凋亡通路NF-κB表达情况.使用Morris水迷宫检测手术28 d后大鼠学习记忆能力.结果 米诺环素减少MCAO 6 h后大鼠脑梗死面积[(43.0±5.3)cm3 vs (36.0±6.8)cm3, P<0.01],减少脑神经元凋亡数量并促进M2型(神经保护型)小胶质细胞增殖,MCAO 24 h后米诺环素治疗不能改善脑梗死以及神经元细胞凋亡(P>0.05).米诺环素显著减少MCAO 6 h诱导的凋亡信号通路蛋白NF-κB的表达(P<0.01).MCAO 28 d后大鼠学习记忆能力较假手术组显著降低;米诺环素显著改善MCAO后学习记忆能力(P<0.05),而MCAO 24 h后米诺环素不能改善大鼠神经功能障碍,差异无统计学意义(P>0.05).结论 米诺环素能促进缺血性脑卒中早期活化小胶质细胞向M2型转化并抑制凋亡信号通路,减轻脑缺血诱导的神经炎症及细胞凋亡,改善大鼠学习记忆功能.     

丙泊酚对新生小鼠海马星形胶质细胞和小胶质细胞的影响

目的：观察丙泊酚麻醉对新生小鼠海马星形胶质细胞（AST）和小胶质细胞的影响。方法将健康同窝日龄7d（P7）C57小鼠15只,随机分为丙泊酚高剂量组、低剂量组和10％脂肪乳对照组,每组5只,所有小鼠从P7开始接受药物处理。高、低剂量组分别腹腔注射丙泊酚60、30mg／kg;对照组腹腔注射同等体积的10％脂肪乳。药物处理24h后取材,采用免疫组化方法检测AST标记物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）与小胶质细胞标记物离子钙接头分子（Iba1）在海马内的表达。结果丙泊酚高剂量组小鼠海马齿状回分子层中GFAP标记的AST数量较对照组明显减少（P＜0．01）,低剂量丙泊酚对新生鼠海马中AST数量无显著影响;高剂量和低剂量丙泊酚均显著性降低海马小胶质细胞数量（P＜0．01）。结论丙泊酚抑制新生小鼠海马AST和小胶质细胞的发育,且存在剂量依赖关系。     

缺血性脑卒中后小胶质细胞吞噬作用的研究进展

缺血性脑卒中是影响人类健康的重大疾病,目前有关它的病理机制并未完全阐明。小胶质细胞是中枢神经系统中重要的免疫细胞。缺血性脑卒中后,大量小胶质细胞激活,并向损伤区域迁移聚集,吞噬坏死的细胞或碎片,释放炎症因子或营养因子,参与了缺血性脑卒中的病理过程。其中小胶质细胞的吞噬作用在脑缺血损伤以及康复中发挥重要的作用。本文总结小胶质细胞吞噬作用的分子机制,并综述小胶质细胞吞噬作用在缺血性脑卒中的研究进展,探讨小胶质细胞吞噬作用在脑缺血损伤和康复中的多样性和复杂性,旨在为缺血性脑卒中的治疗和药物研发提供新的思路。     

麝香保心丸对小鼠缺血性脑卒中的保护作用及机制

 目的 探究麝香保心丸（Shexiang Baoxin Pill,SBP）在小鼠缺血性脑卒中的保护作用及机制。方法 通过大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）构建脑缺血性卒中模型,将96只C57BL/6小鼠随机分成4组：假手术（Sham）组、模型（ischemia/reperfusion,I/R）组、低剂量麝香保心丸（LSBP,22.5 mg/kg）组和高剂量麝香保心丸组（HSBP,45 mg/kg）,每组24只。灌胃4周后制备小鼠MCAO模型。记录各组小鼠的大脑梗死体积及脑组织含水量,利用免疫荧光技术分析激活的小胶质细胞数量,采用qRT-PCR检测炎症因子的表达,通过Western blot法分析NF-κB信号通路相关蛋白质的表达情况。结果 与I/R组相比,LSBP组和HSBP组大脑梗死体积减少,脑组织含水量降低,激活的小胶质细胞数量减少,同时促进小胶质细胞由M1型向M2型极化,并抑制NF-κB信号通路的激活。结论 SBP可以减轻由缺血性脑卒中引起的小鼠脑组织损伤,其机制可能与改变小胶质细胞M1/M2的极化状态和抑制NF-κB信号通路的激活有关。     

Robo4在脑缺血再灌注损伤大鼠小胶质细胞极化中的作用及其机制研究

目的 探讨环形交叉轴突导向受体同源物4（Robo4）蛋白对脑缺血再灌注损伤（CIRI）后小胶质细胞M1/M2极化的影响。方法 选取60只SD大鼠，随机分为假手术（Sham）组、大脑中动脉短暂性闭塞/再灌注（tMCAO/R）组、tMCAO/R联合过表达Robo4慢病毒阴性载体（tMCAO/R+Lv-scramble）组、tMCAO/R联合过表达Robo4慢病毒载体（tMCAO/R+Lv-Robo4）组，每组15只。tMCAO/R+ Lv-scramble组及tMCAO/R+Lv-Robo4组在复制tMCAO前7 d于脑室内注射慢病毒载体。Longa评分评估神经功能缺损，TTC法检测脑梗死面积，实时荧光定量聚合酶链反应及Western blotting检测大脑组织中Robo4的表达，Western blotting检测M1小胶质细胞标志物（iNOS和CD86）、M2小胶质细胞标志物（Arg-1和CD206）和Notch通路蛋白（Notch-1、Hes1和Hes5）表达。酶联免疫吸附试验检测TNF-α、IL-1β、IL-10和TGF-β水平。结果 tMCAO/R组Longa评分较Sham组高（P <0.05），tMCAO/R+Lv-scramble组较tMCAO/R+Lv-Robo4组高（P <0.05）。tMACO/R组Robo4 mRNA和蛋白相对表达量较Sham组低（P <0.05），tMCAO/R+Lv-Robo4组较tMCAO/R+Lv-scramble组高（P <0.05）。tMACO/R组脑梗死面积较Sham组大（P <0.05），tMCAO/R+Lv-Robo4组较tMCAO/R+Lv-scramble组小（P <0.05）。tMACO/R组较Sham组高（P <0.05），tMCAO/R+Lv-Robo4组iNOS、CD86较tMCAO/R+Lv-scramble组低，Arg-1、CD206较tMCAO/R+Lv-scramble组高（P <0.05）。tMACO/R组较Sham组高（P <0.05），tMCAO/R+Lv-Robo4组TNF-α、IL-1β较tMCAO/R+Lv-scramble组低，IL-10、TGF-β较tMCAO/R+Lv-scramble组高（P <0.05）。tMACO/R组Notch-1、Hes1和Hes5相对表达量较Sham组高，tMCAO/R+Lv-Robo4组较tMCAO/R+Lv-scramble组低（P <0.05）。结论 Robo4可调控CIRI后小胶质细胞极化向M2表型转移，并调控Notch信号通路，缓解CIRI。     

热习服对热射病小鼠中枢神经细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨热习服对热射病小鼠中枢神经细胞自噬及凋亡的影响.方法 48只C57雄性小鼠分为正常对照(CON)组、热习服(HA)组、热射病(HS)组、热习服+热射病(HA+ HS)组,分别建立热习服和热射病模型.观察比较各组动物脑组织含水量,脑切片HE染色观察病理学改变,FJB染色观察神经细胞变性情况,TUNEL染色标记凋亡神经细胞,免疫荧光标记自噬神经细胞,Western blot检测Caspase 3及LC3蛋白表达.结果 在43℃环境中暴露120 min后,HA +HS组脑组织含水量为(78.54±0.25)％,显著低于HS组的(79.64 ±0.21)％,差异有统计学意义(P＜0.05);脑组织病理学显示HS组细胞肿胀,胞质疏松,染色质边集,核明显固缩、破裂、溶解,细胞空泡化明显,神经元变性和凋亡加剧,HA+ HS组细胞损伤程度明显减轻,神经元变性和凋亡减轻,Caspase-3蛋白表达明显下降(P＜0.05);HA、HA+ HS和HS组神经细胞自噬均明显增强,但与HS组相比,HA+ HS组自噬程度下降,且LC3蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 热习服对热射病小鼠脑损伤具有保护作用,并可减轻热射病导致的中枢神经细胞自噬及凋亡.     

脑卒中后血糖的变化及其对愈后的影响

目的：了解血糖水平在脑卒中后的变化及其对愈后的影响。方法：次日清晨测空腹血糖，比较不同愈后的患者水平。结果：恶化及死亡患者的血糖水平较痊愈及好转的患者明显增高，差异有显著性。结论：血糖水平与愈后有明显相关，早期控制血糖可对愈后产生影响。     

热习服对小鼠热射病脑损伤的保护作用

目的探讨热习服对小鼠热射病脑损伤的保护作用。方法以C57小鼠分别建立热习服和热射病模型,实验分为对照组(CON组)、热习服组(HA组)、热射病组(HS组)、热习服后再接受热应激组(HA+HS组)。观察各组小鼠一般行为学表现、肛温变化、脑组织含水量及死亡率。HE染色观察病理改变,TUNEL染色观察神经元凋亡情况,透射电镜观察神经元形态改变。结果在43℃环境中暴露120min后,HS组肛温升高至(42.8±0.83)℃,死亡率为33%,脑组织含水量为(82.6±12.7)%;HA+HS组肛温升至(40.0±0.67)℃,未有动物死亡,脑组织含水量为(77.8±12.1)%,以上指标两组间差异具有统计学意义(P0.01或P0.05)。组织病理观察可见HS组脑组织细胞肿胀,胞质疏松,染色质边集,核明显固缩,内质网短小分散,排列紊乱,线粒体明显增大,线粒体DNA固缩,空泡化等,并有大量神经元凋亡,HA+HS组亦可见类似病理变化及神经元凋亡,但病变程度明显轻于HS组,而对照(CON)组及单纯热习服(HA)组以上指标均无明显变化。结论热射病可导致小鼠脑组织水肿,脑组织结构改变,神经元凋亡增加,对中枢神经系统功能损伤严重。热习服预处理可减轻脑损伤,具有明显的保护作用。     

免疫相关GTP酶M1在脓毒症诱导脑损伤小鼠皮质神经元细胞自噬中的作用

目的：探讨免疫相关GTP酶M1(immune-related GTPase M1,IRGM1)在脓毒症诱导脑损伤(sepsis-induced brain injury,SIBI)小鼠皮质神经元细胞自噬中的作用。方法：将野生型和IRGM1基因敲除小鼠各60只分为野生型假手术 (sham-operated wild-type,SWT)组、野生型模型(model wild-type ,MWT)组、基因敲除假手术(sham-operated knockout, SKO)组和基因敲除模型(model knockout,MKO)组。模型组行小鼠盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP), CLP后6 h行神经行为学评分,如神经生物学低于6分,诊断为SIBI;假手术组只打开腹腔,未行CLP。采用HE染 色观察小鼠大脑皮质区病理学改变;电子显微镜下观察小鼠皮质神经元细胞自噬的超微结构;实时定量PCR检 测IRGM1和INF-γ mRNA在小鼠大脑皮质组织中的表达;Western印迹检测小鼠大脑皮质组织微管相关蛋白1轻链 3(LC3)-II,LC3-I,SQSTM1,IRGM1的蛋白相对表达量;免疫荧光法观察IRGM1在小鼠大脑皮质神经元中的表达。 结果：电子显微镜显示,与SWT组比较,MWT组在CLP后12或24 h小鼠皮质神经元内质网扩张、线粒体肿胀、 自噬体数量增加。Western印迹结果显示,CLP后6 h小鼠大脑皮质组织LC3-II表达开始增加,高表达维持至CLP后 96 h,相反,SQSTM1在CLP后6 h开始下降。与SWT组比较,MWT组在CLP后12 h小鼠大脑皮质组织中IRGM1的mRNA 和蛋白表达水平明显上调,同时,IFN-γ的mRNA表达也明显增加(P<0.05)。双色免疫荧光检测结果显示,CLP后 24 h,与SWT组比较,MWT组小鼠皮质神经元中IRGM1表达明显上调。SWT组和SKO组小鼠大脑皮质细胞中自噬活 性的基线水平相当低,几乎无LC3-II的表达,而SQSTM1表达均很高。但是,CLP后12 h,MWT组LC3-II表达明显升 高,SQSTM1表达下调(P<0.05),而IRGM1基因敲除的MKO组小鼠大脑皮质组织中几乎无LC3-II,SQSTM1的表达明显 上调。CLP后6 h,MWT组SIBI发生率90%(27/30),MKO组发生率96.67%(29/30)。CLP后12 h,MKO组小鼠神经生物学 评分明显低于MWT组(4.97±0.71 vs 5.43±0.86;t=2.284,P=0.026)。小鼠大脑皮质HE染色显示,与MWT比较,MKO组 小鼠脑皮质损伤严重,神经细胞数量明显减少。结论：SIBI时IRGM1表达对小鼠大脑皮质神经元损伤具有一定的保护 作用,其机制可能与其调节小鼠大脑皮质神经元细胞自噬有关。     

肌酸激酶浓度在劳力性热射病早期判别预后的研究

目的:分析血清肌酸激酶(CK)值作为劳力性热射病患者预后判别指标的意义.方法:回顾分析1995年9月-2007年8月6所部队医院的11例EHS病例.以预后为标准,将11例患者分为两组,死亡组(n=4)及存活组(n=7),比较两组病例入院后0 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h的CK数值,并描绘48 h CK值的ROC曲线,分析CK值在发病早期判别预后的意义.结果:在人院后各时间点死亡组CK值持续升高,存活组CK值略升高后保持稳定并逐渐下降,两组CK值在48 h、60 h、72 h有显著差异(P<0.05),48 h CK值的ROC曲线AUC(area under the Roc curve)为0.893.结论:死亡患者与存活患者CK值的变化趋势显著不同,CK值可以在发病早期(48 h)判别预后.