Tmub1沉默提高Akt蛋白活性促进肝细胞增殖

目的 探讨Tmub1沉默对Akt磷酸化和肝细胞增殖及生长能力的影响.方法 应用RNAi技术对BRL-3A细胞株Tmub1基因进行沉默,采用qRT-PCR和Western blot分别检测Tmub1、Akt、p-Akt、Cyclin D1、c-myc等基因的mRNA和蛋白表达水平;采用平板集落形成实验和CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期.结果 与对照组相比,Tmub1基因沉默后,Cyclin D1和c-myc基因mRNA表达增强(P＜0.05),p-Akt磷酸化水平以及Cyclin D1和c-myc蛋白的表达增高(P＜0.05);BRL-3A细胞的增殖及生长能力增强(P＜0.05);且处于细胞周期S+G2/M期的细胞比例明显增加(P＜0.05).通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的mRNA及蛋白的表达水平,细胞的增殖及生长能力明显降低(P＜0.05),且处于S+ G2/M期的细胞比例下降(P＜0.05).结论 Tmub1沉默通过增加Akt蛋白的磷酸化及Cyclin D1、c-myc的表达水平从而促进BRL-3A细胞的增殖和生长.     

EGR1在调控肝再生过程中的功能研究

目的探讨EGR1在调控肝再生过程中的功能地位.方法使用RT-PCR法测定部分切肝和假手术后不同时间点野生小鼠静止和再生肝组织EGR-1 mRNA水平;使用western blot检测部分切肝后48和72 h野生小鼠和EGR1基因敲出鼠的全肝组织裂解液中EGR1蛋白质的表达水平并对其进行比较.结果肝再生过程中EGR1基因的诱导表达开始于部分切肝后6～12 h,继而下降,但于48 h表达再次增高;而EGR1蛋白质表达在部分切肝后12～48 h均可检测到.因此,肝再生过程中EGR1蛋白质表达的时段恰好对应于肝细胞的有丝分裂进程.结论正常肝再生的有效进程中EGR1基因的表达是必需的.肝再生过程中,EGR1参与了肝细胞有丝分裂周期的调控.     

B23在肝再生和肝细胞增生过程中的表达与移位

目的：用B23蛋白的单克隆抗体研究B23表达在鼠肝大部分切除后再生过程中肝细胞的动态变化,探讨B23作为肝再生和肝细胞增生标记物的可能性。方法：鼠肝大部切除术后第1、2、3、4和7d收取再生肝组织,采用B23的单克隆抗体和Western印迹及免疫组化方法检测B23在不同时间再生肝组织的表达,并与增殖细胞核抗原（PCNA）的表达相比较。结果：B23在静止期肝细胞中几乎检测不到,但在不同时间再生肝组织的表达中既有表达量的变化又有表达位置的变化,在术后1－7d再生肝组织的表达中,B23表达量的增高变化呈近似抛物线样变化,其中第3d表达水平最高,B23表达量的这些变化与PCNA的变化非常相似。B23表达位置的变化从核仁的增强表达（G1－S）开始,进而核浆的表达（S－G2）及胞质和分裂染色体的表达（M）。结论：B23蛋白表达可作为肝再生和肝细胞增生的标记。     

泛素结合酶-10表达对结直肠癌细胞增殖的影响

目的 探讨泛素结合酶-10(Ubiquitin-conjugafing enzymes,UbcH10)表达对结直肠癌细胞增殖的影响.方法 采用脂质体LipofectamineTM 2000转染人UbcH10的真核表达载体pcDNA3.1-UbcH10及其对照载体pcDNA3.1至结直肠癌细胞LoVo,蛋白印迹(West...     

肝再生增强因子研究进展

本文对有关肝再生增强因子的研究进行综述,为今后进一步将肝再生增强因子研制成为一种治疗肝病有效的靶点药物提供理论依据.     

肝硬变大鼠肝部分切除术后肝细胞再生机理的实验研究

肝硬变大鼠肝部分切除术后肝细胞再生机理的实验研究Ａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｆｔｅｒｐａｒ┐ｔｉａｌｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙｉｎｃｉｒｒｈｏｔｉｃｒａｔｓ陈平韩本立（第三军...     

肝部分切除术后肝细胞再生机制的探讨

肝细胞再生的机制非常复杂，影响因素众多，目前对其机制还不完全清楚。肝细胞增殖有两种情况：一种是代偿性肝细胞再生，一种是肝细胞直接增生。前者常常由于外科手术引起肝组织的缺失，或是化学物质引起的肝细胞坏死造成肝细胞代谢超载而诱发。后者常常是由于某种因素直接刺激肝细胞增殖，造成肝细胞过量，通过细胞凋亡而恢复细胞正常的功能。     

脾切除对肝再生及肝细胞凋亡影响的实验研究

目的 探讨脾切除对正常肝、纤维化肝行肝部分切除术后肝再生和肝细胞凋亡的影响。方法建立小白鼠肝纤维化模型;正常小白鼠、肝纤维化小白各分为肝部分切除加脾切除组、肝癌切除保留脾脏组。有肝再生指数、增殖细胞核抗原阳性细胞指数、细胞凋亡指数、谷丙转氨酶作为指标,分别于术后第２４小时、３天、７天评价脾切除对肝再生和肝细胞凋亡的影响。结果 肝再生指数、有丝分裂指数、增殖细胞核抗原阳性细胞指数、正常和肝纤维化小鼠     

活化的Kupffer细胞对肝硬变肝脏细胞再生功能的影响

目的：通过对肝硬变大鼠行肝部分切除术基础上，体外活化Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞（ＫＣ），观察其对肝细胞再生过程的影响。方法：分为肝硬变大鼠部分肝切除术组（Ｃ－ＰＨ）、正常大鼠部分肝切除术组（Ｎ－ＰＨ）和假手术组（ＳＯ）。皮下注射四氯化羰油溶液加口服乙醇制作大鼠肝硬变模型，切除大鼠肝脏的左叶和中叶。观察时相为大鼠术后６ｈ，行＾３Ｈ－ＴＤＲ掺合法，＾Ｈ－亮氨到的测定，用ＬＰＳ体外活化ＫＣ，观察其对肝再生过程的     

肝细胞移植对大鼠实验性肝衰竭的疗效研究

目的　探讨同种异体肝细胞经腹腔、门静脉移植对D-氨基半乳糖 (D- gal)诱导的急性肝衰竭大鼠的治疗作用 .方法　采用 D- gal诱导大鼠急性肝衰竭 ,诱导后 6 0 h,分 4组进行治疗实验 , 组 :经门静脉移植 2× 10 7肝细胞 ,同时肌注环孢霉素 A(Cs A) 10 mg· kg- 1 ; 组 :经门静脉注射生理盐水 1m L ,同时肌注 Cs A 10 mg· kg- 1 ; 组 :经腹腔移植 4×10 7肝细胞 ; 组 :经腹腔注射生理盐水 2 m L ,观察大鼠的存活率、肝脏功能、病理变化 .结果　 组大鼠存活率与 组无明显差异 (42 % vs 37% ,P>0 .0 5 ) ,肝脏功能、病理无明显改善 . 组大鼠存活率显著高于 组 (75 % vs 33% ,P<0 .0 5 ) ,肝脏功能、病理均有部分改善 .结论　经腹腔移植同种异体肝细胞可明显改善 D- gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率 ,部分改善肝功能、病理 ;经门静脉移植同种异体肝细胞不能改善D- gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率、肝脏功能及病理改变 .     

小鼠单纯肝切除后再生肝组织内大小核分裂相和卵圆细胞的观察

目的:探究C57小鼠单纯2/3肝切除后肝组织内与再生和肝干细胞有关的病理形态学变化及其意义.方法:在4个对照组(正常组、假手术组、倒千里光碱组和倒千里光碱2/3肝切除组)的参照下,观察实验组C57小鼠单纯2/3肝切除后不同时间肝脏病理形态变化(核分裂相和卵圆细胞等)和CK19、AFP免疫组化检测情况.结果:单纯2/3肝切除后小鼠均出现不同程度的成熟肝细胞通过大核分裂相分裂增生、轻重不等的小胆管/终末胆管增生反应和个别例中有类似于倒千里光碱肝切除模型组的卵圆细胞增生;尤其还有大小核分裂相分布等一些文献未提及的形态学改变.结论:本研究提出肝流域假说的初步设想:肝内成体干细胞存在于小胆管/终末胆管附近,是肝主质细胞的重要源头;在其向中央静脉方向的流向上产生各级分化程度不同的子代(自卵圆细胞到小肝细胞、成熟肝细胞),沿肝板形成该流域干流;而经由血流到达肝脏的过客性干细胞可不同程度地在不同区段作为该流域的支流汇入干流并转分化为肝系细胞.     

siRNA抑制DJ-1基因表达对肺鳞癌SK-MES-1细胞生物学行为的影响

目的:采用RNA 干扰技术下调DJ-1 基因在肺鳞癌细胞SK-MES-1 中的表达, 探讨DJ-1 表达下调对SKMES-1 细胞生物学行为的影响, 以期探讨DJ-1 基因的功能。方法:构建靶向DJ-1 基因siRNA 慢病毒载体( 重组慢病毒中有绿色荧光蛋白真核表达框), 感染SK-MES-1 细胞(DJ-1 siRNA 组), 并设立慢病毒载体对照组(Control-siRNA 组)及空白对照组。荧光显微镜下观察并计算感染效率, Western 印迹检测各组细胞中DJ-1 蛋白表达水平, MTT法检测细胞增殖能力, 流式细胞术测定细胞周期, Transwell 小室实验检测细胞体外迁移侵袭能力。结果:与Control-siRNA组及空白对照组比较, DJ-1 siRNA 组的DJ-1 蛋白表达受到抑制、细胞增殖能力明显减弱(P<0.01)、G1/G2 期细胞数增多和S 期细胞数减少表明细胞周期受阻、细胞体外迁移和侵袭能力显著减弱(P<0.01)。结论:DJ-1 基因具有促进肺鳞癌细胞SK-MES-1 细胞的增殖和体外迁移侵袭的作用。     

Tmub1沉默对大鼠肝部分切除术后肝细胞增殖的影响

目的探讨Tmub1蛋白在肝再生过程中的作用及其在肝再生过程中对Securin蛋白的影响。方法 54只大鼠随机分为3组即Tmub1 RNAi慢病毒组、空载慢病毒组及正常对照组,其中Tmub1 RNAi慢病毒组、空载慢病毒组注射相应病毒颗粒(3×107TU),对照组未行注射,2 d后行肝部分切除术(partial hepatectomy,PH),每组分为6个亚组:PH术后0、2、6、12、24、48 h,每亚组3只大鼠,术后提取原代肝细胞、留取肝脏组织标本,利用Real-time PCR和Western blot检测慢病毒干扰效果及Tmub1沉默后对Securin蛋白的影响。MTT实验、流式细胞仪检测原代肝细胞的增殖情况。结果Real-time PCR和Western blot表明实验组Tmub1 mRNA和蛋白被有效抑制;Tmub1沉默后securin mRNA表达无明显变化,而G2/M期securin蛋白量明显减少。MTT实验表明Tmub1沉默可明显上调PH术后6～24 h肝细胞的增殖速率;流式细胞分析结果显示实验组处于G2/M期的肝细胞比例明显增高。结论 Tmub1蛋白在肝再生过程中对肝细胞增殖进程发挥负向调控作用,而该作用可能与其在蛋白质水平影响了Securin的表达密切相关。     

外源hTERT基因对大鼠肝细胞增殖的影响

目的:构建含目的基因人端粒逆转录酶(hTERT)重组逆转录病毒载体pLNCX2-hTERT,体外感染原代大鼠肝细胞,观察对大鼠肝细胞增殖的影响.方法:将hTERT插入逆转录病毒载体pLNCX2获得重组逆转录病毒载体pLNCX2-hTERT,转染包装细胞293T后可获得表达hTERT逆转录病毒,感染体外培养的原代大鼠肝细胞,通过RT-PCR及western-blot检测基因在细胞中的表达情况.结果:重组载体pLNCX2-hTERT经双酶切鉴定及序列测定,证实构建正确.转染原代大鼠肝细胞后能明显促进其增殖.结论:体外转染原代大鼠肝细胞后能有效促进其增殖,这为进一步解决人工肝细胞来源问题奠定了实验基础.     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响及叶酸的拮抗作用

目的探讨不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和细胞周期分布的影响及叶酸对Hcy的拮抗作用。方法正常人脐动脉VSMCs体外培养,随机分为6组:空白对照组、不同浓度Hcy干预组(50、100、2005、00μmol.L-1)和叶酸治疗组(Hcy100μmol.L-1+叶酸30μmol.L-1)。应用MTT法及流式细胞仪检测各组VSMCs增殖率及细胞周期。结果随着Hcy浓度的增加VSMCs的增殖率增加;Hcy作用后VSMCs G0/G1期细胞数降低;S期和G2/M期细胞数增加,处于DNA合成期的细胞数明显增加,而叶酸治疗组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),叶酸治疗组与Hcy 100μmol.L-1组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hcy可通过对细胞周期的影响促进VSMCs的增殖,并在一定时间和浓度范围内呈明显的剂量依赖关系;叶酸对Hcy有拮抗作用。