吴茱萸碱抑制PI3K/AKT通路诱导小细胞肺癌H1688和H446细胞凋亡

目的 探讨PI3 K/AKT通路在吴茱萸碱(evodiamine,EVO)诱导小细胞肺癌H1688和H446细胞凋亡中的作用.方法 分别以不同浓度(1、5、20 μmol/L)和不同作用时间(3、6、12、24、48 h)的EVO处理H1688和H446细胞,Western blot检测p-AKT的表达水平.以EVO分别作用于经过PI3 K/AKT通路激活剂IGF-1或抑制剂LY294002预处理后的H1688和H446细胞,Western blot检测p-AKT蛋白的表达.将EVO作用于IGF-1预处理的H1688细胞后,Annexin-V/PI染色检测细胞凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达水平.以不同浓度的EVO处理H1688细胞,Western blot检测t-AKT、PTEN蛋白表达,RT-PCR检测AKT mRNA表达.结果 与对照组相比,不同浓度和不同作用时间的EVO处理后H1688和H446细胞中p-AKT表达水平下降(P＜0.05).而IGF-1可减弱EVO下调H1688和H446细胞p-AKT的作用(P＜0.05),并降低EVO在H1688中的增殖抑制和凋亡诱导作用.EVO与LY294002下调p-AKT蛋白的效果差异无统计学意义(P＞0.05).EVO对H1688细胞t-AKT蛋白和AKT mRNA的表达无影响,EVO可明显上调PTEN的表达(P＜0.05).结论 抑制PI3 K/AKT通路活性是EVO诱导H1688和H446细胞凋亡的重要机制之一.     

抑制树突状细胞的自噬改善小鼠哮喘病情

目的 研究抑制树突状细胞(DCs)自噬对DCs功能及小鼠哮喘的影响.方法 (1)将BALB/c小鼠按随机数字表法分为3组:急性哮喘对照组(哮喘组)、哮喘自噬抑制剂氯喹(CQ)治疗组(CQ组)和空白对照组(对照组).哮喘组和CQ组利用卵清蛋白(OVA)诱导建立小鼠过敏性哮喘模型,CQ组加用CQ.用H-E染色观察各组小鼠肺组织的病理改变,酶联免疫吸附实验、蛋白质印迹实验、流式细胞术分别检测各组小鼠血清OVA特异性IgE以及肺DCs自噬水平、表面共刺激分子和主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(MHCⅡ)的表达水平.(2)体外用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3MA)抑制C57/B6小鼠骨髓源DCs自噬,检测DCs表面共刺激分子、MHCⅡ的表达水平.(3)获取OT2小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞,与各组肺DCs以1∶10的比例混匀,流式细胞术检测T细胞的增殖情况与活化反应.结果 (1)CQ组IgE的表达水平(P＜0.05)、肺炎症细胞浸润程度以及肺DCs自噬水平(P＜0.05)和CD86、MHCⅡ表达水平(P＜0.05)均低于哮喘组.(2)3MA体外抑制骨髓源DCs自噬后,DCs表面的CD86及MHCⅡ表达均低于哮喘组(P＜0.05).(3)CQ组肺DCs体外诱导的T细胞增殖能力与活化反应均弱于哮喘组(P＜0.05).结论 自噬抑制剂可抑制过敏性哮喘肺DCs的自噬,下调DCs表面共刺激分子、MHCⅡ的表达以及DCs诱导的T细胞增殖能力,改善哮喘病情.     

HDAC3负性调控mTOR促进低氧诱导H9C2心肌细胞自噬

目的 研究组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)调控低氧诱导H9C2心肌细胞自噬的功能和机制.方法 体外建立H9C2心肌细胞低氧模型,采用Western blot和免疫荧光染色技术检测自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Beclin-1和P62的表达变化以及荧光活性.分别转染HDAC3过表达质粒和干扰RNA后,检测自噬调节分子mTOR和LC3B的蛋白表达和荧光活性变化.结果 与对照组比较,低氧1、6、12 h后,H9C2心肌细胞中LC3B-Ⅱ和Beclin-1表达显著增加(P＜0.05);P62蛋白表达先增高(1 h)后降低(6 h)(P＜0.05).低氧1 h和6h后,HDAC3和mTOR蛋白表达明显增高(P＜0.05);低氧12 h后HDAC3和mTOR蛋白表达显著减少.过表达HDAC3能够降低mTOR蛋白表达和荧光活性,增加LC3B的蛋白表达和荧光活性(P＜0.05);下调HDAC3蛋白表达能够升高mTOR蛋白水平和荧光活性,减少了LC3B蛋白表达和荧光活性(P＜0.05).结论 HDAC3负性调节mTOR蛋白,促进了低氧诱导的H9C2心肌细胞自噬.     

厄洛替尼对非小细胞肺癌增殖和自噬的影响

目的:探讨厄洛替尼对人非小细胞肺癌细胞HCC827?A549?H1299增殖及自噬的影响?方法:将体外培养的人肺癌HCC827?A549?H1299细胞株分为对照组(CON组)?溶剂对照组(DMSO组)和厄洛替尼处理组,采用CCK-8法检测厄洛替尼对细胞增殖的抑制作用,采用Western blot及细胞免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3?Beclin-1表达?结果:厄洛替尼以剂量依赖的方式抑制HCC827?A549?H1299细胞增殖,增殖抑制率由高到低分别为HCC827?A549?H1299,3株细胞的半数抑制浓度分别为8.72?32.09?87.46 μmol/L;与对照组相比,厄洛替尼显著上调LC3-Ⅱ及Beclin-1表达 (P < 0.05);厄洛替尼诱导HCC827?A549?H1299细胞株自噬,且其诱导作用呈剂量依赖性(P < 0.05)?结论:厄洛替尼选择性抑制非小细胞肺癌增殖,并诱导非小细胞肺癌细胞自噬?     

大麻二酚通过促进自噬流减轻棕榈酸诱导的肝细胞损伤

目的 观察大麻二酚(CBD)对棕榈酸(PA)诱导的肝细胞损伤的保护作用,并考察其与自噬流相关的潜在机制.方法 原代培养大鼠肝细胞,分别给予1 μmol/L和5μmol/L的CBD处理24 h,采用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和p62的表达,考察CBD对细胞自噬的影响.将细胞分为4组并分别给予不同处理:PA组(800μmol/L PA处理细胞)、PA+CBD组(800 μmol/L PA和5μmol/L CBD联合作用)、PA+CBD+CQ组[800 μmol/L PA、5μmol/L CBD和50 nmol/L自噬抑制剂氯喹(CQ)共同作用]和阴性对照组(加入等体积0.03％ DMSO处理细胞),每组作用时间均为24 h;采用蛋白质印迹法检测LC3和p62的蛋白表达,流式细胞术考察细胞凋亡情况,qPCR法检测内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和X盒结合蛋白1(XBP-1) mRNA的表达,Rh123和lucigenin荧光探针分别检测线粒体的膜电位和活性氧簇(ROS)含量.结果 1μmol/L和5μmol/L CBD均不影响肝细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值以及p62蛋白的表达.与阴性对照组相比,PA组肝细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值和p62蛋白表达增加(P＜0.05),细胞凋亡增加(P＜0.05),CHOP、GRP78、XBP-1 mRNA表达增加(P＜0.05),线粒体膜电位降低(P＜0.05),线粒体ROS的生成增加(P＜0.05);与PA组相比,PA+CBD组肝细胞内的自噬流恢复,细胞凋亡减少,内质网应激和线粒体失常减轻(P＜0.05);同时给予CQ处理可以逆转CBD的保护作用(P＜0.05).结论 CBD能够通过促进自噬流减轻PA诱导的肝细胞损伤,改善内质网应激和线粒体功能.     

多西环素对体外人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨多西环素对体外人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响及其可能的作用机制.方法 不同浓度的多西环素作用于体外培养的人小细胞肺癌H446细胞24、48、72或96 h,采用CCK-8法检测多西环素对H446细胞增殖的影响;采用Bliss法计算半数抑制浓度(IC50);采用TUNEL法检测多西环素对H446细胞凋亡的影响;采用Western印迹法检测多西环素对Bcl-2、Bax等凋亡相关蛋白表达的影响;采用实时定量-PCR法检测多西环素对Bcl-2、Bax等凋亡相关基因mRNA表达的影响.结果 多西环素可浓度-时间依赖性地抑制人小细胞肺癌H446细胞的体外增殖,作用24、48、72和96 h对应的IC50值分别为24.10、10.98、8.20和8.03 mg/L;多西环素作用后H446细胞的凋亡指数显著增加(P<0.05);Bax的蛋白及mRNA表达水平上调,Bcl-2的蛋白及mRNA表达水平下调,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 多西环素可通过上调促凋亡相关蛋白Bax的表达,下调抑凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,诱导人小细胞肺癌H446细胞凋亡,进而抑制人小细胞肺癌H446细胞的体外增殖,是一种有开发前景的小细胞肺癌治疗药物.     

自噬在电离辐射诱导的小鼠精母细胞GC-2凋亡过程中的作用

目的 探讨自噬在电离辐射诱导小鼠精母细胞GC-2凋亡过程中的作用.方法 将小鼠精母细胞GC-2分为空白对照组和不同剂量(2、4和8 Gy)60Co辐射处理组.采用原位末端转移酶标记法(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过蛋白质印迹实验观察自噬相关蛋白LC3(LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)和Beclin1表达水平的改变,使用荧光显微镜观察C,C-2细胞内自噬小体的变化.用5mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理GC-2细胞2h再给予60Co辐射处理,观察自噬抑制剂联合电离辐射对细胞凋亡率的影响以及自噬相关蛋白表达水平的改变.结果 与空白对照组相比,GC-2细胞经60Co辐射处理后细胞凋亡率升高(P＜0.05),荧光显微镜下可见细胞自噬体明显增多,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ以及Beclin1蛋白表达水平增加(P＜0.05).预先用5mmol/L 3-MA处理GC-2细胞2h再给予60Co辐射处理,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ以及Beclin1蛋白表达水平与未经3-MA处理组相比降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05).结论 电离辐射可以诱导精母细胞发生自噬,抑制细胞自噬后可增强电离辐射对精母细胞的杀伤作用.     

左旋棉酚通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬及意义

目的 探讨左旋棉酚诱导淋巴瘤Daudi细胞发生自噬可能机制及对细胞存活率的影响.方法 采用CCK-8法检测左旋棉酚在体外对Daudi细胞增殖抑制作用的影响;采用台盼蓝排斥实验检测不同处理对细胞存活率的影响;Western blot检测细胞中自噬相关蛋白LC3、ERK和磷酸化ERK的表达情况;AO染色观察经左旋棉酚处理后Daudi细胞酸性小体的变化情况.结果 左旋棉酚能剂量依赖性地抑制Daudi细胞的增殖和促进细胞死亡;AO染色后经左旋棉酚处理的细胞内可观察到大量的酸性小体形成;Western blot显示左旋棉酚能显著上调自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达及增强磷酸化ERK的水平,抑制ERK的磷酸化能下调LC3Ⅱ的表达;ERK抑制剂U0126及自噬抑制剂CQ和3-MA均能显著增强左旋棉酚的杀细胞效力.结论 左旋棉酚可能通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬,抑制ERK介导的自噬能够显著增强左旋棉酚的抗瘤效应.     

自噬对口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞放疗敏感性的影响及其机制

目的：利用自噬抑制剂联合放射疗法作用于口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞,探讨自噬对口腔癌放射治疗敏感性的影响及其作用机制。方法：选择人口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞,分为对照组、氯喹（CQ）组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、放射组（IR组）及联合放射组（CQ+IR组和3-MA+IR组）。应用MTT法检测细胞生存率,采用免疫荧光法激光共聚焦显微镜观察CAL-27细胞自噬水平（即LC3Ⅱ免疫荧光强度）,Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3和beclin-1表达水平,AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：与IR组比较,联合放射组细胞生存率明显降低（P < 0.05）。IR组细胞自噬水平明显高于对照组、CQ组、3-MA组和联合放射组（P < 0.05）。IR 组LC3和beclin-1蛋白表达水平明显高于对照组和联合放射组（P < 0.05）。与对照组比较,IR组和联合放射组细胞凋亡率明显升高（P < 0.05）;与IR组比较,联合放射组细胞凋亡率也明显升高（P < 0.05）。结论：放射疗法可以诱导口腔鳞状细胞癌细胞自噬水平升高。自噬抑制剂可以通过对口腔鳞状细胞癌细胞的增殖抑制及促凋亡作用,提高其对放射治疗的敏感性。     

红景天苷对97H细胞自噬的影响

目的：探讨红景天苷对人高转移性肝癌细胞株97H自噬的影响。方法：97H细胞经红景天苷处理后,采用透射电镜、MDC染色和吖啶橙AO染色观察自噬现象;采用qRT-PCR方法检测自噬相关基因的mRNA水平;用Western blot方法检测自噬相关蛋白的表达。结果：红景天苷可诱导97H细胞发生自噬,且上调Beclin-1基因mRNA水平,下调p62基因mRNA水平（P<0.05）,上调Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达,下调p62蛋白的表达（P<0.05）。结论：红景天苷可以诱导97H细胞的自噬作用。     

吴茱萸碱联合自噬抑制剂氯喹抗肝癌作用的研究

目的  研究吴茱萸碱(EVO)联合自噬抑制剂氯喹(CQ)的抗肝癌作用。方法  用CCK8法检测EVO及EVO联合CQ对HepG2细胞活性的影响,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)/微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)、P62、血管内皮生长因子(VEGFA)蛋白表达,ELISA法检测HepG2细胞上清液中VEGFA的表达水平,细胞侵袭实验检测条件培养液对人脐静脉血管细胞HUVECs侵袭能力的影响。结果  不同浓度的EVO在作用24 h后能明显抑制HepG2细胞的活性且呈剂量依赖性,当EVO与CQ联合使用时其抑制细胞活性能力更强(P < 0.01)。Western blot结果显示EVO能上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达(P < 0.05),降低P62的表达(P < 0.05),对VEGFA的表达没有明显作用,但有下降的趋势。丹酰戊二胺(MDC)染色结果显示EVO能促进HepG2细胞自噬小体增加,EVO+CQ组细胞内自噬小体聚集明显增多。ELISA结果显示EVO能降低VEGFA的表达(P < 0.01),并且EVO联合CQ作用效果更加明显(P < 0.01)。HUVECs侵袭实验表明,EVO能有效抑制HUVECs细胞侵袭(P < 0.01),同时EVO联合CQ抑制HUVECs细胞侵袭能力更为显著(P < 0.01)。结论  EVO能抑制HepG2细胞活性,并且能提高其自噬水平,降低血管生成能力。EVO与自噬抑制剂CQ联合使用时,对HepG2细胞活性和血管生成的抑制作用更为显著。      

Beclin1基因在SW620细胞自噬和凋亡中作用

目的 探讨Beclinl基因在SW620细胞自噬和凋亡中作用.方法 采用RNA干扰技术抑制Beclinl表达,Beclinl被抑制后细胞的存活能力通过MTT实验评估;结直肠癌细胞SW620在血清剥夺状态下自噬活性通过LC3蛋白水平评估;分别经血清剥夺、星孢菌素及依托泊苷处理的SW620凋亡率通过流式细胞仪检测;Beclinl表达情况经Western blot评估.结果 pSUPER-Becl组细胞血清剥夺后存活能力显著降低(P＜0.05),在血清剥夺24 h后,空白对照组和pSUPER-non组抗凋亡能力比pSUPER-Becl组更强(P＜0.05),星孢菌素处理后,pSUPER-Becl组细胞凋亡最为显著(P＜0.05),用依托泊苷处理后得到相似的结果(P＜0.05);pSUPER-non组与空白对照组细胞中Beclinl的表达随血清剥夺时间的延长呈现上调趋势(P＜0.05),这与LC3的表达变化相一致;而pSUPER-Becl组LC3的表达显著减少(P＜0.05).结论 Beclin1是结直肠癌细胞中自噬和凋亡的关键调节因素,并且维持凋亡和自噬的平衡;Beclinl通过调节细胞自噬活性,在结直肠癌发展与演进中作为一种保护机制,使肿瘤细胞免受到低营养和化疗所致的损伤而持续生存.     

姜黄素对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡及衰老的影响

目的 探讨姜黄素对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬、凋亡及衰老的影响.方法 体外培养HUVECs,分为对照组(只给予培养基),模型组(给予60 μmol/L H2O2),姜黄素组(给予60μmol/L H2O2+ 10 μmol/L姜黄素),3-MA组[(给予60 μmol/L H2O2+ 10μmol/L姜黄素+1 mmol/L3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine)],培养4d后,DCFH-DA法检测细胞培养液中活性氧(ROS)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老程度,Western blot技术检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达水平.结果 与对照组相比,模型组ROS含量、凋亡率、SA-β-gal阳性率及p62水平升高(均P＜0.05),而LC3-Ⅱ/Ⅰ比值差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比,姜黄素组ROS含量、凋亡率及SA-β-gal阳性率及p62水平降低(均P＜0.05),但LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高(P＜0.05).与姜黄素组比较,3-MA组ROS含量、凋亡率、SA-β-gal阳性率及p62水平升高(均P＜0.05),但LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低(P＜0.05).结论 姜黄素可减轻H2O2诱导内皮细胞凋亡及衰老,其机制与提高内皮细胞自噬有关.     

抑制Aurora激酶B的表达可促进骨肉瘤143B细胞凋亡

目的 探讨抑制Aurora激酶B（AURKB）诱导骨肉瘤143B细胞自噬对凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法 构建慢病毒载体（干扰慢病毒Lv/shAURKB和相应的空载慢病毒Lv/shScrambled）,分别感染人源骨肉瘤细胞系143B细胞,并采用氯喹（CQ）进行干预24 h,分别作为：AURKB慢病毒干扰组（plv/shAURKB组）;阴性对照组（plv/NC组）;plv/shAURKB+CQ组;空载慢病毒+氯喹处理组（plv/NC+CQ组）。RT-qPCR检测Lv/shAURKB慢病毒载体对AURKB mRNA的干扰效率。Western blot检测AURKB、P62、LC3、Cleaved-Caspase3、Bcl2、P-ULK1（Ser555）等蛋白表达水平。采用透射电镜和LC3双标荧光法示踪143B细胞内自噬小体并检测自噬水平,流式细胞术和Tunel实验检测细胞凋亡。免疫共沉淀检测AURKB蛋白与ULK1（UNC-51样激酶1）蛋白间的相互作用关系。结果 plv/shAURKB组细胞中AURKB mRNA及蛋白表达水平均低于plv/NC组,差异有统计学意义（P<0.05）;plv/shAURKB组中自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的比率和自噬小体数量高于plv/NC组,而P62的表达低于plv/NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）;plv/shAURKB组细胞中促凋亡蛋白Cleaved-caspase3显著高于plv/NC组（P<0.05）,而抑制凋亡蛋白Bcl2的表达水平显著低于plv/NC组（P<0.05）;与plv/shAURKB组相比plv/shAURKB+CQ组中凋亡相关蛋白 Cleaved-caspase3和Bcl2的表达得到明显回复（P<0.05）。Tunel实验和流式细胞术结果显示,plv/shAURKB组细胞凋亡率显著高于plv/NC组（P<0.05）,plv/shAURKB+CQ组细胞凋亡率与plv /shAURKB组相比得到明显的回复（P<0.05）。plv/shAURKB组细胞中自噬启动蛋白ULK1Ser555磷酸化水平显著高于plv/NC组（P<0.05）。免疫共沉淀检测显示：免疫沉淀AURKB的同时ULK1也发生了沉淀。结论 沉默AURKB能够通过激活ULK1Ser555磷酸化诱导细胞自噬促进骨肉瘤143B细胞凋亡。     

缺氧后不同复氧时间对心肌细胞自噬的影响

［摘要］目的　探讨大鼠心肌细胞（H9C2）不同缺氧复氧（hypoxia reoxygenation,HR）时间对自噬（Autophagy）及细胞活力的影响．方法　体外培养的H9C2细胞按照不同复氧时间随机分为5组,正常对照组（A 组）、缺氧组（B 组）、复氧2 h组（C组）、复氧12 h组（D组）、复氧24 h组（E组）．Western Blot检测各组细胞中LC3 II/LC3 I的表达量,MTT法检测各组心肌细胞的活力．结果　HR模型组心肌细胞活力明显低于正常对照组（P＜0.05）;缺氧组及各复氧组细胞的LC3 II/LC3 I的比值明显高于对照组（P＜0.05）,其中以12 h组比值最高（P＜0.05）;缺氧组及各复氧组的细胞活力明显低于对照组（P＜0.05）,其中以12 h组细胞活力最低（P＜0.05）．结论　利用三气培养箱可以造成H9C2细胞HR损伤;细胞缺氧可以激活细胞自噬,复氧后自噬进一步激活,以12 h自噬激活最明显,24 h下降至缺氧组水平,同时细胞缺氧造成细胞损伤,复氧后细胞损伤进一步加重,在复氧12 h时细胞活力最低,复氧24 h细胞活力得到改善．     

肿瘤相关巨噬细胞通过诱导肝癌细胞自噬降低索拉菲尼的促凋亡作用

目的探讨索拉菲尼治疗肝癌耐药的分子机制,寻找逆转耐药新靶点。方法体外诱导THP-1细胞建立M2型肿瘤相关巨 噬细胞（TAMs）,免疫荧光鉴定M2型TAMs,将SMMC-7721细胞分为空白对照组、M2-TAMs共培养组、索拉菲尼组以及索拉菲 尼与M2-TAMs共培养联合处理组,CCK-8法检测M2-TAMs对索拉菲尼抑制SMMC-7721增殖的影响;Annexin V/PI双染法、 蛋白质免疫印迹法检测使用自噬抑制剂氯喹处理前后M2-TAMs对索拉菲尼促SMMC-7721细胞增殖、细胞凋亡的影响及细胞 凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白的表达量变化。结果索拉菲尼对肝癌细胞SMMC-7721作用48 h的IC50为2.25 μmol/L,索拉菲 尼对与M2-TAMs共培养（共培养给药组）48 h 的SMMC-7721的IC50为4.72 μmol/L。共培养给药组与单独给药组相比细胞凋亡 率明显下降（P<0.01）,Bcl-2 表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值增加（P<0.05）,而自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高（P< 0.001）,p62蛋白表达下调（P<0.05）,自噬水平明显增强。氯喹处理后能明显抑制共培养给药组的细胞增殖（P<0.05）,促进细胞 凋亡（P<0.05）,下调Bcl-2/Bax比值（P<0.01）。结论M2-TAMs可通过促进SMMC-7721细胞自噬,降低索拉菲尼对肝癌细胞的 增殖抑制作用,因此抑制自噬可能是逆转肿瘤微环境诱导索拉菲尼治疗耐药的新靶点。     

甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人小细胞肺癌H446细胞的作用研究

目的探讨甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2-′deoxycytidin,5-Aza-CdR）在小细胞肺癌中发挥抗瘤效应的可能性及可能机制。方法将5-Aza-CdR体外作用于人小细胞肺癌H446细胞,应用光镜、MTT法、流式细胞术、自发光荧光仪等方法观察H446细胞的形态学、增殖能力、细胞周期分布、药物敏感性、caspase-3/7活性及Rh123外排效率等的变化,同时应用甲基化敏感性随机引物PCR（MS-AP-PCR）法检测H446细胞基因组DNA甲基化水平。结果 5-Aza-CdR可明显降低H446细胞的基因组DNA甲基化水平,并抑制其细胞增殖。随着5-Aza-CdR处理时间延长,H446细胞中G1期细胞显著增多[由（56.3±2.5）升至（73.75±2.47）,P〈0.05],G2期细胞显著减少[由（19.1±6.8）降至（9.0±1.5）]。同时,H446细胞增殖能力较对照组显著降低（P〈0.01）,呈浓度依赖性,但对顺铂等化疗药物的敏感性无显著性差异（P〉0.05）。此外,H446细胞的Rh123外排效率显著增加[由（11.5±2.3）升至（23.8±3.0）,P〈0.05],而caspase-3/7活性显著增强[由（257510.5±12861.5）升至（538585.5±10897.2）,P〈0.05]。结论 5-Aza-CdR在体外对人小细胞肺癌H446细胞具有较强的抗癌活性,低甲基化细胞毒作用（包括抑制细胞增殖、G1期阻滞、诱导细胞凋亡）以及恢复抑癌基因表达可能是其主要作用机制。