自噬在青蒿琥酯诱导胰腺癌Panc-1细胞死亡过程中作用的初步研究

目的:探索性地研究一种非凋亡性死亡方式-自噬是否为青蒿琥酯(ART)诱导胰腺癌细胞死亡的途径,为青蒿琥酯治疗胰腺癌提供实验依据,为探寻治疗胰腺癌的新策略提供思路.方法:经丫啶橙(AO)染色、荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞内自噬溶酶体;并应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)观察抑制自噬对ART介导的Panc-1细胞存活率及细胞周期的影响.结果:经丫啶橙染色后提示阴性对照组和ART处理组细胞均存在自噬,两者无明显差异(P＞0.05);流式细胞仪检测显示ART作用于胰腺癌Panc-1细胞并没有诱导细胞内自噬溶酶体明显增加,应用自噬特异性抑制剂3-MA预处理后,荧光显微镜显示抑制自噬对细胞的生长状态无明显影响,台盼蓝排斥实验表明,抑制自噬对ART介导的Panc-1细胞存活率无明显影响;流式细胞仪检测结果显示抑制自噬对ART介导的Panc-1细胞G2/M期阻滞无明显影响(P＞0.05).结论:ART诱导胰腺癌Panc-1细胞死亡的过程中存在自噬,但自噬并非ART诱导产生,也不是引起胰腺癌细胞死亡的方式.     

青蒿琥酯对小鼠免疫功能的影响

本文观察蒿琥酯对正常小鼠免疫器官重量、血清溶菌酶水平、红细胞免疫粘附功能及ＩＬ－２产生的影响，结果表明青蒿琥酯能减轻胸腺重量，降低血清溶菌酶水平，增加红细胞Ｃ３ｂ受体花环率及抑制ＣｏｎＡ诱导的脾细胞ＩＬ－２产生。青蒿琥酯抑制ＩＬ－２产生可能是其免疫抑制的重要机制。     

青蒿琥酯抗肿瘤作用研究进展

目前肿瘤已成为威胁人类健康的主要疾病之一,寻求防治肿瘤的药物成为研究热点。研究发现,青蒿琥酯具有抗多种肿瘤活性,通过影响钙、caspase-3、surivin和p53等使肿瘤细胞发生凋亡,铁介导的自由基的生成、抗血管生成、改变细胞周期和逆转免疫抑制肿瘤的生长,逆转耐药恢复对化疗药物的敏感性;但动物实验表明有一些不良反应发生,青蒿琥酯能否成为新一代抗肿瘤药物,有待进一步研究。     

青蒿琥酯免疫作用的研究

１青蒿琥酯的药理作用青蒿琥酯（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ，简称Ａｒｔ）是我国发现的一种新抗疟药，１９８７年经卫生部批准。它是从中药青蒿中提纯的有效化合物青蒿素的衍生物之一，为二氢青蒿素的半琥珀酸酯，分子式为Ｃ１９Ｈ１８Ｏ８，分子量为３８４．４３。临床使用的...     

青蒿琥酯和青蒿琥酯-盐酸阿莫地喹序贯治疗南苏丹恶性疟疾疗效观察

目的观察注射用青蒿琥酯和青蒿琥酯-盐酸阿莫地喹片序贯治疗南苏丹恶性疟疾的临床效果。方法选择2016年4月至2017年7月南苏丹朱巴中国维和步兵营一级医院收治的恶性疟疾患者31例,均肌肉注射青蒿琥酯注射液(首剂120 mg,4 h后再次肌肉注射60 mg,然后每日肌肉注射60 mg)1~3 d,体温恢复至正常范围后24、48、72 h口服青蒿琥酯-盐酸阿莫地喹片2片,共6片;观察治疗效果。结果 31例疟疾患者的总治愈率为100.0%(31/31),其中3 d治愈率为90.3%(28/31),3~6 d治愈率为9.7%(3/31)。4例(12.9%)患者发生恶心、呕吐、食欲减退、腹胀、腹泻、头晕等轻度不良反应,治疗结束后均自行消失。结论注射用青蒿琥酯和青蒿琥酯-盐酸阿莫地喹片序贯治疗南苏丹恶性疟疾疗效显著,且患者耐受性好。     

大白鼠长期服用青蒿琥酯的安全性评估

大鼠分别每周一次喂服１２０，６０，３０ｍｇ／ｋｇ的青蒿琥酯，连续６个月，于喂药中期，最后一次给药后１天及停药后２周，对大鼠的外观，一般症状，体重，血液学，血清生化学指标及病理学进行观察。结果表明各实验组在服药前后的外观，体征，行为活动和粪便等均无明显异常，各项指标均在正常范围，各服药组与对照组比较无显著性差异；病理学检查未见异常。表明口服使用青蒿琥酯具有较好的安全性。     

青蒿琥酯对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的探讨青蒿琥酯(Artesunate,Art)对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝法分别检测Art对正常和刀豆蛋白A诱导的小鼠脾细胞增殖的影响。结果 Art对正常增殖的淋巴细胞活性无明显影响;剂量≥12.5μg/mL时,对刀豆蛋白A诱导的淋巴细胞增殖表现出较强的抑制活性(P<0.01),且抑制作用随药物浓度的增加而提高。结论 Art具有较强的抑制淋巴细胞增殖活性。     

青蒿琥酯对人子宫内膜癌细胞RL95-2的生长抑制作用

目的 研究青蒿琥酯在体外对人子宫内膜癌RL95-2细胞的生长抑制作用及其可能机制.方法 通过MTT法实验观察青蒿琥酯在体外对RL95-2细胞的抑制作用;透射电镜观察癌细胞的形态学改变;免疫组化检测细胞浆Caspase3活性;流式细胞术观察青蒿琥酯对细胞周期的影响及检测细胞线粒体膜电位△ψm和细胞内ROS水平.结果 青蒿琥酯对RL95-2细胞具有增殖抑制作用,其半数细胞抑制浓度(IC50)为26.29 μg/ml.透射电镜见:细胞呈早期凋亡改变:核染色质聚集于核膜周围,呈团块状;免疫组化检测细胞浆Caspase3表达阳性;流式细胞仪检测:细胞周期阻滞发生在G0/G1期;细胞内ROS升高(P<0.05);细胞线粒体膜电位△ψm降低(P<0.05).结论 青蒿琥酯在体外作用于人子宫颈癌RL95-2细胞,可能通过诱导细胞凋亡抑制癌细胞增殖.     

类胰蛋白酶通过PAR2激活JAK-STAT通路促进小鼠骨髓来源的巨噬细胞向M1表型转换

 目的  研究类胰蛋白酶促进小鼠巨噬细胞表型转换的作用及其机制。方法 体外分离培养小鼠巨噬细胞(对照组),并诱导为M1和M2亚型,经类胰蛋白酶和PAR2激动剂分别作用后,通过real-time PCR和Western blot检测巨噬细胞亚型标志物以及JAK STAT信号通路的变化。结果  成功分离培养小鼠骨髓来源的巨噬细胞,并诱导其分化为M1和M2亚型。PAR2激动剂（2-Furoyl-LIGRLO-amide）和类胰蛋白酶分别与M1型巨噬细胞分别作用后,M1型标记物iNOS和IL-12高于对照组,而M2型标记物arg1和mrc1与对照相比无明显变化,提示类胰蛋白酶和PAR2激动剂可以促进巨噬细胞向M1型转化,而不会促进M1型向M2型转化。PAR2激动剂和类胰蛋白酶分别与M2型巨噬细胞作用后,M2型标记物arg1和mrc1明显下降,而M1型标记物iNOS和 iL-12有所增加,提示类胰蛋白酶和PAR 2激动剂均可促进M2型向M1型转化。类胰蛋白酶作用于M1型巨噬细胞后,JAK2磷酸化水平、STAT和p STAT的表达水平均无明显变化。类胰蛋白酶作用于M2型巨噬细胞后,JAK2的磷酸化随着时间延长明显升高,STAT的磷酸化水平同时升高,提示类胰蛋白酶可以通过和PAR2结合而激活JAK2-STAT信号通路,进而引起M2型向M1型转化。结论  类胰蛋白酶可能通过与其受体PAR2相互作用后激活JAK-STAT通路,促进小鼠骨髓来源的巨噬细胞向M1亚型转化,起到促进炎症发展的作用,从而进一步加重动脉粥样硬化的发展。     

阿米卡星对产ESBL大肠埃希菌的体外杀菌活性

目的：探讨临床常规剂量阿米卡星(amikacin,AMK)对产ESBL大肠杆菌的AMK敏感株是否有杀菌作用．方法：采用时间．杀菌曲线法进行体外实验,AMK浓度根据模拟健康人体内给予400mg／L静脉点滴后2,4,6,8和12h内的平均血药浓度设定．结果：2,4,6h组待测菌分别在设定时间内菌落数降至0．1％以下,8,12h组待测菌菌落数未在设定时间内降至0．1％以下．结论：临床常规剂量的AMK对产ES-BL大肠杆菌(AMK敏感株)具有良好的杀菌活性,其主要杀菌作用在给药后的前4h．     

白细胞介素-10对小鼠中性粒细胞吞噬和杀菌活性的影响

目的: 探讨白细胞介素-10(IL-10)对中性粒细胞(PMN)吞噬和杀菌活性的影响,以了解IL-10对非特异性免疫的作用机制。方法: 小鼠麻醉后从眼球取血,与不同浓度IL-10在37℃水浴中作用2 h,然后加FITC标记大肠埃希菌,置37℃水浴中15 min,溶血剂去除红细胞,流式细胞仪检测各IL-10浓度组PMN的吞噬率。小鼠麻醉后局部消毒,摘眼球,无菌方法取血。与不同浓度IL-10在37℃下作用2 h,然后加大肠埃希菌置37℃水浴1 h,同时设PMN杀菌0 min组、无IL-10的PMN杀菌对照组,各组样品作适当稀释后接种琼脂平板,最后观察各组菌落数,与对照组比较,计算IL-10对杀菌力影响。结果: PMN的吞噬功能在IL-10浓度为1 ng/ml组减低(15.87 ±14.25)%,但差异无统计学意义(P > 0.05)。而PMN的杀菌功能在IL-10浓度为0.1 ng/ml组降低(39.59 ±37.36)%,在IL-10浓度为1 ng/ml组则降低(42.28 ±22.24)%,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论: IL-10对PMN的吞噬功能有轻度的抑制作用,对PMN的杀菌功能有明显的抑制作用,对非特异性免疫亦有抑制作用。     

线粒体靶向KillerRed增强辐射诱导HeLa细胞自噬作用及其机制

目的：探讨线粒体靶向KillerRed（mtKR）增强辐射诱导HeLa细胞线粒体失能及细胞自噬作用,并阐明其相关分子机制。方法：线粒体靶向质粒PTEN诱导激酶1（Pink1）-mtKR转染HeLa细胞后,进行可见光和4 Gy X射线照射,实验分为对照组、空载体组、Pink1-mtKR组、对照+4 Gy X射线照射组、空载体+4 GyX射线照射组和Pink1-mtKR+4 GyX射线照射组。X线照射后24 h,采用流式细胞术检测线粒体膜电位（MMP）和细胞自噬率,采用生化试剂盒检测线粒体呼吸链复合物Ⅰ和Ⅲ水平,采用Western blotting法检测自噬分子P62、Pink1、帕金蛋白（parkin）和线粒体外膜转换酶20（Tom20）的表达量。结果：Pink1-mtKR瞬时转染HeLa细胞后,给予可见光联合4 Gy X射线照射,与对照组比较,Pink1-mtKR组细胞MMP、线粒体呼吸链复合物Ⅰ和Ⅲ水平均明显降低（P<0.05）,细胞自噬率明显升高（P<0.05）,Pink1-mtKR+4 GyX射线照射组细胞MMP、线粒体呼吸链复合物Ⅰ和Ⅲ水平进一步降低（P<0.05）,自噬率进一步升高（P<0.05）。与对照组比较,Pink1-mtKR组和Pink1-mtKR+4 Gy X射线照射组细胞总蛋白中Pink1和parkin蛋白表达量无明显变化,而P62蛋白表达量增加,Pink1-mtKR组和Pink1-mtKR+4 Gy X射线照射组细胞线粒体蛋白中Pink1、parkin和Tom 20蛋白表达量均明显增加。结论：mtKR可增强辐射诱导的线粒体失能和自噬,其机制可能涉及到Pink1/parkin自噬通路的调控。     

同型半胱氨酸对FABP 4 启动子活性的影响

目的 通过克隆脂肪酸结合蛋白4（FABP4）基因启动子,确定其活性核心区和功能片段,分析 心血管疾病独立危险因子同型半胱氨酸（Hcy）对FABP 4 启动子活性的影响。方法 应用生物信息学预测 FABP 4 基因启动子区顺式转录作用元件和反式作用因子,以pGL3-Basic 为载体,采用基因重组法构建启动子 截取片段,转染HEK-293A 细胞,观察不同截取片段的荧光素酶活性变化,确定活性最强的片段。进一步将 核心启动子片段（-2000/-1）转染巨噬细胞,观察不同浓度Hcy 和DNA 甲基化抑制剂5- 氮杂胞苷（AZC） 对FABP 4 基因启动子活性的影响。结果 不同长度截取片段转染HEK-293A 细胞后检测荧光素酶活性结果 显示,与pGL3 对照组比较,-2000/-1 片段转录活性最强。将核心启动子片段（-2000/-1）转染巨噬细胞并 用不同浓度Hcy 干预后,与0μmol/L Hcy 组比较,100 和200μmol/L Hcy 组启动活性升高;与100μmol/L Hcy 组比较,在100μmol/L Hcy 基础上用AZC 干预后,FABP 4 基因启动活性升高（P <0.05）。结论 成功克 隆FABP 4 启动子的4 个片段,且确定FABP 4 基因核心启动子位于-2000/-1 片段;Hcy 可以促进FABP 4 基 因核心启动子片段活性,补充AZC 后可以进一步促进Hcy 引起的FABP 4 启动子活性升高。     

补体在严重骨折病人中性粒细胞杀菌功能降低中的作用

从多处和一处骨折的４１例病人随机采集６８份静脉血，观测分离的中性粒细胞（ＰＭＮ）胞内超氧离子、特殊颗粒（ＳＧ）和胞内杀菌力（ＩＣＢＡ）的水平；观察严重骨折病人血浆对正常人ＰＭＮ胞内、ＳＧ和ＩＣＢＡ的影响以及抗人Ｃ３Ｃ５血清（ＡＨＣ３Ｃ５Ｓ）对上述血浆有害作用的特异阻断效能。结果表明：（１）骨折病人ＰＭＮ的各指标值均低于正常水平，伤后１～４ｄＩＣＢＡ测值最低。（２）ＩＣＢＡ与和ＳＧ的测值相关显著（Ｐ＜０．０５）。（３）病人血浆能显著削减正常人ＰＭＮ胞内ＩＣＢＡ、和ＳＧ的储存，而ＡＨＣ３Ｃ５Ｓ能减轻这些储存的丢失，其净保留率排序为：（７０．７１％）、ＩＣＢＡ（５３．３０％）、ＳＧ（４１．１２％）。结果提示：Ｃ３Ｃ５碎片是ＰＭＮＩＣＢＡ下降的重要直接动因。其机理可能是Ｃ３ｂＣ５ａ对ＰＭＮ的持续作用，使胞内杀菌物质、ＳＧ在吞入病菌前就已消耗殆尽。这对骨折并发全身感染的防治有参考价值。     

干扰Nrf2可增强Hirsutanols A对肿瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨干扰Nrf2对HirsutanolsA抑制人结肠癌细胞SW480、肝癌细胞HepG2细胞增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测不同浓度Hirsutanols A对细胞增殖抑制作用。流式细胞仪检测细胞内ROS的含量;Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡;Western blot检测siRNA干扰NRF2蛋白表达的效果。结果 HirsutanolsA(1.25、2.5、5、10、20和40μmol/L)对SW480、HepG2细胞增殖有明显的抑制作用,并呈现剂量依赖关系;Hirsutanols A处理SW480(15μmol/L)、HepG2(30μmol/L)细胞后,诱导细胞中过氧化氢迅速增加,并引起细胞凋亡,用自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸(5 mmol/L)预处理完全抑制HirsutanolsA诱导的ROS增加及细胞凋亡。siRNA有效地干扰Nrf2表达后可极大增强Hirsutanols A对肿瘤细胞的增殖抑制作用。结论Hirsutanols A通过增加细胞内ROS诱导其凋亡同时激活Nrf2,Nrf2在维持细胞氧化还原稳态中起重要作用,干扰其表达可增强Hirsutanols A的凋亡诱导作用。     

青藤碱通过调节血红素氧合酶-1表达和自噬抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症

目的：探讨青藤碱对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症的影响和机制。方法：以小鼠RAW264.7巨噬 细胞为研究对象,在有或无血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)抑制剂Znpp处理下,采用青藤碱和/或脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)处理RAW264.7巨噬细胞。应用Real-time PCR检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6 mRNA表达, ELISA检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6水平,免疫荧光试验分析细胞自噬情况,Western印迹检测细胞HO-1蛋白表达。 结果：与对照组相比,LPS作用后RAW264.7细胞炎症因子TNF-α和IL-6表达和释放增多,自噬相关蛋白LC3绿色荧光 聚集,HO-1表达水平升高(P<0.05);与LPS组相比,加用青藤碱处理能减少TNF-α和IL-6表达和释放,进一步促进LC3 绿色荧光聚集,增加HO-1水平(P<0.05);用HO-1抑制剂Znpp预处理后,青藤碱对LPS诱导TNF-α和IL-6表达和释放的 抑制作用减弱,LC3绿色荧光聚集减少(P<0.05)。结论：青藤碱能减轻LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症,其机制可 能与HO-1介导的自噬激活有关,这为青藤碱应用于炎症反应的防治提供了实验基础和理论依据。