β—内酰胺丝氨酸样蛋白在高脂诱导的心肌细胞损伤中的作用及机制

目的 探讨高脂对心肌细胞的影响及β-内酰胺丝氨酸样蛋白（LACTB）在其中的作用与机制。方法 将小鼠心肌细胞分为正常组（脂肪酸浓度为0μmol/L）和高脂组（HF组,脂肪酸浓度为400μmol/L）,干预18h。采用siRNA敲低心肌细胞LACTB的表达,进一步将HF组分为对照组（仅予以转染试剂处理）、Scra siRNA组（予以转染试剂+非特异阴性siRNA处理）及LACTB siRNA组（予以转染试剂+ LACTB特异性siRNA处理）。为探讨LACTB在高脂诱导的心肌细胞损伤中可能的作用机制,将LACTB siRNA组分为Vehicle组、N-乙酰半胱氨酸（ NAC）组。通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR及Western blot分别检测细胞LACTB mRNA及蛋白表达,DHE染色及ELISA试剂盒检测细胞内活性氧簇（ROS）含量。结果 高脂可增加心肌细胞的凋亡,增加心肌细胞中LACTB的表达,促进ROS生成（均P＜0.05）。与对照组及Scra siRNA组比较,LACTB siRNA组心肌细胞凋亡与ROS生成进一步增加（P＜0.05）;与此相反,在此基础上使用抗氧化剂NAC部分逆转了心肌细胞凋亡（P＜0.05）。结论 LACTB通过抑制氧化应激反应可缓解高脂诱导的小鼠心肌细胞凋亡。     

罗格列酮对高糖刺激下肾小管上皮细胞凋亡及整合素β1表达的影响

目的 观察罗格列酮(ROS)对肾小管上皮细胞凋亡及整合素β1 (integrin β1)水平的影响.方法 将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞分为空白对照组、正常血糖(5 mmol/L)组、高糖(30 mmol/L)组、ROS (10 μmol/L)组、高糖(30 mmol/L) ROS (5 μmol/L)组和高糖30 mmol/L ROS 10 μmol/L 6组, 采用流式细胞仪检测细胞培养后24、48、72 h的凋亡情况、Western blot及RT-PCR检测不同浓度的ROS对高糖刺激下integrin β1蛋白质和mRNA表达的影响.结果 integrin β1的蛋白质和mRNA的改变趋势相同,高糖组较对照组及正常血糖组增加(P＜0.05) ,经ROS处理后integrin β1的表达较高糖组降低,且与ROS浓度呈剂量相关.各实验组在48 h、72 h的细胞凋亡率与空白对照组相比均降低(P＜0.05);48、72 h的细胞凋亡率低于24 h(P＜0.05),但48 h与72 h间的比较差异无统计学意义.结论 ROS可明显抑制高糖刺激下肾小管上皮细胞integrin β1的表达,且有明显剂量依赖关系,而ROS对细胞凋亡的影响可能与 integrin β1的参与有关.     

内质网应激在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激在高糖诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法采用混合酶一步消化法分离SD大鼠乳鼠心肌细胞,以高糖诱导的心肌细胞为模型,将培养的心肌细胞分为3组,甘露醇对照组(对照组)、高糖(25 mmol/L)组和高糖加抗氧化剂组(NAC组),分别检测各组心肌细胞中活性氧(ROS)的含量,利用RT-PCR法检测心肌细胞中内质网应激标志分子GRP78、CHOP和Caspase-12的表达情况。结果与对照组比较,高糖组心肌细胞中ROS含量明显增多,细胞凋亡率升高(P<0.01),与高糖组比较,NAC组ROS含量减少(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01);与NAC组比较,高糖组内质网应激标志分子的mRNA表达显著上调(P<0.01),抗氧化剂能阻断高糖心肌细胞中内质网应激标志分子mRNA的表达,使其表达明显下调(P<0.01)。结论内质网应激凋亡通路可能参与高糖诱导的心肌细胞凋亡。     

氯沙坦抑制高糖及间歇性高糖诱导NRK-52E细胞凋亡研究

目的:探讨氯沙坦对高糖及间歇性高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E凋亡的抑制作用.方法:作用72 h后,分别采用MTT检测NRK-52E细胞活力,细胞凋亡采用流式细胞仪检测AnnexinⅤ-FITC,细胞ROS含量采用CM2H2DCFDA试剂盒检测.Western blot检测空白组(0 mmol/L)、正常葡萄糖组(5 mmol/L)、高糖干预组(25 mmol/L)、间歇性高糖组(5～25 mmol/L交替)、氯沙坦组(10 μmol/L)、高糖氯沙坦组(10 μmol/L氯沙坦预处理后在高糖培养)、间歇性高糖氯沙坦组(10 μmol/L)中凋亡调控标记蛋白Caspase-3及Caspase-9在NRK-52E细胞表达.结果:高浓度葡萄糖及间歇性高糖均上调Caspase-3及Caspase-9表达,细胞活性降低、细胞凋亡率升高,ROS含量显著上升,其中在间歇性高糖作用更显著.应用氯沙坦干预后可以部分下调高糖或间歇性高糖中Caspase-3及Caspase-9表达,细胞凋亡率显著下降,ROS含量下降.结论:氯沙坦可通过抑制高糖及间歇性高糖诱导NRK-52E细胞氧化应激从而减轻细胞凋亡.     

红景天苷对H9c2心肌细胞应激高糖损伤的保护作用及机制研究

目的?利用氧化应激联合高糖复合损伤心肌细胞,建立H9c2心肌细胞应激及高糖损伤模型,探讨应激高糖H9c2心肌细胞线粒体动力学相关蛋白表达、线粒体膜电位水平及细胞凋亡的影响,以及红景天苷对应激高糖H9c2心肌细胞的保护作用及其机制。方法?将正常培养的H9c2细胞随机分为5组:①对照组（C组,正常培养基）;②高糖组（G组,高糖培养基）;③H₂O₂组（H组,H₂O₂处理2小时后,更换为正常培养基继续培养）;④高糖+H₂O₂组（GH组,H₂O₂及高糖处理2小时后,更换为高糖培养基继续培养）;⑤红景天苷+高糖+H₂O₂组（SGH组,H₂O₂+高糖+红景天苷处理2小时后,更换为红景天苷+高糖培养基继续培养）。分组加药培养后,利用流式细胞技术分析各组H9c2心肌细胞的凋亡率;Western blot分别检测线粒体动力学相关蛋白Drp1、OPA1的表达水平;JC-1荧光染色法检测各组心肌细胞的线粒体膜电位水平。结果?①与C组比较,G组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平显著升高,OPA1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;线粒体膜电位下降,细胞凋亡率升高（P＜0.05）;与C组比较,H组及GH组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平显著升高,OPA1蛋白表达水平显著降低,线粒体膜电位显著下降,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。②与GH组比较,SGH组Drp1蛋白表达水平显著降低,OPA1蛋白表达水平显著升高,线粒体膜电位显著升高,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。结论?①氧化应激联合高糖通过降低线粒体膜电位,抑制H9c2心肌细胞线粒体动力学平衡,增加心肌细胞凋亡,从而损伤心肌细胞。②红景天苷可抑制氧化应激联合高糖引起的H9c2心肌细胞凋亡,其机制与升高线粒体膜电位水平以及增加线粒体OPA1蛋白表达、抑制Drp1蛋白表达从而改善线粒体动力学平衡有关;红景天苷对应激高糖心肌细胞具有一定的保护作用,值得进一步深入研究。      

莱菔硫烷对高糖诱导心肌细胞线粒体损伤的保护作用

目的 探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)预处理对高糖诱导心肌细胞线粒体损伤的保护作用.方法 用高糖(33 mmol/L)作用于H9c2(2-1)大鼠心肌细胞24 h建立细胞高糖损伤模型,用噻唑蓝染色法检测不同剂量(1、5、7.5、10 μmol/L)莱菔硫烷预处理24 h和5μmol/L莱菔硫烷预处理不同时间(12、24、36、48 h)的细胞线粒体琥珀酸脱氢酶(succinie dehydrogenase,SDH)活性;荧光酶标仪检测细胞的活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生速度和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP);应用透射电镜观察线粒体形态.结果 与对照组比较,模型组SDH活性下降(P＜0.05),莱菔硫烷组SDH活性显著高于模型组(P＜0.05).与模型组比较,莱菔硫烷组(5μmol/L,24 h)ROS产生速度下降(P＜0.01),MMP上升(P＜0.01),线粒体损伤性形态变化及细胞早期凋亡形态改变减轻.结论 莱菔硫烷能够抑制高糖对心肌细胞线粒体造成的损伤.     

迷迭香酸激活Parkin介导的线粒体自噬并抑制高糖诱导的心肌细胞肥大

目的 评估迷迭香酸对高糖培养下心肌细胞线粒体自噬水平以及细胞肥大的影响。方法 体外培养H9c2大鼠心肌母细胞,分为对照组（葡萄糖5.5 mmol/L）、高糖组（葡萄糖25 mmol/L）、高糖+迷迭香酸组（葡萄糖25 mmol/L+迷迭香酸50 μmol/L）、高糖+迷迭香酸+Parkin-siRNA组（葡萄糖25 mmol/L+迷迭香酸50 μmol/L+Parkin-siRNA转染）;Western blot法测定PINK1、Parkin、LC3II/LC3I蛋白表达水平,透射电子显微镜下观察线粒体自噬体形成情况,流式细胞术检测活性氧物质（ROS）与凋亡水平,分光光度法检测细胞线粒体呼吸链复合酶活性,荧光酶标法检测线粒体膜电位水平,3H-亮氨酸标记法检测细胞蛋白质合成速率,光学显微镜下检测心肌细胞表面积。结果 迷迭香酸可提高高糖培养下心肌细胞内PINK1、Parkin、LC3-II/LC3-I蛋白表达水平（P<0.05）,增多线粒体自噬体数量,并抑制高糖诱导的ROS生成、恢复线粒体呼吸链复合酶活性与线粒体膜电位水平（P<0.05）,抑制高糖诱导的细胞凋亡（P<0.05）,并降低心肌细胞表面积与蛋白质合成速率（P<0.05）。利用Parkin-siRNA抑制心肌细胞线粒体自噬,则阻断了迷迭香酸对高糖培养下心肌细胞氧化应激与心肌细胞肥大的保护作用（P<0.05）。结论 迷迭香酸可通过激活Parkin介导的线粒体自噬,对高糖诱导心肌细胞的氧化应激损伤有保护作用,并改善心肌细胞肥大。     

肉桂醛促进高糖条件下皮肤成纤维细胞迁移及机制研究

目的 探讨肉桂醛(cinnamic aldehyde,CA),核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid2-related factor,NRF2)通路激动剂对高糖条件下成纤维细胞迁移的影响及可能机制.方法 体外培养HS27细胞,分为正常对照组(NG,5.5 mmol/L)、高糖组(HG,30 mmol/L)、高糖(30 mmol/L)+肉桂醛(20μmol/L)组、高糖(30 mmol/L)+Con siRNA组、高糖(30 mmol/L)+NRF2 siRNA组.迁移实验观察CA对高糖条件下HS27迁移的影响.采用western blot分析CA干预后NRF2及下游HO-1,增殖和凋亡相关蛋白P21和P53的表达情况.2',7'-二氯荧光素二醋酸(DCF)法检测CA对高糖条件下细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平的影响.采用NRF2siRNA抑制NRF2通路,观察HS27细胞迁移和氧化应激的变化.结果 与正常对照组相比,HS27在高糖情况下,迁移能力明显降低(P＜0.05),CA干预后,高糖对HS27迁移能力的抑制作用得到改善(P＜0.05).进一步研究发现,CA上调NRF2和HO-1,减轻高糖导致的ROS增加([(4 360 935 ±1 445 723)vs(1 982 673 ±208 109),P＜0.05]).然而,高糖条件下敲除NRF2后,细胞内ROS产生进一步增多,并加剧对成纤维细胞迁移能力的抑制[(0.046 ±0.018)vs(0.318 ±0.032),P＜0.05].结论 CA促进高糖情况下成纤维细胞迁移、缓解氧化应激损伤,并有可能部分依赖于NRF2通路激活.     

氯沙坦抑制高糖及间歇性高糖诱导NRK-52E细胞的转分化作用

目的 探讨氯沙坦对高糖及间歇性高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E转分化的抑制作用。方法 实验分为空白组(0 mmol/L葡萄糖)、正常葡萄糖组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖干预组(25 mmol/L葡萄糖)、间歇性高糖干预组(5 mmol/L葡萄糖/25 mmol/L葡萄糖交替)、氯沙坦干预组(10 μmol/L氯沙坦)、氯沙坦高糖干预组(10 μmol/L氯沙坦预处理后再高糖培养)、氯沙坦间歇性高糖干预组(10 μmol/L氯沙坦预处理后再间歇性高糖培养), 根据分组对NRK-52E细胞施加相应因素作用72 h后, 蛋白免疫印迹法检测转分化标志物转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2(MMP-2)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及甲状旁腺素相关肽(PTHrP)在细胞中的表达, CM2H2DCFDA试剂盒检测细胞ROS含量。结果 高糖干预及间歇性高糖干预组TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP-2、α-SMA和PTHrP表达上调, ROS含量明显上升, 间歇性高糖作用更显著。应用氯沙坦干预后可以部分下调高糖或间歇性高糖诱导的TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP-2、α-SMA以及PTHrP表达, 降低细胞ROS含量。结论 氯沙坦可抑制高糖及间歇性高糖诱导的NRK-52E细胞转分化作用。     

脂联素对高糖环境心肌细胞氧化应激及凋亡的影响

目的通过高糖环境培养人心肌细胞(human cardiac myocytes,HCM)建立心肌细胞氧化应激模型,观察脂联素(ad-iponectin,ADPN)对心肌细胞各氧化应激指标及凋亡的影响,从而揭示脂联素对心肌细胞可能的保护机制。方法将体外培养的人心肌细胞分为3组:对照组、高糖组、高糖+脂联素组,分别干预24、48、72h。在倒置显微镜下观察心肌细胞形态变化,采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量。用代巴比妥酸法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,用荧光定量RT-PCR法测定衔接蛋白(adaptinP66Shc)、血红蛋白加氧酶-1(heme oxygenase-1,Ho-1)在各个时间点上的表达,通过流式细胞术检测心肌细胞的凋亡率。结果与对照组相比,高糖组SOD含量显著下降,MDA含量显著上升(P<0.05),与高糖组相比,脂联素组SOD含量显著上升,MDA含量显著下降(P<0.05),并且呈时间依赖性。与对照组相比,高糖组Ho-1 mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达亦增高(P<0.05)。与对照组相比,高糖组P66Shc mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达降低(P<0.05),呈时间依赖性。高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而脂联素组细胞凋亡率较高糖组显著下降。结论脂联素可通过减少P66Shc表达、增加Ho-1表达,增加抗氧化能力,减少氧化应激反应,减少细胞凋亡,可能对糖尿病心肌细胞起保护作用。     

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高脂高铁致大鼠肝纤维化模型的初探

目的 验证铁是否能够加速大鼠肝脏纤维化的进程。方法 大鼠分为对照组、高脂组、高铁组、高脂高铁组、高脂去铁组,每组24只。分别自由摄取普通饲料和高脂饲料的同时,高铁组、高脂高铁组大鼠隔天肌注右旋糖酐铁50 mg/kg;高脂去铁组大鼠处死前一个月尾静脉注射甲磺酸去铁铵30 mg/kg,3次/周;干预第4、5、6月分别选取8只大鼠,检测透明质酸（hyaluronic acid,HA）、Ⅳ型胶原（collagen type IV,COL-IV）、层粘连蛋白（laminin,LN）、Ⅲ型前胶原（procollagen Ⅲ,PC Ⅲ）;Masson染色观测肝脏病理改变。结果 干预第5个月高脂高铁组HA水平高于对照组与高脂组;第6个月高脂高铁组COL-IV、LN水平高于高脂组,干预第6月高脂高铁组血清PC Ⅲ水平达到高脂饲料组的1.63倍。第6个月高脂高铁组肝脏标本Massom染色见显著的胶原沉积,但其他组未见胶原沉积。结论 铁可加速高脂所致的大鼠肝脏纤维化进程。     

高度近视白内障超声乳化摘除术

目的：总结高度近视（眼轴长度28.61-33.95mm)白内障超声乳化术的疗效。方法：对白内障52例、74眼施行超声乳化术。结果：术后矫正视力≥0.3者38眼,占51.4%,0.1-0.3者29眼,占39.2%,0.02-0.1者7眼。占9.4%,术后发生视网膜脱离1眼。占1.4%。结论：高度近视白内障超声乳化术后视力恢复快,并发症少是较理想的手术方式。     

创建"和谐优质高效低廉"品牌医院

高州市人民医院在发展过程中,确立了创建“和谐优质高效低廉”品牌医院办院方向,通过提供“三优”服务、建立成本低收费廉的高效运行机制、加强行风建设,提高创建和谐医院品牌影响力,使比较贫困患者享受到优质实惠的医疗服务,医院得到健康发展,获得殊荣。     

高龄、高危肺癌患者的手术治疗

目的 :探讨高龄、高危肺癌病人肺切除术的危险因素。方法 :本组 6 7例符合诊断标准的肺癌患者 ,既使术前肺功能危险性指标临界值或不满意 ,而右心射血分数 (RVEF) >4 0 %。仍可安全手术。结果和结论 :老年肺癌肺切除术除常规术前肺切除测定外 ,更应重视其右心功能与肺切除术的危险关系 ,RVEF更适合于作为高龄、高危肺癌患者的肺切除术的危险性评价指标。     

A comparison of isocaloric high carbohydrate and high fat test meals in diabetics

Ten diabetic patients were given test meals at breakfast and lunch on successive days to compare the acute glycaemic responses to meals either high (65%) (HC) or extremely low (12%) in carbohydrate; the latter was very high (71%) in fat (HF). The meals were isocaloric and fibre content, though higher in HC, was within the range of the average British intake for both diets. The mean fasting blood glucose levels were similar on the 2 days (9.8 mmol/l; 9.6 mmol/l) but mean peak post-prandial levels were significantly greater after the HC meals (17.7 mmol/l after breakfast and 14.1 mmol/l after lunch) than after the HF meals (11.7 mmol/litre after breakfast; P less than 0.02; 8.1 mmol/l after lunch; P less than 0.02). Mean blood glucose value for the 6-hr study period was significantly higher after the HC meals (14.0 mmol/l) than after the HF meals (9.2 mmol/l; P less than 0.001). There was no significant difference in mean fasting, peak or total mean triglyceride level. In the short term, therefore, meals very low in carbohydrate and high in fat are followed by a lower glycaemic response than meals high in carbohydrate but with only a usual (22 g/day) fibre content. Delayed gastric emptying after HF meals may well contribute to the results but long-term use of such HF meals is not advised in view of the extremely high fat content.     

高同型半胱氨酸及高脂蛋白a与冠心病的相关性

目的 了解血清高同型半胱氨酸（HCY）及高脂蛋白a[Lp（a）]与冠心病（CHD）的相关性及其监测意义。方法采用循环酶法和免疫透射比浊法分别测定120名CHD患者和80名健康对照者的血清HCY和Lp（a）,然后比较冠心病组和对照组的血清HCY和Lp（a）水平,同时分析HCY和Lp（a）与冠心病的相关性。结果CHD组血清HCY和Lp（a）水平（27．2±12．8,436．5±168．2）比对照组（10.8±3．6,98．6±9．8）有显著性增高,差异有统计学意义（P〈0．01）;血清HCY和Lp（a）与冠心病的相关性分别是0．683和O．583。结论HCY和Lp（a）均与患CHD的危险性呈正相关,临床监测并控制血HCY和Lp（a）的水平对CHD的诊疗和预后有重要意义。