结肠腺癌与腺瘤的蛋白质组表达差异

目的 通过比较结肠腺癌与结肠腺瘤组织的蛋白质组表达差异,寻找结肠腺癌相关的蛋白质,筛选结肠癌早期诊断的分子标志物.方法 应用蛋白质组学技术,对8例结肠腺癌组织和8例结肠腺瘤组织进行胶内差异双向电泳(2-D),选择差异表达超过2倍的蛋白点进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析.结果 成功建立结肠腺癌和结肠腺瘤的双向凝胶电泳图谱,结肠腺癌和腺瘤组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3289和2986,其中表达差异超过2倍的斑点共有31个,质谱分析和数据库检索共鉴定出18个蛋白质,包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase等.结论 蛋白质组学可提示结肠腺癌与腺瘤组织间的蛋白质表达差异,而对相关差异表达蛋白的研究有可能为结肠癌的早期诊断和治疗提供新的分子标记物.     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

蛋白质组学方法分析PRL-3功能相关蛋白

目的 蛋白质组学方法分析转染肝再生磷酸酶-3(PRL-3)后结肠癌细胞LoVo的蛋白表达改变.方法 构建绿色荧光蛋白载体PAcGFP-C3-PRL-3并转染至结肠癌细胞LoVo中,获得稳定表达GFP-PRL-3的结肠癌细胞LoVo-PRL-3.Western blot检测转染后细胞的PRL-3表达.采用双向凝胶电泳(2-DE)分离LoVo-PRL-3细胞及转染空载体PAcGFP-C3的LoVo-Control细胞总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质.结果 Western blot结果显示PRL-3在LoVo-PRL-3细胞中高表达,而未检测到在LoVo-Control细胞中表达.通过双向凝胶电泳图谱分析发现20个差异蛋白质斑点,质谱成功鉴定出17种蛋白.与LoVo-Control细胞比较,10种蛋白在LoVo-PRL-3细胞中高表达,而7种蛋白在LoVo-PRL-3细胞中表达降低.结论 成功鉴定出PRL-3功能相关蛋白,为进一步研究PRL-3促进结直肠癌转移机制奠定基础.     

人胰腺导管腺癌组织及癌旁组织双向电泳图谱的差异分析

目的:探讨人胰腺导管腺癌组织和癌旁组织之间差异的表达蛋白。方法:利用双向凝胶电泳（2-DE）对8例胰腺导管腺癌组织和癌旁组织的总蛋白进行分离,并用质谱仪对两组间差异蛋白质点进行肽指纹谱和串联质谱鉴定。利用蛋白质印迹分析和免疫组化法检测差异蛋白在胰腺癌和癌旁组织的表达。结果:2-DE显示,肿瘤组织中有28个蛋白质点表达上调,17个表达下调。上述蛋白质点经质谱鉴定得到30个蛋白质,包括酶类、抗氧化蛋白、信号转导蛋白、钙结合蛋白、结构蛋白及分子伴侣等。Western blot和免疫组化结果显示差异表达蛋白annexin II在胰腺癌组织中表达上调,与2-DE结果一致。结论:以2-DE为基础的蛋白质组学技术是研究肿瘤的一种重要手段。本实验所得的annexin II等差异表达蛋白可能成为潜在的诊断胰腺癌的分子标志或控制肿瘤生长的治疗靶点。     

急性热应激引起大鼠附睾早期微环境的变化

目的研究热应激引起大鼠附睾早期微环境的变化。方法建立大鼠附睾热应激动物模型,42℃水浴30min,随后提取应激组和正常组附睾头部蛋白质,利用双向凝胶电泳分离、质谱鉴定大鼠附睾受热后差异变化的蛋白质;进一步通过生物信息学、Western blot和免疫组化等方法进行验证。结果蛋白质组学研究二维电泳图谱能检测到92个蛋白,经过质谱分析得出其中有24个蛋白具有意义,其中有12个蛋白上调,12个蛋白下调。热应激组与正常组有显著的差异蛋白质,这些具有意义的差异蛋白质经过免疫组化和Westem blot分析法也得出一致性的结论。结论热应激能导致附睾早期微环境变化,尤其是对附睾蛋白质差异表达以及对精子在附睾中的成熟过程有着显著的影响。     

比较蛋白质组学技术鉴定和筛选胃腺癌组织分化相关蛋白质

目的 应用比较蛋白质组学技术对不同分化程度胃癌组织的差异蛋白质进行筛选鉴定.方法 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)结合液质联用(LC-MS)技术对8例不同分化胃腺癌组织的差异蛋白质进行鉴定,并应用实时荧光定量核酸扩增检测系统(QPCR)和Western blot法对鉴定出的部分因子进行验证.结果 差异表达明显的蛋白质电泳条带15条,共鉴定出355种蛋白质,筛选后经功能分析确定8种可能与肿瘤分化有关的蛋白质,为人肌动蛋白素(Cofilin)、蛋白酶体激活亚单位1(PSME1)、Ras相关蛋白7a(RAB7a)、细丝蛋白A(FLNa)、丙酮酸激酶(PK)、谷胱甘肽巯基转移酶-π-1( GST-π-1)、过氧化物酶5(PRDX5)、actin相关蛋白.对Cofliin、Ras相关蛋白7a、PSME1进行验证,证实这些因子的表达与蛋白质组学鉴定的结果相符.结论 分化程度不同的胃腺癌组织蛋白质表达存在差异.     

蛋白质组技术在胃癌相关标志物筛查中的应用

目的 建立胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，鉴定差异表达蛋白，从中发现有意义的胃癌相关标志物。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）分离胃癌组织和正常胃组织总蛋白，银染显色，PDQuest软件分析，从中选取差异表达蛋白质点，通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）或MALDI-TOF-TOF-MS鉴定差异表达的蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的胃组织双向凝胶电泳图谱；发现23个差异表达蛋白质，其中15个得到鉴定，在肿瘤组织中高表达的有10个，其余5个在肿瘤组织中低表达。结论 建立了胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，并应用质谱技术鉴定了15个差异表达蛋白质。     

人去浆膜层胆囊组织蛋白质表达谱的建立与分析

目的 采用蛋白质组学技术分析胆固醇结石患者与正常人去浆膜层胆囊组织蛋白表达谱的差异,通过质谱技术鉴定差异表达蛋白,为胆石成因提供实验依据.方法 提取胆固醇结石患者和正常人去浆膜层胆囊组织蛋白,构建相应的双向电泳蛋白质表达谱并应用ImageMaster图像分析软件获得差异蛋白点信息,采用质谱鉴定差异表达蛋白质.结果 胆固醇结石患者与正常人去浆膜层胆囊组织差异蛋白质表达谱均获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,差异表达谱结果显示19个蛋白点在两者之间差异较大,质谱成功鉴定11个,1个重复.其中Tropomyosin 4（TPM4）、Transgelin （sm22）、Transthyretin （TTR）、CyanometRhbl.1、Haptoglobin-related protein precursor、Chain A,the structure of Holo type human Cu,Zn superoxide dismutase在结石组中表达上调,Myosin、Peroxiredoxin 3（Prdx3）、Hypothetical protein、T cell receptor alpha chain在结石组中表达下调.TTR、TPM4、SM22、Prdx3蛋白差异为Western blotting和RT-PCR所验证.结论 初步建立了胆固醇结石患者与正常人去浆膜层胆囊组织的差异蛋白质表达谱,分析、鉴定并验证了差异蛋白点,为胆固醇结石形成的关键调控蛋白质研究提供实验依据.     

瘢痕疙瘩与正常皮肤的蛋白质组学研究

目的 通过比较瘢痕疙瘩与正常皮肤组织的蛋白质组表达差异,筛选出与瘢痕疙瘩产生相关的蛋白质.方法 2010年1月至6月运用蛋白质组学技术,对8例瘢痕疙瘩组织和3例正常皮肤组织进行差异双向凝胶电泳(2D-DIGE),选择差异蛋白质斑点,进行基质辅助激光解离飞行时间(MALDI-TOF/TOF)质谱分析和生物学信息分析.结果 成功建立瘢痕疙瘩和正常皮肤组织的双向凝胶电泳图谱,瘢痕疙瘩和正常皮肤组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为2978和3053,其中表达差异超过4倍的斑点共有40个,质谱分析和数据库检索共鉴定出32种蛋白质,包括上调蛋白有20种,下调蛋白有12种.从功能上可分为载体蛋白(3种)、信号转导蛋白(4种)、增殖凋亡相关蛋白(2种)、细胞骨架蛋白(6种)、细胞外基质蛋白(8种)、免疫因子(3种)、肿瘤相关蛋白(2种)和未知功能蛋白(4种).结论 蛋白质组学能较好地显示瘢痕疙瘩与正常皮肤组织间的蛋白质表达差异.对这些差异蛋白质进一步深入研究,将有助于揭示瘢痕疙瘩的发病机制,也为发现新的治疗靶点提供线索和依据.

Abstract：

Objective To investigate and search correlative proteins of keloid by comparing the results of differential proteomic analysis between keloid and normal skin. Methods From January 2010 to June 2010 two-dimensional gel electrophoresis was used to define patterns of protein expression in keloid skin from 8 patients and matched normal skin from 3 patients. Differential expression protein spots were showed and analyzed by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flying/time of flying(MALDI-TOF/TOF) mass spectrometry. Results This study succeeded to provide a two-dimensional protein profiling comparison between normal skin and keloid. Gel-analysis software identified an average of 2978 spots in keloid while 30S3 spots in normal skin and statistical filtering yielded 40 spots of a 4-fold change, 32 of which were identified by using mass spectrometry, 20 were up-regulated and 12 were down-regulated. Functional analysis revealed that these proteins could be fractionated to carrier proteins (3 proteins), signal transduction proteins (4 proteins) , proliferation and apoptosis related proteins (2 proteins) , cytoskeleton proteins(6 proteins) , extracellular matrix proteins(8 proteins) , immunity related proteins (3 proteins) , tumor related proteins (2 proteins) , and function unknown protein (4 proteins). Conclusions Proteomic analysis can identify the proteins with variance of keloid versus normal skin. The further research to these differential proteins may help reveal the pathogenesis of keloid and provide new treatments for keloid.     

胃癌基因表达谱和蛋白质表达谱的分析研究

目的从转录组水平和蛋白质组水平寻找胃癌组织与正常胃组织间的差异表达基因和蛋白。方法应用含有14592个已知基因及表达序列标签的cDNA表达谱芯片获取基因表达谱信息．50％以上样本中Cy3／Cy5荧光强度比大于或等于2和小于或等于0．5的基因分别为在胃癌中表达上调或下调的基因。采用双向凝胶电泳（2-DE）分离32例经手术切除的胃癌患者的胃癌组织和正常胃组织总蛋白．对差异表达蛋白质点利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）进行分析．获取肽质量指纹图谱（PMF）。同时搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果与正常组织相比．胃癌组织中差异表达基因共有387个,其中表达上调的有149个基因．上调超过3倍的有29个基因：表达下调的有238个基因．其中下调超过5倍的有21个基因。在蛋白质水平鉴定了15个差异表达蛋白．在肿瘤组织中高表达的有10个．其余5个在肿瘤组织中低表达。胃癌中过表达的基凶与蛋白产物主要与细胞骨架运动、细胞增殖及信号传导有关．表达下调的则主要与细胞免疫防御、毒理代谢有关。结论从转录组水平和蛋白质组水平对胃癌基因表达谱进行分析．不仅有助于从分子水平全方位理解胃癌的发病机制及生物学特性．同时也有助于进一步发现新的胃癌相关标志物和基因治疗的靶点。     

细胞增殖标记物微型染色体维持蛋白2在结肠腺瘤和腺癌中的表达差异及意义

目的 探讨细胞增殖标记物MCM2在结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜中的表达差异及在不同临床病理特征的结肠腺瘤巾的表达差异.方法 应用免疫组织化学(免疫组化)SP法检测MCM2在正常结肠黏膜、结肠腺瘤及结肠癌中的表达部位;应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测MCM2 mRNA在12例结肠癌、33例结肠腺瘤及5例正常黏膜中表达量的差异并分析其意义,同时用REST-XL(C)软件分析不同临床病理特征的腺瘤之间MCM2的表达差异及其意义.结果 MCM2在正常黏膜中仅表达在腺凹底部,而在结肠腺瘤及腺癌组织中均呈全层上皮表达,但两者在MCM2 mRNA水平上的表达量差异有统计学意义(P=0.001).结肠腺瘤与正常黏膜相比较,MCM2表达上调,但差异无统计学意义(P＞0.05).不同临床病理特征的结肠腺瘤之间MCM2表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MCM2在正常黏膜和结肠肿瘤中表达部位不同,且在结肠腺瘤及结肠癌中的表达量差异显著,可能作为早期筛查诊断结肠癌及评估腺瘤突变的指标之一.     

大肠癌发生和肝转移的蛋白质组学研究

目的 利用蛋白质组研究技术分离、鉴定大肠癌肝转移相关蛋白。方法 用等电聚焦／SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳对比分析12例大肠癌患者原发灶、癌旁肠黏膜和肝转移灶中疏水蛋白表达差异,经肽质量指纹谱分析、鉴定差异蛋白点。结果 双向电泳图像对比分析表明,正常结直肠黏膜组织、癌原发灶和肝转移灶中蛋白质表达有显著差异。对9个差异表达蛋白点分析鉴定,钙调蛋白联合体、核糖核酸酶-6-前体蛋白以及XP-040720蛋白在正常肠黏膜表达,但在癌原发灶和肝转移组织中表达缺失。前阿朴脂蛋白在正常肠黏膜、癌原发灶及肝转移灶中呈递增表达。β-珠蛋白在肝转移灶和正常肠黏膜中表达,而在癌原发灶中表达缺失。Cdc42蛋白在肝转移灶中特异表达。差异蛋白点C4、N7和N9肽指纹谱与已知蛋白同源性低,为候选大肠癌发生和肝转移相关新蛋白。结论 钙调蛋白联合体、核糖核酸酶-6-前体蛋白、α-甘露糖苷酶Ⅰ表达缺失与大肠癌发生和肝转移有关;前阿朴脂蛋白增强表达与大肠癌发生和肝转移有关;Cdc42蛋白、β-珠蛋白表达与肝转移有关。     

Proteome analysis of round-headed and normal spermatozoa by 2-D fluorescence difference gel electrophoresis and mass spectrometry

Globozoospermia is a severe form of teratozoospermia characterized by round-headed spermatozoa with an absent acrosome, an aberrant nuclear membrane and midpiece defects. Globozoospermia is diagnosed by the presence of 100% round-headed spermatozoa on semen analysis, and patients with this condition are absolutely infertile. The objective of this study was to investigate the differences in protein expression between human round- headed and normal spermatozoa. Two-dimensional （2-D） fluorescence difference gel electrophoresis （DIGE） coupled with mass spectrometry （MS） was used in this study. Over 61 protein spots were analysed in each paired normal/round-headed comparison, using DIGE technology along with an internal standard. In total, 35 protein spots identified by tandem mass spectrometry （MS/MS） exhibited significant changes （paired t-test, P 〈 0.05） in the expression level between normal and round-headed spermatozoa. A total of nine proteins were found to be upregulated and 26 proteins were found to be downregulated in round-headed spermatozoa compared with normal spermatozoa. The differentially expressed proteins that we identified may have important roles in a variety of cellular processes and structures, including spermatogenesis, cell skeleton, metabolism and spermatozoa motility.     

Development of 1,2-dimethylhydrazine-induced colonic neoplasia in rats and changes in cellular proteins of colonic mucosa

Development of 1,2-dimethylhydrazine (DMH) induced colonic neoplasia were studied using male Wistar rats given 120 mg DMH per kg s.c. weekly for 5 weeks. During the course of colon carcinogenesis, changes in cellular proteins of colonic mucosa were analysed by two-dimensional gel electrophoresis. Rats were sacrificed just before and at 10, 15 and 20 weeks after the initial DMH treatment together with controls. Incidence and number of colorectal tumors gradually increased. At the 20th week, colon carcinoma was found in every rat. Most tumors (92%) were found in the major flexure and the distal colon and rectum, while only 1% and 7% were found in the cecum and proximal colon, respectively. Histologically, most (92%) were classified as well differentiated or moderately differentiated adenocarcinoma. Eighty-five percent of the tumors were semipedunculated or sessile without depression, and the remainder were sessile with depression. All of the latter were carcinomas with invasion to the submucosa or further. Two-dimensional gel electrophoresis revealed 180 spots in cellular proteins before and after the initial treatment. Three new spots appeared and four spots greatly increased during the course of carcinogenesis, while one spot disappeared. The above results suggest that the appearing and increasing spots may be associated with cancer and that the disappearing spot may be associated with the normal colon.     

人体失神经萎缩骨骼肌蛋白质组学的初步研究

目的采用蛋白质组学分析方法研究人类失神经萎缩骨骼肌肌细胞的蛋白质组表达变化及其临床意义。方法以臂丛神经根性撕脱伤患者为对象,对失神经萎缩的肱二头肌、小鱼际肌及其健侧胸锁乳突肌肌纤维组织中的蛋白质进行二维电泳和PD-Quest分析,对差异蛋白质用MALDI-TOF质谱仪进行Trypsin酶解指纹图测定。结果(1)初步建立了人体骨骼肌蛋白质组学研究的技术平台,建立了失神经萎缩肱二头肌、小鱼际肌以及健侧胸锁乳突肌的凝胶图像的Matchset;(2)在失神经萎缩肌肉中800个蛋白质共有32个发生了变化,表达变化蛋白质主要集中在pI4~8,Mr相对分子质量为30000~50000范围内;(3)发现了肌肉萎缩部分的可能相关蛋白,在萎缩组共有6个点的表达量增加,24个点的表达量降低,两者差异有统计学意义(P<0.05);其中7个蛋白质在肱二头肌和小鱼际肌中的表达量是不同的。被鉴定的7个蛋白质可归类为代谢蛋白、分子伴侣蛋白、收缩性蛋白。结论该结果证实使用蛋白质组学分析骨骼肌萎缩相关蛋白质是可行和有效的,并首次提供了人类健康骨骼肌组织蛋白质2-D图谱。研究了失神经萎缩骨骼肌蛋白质组学的结果表明,细胞内蛋白质合成、防止自由基团的攻击、蛋白质错误折叠的修复以及细胞中蛋白质分选均与人类臂丛损伤后失神经骨骼肌萎缩的病程相关。     

胰腺癌血清相关蛋白质分子的差异表达

目的 利用双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)的方法建立胰腺癌、慢性胰腺炎和正常对照人群外周血清的差异蛋白质双向凝胶电泳图谱并分析差异蛋白质点.方法 双向差异凝胶电泳分离20例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者和20例正常对照组人群外周血清蛋白,比较不同血清中蛋白质表达的差异.结果 成功建立胰腺癌、慢性胰腺炎和正常人之间的外周血清蛋白质双向差异凝胶电泳图谱,软件分析共发现了168个明显差异表达的蛋白质点,其中在胰腺癌组与正常对照组的比较中有22个蛋白质点在胰腺癌血清中表达上调,29个蛋白质点下调;在胰腺癌组和慢性胰腺炎组的比较中有24个蛋白质点在胰腺癌血清中表达上调,54个表达下调;在慢性胰腺炎组和正常对照组的比较中有20个蛋白质点表达上调,19个蛋白质点表达下调.结论 双向差异凝胶电泳是快速有效的分离蛋白质新的方法,得到的双向差异凝胶电泳图谱以及显著表达差异的蛋白质点为质谱鉴定提供了实验基础.

Abstract：

Objective To analyze and compare the proteomes expressed by human pancreatic carcinoma, chronic pancreatitis and normal control groups. Methods Differencial expression of the proteomes in peripheral serum was analyzed by fluorescence 2-D difference gel electrophoresis (2D-DIGE). Results 2D-DIGE protein maps in 20 patients with pancreatic cancer, 10 patients with chronic pancreatitis and 20 normal controls were analyzed and 168 spots were identified by gel-analysis software. Between pancreatic cancer group and normal control group 22 protein spots were up-regulated and 29 spots down-regulated; 24 spots were up-regulated and 54 spots down-expressed between pancreatic cancer group and chronic pancreatitis group; 20 spots were up-regulated and 19 spots down-regulated between chronic pancreatitis group and normal control group. Conclusion 2D-DIGE was a rapid and efficient method to separate proteins. 2D-DIGE protein maps and different protein spots would provide an exprimental basis for the phase of mass spectrometry.