GR基因片段的克隆和可诱导的目标载体的构建

为了构建针对小鼠糖皮质激素受体基因第2 外显子的可诱导目标载体,我们对小鼠糖皮质激素受体基因第2 外显子及其侧翼区域的基因组DNA 片段进行了结构分析,和部分片段的亚克隆,然后以pF1ox 质粒为框架构建了可诱导的目标载体。这一载体的构建为进一步建立诱导型GR 基因剔除小鼠奠定了基础,而且对于深入研究GR 基因的表达调控也很有帮助。     

VEGF受体KDR胞外Ⅴ—Ⅶ区的克隆,单抗制备及KDR在不同来源肿瘤组织 …

目的 利用制备的血管内皮细胞增殖因子（ＶＥＧＦ）受体ＫＤＲ抗体,通过免疫组湍不同来 的表达,为探讨ＶＥＧＦ及其受体对肿瘤生长及转移的作用提供可能方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从人胎儿脐静脉内皮细胞克隆ＫＤＲ胞外Ⅴ－Ⅶ区基因片段,在大肠杆菌中表达,并用传统的杂交瘤融合技术制备小鼠ＫＤＲ单克隆抗体。通过组化及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定ＫＤＲ单抗的特生,最后采用Ｓ－Ｐ免疫组化法,分别对不同来源的１１５例     

高转移人肺巨细胞癌细胞67—KD层粘连蛋白受体基因表达

在逆转录ＰＣＲ特异扩增６７－ＫＤ层粘连蛋白受体（简称ＬＮ－Ｒ）ｃＤＮＡ片段并制备成探针的基础上，观察了高转移人肺巨细胞癌（简称ＰＧ）细胞和低转移人肺腺癌（简称ＰＡａ）细胞６７－ＫＤＬＮ－Ｒ ｍＲＮＡ表达水平。结果表明，两种细胞存在大小相同的特异转录体，约１．７ｋｂ左右；高转移ＰＧ瘤细胞比低转移ＰＡａ瘤细胞表达较高水平的６７－ＫＤＬＮ－Ｒ ｍＲＮＡ，同时ＰＧ瘤细胞存在明显的该基因扩增；不同剂量６７－     

抗肺肿瘤转基因小鼠模型的建立

目的建立抗肿瘤转基因小鼠模型。方法用ＢａｍＨＩ酶切表达质粒ｐＵＬＢ３２３８获取小鼠细小病毒非结构基因,通过显微注射法将其接种入小鼠受精卵内制备转基因小鼠。转基因鼠尾部组织ＤＮＡ以ＰＣＲ检测靶基因整合;整合转基因的Ｇ０Ａ６小鼠与正常Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠配种所产Ｇ１代转基因鼠,通过ＲＴ┐ＰＣＲ检测目的基因在其肺脏等组织的转录;Ｇ１代鼠根据ＰＣＲ检测结果分整合和未整合非结构基因两组,两组均腹腔注射致肺肿瘤化学致癌剂氨基甲酸乙酯水溶液。结果Ｇ０代有４只鼠整合靶基因;Ｇ１代（Ｇ０Ａ６子代）转基因鼠的肺组织有靶基因转录;Ｇ１代整合转基因实验组小鼠被诱导肺瘤结节平均数显著少于未整合转基因的对照组（Ｐ＜０．０１）。结论抗肺肿瘤转基因小鼠模型已建立。     

多发性骨髓瘤外周血白细胞糖皮质激素受体与糖皮质激素疗效关系

多发性骨髓瘤外周血白细胞糖皮质激素受体与糖皮质激素疗效关系吕鸣孔宪涛黄隆安糖皮质激素受体（ＧＲ）是一种存在于细胞内能与糖皮质激素特异结合的蛋白质，糖皮质激素的绝大多数效应由ＧＲ介导。本研究旨在探讨多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血白细胞ＧＲ表达水平与糖皮...     

脑胶质瘤c—myc癌基因重排与MDR1基因的变化

作者对２２例胶质瘤ｃ－ｍｙｃ癌基因和ＭＤＲ１基因Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析发现有５例胶质瘤ｃ－ｍｙｃ癌基因发生基因重排，其中２例伴有重排序列的扩增。这些标本同时出现ＭＤＲ１基因限制片段拷贝量的倍增（ＥｃｏＲＩ，６．６ｋｂ），其倍增是脑组织２￣２８倍。这一分子事件不仅反映ｃ－ｍｙｃ癌基因与脑胶质瘤的恶性程度和预后关系密切，而且也与胶质瘤的耐药性有关。     

脑胶质瘤c─myc癌基因重排与MDR1基因的变化

作者对２２例脑胶质瘤Ｃ─ｍｙｃ癌基因和ＭＤＲ１基因Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析发现有５例胶质瘤Ｃ－ｍｙｃ癌基因发生基因重排，其中２例伴有重排序列的扩增。这些标本同时出现ＭＤＲ１基因限制片段拷贝量的倍增（ＥｃｏＲＩ，６．６ｋｂ），其倍增是脑组织２～２８倍。这一分子事件不仅反映Ｃ─ｍｙｃ癌基因与脑胶质瘤的恶性程度和预后关系密切，而且也与胶质瘤的耐药性有关。     

大肠癌组织中抑癌基因APC突变的研究

为了解肿瘤抑制基因ＡＰＣ基因在大肠癌中突变的规律。方法应用聚合酶链反应┐单链构象多态性技术（ＰＣＲ┐ＳＳＣＰ）对３０例人大肠癌组织ＡＰＣ基因１５号外显子的三个区１５┐６、１５┐７、１５┐８进行了检测。检测步骤主要包括人基因组ＤＮＡ提取、ＰＣＲ反应扩增及ＰＣＲ产物的ＳＳＣＰ分析。结果检查结果显示在第１５┐６及１５┐７片段上共１０例发生了突变，突变率为３３．３％。突变的１０例中有８例发生于１５┐７外显子片段，占突变总数８０％（８／１０），２例发生于１５┐６片段，占突变总数的２０％（２／１０）。结论证明我国大肠癌患者中存在着ＡＰＣ基因的突变，且１５┐７片段是突变集中区。     

食管癌组织中Rb基因突变与表达的研究

应用ＰＣＲ直接顺序和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交方法，分析了食管癌组织中Ｒｂ基因的突变和表达状况。应用ＰＣＲ扩增Ｒｂ基因片段，发现５％（１／２０）的食管癌有Ｒｂ基因１７和２１外显子缺失；１／６的食管癌旁组织中，有Ｒｂ基因１７外显子缺失；还发现甲基苄基亚硝胺（ＮＭＢｚＡ）诱发的人胎儿食管癌有Ｒｂ基因１７和２１外显子缺失。ＰＣＲ直接测序，发现４０％（４／１０）癌组织中有Ｒｂ基因的突变，首次证实食管癌     

重组人白介素2-卡介苗对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞体外杀伤活性的影响 *

目的：研究ＨＥＲ２／ｎｅｕ原癌基因胞外区片段（ＥＣＤ）ＤＮＡ直接肌肉注射在小鼠体内表达,体液免疫状况,利用小鼠流产模型观察其体内效应。方法：克隆并构建了人及大鼠ＨＥＲ２／ｎｅｕ原癌基因胞外区片段真核表达载体ｐＣＤＮＡ３－Ｘ,采用肌肉直接注射的方法免疫小鼠,分析目的基因在小鼠体内的表达及其诱导的兔疫应答。结果：在质粒ＤＮＡ直接注射部位可检测到目的基因的表达,并诱导了针对ＨＥＲ２／ｎｅｕ的抗体反应;同时诱发小鼠流产,使免疫鼠产仔数减少,可观察到流产结节形成。结论：通过基因免疫,可诱导针对ＨＥＲ２／ｎｅｕ原癌基因产物的有效免疫应答。     

人食管癌相关基因大肠杆菌中的表达

目的 研究食管癌相关基因－１（ＥＣＲＧ－１）的编码蛋白质在大肠杆菌中的表达,进一步制备抗ＥＣＲＧ－１编码蛋白质的多克隆抗体。方法 用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法克隆ＥＣＲＧ－１基因蛋白编码序列。构建该基因的表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定。用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳）纯化的蛋白免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠制备多抗。结果 ＲＴ－ＰＣＲ所分离的ＥＣＧＥ     

表皮生长因子受体反义RNA抑制胶质瘤细胞生长增殖的体外试验

目的：研究表皮生长因子受体基因对于胶质瘤发生发展的作用，探索以ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ进行反义基因治疗胶质瘤的可行性。方法：将含ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ的质粒通过脂质体介导转入Ｃ６恶性胶质瘤细胞，通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交鉴定外源基因整合情况，ＭＴＴ法测定细胞存活率，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交、细胞原位ｍＲＮＡ杂交及ＥＧＦＲ免疫组化染色检测ＥＧＦＲｍＲＮＡ及蛋白表达，核仁组成区相关嗜银蛋白染色（ＡｇＮＯＲ计数）检测细胞增殖活性。结果：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交表明外源性反义ＥＧＦＲ基因（互补于ＥＧＦＲ基因全长及３端部分序列）分别在Ｃ６细胞中整合（分别命名为Ｃ－ｐＲ１和Ｃ－ｐＲ３），通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交、原位杂交及细胞免疫组织化学检测均显示转染ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ的Ｃ６细胞比转染前ＥＧＦＲｍＲＮＡ水平及ＥＧＦＲ蛋白水平有不同程度的降低。表达高水平反义ＲＮＡ的克隆在培养状态下细胞增殖活性较对照组有明显下降。结论：ＥＧＦＲ在恶性胶质瘤细胞的发生发展过程中起十分关键的作用，ＥＧＦＲ有可能成为基因治疗恶性胶质瘤的优选靶的之一。     

VEGF受体KDR胞外Ⅴ～Ⅶ区的克隆、单抗制备及KDR在不同来源肿瘤组织中的表达

目的利用制备的血管内皮细胞增殖因子（ＶＥＧＦ）受体ＫＤＲ抗体,通过免疫组化,检测ＫＤＲ在不同来源肿瘤组织中的表达,为探讨ＶＥＧＦ及其受体对肿瘤生长及转移的作用提供可能。方法采用ＲＴＰＣＲ方法,从人胎儿脐静脉内皮细胞克隆ＫＤＲ胞外Ⅴ～Ⅶ区基因片段,在大肠杆菌中表达,并用传统的杂交瘤融合技术制备小鼠ＫＤＲ单克隆抗体。通过组化及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ＫＤＲ单抗的特异性,最后采用ＳＰ免疫组化法,分别对不同来源的１１５例肿瘤组织及相应正常组织进行了ＫＤＲ表达分析。结果不同来源的肿瘤组织中,ＫＤＲ受体的表达率及强度存在差异,移行上皮来源的膀胱癌１００％表达ＫＤＲ,表达强度最高;乳腺癌及肠道腺癌细胞表达ＫＤＲ次之;肺鳞癌表达最弱。此外,肿瘤组织中不仅血管内皮细胞表达ＫＤＲ受体,且肿瘤细胞、血管平滑肌细胞及某些间质细胞也有ＫＤＲ表达,而相应正常组织中ＫＤＲ表达相对较弱。结论ＶＥＧＦ受体ＫＤＲ不仅表达于肿瘤血管内皮细胞,而且表达于肿瘤细胞,肿瘤细胞表达ＫＤＲ的强度与组织来源有关     

糖皮质激素受体水平与造血系统淋巴类肿瘤疗效关系的研究

为研究糖皮质激素受体（ＧＲ）与造血系统淋巴类肿瘤化疗疗效的关系，采用放射配体结合分析法测定６３例造血系统淋巴类肿瘤白细胞ＧＲ，其中淋巴瘤２５例，急性淋巴细胞白血病２０例，多发性骨髓瘤１８例。结果显示：急性淋巴细胞白血病ＧＲ水平与化疗疗效呈正相关（Ｐ＜０．０５），淋巴瘤及多发性骨髓瘤ＧＲ水平与化疗疗效无相关性（Ｐ＞０．０５）。结果提示，测定急性淋巴细胞白血病ＧＲ水平可预测化疗疗效     

染色体17p13.3肿瘤杂合性缺失区域内外显子的分离

目的 在染色体１７ｐ１３．３杂合性缺失区域内进行表达的分离。方法 采用外显子搏获法对位于１７ｐ１３．３杂合性缺失区域内的ＢＡＣ基因组克隆进行外显子的分离。结果 在获得的克隆中,４个克隆为已知基因的外显子,另４个史隆属于３个上显子（２个克隆中的外显子片段序列一致）。结论 在染色体１７ｐ１３．３杂合性缺失区域内获得了一些表达序列。     

错配修复酶切割分析法检测基因点突变

错配修复酶切割分析法检测基因点突变董燕综述孙志贤审校军事医学科学院放射医学研究所北京１００８５０（上接第一期封三）胞核提取物中发现了具有Ｇ／Ｔ特异性的ＭＲＥ（６，７）。其中之一被证明是大肠杆菌ＶＳＲ基因的产物。克隆表达的ＶＳＲ基因产物，有Ｇ／ＴＭＲ活...     

染色体3p14.2-14.3区域一个与鼻咽癌相关新基因的克隆

目的：在染色体３ｐ１４．２－１４．３区域寻找与鼻咽癌发生发展密切相关的新基因。方法：运用ＲＡＣＥ方法获取基因全长ｃＤＮＡ序列,ｐＥＧＦＰ质粒和脂质体共转染ＣＯＳ７细胞进行新基因的蛋白质定位。结果：在３ｐ１４．２－１４．３区域克隆了一个在鼻咽癌中表达不调新基因的全长ｃＤＮＡ序列,被命名为ＣＰＣＤＲ１,编码１０９个氨基酸,其蛋白质聚集在细胞核内,其基因组由２个外显子和１个内含子组成。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印     

N乙基马来酰亚胺敏感因子NSF与食管鳞癌细胞分化有关

目的：克隆食管鳞癌细胞ＥＣ８７１２分化过程中受ＡＴＲＡ调控的靶基因。方法：采用ＡＰ－ＰＣＲ技术从食管鳞癌细胞ＥＣ８７１２中克隆受ＡＴＲＡ调控的差异表达基因片段,并测序及作同源分析,采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交进行验证。结果：分离到在食管癌细胞分化过程中表达下调的一基因片段。该基因从ＡＴＲＡ处理一天开始表达被明显抑制 种抑制持续整个诱导过程。该片段被克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ载体并测序。同源分析结果表明,该基因     

脑肿瘤中表皮生长因子受体扩增的研究

目的探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）基因扩增在脑肿瘤发生、发展中的作用机制。方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法观察脑肿瘤中ＥＧＦＲ的扩增。结果６１例脑肿瘤中，ＥＧＦＲ基因扩增６例，其中星形细胞瘤６级１例、Ⅲ～Ⅳ级４例，神经鞘瘤１例。结论ＥＧＦＲ扩增与部分脑肿瘤发生有关，并且可能是星形细胞瘤恶性变的促发因素。     

高转移人肺巨细胞癌细胞67－KD层粘连蛋白受体基因表达

在逆转录ＰＣＲ特异扩增６７一ＫＤ层粘连蛋白受体（简称ＬＮ—Ｒ）ｃＤＮＡ片段并制备成探针的基础上，观察了高转移人肺巨细胞癌（简称ＰＧ）细胞和低转移人肺腺癌（简称ＰＡａ）细胞６７—ＫＤＬＮ—ＲｍＲＮＡ表达水平。结果表明，两种细胞存在大小相同的特异转录体，约１．７ｋｂ左右，高转移ＰＧ瘤细胞比低转移ＰＡａ瘤细胞表达较高水平的６７—ＫＤＬＮ—ＲｍＲＮＡ，同时ＰＧ瘤细胞存在明显的该基因扩增；不同剂量６７—ＫＤＬＮ—Ｒ单克隆抗体（５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ和４００μｇ／ｍｌ）处理ＰＧ瘤细胞４８小时，可见１００μｇ／ｍｌ以上剂量组细胞６７—ＫＤＬＮ—ＲｍＲＮＡ表达水平明显下降，表现为剂量依赖性抑制。这些结果提示，６７—ＫＤＬＮ—Ｒ在高转移ＰＧ瘤细胞转移过程中可能起有重要作用。