抗人IgG单克隆抗体制备和鉴定

以人ＩｇＧ为抗原，采用杂交瘤技术获得６株不同性质的抗人ＩｇＧ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）（ＡＩ２，ＡＩ３，ＡＩ４，ＡＩ５，ＡＩ６和ＡＩ７）。ＡＩ２ＭｃＡｂ具有抗ＩｇＧ１亚类的特异性，可识别ＩｇＧγ链和Ｆ（ａｂ）２片段，作用位点可能在人ＩｇＧ１铰链区。ＡＩ３，ＡＴ７，ＭｃＡｂ分别为ＩｇＧ３，ＩｇＧ４亚类限制性ＭｃＡｂ，可能作用于ＩｇＧＣＨ１区。ＡＩ４ＭｃＡｂ铰链区。ＡＩ３，ＡＩ７，ＭｃＡｂ可识别ｘ和λ链。     

抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定

用纯化的人肌红蛋白（Ｍｂ）抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠通过细胞杂交技术。获得１０株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株．其中３株分泌ＩｇＧ_１亚类抗体，２株为ＩｇＧ_（２ａ），５株为ＩｇＧ_（２ｂ）．间接ＥＬＩＳＡ法证明单抗腹水与Ｍｂ起特异性反应，与人血红蛋白（Ｈｂ）．人白蛋白（Ａｌｂ）无交叉反应．免疫印迹检测结果表明，６株单抗腹水能特异性识别分子量１７ＫＤ的Ｍｂ，抗Ｍｂ单克隆抗体的制备，对于急性心肌梗塞早期诊断很有应用价值．     

一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株,其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４）,并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价,分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆,传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。     

抗人肝癌单克隆抗体和Fab片段在裸鼠体内分布及药物偶…

大鼠抗人肝癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）３Ａ５（ＩｇＧ１）腹水经亲和层析柱纯化后，用木瓜蛋白酶消化得到Ｆａｂ片段，经ＥＬＩＳＡ检测均具有良好的免疫活性。将＾１２５Ｉ－Ｆａｂ和＾１２５Ｉ－３Ａ５注入移植人肝癌裸鼠体内Ｆａｂ片段分布在主要脏器的每克组织注射剂量百分比（ＩＤ％／ｇ）的持续时间和数值均低于完整ＭｃＡｂ，但肿瘤与非肿瘤组织（Ｔ／ＮＴ）的比值则高于完整ＭｃＡｂ，说明Ｆａｂ片段的分布对肿瘤组织具有较高     

抗ENA单克隆抗体的研制

目的：制备与分析抗可提取性核抗原（ＥＮＡ）单克隆抗体;方法：以ＥＮＡ为抗原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合,经反复筛选和再克隆化,建立能稳定分泌抗ＥＮＡ单克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）的杂交瘤细胞株;结果：共获得１１株能稳定分泌抗ＥＮＡ的杂交瘤细胞株。对其中的５种单克隆抗体（ＩＧ５,２Ｅ５,２Ｃ６,４Ｃ１０和４Ｅ６）进行了初步分析,结果如下：小鼠腹水抗体效价范围２×１０－５～３×１０－６;免疫球蛋白亚类鉴定,１株为ＩｇＧ２ａ,１株为ＩｇＧ２ｂ,其余３株均为ＩｇＧ１;结论：ＥＮＡ作为弱免疫原可用于制备单克隆抗体     

抗内毒素类脂A单克隆抗体杂交瘤细胞的建立及保护性实验研究

采用Ｊ５突变株免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，建立了６株分泌单克隆抗体的杂交瘤，分别命名为 ９Ｇ６，１０Ｈ１１，９Ｈ１，９Ｆ９，１１Ｅ７和１２Ｈ１１。它们的亚类鉴定为ＩｇＭ，ＩＧ１，ＩＧ２ａ和ＩＧ２ｂ。     

脂蛋白脂肪酶单克隆抗体的制备及特征分析

用牛奶纯化的脂蛋白脂肪酶（ＬＰＬ）一分子量为５６ＫＤ，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠利用杂交瘤技术，建立了３０余株分泌抗朱ＬＰＬ单克隆抗体的杂交瘤细胞，对其中２Ｅ５，２Ｇ１０，６Ｄ７，８Ｄ２，７Ｆ４进行特征分析表明：（１）其抗体类别均为ＩｇＧ，亚类分别为ＩｇＧ１，ＩｇＧ２ｂ，ＩｇＧ２ｈ，ＩｇＧ１，ＩｇＧ１；（２）抗体效价（细胞培养上清）５×１０＾－２－２×１０＾－３；（３）５种单抗可认为识别三个不同的抗原表     

猴EAE致敏前后脑脊液IgG指数和IgG合成率的变化

目的：研究体液免疫在多发性硬化（ＭＳ）病程不同阶段中的作用。方法：采用Ｂｅｋｍａｎｎ免疫仪和ＭｏｎａｒｃｈＰｌｕｓ生化仪，对１０只食蟹猴中ＩｇＧ指数和ＩｇＧ合成率，进行实验性变态反应性脑脊髓炎（ＥＡＥ）致敏前和致敏后不同阶段的自身对照检测。结果：致敏前正常食蟹猴脑脊液（ＣＳＦ）ＩｇＧ指数为０．３±０．１，ＩｇＧ合成率为－４．６±３．３；致敏后１、２、３、４、５周ＩｇＧ指数分别为０．４±０．２、０．７±０．５、０．７±０．４、０．７±０．３、０．６±０．２；而ＩｇＧ合成率分别为－１．３±４．１、２７．１±４０．０、２６．６±３９１、２６．２±３８．２、２４．５±４３．９。致敏后１周与致敏前的ＩｇＧ指数和ＩｇＧ合成率的差异无显著性意义，而致敏后２、３、４、５周与致敏前的差异均有显著性意义，但致敏后２、３、４、５周之间差异无显著性意义。结论：提示体液免疫在ＭＳ和ＥＡＥ中起重要作用，并且持续相当长的时间。     

抗P^185McAb的制备,鉴定及其在免疫组化检测的应用

本文以ＨＥＲ－２／ｎｅｕ癌基因表达产物为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，采用常规淋巴细胞杂交瘤技术立一株稳定分泌抗Ｐ＾１８５ＭｃＡｂ的杂交瘤株５Ｅ１２，ＭｃＡｂ５Ｅ１２属ＩｇＧ亚类，与ＳＫＢＲ－３，Ｔ４７Ｄ乳癌细胞系呈阳性反应，与ＨＴ２９，ＥＣ１０９，ＤＡＣ－１，ＳＰ２／０，成纤维细胞及小鼠ＮＩＨ３Ｔ３等细胞系列呈阴性反应，３０例乳癌组织石蜡切片同时以自制抗Ｐ＾１８５ＭｃＡｂ５Ｅ１２及进口ＭｃＡｂＣ－ｅ     

小儿单纯性肾病IgG亚类及BCGF,BCDF,IL—6活性观察

测定ＩＮＳ患儿Ｔ、Ｂ细胞增殖功能，血清ＩｇＧ亚类，ＰＷＭ诱导的体外ＩｇＧ类产生及ＢｃＧＦ、ＢｃＤＦ、ＩＬ－６活性。结果显示ＩＮＳ发作期儿童Ｔ、Ｂ细胞增殖功能低下；血清及体外产生ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及ＩｇＧ４低下，ＩｇＧ３和ＩｓＭ正常；ＢＣＧＦ活性降低与Ｂ细胞增殖功能低下呈直线正相关；ＢＣＤＦ及ＩＬ－６活性降低与体外ＩｇＧ产生低下呈直线正相关。结果提示ＩＮＳ可能存在Ｉｇ类别转换障碍致低ＩｇＧ血症。Ｔ细胞及其分泌的淋巴因子异常可能在其中起重要作用     

生物素标记人免疫球蛋白IgG重链的效果评估

目的对生物素标记的人免疫球蛋白IgG重链的效果进行评估和研究。方法将生物素与人免疫球蛋白IgG重链以各种不同的比例进行反应,然后让连接有抗人免疫球蛋白IgG重链抗体的微球颗粒与其反应,应用Luminex200仪器来测定其反应结果,最终来评估生物素与待标记的人免疫球蛋白IgG重链反应的效价。结果生物素与人免疫球蛋白IgG重链的重量比例适当时,微球颗粒上的平均荧光强度(MFI值)最强,而其他比例时,微球颗粒上的平均荧光强度呈下降趋势。结论生物素标记人免疫球蛋白IgG重链应有适当的比例,使被标记的生物素尽可能的多,同时又避免过多的生物素造成空间位阻影响。     

抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体死亡受体5嵌合抗体的构建及其真核表达

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳定分泌表达抗DR5嵌合抗体的细胞株。采用ELISA和Western bloting法鉴定抗体的人源性和抗体-抗原结合活性,四唑盐/吩嗪硫酸甲酯比色法检测抗体的生物学活性。结果获得了稳定表达和分泌抗人DR5的嵌合抗体(anti-DR5mV-hH)的重组细胞;与人DR5蛋白具有高的特异性结合活性;能使体外培养的人髓性白血病Jurkat细胞和人结肠癌HCT116细胞的存活率分别下降到73.15%和77.30%。结论抗DR5嵌合抗体anti-DR5mV-hH具有抗肿瘤活性,为发展人源化抗体药物的研究奠定了基础。     

全人源抗Trop-2 IgG的制备及对卵巢癌细胞生物特性的影响

目的:构建全人源抗人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)抗体 IgG真核表达系统,表达并纯化该抗体,并检测其对卵巢癌细胞生物特性的影响?方法:构建全人源抗Trop-2抗体IgG的重组表达载体;在293FreeStyle(293F)真核表达体系中表达并纯化该抗体?使用SDS-PAGE?ELISA?亲和力测定?免疫荧光等方法鉴定该抗体并分析其免疫学活性;使用cell counting kit-8(CCK-8)法?划痕实验?Transwell实验和细胞凋亡实验分析其对卵巢癌细胞特性的影响?结果:成功制备出全人源抗Trop-2 IgG;经多种方法检测,该抗体能与Trop-2蛋白特异性结合;对表达Trop-2的卵巢癌细胞增殖?侵袭?迁移和凋亡有明显影响?当抗体浓度为400 μg/mL时,卵巢癌细胞HO8910的生存率仅为55.95%(P < 0.01),划痕愈合率仅为24.71%(对照组为70.80%,P < 0.01),侵袭细胞数是对照组的32.11%(P < 0.05),细胞凋亡率是对照组的2倍(P < 0.05)?结论:全人源抗Trop-2 IgG可特异性识别卵巢癌细胞表面的Trop-2 蛋白,对卵巢癌细胞的恶性行为具有明显的抑制作用?因此,全人源抗Trop-2 IgG在卵巢癌的靶向治疗中有潜在应用价值?     

人源抗TLR4抗体IgG的制备及其中和特性分析

目的:构建全人源抗人Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体轻?重链表达载体,在293Free style 细胞中表达并纯化,分析该重组全分子抗体的生物学活性?方法:设计引物扩增全人源抗人TLR4抗体可变区编码序列,将其分别克隆到真核表达载体pFUSE-CHIg-hG1和pFUSE-CLIg-hl中,共转染至293Free style 细胞,表达产物用protein A亲和层析柱纯化?应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)?Western blot?免疫共沉淀?质谱分析及蛋白芯片检测抗体的免疫学特性,并检测该抗体对人单核细胞淋巴瘤THP1细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α表达的影响?结果:成功构建全人源抗人TLR4抗体真核表达载体,获得的全分子抗TLR4抗体保持了与抗原的结合活性,对THP-1细胞TNF-α表达的抑制率可达85.7%?结论:重组全人源抗TLR4 IgG保持了与TLR4的结合特异性,并具有明显的中和作用,对炎症治疗具有潜在的应用价值?     

SPA单结构域突变体组合噬菌体文库的构建及体外进化筛选

目的 使用人免疫球蛋白G( IgG)对金黄色葡萄球菌蛋白A( SPA)单结构域突变体组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同突变体组合的特异结合优势,探索优势组合分子结构与功能间的关系. 方法 通过 Overlap PCR获得SPA中A和C单结构域突变体片段组合构成的噬菌体文库,再使用人IgG对文库进行体外亲和筛选,期望通过对特定结合分子的定向改造及体外进化获得具有高结合优势的组合分子. 结果 成功构建符合体外筛选要求的SPA单结构域A在29、30位氨基酸定点突变文库( A1 )、SPA单结构域C在36、37位定点突变文库( C1 )和SPA单结构域A在37位后插入3个氨基酸随机肽( AI37 )、SPA单结构域C在20位后插入3个随机连接肽( CI20 ) ,将A1、C1随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库A1C1,将AI37、CI20随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库AI37 CI20. 两个文库各自经过4、5轮亲和筛选,文库进化完全.Phage-ELISA高光密度值的单克隆,测序结果分析为A(Q29K30) A(I29I30)和AI-TQS A. 结论 通过定向改造技术获得了高结合能力的定点突变分子A(Q29K30) A(I29I30)和插入突变分子AI37-TQS A,为Ig结合分子的定向改造及具有新的Ig结合特性的重组Ig结合分子的进一步研究奠定了基础.     

应用免疫荧光法检测华枝睾吸虫病特异性抗体的研究

用华枝睾吸虫成虫冰冻切片做抗原,以间接免疫荧光法检测了46份华枝睾吸虫病人血清中特异性IgG抗体。当血清1:10和1:20稀释时,阳性率分别为89.1%(41/46)和60.9%(28/46)。提示本法可能成为华枝睾吸虫病辅助诊断和流行病学调查的一种新方法。     

日本血吸虫病流行区再感染人群血清IgG_4抗体的特异性免疫识别

目的对构建人群再感染易感性的预测系统提供有价值的信息。方法采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术,以日本血吸虫病流行区化疗后再感染人群的４３份血清中ＩｇＧ４抗体,对日本血吸虫的可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）和可溶性成虫粗抗原（ＳＷＡＰ）进行免疫识别。结果ＳＥＡ中２００ｋｕ、７０ｋｕ及５５～６０ｋｕ蛋白组分和ＳＷＡＰ的８７ｋｕ蛋白组分被２１份以上血清的ＩｇＧ４抗体识别。结论上述血吸虫蛋白分子可能是人群日本血吸虫病再感染易感状态相关的抗原表位。     

压电石英晶体微阵列免疫传感器检测IgG的实验研究

目的 构建一种新型压电石英晶体人免疫球蛋白(IgG)的免疫微阵列传感器。方法 抗IgG单克隆抗体采用蛋白A(SPA)法固定在AT切向、基频10MHz的石英晶体微阵列金膜电极表面制成抗体敏感膜，构成压电石英晶体IgG免疫微阵列传感器。结果 构建的IgG压电石英晶体免疫微阵列传感器对IgG的响应特性良好，其检测下线为0．5mIU／ml。结论 研制的压电石英晶体IgG免疫微阵列传感器具有灵敏度高、特异性好、成本低廉、操作简单、快速，能在线实时检测等优点，可用于临床实验诊断。     

混合人血清IgG亚类分离的研究

本文对混合人血清中IgG四个亚类提供了系统的分离方法。首先用DEAE-Sephadex A 50从血清中分离IgG作为亚类分离的材料。然后用DEAE-纤维素柱分离IgG4。再用CM-纤维素柱分离出IgG2,最后用Protein A-Sepharose CL-4B 将IgGl与IgG3分离。     

ELISA 检测母乳中轮状病毒抗体的研究

目的：探讨健康母乳中轮状病毒特异性抗体水平及临床意义。方法：采用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法测定了２５４份健康初乳和成熟乳中抗轮状病毒 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 和 Ｉｇ Ｇ 抗体（ａ Ｒ Ｉｇ Ａ、ａ Ｒ Ｉｇ Ｍ 、ａ Ｒ Ｉｇ Ｇ），分析其滴度变化。结果：初乳中 ａ Ｒ Ｉｇ Ａ 阳性率为８０３％ ，滴度达１ｖ２５６，随哺乳期延长逐渐降低。ａ Ｒ Ｉｇ Ｍ和 ａ Ｒ Ｉｇ Ｇ 可在部分母乳中测得。结论：健康母乳中广泛存在轮状病毒特异性抗体，以 ａ Ｒ Ｉｇ Ａ 为主，为婴幼儿抵御轮状病毒感染提供了重要的免疫保护作用。