人脑胶质瘤组织中c—myc基因的扩增和重排及异常表达

癌基因结构及表达异常与肿瘤的发生发展有着密切的关系，作者在于考察胶质瘤中ｃ－ｍｙｃ基因的状况。采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交和ＲＮＡ打点杂交的方法以正常人脑组织为对照观察了７例人脑胶质瘤组织中ｃ－ｍｙｃ基因在ＤＮＡ和ＲＮＡ水平的改变。７例人脑胶质瘤标本中ｃ－ｍｙｃ基因有不同程度的扩增和重排。其ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达幅度是正常组织的１．６－４．０倍。在胶质瘤中有ｃ－ｍｙｃ基因的异常。     

人脑原发性肿瘤中c—fos基因的扩增,重排及过强表达

The c-fos gene was used as a probe to detect the Bam HI-digested brain DNA and total RNA isolated from 2 cases of normal human brain and 11 cases of human brain tumor by Southern blot analysis and RNA dot hybridization technique. The result showed an amplification and over-expression of c-fos gene in one case of glioblastoma multiforme. These data suggest that the c-fos gene may take an important role in the carcinogenesis of human primary brain tumor, and the level of c-fos expression may be correlated with the degree of differentiation of brain tumor cells. We also found that there was a rearrangement of c-fos gene in one case of ependymoma. This suggests that, in ependymoma, the c-fos gene may be activated in a way different from that in the brain tumors of astroglia origin.     

卵巢恶性肿瘤细胞端粒酶表达和hTERT基因，c—myc基因的调控

目的　研究端粒 (TL M)在卵巢恶性肿瘤中的表达和相互关系。　方法　 (1)采用 PCR- EL ISA半定量方法研究端粒酶活性在卵巢恶性肿瘤、癌旁组织、交界性肿瘤、良性肿瘤、正常卵巢及卵巢肿瘤细胞株的表达情况。(2 )采用 RT- PCR方法检测人端粒酶逆转录酶 (h TERT)基因 m RNA和 c- myc基因m RNA在上述标本中的表达情况 ,分析端粒酶活性、h TERT基因、c- myc基因间的关系。(3)用顺铂对卵巢肿瘤细胞株 HO-8910、COC1 进行处理 ,同步检测 h TERT和 c- myc基因 m R-NA、端粒酶活性表达情况 ,分析 h TERT和 c- myc基因 m R-NA水平改变与端粒酶活性的相互影响。　结果　 (1)卵巢良性肿瘤组织与正常卵巢端粒酶活性差别无显著性 (P>0 .0 5 ) ,正常卵巢端粒酶活性 0 .2 2为上限 (0 .2 13± 0 .0 70 ,可信区间97.5 % ) ,恶性卵巢肿瘤组织端粒酶活性表达率 91.30 % ,明显高于交界性卵巢肿瘤组织 2 0 .0 0 % (P<0 .0 1)、良性卵巢肿瘤组织 7.13% (P<0 .0 1)和正常卵巢 0 (P<0 .0 1)。交界性卵巢肿瘤组织端粒酶活性表达率与后两者差异具有显著性 (P<0 .0 1)。端粒酶活性值在恶性卵巢肿瘤组织表达中临床分期 、 期明显高于 、 期 (P<0 .0 5 ) ,分化程度低者高于分化高者 (P<0 .0 5 ) ,恶性卵巢肿瘤组织端粒酶活性明显高     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c－fos，c－myc异常表达的实验研究

我们观察了不同浓度的胰岛素对体外培养人血管平滑肌细胞增殖的影响，及其该过程中原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ的表达。结果表明，胰岛素能促进血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖，即：ＳＭＣ数目的增多，ＳＭＣＤＮＡ的合成；胰岛素能促进原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的异常表达；且以上作用均存在着剂量－效应关系。这些结果提示，高胰岛素血症促进动脉粥样硬化（ＡＳ）发生、发展可能是通过促进某些原癌基因异常表达，进而促进ＳＭＣ增殖而实现的。这也许是某些基因治疗ＡＳ的基础。     

c－myc癌基因在原发皮肤恶性黑色素瘤中的扩增与表达

目的：为探讨c—myc癌基因在恶黑中的扩增与表达。方法：采用原位杂交和免疫组化法检测了c—myc癌基因的扩增和p62myc的表达。结果：发现恶黑中无c—myc扩增。无转移的浸润性恶黑中，p62myc阳性率为82．14％，伴淋巴结转移的浸润性恶黑阳性率为83．33％。两者间无显著差异。但两者表达强度分别为80．00％和57．17％，伴淋巴结转移组高于无转移组。结论：p62myc高强度表达可能与恶黑转移有关。     

睑板腺癌nm23基因mRNA和c—myc基因的表达

目的：探讨nm323和c-myc基因表达与睑板腺癌生物学行为的关系。方法：采用原位杂交技术和免疫组化SABC法对33例睑板腺癌石蜡切片中睑板腺癌nm323和c-myc基因的表达进行研究。结果：睑板腺癌睑板腺癌nm23基因mRNA阳性表达率为48．5％（16／33）,c-myc基因阳性表达率为54．5％（18／33）。Ⅱ-Ⅲ度睑板腺癌睑板腺癌nm23基因mRNA阳性率为63．6％（14／22）,Ⅰ度为18．2％（2／11）,二者比较P＜0．05,中、低分化睑板腺癌nm23基因mRNA阳性表达率为60．95（14／23）,高分化癌nm23基因mRNA阳性率为20％（2／10）,P＜0．05。Ⅱ-Ⅲ度睑板腺癌c-myc基因阳性表达率为（68．2％）（15／22）,Ⅰ度为27．3％（3／11）,P＜0．05）;中低分化睑板腺癌c-myc基因阳性表达率为69．6％（16／23）,高分化癌为20％（2／10）,P＜0．05。nm23基因c-myc基因表 关性检验,P＞0．05。结论：睑板腺癌nm23和c-myc基因与睑板腺癌的发生、发展有关,与睑板腺癌分化程度密切相关,可能是判断其恶性程度的指标之一。     

大鼠脑损伤时神经细胞c—fos,c—jun和c—myc基因表达变化

目的 观察大鼠脑损伤不同时间皮质神经细胞早期快反应基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ表达变化。方法 应用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、原位杂交和免疫组织化学方法检测皮质神经细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ的表达。结果 脑损伤后１５ｍｉｎ,伤测皮质神经细胞出现上述３种基因ｍＲＮＡ的表达,随时间的延长,表达逐渐增加,于伤后３ｈ达高峰并持续至伤后２５ｈ伤后,伤后７２ｈ恢复至对照水平ｃ－ｆｏｓ、ｃ－     

骨肉瘤组织中c—myc蛋白表达及其临床意义

目的 探讨ｃ－ｍｙｃ基因与骨肉瘤发生发展及预后的关系。方法 用Ｓ－Ｐ免疫组化法，对５０例骨肉瘤石蜡包埋标本进行了ｃ－ｍｙｃ ｐ６７表达水平的研究。结果 骨肉瘤ｃ－ｍｙｃ ｐ６７蛋白阳性率高达７２％，ｃ－ｍｙｃ ｐ６７表达与骨肉瘤患者性别、年龄、病理类型、肿瘤分期等均无明显关系，而ｃ－ｍｙｃ ｐ６７例表达骨肉瘤患者的３年生存率低于ｃ－ｍｙｃ ｐ６７阴性表达者。结论 ｃ－ｍｙｃ ｐ６７表达可能对判断骨     

老年急性淋巴细胞白血病细胞中c—myc基因的表达及其临床意义

目的：探讨c-myc基因在老年急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及其临床意义。方法：采用免疫细胞组织化学染色方法,检测28例老年急性淋巴细胞白血病病人化疗前后及26例非白血病的c-myc基因的表达水平。结果：急性淋巴细胞白血病组c-myc基因表达较非白血病明显增高,两者呈显著性差异（P＜0．01）,急性淋巴细胞白血病组中,化疗后完全缓解与不缓解病人c-myc基因的表达有显著差异（P＜0．05）,结论：c-myc基因在老年急性淋巴细胞白血病细胞中高表达,而且与化疗疗效密切相关,提示c-myc基因对于老年急性淋巴细胞白血病的诊断,疗效评价及预后估计均有一定意义。     

离子浓度对肽核酸压电基因传感器杂交效应的影响

目的　探索不同离子浓度的PBS缓冲液对肽核酸压电基因传感器阵列杂交效应的影响。方法　压电基因传感器阵列表面固定上 1 .5 μM的bis PNA探针后 ,分别观察在 1 0、2 0、5 0、1 0 0mM的PBS缓冲液环境中与相应的靶序列杂交 ,记录频率的下降值及反应所需的时间。结果　钠离子浓度从 1 0mM增加至 2 0mM时 ,杂交导致的频率下降值及平衡时间均增加 (P <0 .0 5 ) ;从 2 0mM增加至 5 0、1 0 0mM时 ,杂交导致的频率下降值各组间无显著差异 ,但杂交平衡时间却呈倍数增长。结论　离子浓度极大地影响了杂交反应的时间 ,低盐离子浓度更有利于提高bis PNA和dsDNA的杂交速率 ,高盐离子浓度则会大大降低bis PNA的结合速率。     

人胃癌组织基因组文库中异常高表达基因及c－myc阳性克隆的筛选

目的：为了研究人胃癌组织中癌基因及其调控序列是否存在结构上的改变，首先需要分离并获得所需研究的基因．方法：用人胃癌异常高表达基因ｃＤＮＡ片段（ｈＳＣＧ－３）和ｃ－ｍｙｃ基因为探针，经同位素标记，对所构建的人胃癌组织基因组文库进行二轮噬菌斑原位杂交筛选．结果：从该基因组文库中分别筛选得到２个和６个阳性克隆．结论：为进一步探讨胃癌发生的机理，以及对这二个基因进行亚克隆和序列分析奠定了基础．     

探针浓度对肽核酸石英谐振式基因传感器阵列杂交效应的影响

目的探索不同肽核酸(PNA)探针浓度对PNA石英谐振式基因传感器阵列杂交效应的影响.方法石英谐振式基因传感器阵列表面分别固定上0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0μM的bis-PNA探针后,观察其固定以及与相应的HBV靶序列杂交时频率的下降值及反应所需的时间.结果探针固定引起的频率变化值先升而后趋于平缓,而与HBV靶序列杂交所引起的频率变化值却是先升后降,以1.5μM探针浓度为分界线;杂交平衡时间上各组间未见明显的变化趋势.结论 1.5μM bis-PNA探针固定浓度最为适宜.     

人组织era基因mRNA的表达谱

目的：研究人era基因mRNA在不同组织、不同细胞系的表达水平。方法：用α[^32p]dCTP标记人era编码区基因作为探针,分别用Northern杂交和斑点杂交分析含12种不同成人组织mRNA的Multiple tissue northern(MTN)bolt膜和含76种成人、胎儿及常用细胞系mRNA的Multiple tissue expression (MTE）array膜,并用同位素扫描系统对杂交结果进行图像分析。结果：Northern blot杂交所检测的12种组织中均有位于2．2kb处的杂交条带,斑点杂交显示人eramRNA在所检测的76种组织中均有表达,但表达水平有很大差异,在神经系统、某些胎儿组织以及某些肿瘤细胞中高表达。结论：人era mRNA表达于所有检测的组织或细胞系,可能为一种组成性表达的基因。     

缓冲液pH值对肽核酸压电基因传感器阵列杂交效应的影响

目的 探索PBS缓冲液的pH值对肽核酸压电基因传感器阵列杂交效应的影响。方法 压电基因传感器阵列表面先固定上1．5μmol／L的bis-PNA探针，然后分别在pH5.8～8．0的PBS缓冲液中和相应的靶序列杂交，记录频率的下降值及反应所需的时间。结果 随着pH值从5.8升到8．0，杂交导致的频率下降值先高后低，以pH6．8为一个分水岭。杂交平衡时间在pH6.8之前总体上说相差尚不明显，但当pH值从6．8升到8．0时，却骤然增加。结论 bis-PNA和靶序列dsDNA的杂交时适用的pH范围很窄(pH6．6～7．0)。弱酸环境下(pH618时)最为容易，pH超过7．5就不适宜杂交。结果 从另一个侧面证实了在bis-PNA和dsDNA的杂交过程中“Hoogsteen链第一”的反应机制。     

一种胶质瘤相关的酸性成纤维细胞生长因子mRNA同源物

目的 克隆胶质瘤相关基因。方法 取胶质瘤患者新鲜肿瘤标本及肿瘤附近正常脑组织提取mRNA,反转录成cDNA,采用基于PCR的消减杂交法获得差异的cDNA,并经多聚酶链反应扩增后克隆人T载体测序,用打点杂交法验证差异克隆。结果 获得一胶质瘤相关的酸性成纤维生长因子基因同源物。结论 该酸性成纤维生长因子基因同源物是酸性成纤维生长因子mRNA的不同拼接产物,可能参与胶质瘤的形成。     

缓冲液离子浓度对新型PNA-LSAW基因传感器杂交效应的影响

目的 探讨PBS缓冲液的离子浓度对构建的肽核酸(PNA)漏声表面波(LSAw)基因传感器杂交效应的影响.方法 将1.0μmol/L的PNA探针固定在LSAW基因传感器表面,分别加入10、20、50、100mmol/L的PBS缓冲液,观察不同离子浓度的PBS缓冲液对PNA-LSAW基因传感器杂交效应的影响,记录分析传感器相位的变化值及反应所需的时间.结果 当钠离子浓度从10mmol/L增加至100mmol/L时,传感器的相位变化呈先升高后降低的趋势,以20mmol/L为分水岭.而杂交平衡时间增加显著.结论 离子浓度极大地影响了杂交反应的时间,低盐离子浓度更有利于提高PNA和靶序列的杂交速率,高盐离子浓度则会大大降低PNA的结合速率.离子浓度为20mmol/L时杂交最为适宜.     

网织红细胞胞质因子调控肿瘤细胞基因表达的核酸杂交分析 Ⅰ.β-珠蛋白基因的表达

本实验采用核酸杂交技术,以小鼠和人β-珠蛋白基因为探针,分析了同种和异种细胞的胞质体杂交细胞中β-珠蛋白基因的表达状态。结果发现小鼠β-珠蛋白基因转录物不但在同种杂交(小鼠网织红细胞RM×小鼠骨髓瘤BW)的胞质体杂交细胞(BW-RM)中出现,而且在兔网织红细胞与小鼠骨髓瘤的异种杂交细胞(Bw-RR)中亦有表达。同样在小鼠网织红细胞与人浆细胞瘤(HMy)的异种胞质杂交细胞(HMy-RM)中出现人β-珠蛋白基因产物。说明网织红细胞胞质因子可激活原来处于不活动状态的肿瘤细胞β-珠蛋白基因并使之表达.兔和小鼠的胞质因子有同样的调节基因表达的作用而似无种属特异性。对网织红细胞胞质因子调控基因表达和肿瘤细胞恶性逆转的机理和分子生物学基础进行了讨论。     

Survivin反义核酸真核表达载体的构建及在胶质瘤细胞中的表达

目的构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SVVas,并检测其在恶性胶质瘤细胞SHG-44中的表达。方法构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SVVas,并用脂质体介导转染入SHG-44细胞,通过RT-PCR及western blot检测细胞中survivin mRNA和蛋白的表达。结果构建了survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SWas,并成功导入SHG-44细胞中,且有效表达,使SHG-44细胞中survivin mRNA和蛋白表达水平均降低。结论Survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-sVVas可以降低SHG-44细胞survivin基因的表达。     

缓冲液pH值对LSAW-bisPNA传感器检测系统的影响

目的 探讨PBS缓冲液pH值对LSAW-bisPNA基因传感器检测系统的影响.方法 LSAW-bisPNA基因传感器表面固定终浓度为1.0 μmol/L的bis-PNA探针,然后分别在pH 5.8～8.0的PBS缓冲液中和相应的靶序列杂交,记录相位变化及反应所需时间.结果 在不同pH值缓冲液中,bis-PNA与靶序列反应引起的相位变化有明显差异(P＜0.01),pH 6.6与pH 6.8时传感器响应信号最大,但两者反应所达到的平衡时间有明显差异(P＜0.05),pH值6.6时检测所需时间更短.结论 选择pH 6.6作为bis-PNA和靶序列dsDNA反应的最适pH值,在该pH值条件下传感器响应信号大,反应达平衡时间短.