日本血吸虫虫卵核糖核酸的提取及鉴定

本文采用异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法成功地提取了日本血吸虫虫卵总RNA，琼脂糖电泳结果呈现18S一条主带，与日本血吸虫成虫RNA的电泳结果一致。日本血吸虫虫卵RNA的抽提成功为虫卵cDNA库的构建以及虫卵有效抗原的筛选奠定了基础。     

日本血吸虫免疫核糖核酸佐剂作用的研究

本实验研究了日本血吸虫免疫核糖核酸（ＳｉＲＮＡ）的佐剂作用。用ＥＬＩＳＡ检测结果表明，用ＳｉＲＮＡ加日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡ）免疫的小鼠的抗体水平显著高于仅用ＳｉＲＮＡ或ＳＷＡ免疫的小鼠。尾蚴攻击感后，用ＳｉＲＮＡ＋ＳＷＡ或ＳｉＲＮＡ免疫的小鼠有较高的减虫率，两组间减虫率无显著性差异。这些结果表明，ＳｉＲＮＡ能增强宿主的体液免疫反应，但未能增强宿主保护性免疫力。     

日本血吸虫成虫RNA的快速分离纯化

应用异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法提取日本血吸虫ＲＮＡ，在１ｈ左右即可提取纯度高，完整性较好的ＲＮＡ。该方法简单易行，既经济又省时，对来源不易的少量组织尤为有效。通过对血吸虫成虫ＲＮＡ变性琼脂糖凝胶电泳，观察到日本血吸虫大亚基ｒＲＮＡ存在休丙缺口现象，随核糖体小亚基ＲＮＡ一道电泳迁移。     

日本血吸虫成虫RNA的快速分离纯化

应用异硫氨酸胍-酚-氯访一步法提取日本血吸虫总RNA，在1h左右即可提取纯度高、完整性较好的RNA。该方法简单易行，既经济又省时，对来源不易的少量组织尤为有效。通过对血吸虫成虫RNA变性琼脂糖凝胶电泳，观察到日本血吸虫大亚基rRNA存在体内缺口现象，随核糖体小亚基RNA一道电泳迁移。     

核糖核酸对家兔日本血吸虫性肝纤维化病理及超微结构…

应用家兔日本血吸虫病模型，在不同阶段进行了肝内核糖核酸含量的测定和光镜，电镜观察肝组织相应的变化。结果显示感染血吸虫后，肝内核糖核酸含量减少，光镜下肝细胞变性坏死程度与胶原纤维分布明显增多，经核糖核酸治疗后，肝内核糖核酸含量增加的同期，肝组织病变明显减轻，电镜观察在核糖核酸减少时，贮脂细胞，枯否氏细胞增多。胶原纤维分布广泛，经核糖核酸治疗后，上述细胞及胶原纤维相应减少，提示核糖核酸对血吸虫性肝纤维     

日本血吸虫成虫RNA CHOMCZYNSKI法快速分离纯化

应用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法抽提日本血吸虫成虫RNA,能够在数小时内抽提出完整的成虫RNA。此法对于分离数量很少的寄生虫材料中的RNA尤为有效。通过对日本血吸虫成虫RNA变性琼脂糖凝胶电泳分析,发现其核糖体大亚基RNA(L-rRNA)体内切口(in vivo nick)现象的存在。并随核糖体小亚基RNA(S-rRNA)一道电泳迁移。反映了L-rRNA的后转录加工。     

日本血吸虫免疫核糖核酸传递免疫活性的研究

从日本血吸虫感染兔脾脏提取特异性免疫核糖核酸(SiRNA),以巨噬细胞移动抑制试验和斑点酶标免疫吸附试验分别检测免疫核糖核酸iRNA传递特异性细胞免疫和体液免疫水平。结果:无论采用体内或体外致敏的方法,SiRNA均能将特异性细胞免疫传递给正常小鼠。SiRNA注射于正常小鼠腹腔后,可使正常小鼠产生特异性抗体。     

核糖核酸对家兔日本血吸虫性肝纤维化病理及超微结构变化的影响

应用家兔日本血吸虫病模型，在不同阶段进行肝内核糖核酸含量的测定和光镜、电镜观察肝组织相应的变化。结果显示感染血吸虫后，肝内核糖核酸含量减少。光镜下肝细胞变性坏死程度与胶原纤维分布明显增多。经核糖核酸治疗后，肝内核糖核酸含量增加的同期，肝组织病变明显减轻。电镜观察在核糖核酸减少时，贮脂细胞、枯否氏细胞增多。胶原纤维分布广泛，经核糖核酸治疗后，上述细胞及胶原纤维相应减少。提示核糖核酸对血吸虫性肝纤维化的形成有直接影响，核糖核酸可以减轻病变程度，阻抑肝纤维化的进展。     

日本血吸虫核糖核酸酶T2的表达及其功能分析

目的制备重组151本血吸虫核糖核酸酶T2蛋白（rSj RNase T2）,并分析其生物学功能。方法根据编码RNase T2开放阅读的基因序列设计、合成一对5’端带有酶切位点的引物。采用PCR方法从质粒CP1412/PEu—GST中扩增编码RNase T2蛋白成熟肽的基因片段,亚克隆到表达载体pET28a（＋）中,构建重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a。将重组表达质粒转化到E．coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达,用镍螯合亲和层析胶在变性条件下纯化rSj RNase T2蛋白。纯化蛋白通过尿素浓度梯度透析的方法进行复性,制备可溶性rSj RNase T2。以酵母RNA为底物进行消化,采用琼脂糖凝胶电泳的方法检测rSj RNase T2酶活性。用纯化的rSj RNase T2免疫小鼠,采用酶联免疫法（ELISA）检测小鼠血清特异抗体水平,观察其抗原性;采用检测Western blot抗rSj RNase T2抗体IgG与成虫可溶性虫抗原、成虫外分泌抗原、虫卯可溶性抗原和虫卵外分泌抗原的反应性,并观察Sj RNase T2在虫体中的分布。以rSj RNase T2刺激巨噬细胞RAW264．7,通过流式分析观察RAW264．7细胞表面标志物CD16／32、CD206表达水平的变化,采用RTPCR检测RAW264．7细胞内诱导型一氧化氮合酶与精氨酸酶基因mRNA的表达水平,采用ELISA检测RAW264．7细胞培养上清液中IL-12及IL-10水平的变化,以观察Sj RNase T2的免疫凋节功能。结果重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a构建成功,经IPTG诱导,能表达重组Sj RNase T2蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,经过复性能获得部分可溶性蛋白。rSj RNaseT2具有酶活性,能够水解酵母RNA。ELISA检测rSj RNase T2免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1：200000,该抗血清能识别来源于血吸虫虫卯及虫卯外分泌抗原中的天然RNase T2。rSj RNase T2可诱导巨噬细胞向M2型方向转化,表达高水平的IL-10、精氨酸酶及CD206表面分子。结论rSj RNase T2表达成功。该蛋白具有天然的酶学特性和抗原性,能调节巨噬细胞向M2型方向分化。     

日本血吸虫成虫培养细胞骨架系统的研究

目的：研究日本血吸虫成虫培养细胞的骨架系统。方法：将日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,以RPMI－1640含20％小牛血清附加常量抗菌素的培养基培养,用考马斯亮蓝染色法和魁笔环肽荧光染色法显示培养细胞骨架。结果：考马斯亮蓝染色显示日本血吸虫成虫细胞骨架呈网络状结构,均钭分布于胞质中;用（NH4）2SO4抽提后考马斯亮蓝色显示细胞骨架无明显改变;鬼笔环肽荧光染色后可见细胞内有均匀荧光亮点。结论：日本血吸虫成虫培养细胞骨架呈致密网络状结构,以中间纤维为主,缺乏粗大的微丝束。     

日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究

本文报道日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究.结果表明:日本血吸虫的成虫细胞,在合成培养基RPMI-1640和5%的小牛血清、台成培养基TC-199和10%或20%的小牛血清培养液中,在附加常量抗菌素、pH值为7.2—7.4、培养温度为36℃一37℃条件下,其存活时间均可超过150d.另外,成虫细胞在未加抗菌素或附加一定量(常量或两倍于常量)抗菌素的培养液中的存活天数,没有明显差别.     

日本血吸虫3－磷酸甘油醛脱氢酶的分离与纯化

介绍了一种分离与纯化日本血吸虫３－磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的简易方法。通过超速离心、硫酸铰沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ－５２）柱与ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离、纯化，获得了电泳纯的日本血吸虫３－磷酸甘油醛脱氢酶。日本血吸虫具有丰富的ＧＡＰＤＨ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示其分子量为３７ｋＤａ，纯化的日本血吸虫的３－磷酸甘油醛脱氢酶可用于研制日本血吸虫候选疫苗的研究。     

PHA诱导日本血吸虫成虫培养细胞增殖的研究

研究PHA对日本血吸虫成虫培养细胞的促增殖作用。方法用浓度为333．3ug／ml的PHA处理日本血吸虫成虫培养细胞24h，在光镜和电镜下观察培养细胞的增殖情况。结果在光镜下发现在老化的培养细胞中间出现一些类似于淋巴母细胞样的新细胞；在光镜和扫描电镜下观察到有呈哑铃状的成对细胞；在透射电镜下观察到有细胞核膜消失，染色质变成粗颗粒状．中心粒一分为二，两中心粒之间还有纺锤丝牵引；还观察到处于分裂早期的细胞，核中染色质浓缩成四块状，核膜有部分消失、结论PHA对日本血吸虫成虫培养细胞有一定的促增殖作用。     

不同地区日本血吸虫成虫可溶性抗原免疫反应性的比较

应用酶联免疫印迹技术检测我国不同地区日本血吸虫雌、雄及雌雄合抱虫体可溶性抗原(AWA),结果上述三者与相应感染动物血清及慢性日本血吸虫病人血清反应,分别显示出4～20、6～34和3～29条反应带;一地日本血吸虫AWA与各地感染鼠血清反应呈明显相似,而不同地区虫体AWA与各感染鼠血清反应性之间则显示出大的差异性;与不同感染宿主血清(感染鼠、兔和病人血清)的反应带及其分子量互不相同;各地雌、雄虫之间也不同,一般雄虫较雌虫反应带多且强;不同宿主(兔和鼠)体内获取的江苏虫体AWA的反应性也存有差异。提示不同地区日本血吸虫成虫可溶性抗原的血清反应性存在着地区及性别间差异。     

快速分离和纯化感染6wk兔肝组织中的日本血吸虫虫卵

从感染兔肝组织中分离、纯化具有生物活性的日本血吸虫虫卵，是分子生物学研究的基本需要。本文采用匀浆—分级过滤—中速低温离心沉淀—反复洗涤法，获得高纯度、具有活性的虫卵，回收率达71％，毛蚴孵出率达90％以上。本方法经济简便、快速易行、效率高、适用于大批量操作。     

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞磷酸酶影响的研究

目的 研究甲基硝基亚硝基胍（MNNG）对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）活性的影响。方法 将虫龄26d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上，在RPMI－1640含20％小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中培养第7天时，随机分为实验组和对照组，实验组用含浓度为3μg/mlMNNG的常规培养基处理48h，对照组用不含MNNG的常规培养基处理同样时间，随后换用常规培养基培养3周，当再换用含5％小牛血清的培养基培养1周时，分别用Gomori钙钴法和Gomori硫化铅法对两组培养细胞进行AKP和ACP细胞化学染色，用实验组培养细胞的AKP、ACP活性明显高于对照组培养细胞的活性（P＜0．01）。结论 MNNG能增强日本血吸虫成虫培养细胞AKP、APC的活力，对培养细胞有促生长或／或诱导其转化的作用。