罗格列酮对RIN-m细胞高糖损害干预作用研究

目的 研究罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对胰岛β细胞高糖损害的干预作用.方法 采用生理浓度葡萄糖(5.5 mmol/L)、生理浓度葡萄糖 罗格列酮、高浓度葡萄糖(33.3 mmol/L)、高浓度葡萄糖 罗格列酮培养RIN-m细胞.以放射免疫法检测胰岛素分泌水平.以流式细胞仪及TUNEL法检测RIN-m细胞凋亡.RT-PCR方法 检测胰腺十二指肠同源盒-1(pancreatic duodenal homeobox factor-1,PDX-1)和胰岛素mRNA表达.结果 ①RIN-m细胞与33.3 mmol/L的葡萄糖孵育2周后胰岛素分泌功能开始下降,细胞凋亡率增长2.7倍(P＜0.01).而罗格列酮可以修复胰岛素的分泌,降低RIN-m细胞凋亡率.②罗格列酮上调 PDX-1(1.30±0.06 vs. 1.61±0.10,P＜0.01)和胰岛素 (1.75±0.09 vs. 1.98±0.11,P＜0.01) mRNA表达.结论 高糖抑制胰岛β细胞胰岛素分泌,并诱导其凋亡.罗格列酮具有直接保护β细胞免于高糖毒性的作用.     

烟酰胺单核苷酸对RIN-m5f细胞中胰岛素分泌及PDX-1和FoxO1基因表达的影响

目的：在细胞水平研究烟酰胺单核苷酸（nicotinamide mononucleotide,NMN）对胰岛素分泌的调节作用及其对与胰岛素分泌相关的重要转录因子胰十二指肠同源盒基因（pancreatic and duodenalhomeobox-1,PDX-1）和分叉头框家族转录因子1（forkhead box-containing protein O-1,FoxO1）基因表达的影响。方法：采用大鼠胰岛素ELISA试剂盒检测RIN-m5f细胞胰岛素分泌水平。用Real-time PCR检测RIN-m5f细胞PDX-1和FoxO1的mRNA表达水平。用Western印迹检测RIN-m5f细胞PDX-1蛋白表达水平。结果：用瑞格列奈10 nmol/L＋NMN 100μmol/L处理RIN-m5f细胞48 h,与空白对照及DMSO对照组相比,胰岛素分泌量均显著增高（P〈0.05）;与NMN 50μmol/L组比较,胰岛素分泌量的增高也有统计学意义（P〈0.05）。10,50和100μmol/L的NMN作用RIN-m5f细胞36 h,PDX-1的mRNA表达量均上调（依次为P〈0.05,P〈0.01,P〈0.001）。100μmol/L剂量组与10μmol/L和50μmol/L剂量组比较差异也有统计学意义（P〈0.001）。50,100和200μmol/L的NMN作用RIN-m5f细胞36或48 h,PDX-1的蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：NMN可以调控RIN-m5f细胞中胰岛素的分泌及PDX-1的mRNA表达水平。     

血管紧张素Ⅱ对RIN-m细胞增殖和凋亡的影响及氯沙坦的保护作用

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对β细胞（RIN-m）增殖和凋亡的影响及氯沙坦的保护作用。方法 常规培养RIN-m细胞,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度AngⅡ(0、0.1、1、10、100nmol/L)在24、36及48h对RIN-m细胞增殖的影响;随后分为空白对照组,100nmol/LAngⅡ组和氯沙坦预处理组,各组干预48h后,MTT比色法检测细胞增殖活性,透射电镜观察细胞的形态学改变以及AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 ⑴AngⅡ浓度及时间依赖性显著抑制RIN-m细胞增殖（P<0.001）,以100nmol/LAngⅡ作用48h抑制的最为明显;⑵各组干预48h后,100nmol/LAngⅡ组RIN-m细胞增殖明显低于空白对照组（P<0.001）,氯沙坦预处理组细胞增殖与空白对照组差异无统计学意义,明显高于100nmol/LAngⅡ组（P<0.001）;⑶透射电镜观察RIN-m细胞,空白对照组和氯沙坦预处理组细胞形态大致正常,100nmol/LAngⅡ组细胞发生典型凋亡样改变;⑷100nmol/LAngⅡ组RIN-m细胞凋亡率高于空白对照组（P<0.001）,氯沙坦预处理组凋亡率与空白对照组差异无统计学意义（P>0.05）,明显低于100nmol/LAngⅡ组（P<0.001）。结论AngⅡ抑制β细胞增殖,诱导β细胞凋亡,氯沙坦预处理可以拮抗AngⅡ的效应,对β细胞起到保护作用。     

ＰＡＲＰ-１抑制剂在游离脂肪酸诱导胰岛细胞凋亡中的作用

目的:探讨PARP-1抑制剂3-氨基苯酰胺(3-Aminobenzamide,3-AB)在游离脂肪酸棕榈酸诱发的胰岛细胞凋亡和坏死中的作用.方法:常规培养RIN-m5F细胞株,采用四甲基偶氮唑盐(MTY)比色法观察棕榈酸和PARP-1抑制剂3-AB作用后细胞的增殖情况,并用流式细胞术及TUNEL法分析细胞凋亡和坏死.结果:棕榈酸明显抑制RIN-m5F细胞的增殖(P<0.01);低浓度3-AB与棕榈酸共同孵育24 h后细胞的凋亡率和坏死率显著低于棕榈酸单独培养(P<0.01);高浓度3-AB与棕榈酸共同孵育后较棕榈酸单独培养时细胞凋亡率显著性增强(P<0.01).结论:低浓度3-AB能有效抑制棕榈酸所诱导的胰岛细胞株RIN-m5F细胞坏死,缓解细胞凋亡;而高浓度3-AB则促进细胞凋亡.进一步说明了3-AB在棕榈酸所诱导的胰岛细胞凋亡过程中具有双重作用,此可为2型糖尿病的治疗提供一个新的靶点.     

PDX-1蛋白对棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用

目的探讨PDX-1蛋白对棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用。方法PDX-1基因克隆及表达质粒的构建,PDX-1蛋白的表达、纯化和鉴定,PDX-1蛋白保护棕榈酸引起的胰岛细胞凋亡的研究。结果PDX-1蛋白可以延缓胰岛细胞的自然凋亡过程,保护其三维形态;可以降低处理后的胰岛Caspase-3活性,同时可以增加葡萄糖刺激胰岛素释放,PDX-1蛋白干预后的棕榈酸组（1.560±0.074）uIU/mL,与对照组（1.426±0.056）uIU/mL相比有显著差异（P〈0.05）。结论表明PDX-1蛋白可以减少棕榈酸诱导的胰岛凋亡,保护β细胞功能。     

游离脂肪酸对大鼠胰岛分泌功能和胰岛细胞凋亡的影响研究

目的：研究游离脂肪酸对体外培养SD大鼠胰岛功能和胰岛细胞凋亡的影响并探讨可能机制。方法：取健康雄性SD大鼠胰岛原代分离培养,分为6组,培养1d：NC1组（5．6mmol／L葡萄糖）、FFA1组（0．25mmol／L）、FFA2组（0．5mmol／L）;培养3d：NC2组（5．6mmol／L葡萄糖）、FFA3组（0．25mmol／L）、FFA4组（0．5mmol／L）;每组6个样本,每个样本20个胰岛。采用RT—PCR扩增胰岛素、PDX-1、Bax、Caspase-3基因mRNA表达,TUNEL法检测胰岛细胞凋亡率,放射免疫法检测胰岛素水平。结果：①FFA1、FFA2组Insulin、PDX-1基因表达量、胰岛素分泌较NC1组明显下降,FFA1、FFA2组凋亡基因Bax、Caspase-3表达量及胰岛细胞凋亡率较NC1组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;②FFA3、FFA4组Insulin、PDX-1基因表达量、胰岛素分泌较NC2组明显下降,FFA3、FFA4组凋亡基因Bax、Caspase-3表达量及胰岛细胞凋亡率较NC2组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：游离脂肪酸抑制体外培养SD大鼠胰岛细胞的胰岛素分泌功能,其可能机制是FFA抑制胰岛素基因、PDX-1基因的合成,刺激胰岛细胞凋亡基因Bax、Caspase-3表达,并导致胰岛细胞凋亡,最终导致胰岛细胞分泌功能下降。     

转化生长因子-β1诱导小鼠足细胞凋亡实验研究

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）是否能诱导小鼠足细胞株凋亡以及诱导凋亡的途径。方法（1）体外培养小鼠足细胞株;（2）应用不同浓度（10^-1～104ng／L）TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡;（3）10^3ng／LTGF-β1诱导不同时间（12、24、48h）后观察足细胞凋亡情况;（4）采用流式细胞仪检测AnnexinV、Caspase3;（5）实时定量PCR及Western印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、Smad2、Smad3、Smad7mRNA及蛋白质的表达情况。结果（1）小鼠足细胞在不同浓度（10^-1～10^4ng／L）TGF-β1刺激下,细胞凋亡率明显高于正常对照组（均P〈0.05）;（2）随着TGF-β1浓度增加、凋亡时间增加,足细胞凋亡率增高（P〈0．05）;p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达增加;TGF-β1 103ng／L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24h为最佳诱导凋亡时间;（3）与正常对照组比较,10^3ng／LTGF-β1诱导后Caspase3阳性细胞比率显著增加（P〈001）．p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7蛋白质表达亦显著增加（P〈0．01）。结论TGF-β1能诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。TGF-β1通过Smad通路、p38MAPK通路以及线粒体通路诱导小鼠足细胞凋亡。     

TLR9激动剂在胰腺星状细胞介导的胰腺癌耐药中的作用

目的:研究Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)激动剂在胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)介导的胰腺癌化疗耐药中的作用。方法:分离并培养小鼠胰腺星状细胞,采用免疫组化检测小鼠胰腺星状细胞TLR9的表达情况;应用MTT法检测TLR9激动剂OND1826对胰腺星状细胞增殖的影响;将胰腺星状细胞与胰腺癌MIAPaCa-2细胞进行Transwell共培养,分为对照组,共培养组,共培养+OND1826组,48 h后采用ELISA法检测上清液中的氧化亚氮(NO)及白介素-1β(IL-1β)表达量,加入10μg/ml吉西他滨继续培养24 h,采用MTT法检测肿瘤细胞凋亡情况。结果:免疫组化结果显示胰腺星状细胞表达TLR9,TLR9激动剂可抑制胰腺星状细胞生长(P<0.05),与对照组相比,共培养组的NO、IL-1β表达量明显增加,肿瘤细胞凋亡明显减少(P<0.05);OND1826干预后NO、IL-1β表达量有所减少,而肿瘤细胞凋亡有所增加(P<0.05)。结论:TLR9激动剂可抑制胰腺星状细胞的增殖能力,进而抑制星状细胞介导的胰腺癌耐药。     

2型糖尿病GK大鼠胰岛β细胞凋亡的研究

目的研究2型糖尿病GK大鼠胰岛β细胞凋亡可能机制。方法选择10周龄雄性GK大鼠为2型糖尿病大鼠模型,同源雄性Wistar大鼠为对照组,均以普通饲料喂养12周,定期行OGTT、血脂、空腹胰岛素测定。12周后处死大鼠,光镜下HE染色观察胰岛结构,电镜观察大鼠胰腺组织超微结构的改变,免疫组化法检测胰腺组织Bcl-2及Bax蛋白的表达,TUNEL法检测胰腺组织的β细胞凋亡数。结果与Wistar大鼠比较,GK大鼠血糖呈轻、中度升高（P〈0.05）,尤以餐后血糖升高明显;血清总胆固醇、低密度脂蛋白升高（P〈0.01）,血清甘油三酯降低（P〈0.05）,血清高密度脂蛋白无明显变化（P〉0.05）,血浆胰岛素水平升高（P〈0.01）。透射电镜观察Wistar大鼠的胰岛结构完整,GK大鼠胰岛β细胞呈现凋亡早期改变。GK大鼠Bcl-2蛋白表达低于Wistar大鼠（P〈0.05）,Bax蛋白表达高于Wistar大鼠（P〈0.01）,β细胞凋亡数高于Wistar大鼠（P〈0.01）。结论 GK大鼠早期即可呈现胰岛β细胞凋亡,凋亡相关基因Bcl家族成员间的失衡是导致GK大鼠胰岛β细胞凋亡的可能机制之一。     

百里醌联合吉西他滨对人胰腺癌细胞株BxPC-3生长和凋亡的影响

目的探讨百里醌联合吉西他滨对人胰腺癌细胞株BxPC-3的影响。方法百里醌、百里醌联合吉西他滨分别作用于人胰腺癌细胞株BxPC-3,培养24、48及72 h后检测细胞存活率（两药联合培养72 h）。采用CCK-8法检测两组BxPC-3细胞的增殖情况,流式细胞术检测BxPC-3细胞凋亡情况。结果百里醌对BxPC-3细胞的增殖抑制作用呈明显浓度和时间依赖性。其联合吉西他滨作用72 h后胰腺癌BxPC-3细胞的存活率仅为27.43%,与单用百里醌（49.38%）比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;百里醌单用于BxPC-3细胞24 h后,胰腺癌细胞早期凋亡率为（4.80±1.53）%,联合用药BxPC-3细胞凋亡率为（21.40±3.15）%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论百里醌可显著抑制人胰腺癌BxPC-3细胞生长,有效增强吉西他滨对人胰腺癌BxPC-3细胞的增殖抑制作用,其协同作用以诱导胰腺癌细胞凋亡方式为主。     

丹蛭降糖胶囊联合运动对糖尿病大鼠胰腺JNK信号通路的影响

目的：观察丹蛭降糖胶囊联合运动对糖尿病大鼠胰腺c—Jun氨基末端激酶（c—Jun N-terminal kinase,JNK）信号通路的影响,探讨其治疗糖尿病的可能机制。方法：雄性Wistar大鼠78只,用小剂量链脲佐菌素联合高脂饲料的方法建立糖尿病大鼠模型,并将造模成功的60只大鼠分为模型组、运动组、丹蛭降糖胶囊组及运动联合丹蛭降糖胶囊组;另取12只大鼠作为正常对照。治疗8周后,用免疫组织化学法、蛋白质印迹法检测大鼠胰腺组织中磷酸化JNK（phospho-JNK,p-JNK）、胰腺十二指肠同源异型盒基因1（pancreatic and duodenal homeobox-1,PDX-1）及胰岛素的表达水平。结果：模型组胰腺组织中的P—JNK表达水平明显高于正常对照组（P〈0．01）,而PDX-1和胰岛素含量则明显低于正常对照组（P〈0．01）;给予中药、运动干预能明显抑制JNK的活性,提高PDX-1和胰岛素的表达水平（P〈0．05,P〈0．01）。结论：运动及丹蛭降糖胶囊联用可能是通过抑制糖尿病大鼠JNK信号通路,对糖尿病胰岛β细胞起保护作用。     

轻度增高的游离脂肪酸与脂多糖协同抑制中性神经酰胺酶诱导INS⁃1细胞凋亡及胰岛素分泌异常的机制

目的：探讨轻度增高的游离脂肪酸与脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）协同对大鼠胰岛β细胞株INS?1凋亡及胰岛素分泌的影响及机制。方法：采用0.125 mmol/L棕榈酸和不同浓度的LPS（1、10、50 ng/mL）单独、联合作用INS?1细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Cleaved caspase?3表达;棕榈酸和LPS（50 ng/mL）单独或联合刺激INS?1细胞24 h后,HPLC法检测中性神经酰胺酶（neutral ceramidase,NCDase）活性,ELISA法检测胰岛素分泌功能;并观察转染pEGFP?C3?NCDase重组质粒后,棕榈酸和LPS刺激的INS?1细胞凋亡率及胰岛素分泌功能的改变。结果：与对照组相比,棕榈酸或LPS（50 ng/mL）单独处理,对INS?1细胞凋亡及胰岛素分泌无明显影响,但两者联合可明显增加凋亡率及Cleaved caspase?3表达（P < 0.05）。棕榈酸联合LPS作用24 h后明显抑制基础胰岛素分泌（P < 0.01）,对细胞内胰岛素含量及葡萄糖刺激的胰岛素分泌无影响。此外,棕榈酸或LPS单独刺激不影响INS?1细胞NCDase,两者联合则显著抑制其活性（P < 0.01）;而高表达NCDase能明显缓解棕榈酸联合LPS诱导的凋亡和基础胰岛素分泌减少（P < 0.05）。结论：轻度增高的游离脂肪酸联合LPS可通过抑制鞘脂信号分子代谢的关键酶——NCDase活性,促进胰岛β细胞凋亡并抑制基础胰岛素分泌。     

昆明小鼠胰腺导管上皮细胞转分化为胰岛样细胞的实验研究

目的:培养小鼠胰腺导管上皮细胞并使之转分化为胰腺干细胞及胰岛样细胞,为胰岛移植治疗糖尿病提供细胞来源.方法:分离培养昆明小鼠胰腺导管上皮细胞,以添加有角化细胞生长因子(KGF)、肝细胞生长因子(HGF)和烟酰胺的DMEM/F12培养基培养,分别于光镜和电镜下观察细胞形态和超微结构的变化.采用细胞免疫化学染色检测第1天和16天时CK-19、PDX-1蛋白的表达,RT-PCR检测第1天和16天时胰岛素和胰高血糖素基因的表达,第21天行双硫腙染色试验及葡萄糖刺激的胰岛素释放试验.结果:培养第7～10 d,细胞快速增殖成鹅卵石样;培养第16～21 d,细胞逐渐聚集,最终形成胰岛样细胞团;培养第16 d,细胞超微结构的变化表明上皮细胞在向干细胞转分化.免疫化学染色显示,分离第1天,大部分细胞CK-19染色阳性,偶见PDX-1弱阳性细胞,第16天时,CK-19阳性细胞快速增殖形成细胞团,大部分细胞PDX-1染色阳性.RT-PCR显示培养第16天,细胞胰岛素和胰高血糖素表达较培养第1天明显增强(P<0.01).培养第21天,胰岛样细胞团更加成熟,双硫腙着色阳性,且在高糖(15 mmol/L)刺激下的胰岛素释放较低糖(5.6 mmol/L)刺激时增加了1.6倍(P<0.05).结论:小鼠胰腺导管上皮细胞在体外培养条件下可增殖,并具有干细胞潜能,可转分化为胰岛素分泌细胞.     

单核细胞趋化蛋白-1通过促进胰淀素表达调控胰岛β细胞凋亡

目的观察单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对胰岛β细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养大鼠胰岛β细胞株INS-1E,给予1ng/ml的MCP-1刺激48h后,real-time PCR及western blot检测细胞中Amylin的mRNA及蛋白表达水平,同时流式细胞仪检测细胞凋亡情况。细胞转染Amylin SiRNA,再给予MCP-1刺激,同样采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况。结果 INS-1E细胞经MCP-1刺激后,细胞中Amylin的mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05),细胞出现了凋亡现象。而预先转染了抑制Amylin表达的siRNA后再进行MCP-1的刺激,此时细胞的凋亡率低于单独刺激组(P<0.05)。结论 MCP-1通过促进胰淀素的表达调控胰岛β细胞的凋亡,从而影响血糖代谢。     

八肽胆囊收缩素对游离脂肪酸损伤胰岛β细胞氧化应激的影响

目的：观察八肽胆囊收缩素（CCK-8）对游离脂肪酸（FFAs）损伤的小鼠胰岛β细胞（本文为 NIT-1细胞株）氧化应激及细胞增殖的影响,探讨 CCK-8对胰岛β细胞保护作用的机制。方法将培养良好的 NIT-1细胞分为对照组、FFAs 组（加入0．25 mmol／L 油酸＋0．25 mmol／L 软脂酸）、CCK-8组（FFAs 组基础上同时加入1×10-8 mmol／L CCK-8）,分别培养48 h 和72 h ,观察细胞生长状态,M TT 比色法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,检测细胞培养上清液总抗氧化能力（T-AOC）,谷胱甘肽还原酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT ）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA ）活性。结果 FFAs 组显微镜下可见较多细胞碎片,CCK-8组细胞碎片明显减少;与 FFAs 组比较,48 h 和72 h CCK-8组的光密度（OD）570值显著增高（均 P＜0．01）,与 CCK-8处理48 h 比较,72 h 组 OD570值明显增高（P＜0．01）;与 FFAs 组比较,CCK-8组细胞上清液 CAT 、T-AOC 、SOD及 GSH-Px 活性均明显增高,MDA 含量降低,差异有统计学意义（P＜0．05）;72 h CCK-8组较48 h 组 CAT 、SOD 活性增加,MDA含量降低。结论 CCK-8对 FFAs 损伤的胰岛β细胞具有一定的抗氧化应激作用,同时 CCK-8能够显著刺激 NIT-1细胞的增殖。     

左旋精氨酸/一氧化氮通路对小鼠胰岛β细胞凋亡的影响

目的研究左旋精氨酸／一氧化氮通路对胰岛β细胞凋亡的影响，初步探讨一氧化氮（NO）诱导胰岛β细胞凋亡的作用。方法体外培养的NIT-1小鼠胰岛β细胞，用不同浓度的L-精氨酸（L-arg）处理，6h后采用Griess化学显色法检测细胞培养液内的NO水平，Annexin-V／PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡。而后联合应用hemoglobin处理细胞，分为3组：对照组；L-arg组；L-arg＋hemoglobin组；6h后检测NO的水平和细胞的凋亡，并用Western Blot检测P53蛋白的表达。结果与对照组比较，L-arg 4mg／mL处理组的NO水平最高（P〈0．05），细胞凋亡最明显（P〈0．05）；hemoglobin干预后，NO水平和细胞凋亡率均较L-arg单独处理组明显降低（P〈0．05），与正常对照组之间差异没有显著性（P〉0．05）；Western Blot提示L—arg组的P53蛋白的表达水平明显高于对照组和hemoglobin处理组（P〈0．05）。结论L-arg／NO通路可诱导NIT-1小鼠胰岛β细胞凋亡，并呈现一定程度的剂量依赖性；NO可能通过P53的活化诱导NIT-1胰岛细胞凋亡。     

大蒜素对人胃癌SGC7901细胞生长的影响

目的探讨大蒜素（diallyl trisulfide,allicin）对人胃癌细胞株SGC7901体外生长的影响。方法大蒜素处理胃癌细胞株SGC7901,MTT法检测SGC7901的生长,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测Ki67的表达。结果大蒜素作用于SGC7901细胞后,对其增殖表现出了明显的抑制作用,且呈浓度依赖性;大蒜素作用于SGC7901细胞12、24和48 h后,细胞凋亡率分别为2.41%、7.30%和15.44%,明显高于对照组（P〈0.05）;大蒜素作用48h后,Ki67的阳性表达率下降（P〈0.05）。结论大蒜素可以抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

肝X受体激动剂T0901317对INS-1细胞株凋亡的影响

目的探讨肝X受体激动剂T0901317对软脂酸诱导的大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1凋亡的促进作用。方法根据不同干预条件分为空白对照组（对照组）,T0901317干预组（T0901317组）。24h、48h后应用MTT检测各组细胞增殖活性;48h后Western blot检测细胞因子Bax及Bcl-2的表达、细胞凋亡应用Caspase-3活力检测、ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果T0901317组细胞增殖活性较对照组增殖受抑制,细胞Caspase-3活性显著高于对照组。T0901317组较对照组上调Bax、下调Bcl-2表达、ROS含量显著升高。结论T0901317可以促进胰岛β细胞的凋亡。     

茜草提取物对胃癌MGC-803细胞株的诱导凋亡及抗增殖作用

[目的]探讨茜草提取物对胃癌MGC-803细胞株的诱导凋亡、抗增殖作用及凋亡后bcl-2基因表达的影响.[方法]利用组织细胞培养技术及MTT法,通过电泳分析及多种细胞染色等方法.观察茜草提取物对胃癌MGC-803细胞株的凋亡及抗增殖情况.[结果]茜草提取物质量浓度在0.2～1.0 g/L范围内对胃癌MGC-803细胞株均具有抑制增殖作用,且呈浓度依赖性;形态学观察结果显示,各剂量实验组胃癌细胞均有凋亡形态学改变;TUNEL法检测结果见,茜草提取物质量浓度在0.2～1.0 g/L范围内对胃癌MGC-803细胞株均具有诱导凋亡作用,肿瘤细胞凋亡率(AI)随药物浓度增高而上升,当药物作用48 h时AI达到高峰;DNA电泳检测结果表明,用0.4 g/L茜草提取物作用24 h时可见梯形电泳条带出现;增殖细胞核抗原(PCNA)检测结果显示,PCNA阳性表达率随药物质量浓度的增高及作用时间的延长而降低;凋亡相关基因bcl-2的蛋白表达检测结果显示,0.8 g/L茜草提取物作用于胃癌MGC-803细胞48 h后,bcl-2基因蛋白阳性表达率明显下降.[结论]茜草提取物对胃癌MGC-803细胞株具有诱导凋亡和抑制增殖作用,其诱导凋亡作用可能与下调凋亡抑制基因bcl-2的表达有关.