正常大鼠视网膜苗勒（Müller）细胞的形态学结构特点

目的观察正常大鼠视网膜Müller细胞的形态特征及其与神经细胞之间的区别,从形态学方面探索Müller细胞的生理功能。方法应用透射电镜技术观察正常大鼠视网膜Müller细胞形态结构。结果电镜下视网膜Müller细胞的胞体发出放射状突起,这些坚韧的突起纵贯视网膜全层,几乎占据了神经细胞所没有占据的空间。结论Müller细胞不仅是视网膜的支架,而且是神经节细胞能量的重要来源、是维持视网膜内环境的稳定及保护神经突触传递的重要的神经胶质细胞。     

rhEPO对高糖状态下大鼠Müller细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant hu-man erythropoietin,rhEPO)对高浓度葡萄糖作用下体外培养大鼠视网膜Müller细胞凋亡的保护作用及对Bcl-2和Bax表达的影响。方法提取大鼠视网膜神经细胞及胶质细胞进行混合培养,反复胰酶消化法提纯Müller细胞,随机分为空白组,高糖组及不同浓度rhEPO干预组,培养48 h后应用TUNEL法检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 TUNEL法检测显示空白组见少量凋亡阳性细胞,高糖组阳性细胞明显增多(P<0.05),各rhEPO干预组同高糖组相比凋亡细胞明显减少(P<0.05)。酶联免疫吸附法见高糖组Bcl-2蛋白的表达降低而Bax蛋白表达增高,与对照组相比活性下降,而各浓度rhEPO干预组与高糖组相比细胞活力明显增强,Bcl-2蛋白的表达增加(P<0.05),Bax蛋白的表达降低(P<0.05)。结论高糖能够引发大鼠视网膜Müller细胞发生凋亡,而rhEPO能减少体外培养高浓度葡萄糖状态下大鼠视网膜Müller细胞的凋亡,并能明显增强Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达。提示上调Bcl-2及下调Bax蛋白的表达可能是rhEPO对视网膜Müller细胞抗凋亡保护作用的机制之一。     

神经胶质成熟因子-β诱导糖尿病大鼠视网膜Müller细胞炎症反应的机制研究

目的 研究神经胶质成熟因子-β(GMFB)对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞活化的作用及相关机制。方法SPF级雄性SD大鼠60只，采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ,55 mg/kg)制备糖尿病模型后分为STZ组、STZ+AAVGMFB组和STZ+AAV-GMFB+K252a组，每组15只。另取15只正常大鼠作为CON组。STZ+AAV-GMFB组和STZ+AAV-GMFB+K252a组大鼠于成模8周后玻璃体腔单次注射AAV-GMFB腺病毒载体5μL。STZ+AAV-GMFB+K252a组在注射腺病毒基础上给予腹腔注射25μg/（kg·d）的K252a。12周后，免疫荧光检测GMFB在Müller细胞中的表达，免疫组织化学染色检测视网膜胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达，酶联免疫吸附试验检测视网膜炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-1β、IL-6的表达，Western blot检测GMFB、脑源性神经营养因子（BDNF）及磷酸化酪氨酸激酶受体B(p-TrkB)蛋白相对表达水平。HE染色检测视网膜病理改变。结果 GMFB在Müller细胞中大量表达。与CON组比较，S...     

离体培养的大鼠下丘脑神经细胞突起反应的衰老性变化

目的　研究长期培养的大鼠下丘脑神经细胞突起的衰老性变化。方法　通过在不同培龄的神经细胞突起端注入谷氨酸 ,观察其突起的转向、伸长、缩短等可塑性反应的一个衰老性变化。结果　 1.谷氨酸可使一定比例的神经细胞突起伸长 ,但随着细胞的衰老 ,神经突起这种伸长功能减弱或消失。 2 .随着细胞的衰老 ,由谷氨酸诱发的突起缩短的比例增加。 3.钙通道阻滞剂可影响谷氨酸诱发的神经突起的伸长 ,但不影响其缩短反应。结论　培养的下丘脑神经细胞的衰老进程是进行性的 ,且随其进展会导致神经细胞突起的伸长能力趋于降低     

胶质瘤细胞诱导神经干细胞迁移作用的实验研究

目的观察胶质瘤细胞在体外培养条件下对神经干细胞是否有诱导迁移的作用。方法①从新生1～2dSD大鼠脑皮层分离培养神经干细胞,进行神经干细胞及其增殖能力鉴定。②胶质瘤细胞与神经干细胞限定区域联合培养,观察神经干细胞的生长及其形态学变化。结果①所获得神经细胞球Nestin染色阳性,传代神经细胞球抗BrdU染色阳性。②可观察到神经干细胞球周围长出细胞突起,在靠近胶质瘤细胞的一侧,细胞突起的密度及长度均大于其他方向上的突起并且可见部分干细胞向胶质瘤细胞方向的移动。结论胶质瘤细胞在体外对神经干细胞有诱导迁移作用。     

乳腺分叶状肿瘤一例

乳腺分叶状肿瘤是一种罕见的乳腺疾病,占女性乳腺肿瘤的0．3％-0．5％。本病1938年由Müller首先叙述并命名为乳腺叶状囊肉瘤。目前世界卫生组织将其更名为分叶状肿瘤,显示其较大范围的临床病理行为。笔者报道了我院收治的一例乳腺分叶状肿瘤病例。[第一段]     

糖尿病视网膜病变神经细胞凋亡及褪黑素对其影响的实验研究

目的 探讨褪黑素对2型糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响.方法 将48只Wistar雄性大鼠完全随机分为正常组(12只)、模型组(18只)和褪黑素组(各18只).制作2型糖尿病大鼠模型.褪黑素组以褪黑素10 mg/(kg·d)剂量灌胃,共12周.取出视网膜组织,分别在光镜和透射电镜下观察视网膜结构变化,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察视网膜神经细胞的凋亡.结果 电镜变化:模型组神经节细胞结构改变,部分神经节细胞出现凋亡;褪黑素组变化较模型组轻微.TUNEL方法检测结果:模型组、褪黑素组和正常组凋亡细胞数分别为(20.07 ±0.24)、(14.42 ±0.51)和(4.22±0.54)个,模型组和褪黑素组视网膜凋亡细胞均明显多于正常组(均P＜0.01),但褪黑素组明显少于模型组(P＜0.01).结论 糖尿病视网膜病变早期存在着视网膜神经细胞的凋亡现象,褪黑素能够抑制视网膜神经细胞的凋亡.     

银杏内酯B促进体外培养胚胎大鼠脊髓神经细胞生长发育的研究

目的探讨GB对体外培养的胚鼠脊髓神经元存活和生长发育的作用。方法胚胎大鼠脊髓神经细胞原代培养,相差显微镜下进行细胞计数和显微测量,观察GB对神经元存活和生长发育的作用。对培养7d细胞行NSE免疫组化染色,光镜下观察GB对NSE染色阳性神经元生长发育的影响。结果GB及NGF能够促进体外培养胚胎大鼠脊髓神经细胞及NSE染色阳性神经元的存活,促进其细胞及突起的生长。其促进脊髓神经细胞的存活、胞体及突起发育的作用与NGF一致,而其促进神经突起分化与生长的作用强于NGF。结论NGF和GB能促进培养大鼠发育期脊髓神经元存活、分化和生长,并且表现出各自作用的特异性。     

DNA抑制剂在新生大鼠脑神经干细胞体外培养中的作用

<正>神经胶质细胞和成纤维细胞是神经元培养的支持细胞,前者可提供神经细胞营养因子,后者可以提供成纤维细胞生长因子,二者均有维持神经细胞存活和神经细胞突起生长的功能,但过度增殖反而影响神经细胞的生长、分化,使神经     

丁基苯酞对低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用

为进一步探讨丁基苯肽对神经的保护作用,用原代培养大鼠皮层神经细胞的方法,以LDH和细胞形态等指标,观察了l-丁基苯酞(l-NBP)和d-丁基苯酞(d-NBP)对低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用。结果表明:l-NBP和d-NBP能剂量依赖性地抑制低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞内LDH的释放,降低细胞死亡率,并能改善受损细胞的形态;此外还能明显减轻低糖低氧诱导的神经细胞内粗面内质网脱颗粒及多聚核糖体解聚。提示:NBP对低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞损伤有明显保护作用。     

制剂及药物传输系统——Nanobiotix加入“SonoDrugs”联盟

崭露头角的法国纳米医学公司Nanobiotix宣布将与荷兰飞利浦公司、荷兰Erasmus大学医学中心、德国M&#252;nster大学、伦敦大学合作,共同实施一为期4年的项目“SonoDrugs”,该项目旨在最大化发挥药物治疗心血管疾病和癌症疗效并将副作用降至最低。在欧盟,这两种疾病分别为导致死亡的第一和第二元凶。     

果糖二磷酸锌对体外培养新生大鼠海马神经细胞生长发育的影响

目的研究不同剂量果糖二磷酸锌(ZnFDP)对体外培养新生大鼠海马神经细胞的生长发育的影响.方法采用体外培养的新生大鼠海马神经细胞,在血清培养液中加入低、中、高剂量ZnFDP,使之终浓度分别为2.5、12.5、125μg*ml-1,通过细胞形态学观察,神经元突起和胞体生长状况的定量比较,不同培养期细胞存活数和培养液中乳酸脱氢酶(LDH)渗漏量的测定,分析研究了ZnFDP对海马神经细胞生长发育的影响.结果培养36h后与对照组比,中剂量ZnFDP组海马神经元的突起数目增多,突起长度增加,胞体长径没有显著性变化;低剂量ZnFDP组与对照组比各项指标没有显著差别;高剂量ZnFDP则明显抑制神经细胞分化.培养3d、7d、10d,中剂量ZnFDP组细胞存活数明显高于对照组;培养7d、10d,中剂量ZnFDP组LDH渗漏量明显低于对照组.结论一定量的ZnFDP能促进海马神经细胞的生长发育.     

葛根素对糖尿病大鼠视网膜的保护及对NF-κB表达的抑制

目的探讨糖尿病(DM)大鼠视网膜功能、超微结构的变化和NF-κB的表达及葛根素的干预作用。方法采用单次ip给予链脲佐菌素(STZ)60 mg·kg-1制备DM模型。ig给予葛根素125,250和500mg·kg-1组,连续给药4周。视网膜电图(ERG)测定视网膜功能、透射电镜观察视网膜超微结构、TUNEL法检测视网膜细胞凋亡以及免疫组织化学染色法检测视网膜组织NF-κB p65活性。结果与正常对照组相比,DM模型组ERG的b波振幅明显降低。与DM模型组相比,葛根素250和500 mg·kg-1组的b波振幅明显上升(P<0.05);透射电镜下见DM模型组视网膜神经节细胞,内、外核层细胞均出现线粒体改变。葛根素干预后超微结构改变明显好转。与正常对照组相比,DM模型组视网膜细胞凋亡指数显著增高以及NF-κB p65表达明显增强,葛根素干预后各组凋亡指数均显著下降,葛根素250和500 mg·kg-1组NF-κB p65表达显著下降(P<0.05)。结论 DM大鼠早期即出现神经视网膜功能和超微结构的改变,葛根素可抑制NF-κB的活化,抑制视网膜神经细胞的凋亡从而起到保护神经视网膜的作用。     

氯丙嗪对谷氨酸诱导大鼠脑皮质受损神经细胞的保护作用

目的:观察氯丙嗪(CPZ)对谷氨酸(Glu)诱导的大鼠大脑皮质神经细胞兴奋毒性的影响.方法:用倒置显微镜观察神经细胞形态的变化,用Trypan blue染色法观察细胞生存率,测定乳酸脱氢酶(LDH)以定量反映细胞损伤程度.结果:50 μmol&#8226;L 1Glu使神经细胞死亡率升高,LDH释放增加351%;1,10 μmol&#8226;L 1CPZ能改善神经细胞生长,降低细胞死亡率,减少LDH的释放.结论:CPZ可明显抑制Glu介导的神经毒性作用.     

补肾活血方对去卵巢模型大鼠脑内免疫细胞超微结构的影响

目的观察补肾活血中药黄芪三仙汤对去卵巢雌性大鼠脑内神经胶质细胞的超微结构的影响.方法将32只雌性大鼠随机分为4组,即正常对照组、假手术组、模型组和治疗组.模型组、治疗组行大鼠背部切口切除双侧卵巢造模;假手术组切除同样大小的脂肪;治疗组用黄芪三仙汤灌胃,另外三组以等容积的氯化钠液处理.于4周后用透射电镜观察脑组织中神经胶质细胞超微结构变化.结果模型组海马区可见神经胶质细胞增生,其中以小胶质细胞为主,星形胶质细胞次之;可见变性的神经细胞,在变性神经细胞的周边和血管周围增生活跃的小胶质细胞,还见脂褐素.治疗组中,以上变化明显减少.假手术和正常对照组也可见脂褐素,但较模型组少,其余超微结构基本正常.结论黄芪三仙汤能明显抑制神经胶质细胞的增生和活化,抑制中枢神经的免疫炎性反应,从而达到神经保护作用.     

新生大鼠大脑皮层神经细胞培养及影响因素

神经细胞是近代神经学科中研究重点之一，在体外特定环境中，通过培养可以连续地直接观察神经细胞或神经胶质细胞的形态、生长、分化、迁移、突触形成、理化改变以及对环境的反应。本文结合新生大鼠大脑皮层神经细胞的培养，对影响神经细胞培养的诸因素及其作用做了初步探讨。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞培养及对不同类型激动剂刺激产生的反应

目的分离和培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCc）,并检测其功能状态。方法显微分离肺内小动脉,并在含胶原酶（1750 U&#183;mL^-1）和木瓜蛋白酶（9．5U&#183;mL^-1）的低钙HBSS溶液中酶解和培养PASMCs,采用动态细胞荧光成像技术检测PASMCs胞浆游离Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）的变化。结果在18～24h内可获得PASMCs,并可观察到环匹阿尼酸和5-HT可引起PASMCs[Ca^2＋]i的升高效应。结论大鼠PASMCs一步酶消化法,方法简便实用。所分离的PASMCs细胞形态和功能正常,适用于动态细胞荧光成像技术检测实验及PASMCs信号转导功能的研究。     

成人骨髓间充质干细胞体外向视网膜细胞的诱导分化

目的研究取材于成人骨髓的间充质干细胞在一定诱导条件下向视网膜神经细胞的分化。方法成人骨髓经密度梯度离心得到的细胞,根据其高黏附特性体外培养获得间充质干细胞。利用流式细胞仪分析其细胞表型,在体外诱导使其向视网膜神经细胞分化并用免疫荧光法进行鉴定。结果从骨髓中分离培养的细胞具有成纤维细胞样形态,贴壁生长,表型相对均一,表面标志为CD90、CD44、CD147阳性;而CD34、CD38、CD45、CD14、HLA-DR阴性。体外诱导后可以得到表达nestin(神经干细胞标志物)、GFAP(神经胶质细胞标志物)和Rhodopsin(视网膜光感受器细胞标志物)阳性的细胞。结论从人骨髓中分离培养得到的间充质干细胞具有向视网膜神经细胞分化的潜能。     

促红细胞生成素抗高糖体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的NF-κB机制

目的研究促红细胞生成素(EPO)抗高糖体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的NF-κB机制。方法胰酶消化法提取大鼠视网膜神经细胞进行原代培养,随机分为对照组、模型组及不同浓度EPO治疗组,培养48 h后TUNEL法测定细胞凋亡情况,免疫细胞化学法(SP法)测定NF-κB蛋白表达。结果细胞凋亡检测显示模型组同对照组相比凋亡细胞明显增多(P<0.01),各EPO治疗组同模型组相比凋亡细胞明显减少(P<0.01);免疫细胞化学法见NF-κB蛋白在对照组仅有极少量表达,在模型组呈弱阳性表达,而各EPO治疗组较模型组表达明显增强(P<0.01)。随着EPO浓度从5 kU.L-1增加到40 kU.L-1,视网膜神经细胞的凋亡明显减少,NF-κB蛋白的表达明显上升,呈一定浓度依赖性。结论高糖状态是引发大鼠视网膜神经细胞发生凋亡的损伤性因素之一,EPO能抑制高糖引发的凋亡,发挥神经保护作用,其机制可能是通过上调NF-κB的表达来实现,这为临床早期糖尿病视网膜病变的治疗提供了理论依据。     

乌头类生物碱对bcl-2基因表达的影响

目的研究乌头类生物碱对大鼠视网膜神经细胞细胞增殖周期和bcl-2基因表达的影响,探讨乌头类中药神经毒性的作用机制。方法体外培养大鼠视网膜神经细胞,分别以0.5%的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱作用细胞5min后,流式细胞仪检测。结果与阴性对照组比较,乌头碱作用组G2/M期细胞比例从2.3%增加到19.5%,细胞增殖活动被抑制;而bcl-2基因表达量显著增加,表达荧光均值从0.78增加到1.45。新乌头碱和次乌头碱作用组结果与乌头碱类似。结论在本试验条件下,bcl-2基因可能在乌头类生物碱的神经毒性作用机制中具有重要意义。