端粒缩短的染色体可被核酸外切酶C降解

据近期出版的《分子细胞生物学》杂志刊文报道，一项由美国约翰斯霍普金斯医学院分子生物学和遗传学教授Carol Greider博士及其同事进行的研究发现，酶对缩短的端粒末端的降解是遗传信息丢失的主要原因，而且其出现在修复酶将缩短的端粒融合之前。由此研究人员推断认为酶引发的损伤可能出现在端粒发生融合及在随后的细胞分裂中随机断裂之前。     

核酸外切酶-压电石英DNA传感器检测金黄色葡萄球菌的实验研究

目的 构建一种用于检测金黄色葡萄球菌的核酸外切酶-压电石英DNA传感器新方法,同时对其重要影响因素进行探讨.方法 采用λ核酸外切酶处理金黄色葡萄球菌PCR产物,EB染色、电泳后于紫外灯下进行观察,对杂交温度、杂交时间和杂交响应性能等因素进行实验研究,进一步将构建的核酸外切酶-压电石英DNA传感器法用于金黄色葡萄球菌检测,并对其灵敏度和特异性进行研究.结果 λ核酸外切酶-压电石英DNA传感器法最适杂交温度为35℃,最适杂交时间为60 min,响应性能显著大于普通压电DNA传感器(P＜0.01),可以检测到1.0×104CFU/ml的金黄色葡萄球菌,特异性好.结论 利用核酸外切酶-压电石英DNA传感器检测金黄色葡萄球菌,具有杂交效率高、技术难度低、频率响应性能高等优点,有较好的应用前景.     

含有RU486诱导系统的IL-2基因表达质粒的构建及功能鉴定

目的： 构建含有RU486诱导系统的小鼠白细胞介素2 (IL-2) 基因表达质粒,研究RU486系统对IL-2基因表达的调控作用。方法： 用限制性内切酶Cla Ⅰ处理含有RU486诱导系统的质粒pRS17和编码IL-2基因的质粒pUC57-IL-2,将IL-2基因插入到pRS17构建pRS-IL-2;通过PCR及限制性酶切鉴定重组质粒;将重组质粒体外转染SMMC-7721细胞,用不同浓度的RU486进行处理;将重组质粒通过水流动力学注射法注射到小鼠体内,腹腔注射RU486进行诱导;通过ELISA方法检测细胞上清及血清中IL-2基因的表达。结果： 重组质粒pRS-IL-2经过限制性内切酶消化及PCR分析,显示了预期的片段。细胞在1×10-8 mol?L-1的RU486诱导下,IL-2表达水平最高,是无RU486组的1.95倍（P<0.001）。注射质粒后,接受RU486诱导的小鼠血清中IL-2水平较诱导前升高320倍,而未接受RU486的小鼠血清未检测到IL-2的表达。结论：成功构建了含有RU486诱导系统的IL-2基因表达质粒,IL-2基因的表达依赖于诱导剂RU486的存在。     

结核分枝杆菌Ag85B与IL-2基因双顺反子真核表达质粒的构建及体外表达

目的:构建结核分枝杆菌Ag85B与白细胞介素2(IL-2)双顺反子真核表达质粒。方法:以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR扩增出Ag85B基因。采用亚克隆的技术从pcDNA3.1-IL-2中获得小鼠IL-2基因的cDNA片段。将两者分别定向插入真核双表达载体pIRES,构建表达两个目基因的双顺反子重组质粒,然后用脂质体包裹体外转染A549细胞,RT-PCR检测Ag85B及IL-2的表达。结果:酶切分析及序列测定证实重组质粒构建正确;该重组质粒能在体外表达Ag85B及IL-2 mRNA。结论:成功构建了结核杆菌Ag85B及IL-2基因双顺反子真核表达质粒,为进一步在整体动物水平的实验研究奠定了基础。     

分步克隆法构建人拓扑异构酶Ⅲalpha真核反义表达载体及鉴定

目的应用分步克隆法构建人拓扑异构酶Ⅲ alpha (hTOP 3 alpha)真核反义表达载体,为进一步阐明其与控制细胞周期的相关基因ATM之间的相互作用,研究ATM的生物学功能奠定基础.方法采用分步克隆法首先用 Hind Ⅲ和EcoRI双酶切构建插入2.6 kb的片段,再用EcoRI酶切插入另一1 kb的片段,最终获得人拓扑异构酶Ⅲ真核反义表达的重组载体.结果经酶切、测序鉴定,人拓扑异构酶Ⅲ真核反义表达载体构建成功.结论为研究ATM基因与人拓扑异构酶Ⅲ的相互作用,阐明其生物学功能奠定了基础,同时为大片段的基因的表达载体构建探索了新的方法和途径.     

鼠白细胞介素-2受体α、β链基因反义RNA真核表达质粒的构建

【目的】构建鼠IL 2Rα与β链基因的反义RNA真核表达质粒 ,为反义RNA基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。【方法】用限制性内切酶从克隆载体上切下鼠IL 2Rα与β链cDNA及鼠IL 2启动子 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3的多克隆位点上 ,用酶切或PCR法鉴定正反连接。【结果】得到 4个反向连接的重组质粒 :pcAnti mIL 2Rα ,pcAnti mIL 2Rβ,pcAnti mIL 2Rαβ及pciAnti mIL 2Rαβ。前三者由CMV强启动子指导鼠IL 2R基因反义RNA的表达 ,后者由CMV启动子与鼠IL 2靶向可诱导型启动子组成的融合启动子指导反义RNA的表达。【结论】成功构建了 4个不同类型的鼠IL 2R基因反义RNA真核表达质粒。     

人类白细胞介素2表达型基因重组子pRET—90的构建

应用基因重组技术,将人类白细胞介素2(IL-2)cDNA的440bp限制性内切酶片段(HgiAI-DraI)重组于T_7 promotor质粒pET 3d的Ncol克隆点,构建成表达型重组质粒pRET-90。     

人白细胞介素－2基因真核表达载体pDORIL－2的构建

目的：构建逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因真核细胞表达载体．方法：合成带有和表达载体克隆位点相匹配酶切位点的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）引物，用ＰＣＲ方法从质粒ｐＨＩＧ５３中扩增出人的ＩＬ－２ｃＤＮＡ，将其定向克隆人表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ．结果：ＰＣＲ扩增出的ＩＬ－２ｃＤＮＡ片段约４７５ｂｐ，酶切鉴定该片段已被克隆人ｐＤＯＲ－ｎｅｏ的多克隆位点，构建成人ＩＬ－２基因真核表达载体ｐＤＯＲＩＬ－２．结论：用ＰＣＲ扩增目的基因片断，有快速、获得量大、可改变酶切位点等优点；ｐＤＯＲＩＬ－２的构建成功，为开展基因治疗的研究打下了基础。     

携带NK4与IL-2基因真核表达载体的减毒沙门氏菌的构建

目的:构建携带NK4基因和IL-2基因真核表达载体的减毒沙门氏菌株.方法:用基因工程方法将NK4基因和IL-2基因克隆入真核表达载体pcDNA4,并进行基因测序.重组质粒经鉴定后再电转入减毒沙门氏菌Ty21a中,通过PCR和酶切鉴定,并对构建的重组减毒沙门氏菌进行体外稳定性观察.结果:经PCR和酶切证实,构建了分别含NK4基因和IL-2基因的重组真核表达质粒pcDNA4-NK4和peDNA4-IL-2,并将他们成功导入减毒沙门氏菌Ty21a中.稳定性实验结果表明该重组菌株在体外能稳定地繁殖、生长和传代.结论:成功构建携带NK4基因和IL-2基因真核表达载体的减毒沙门氏菌株,为探索制备携带NK4和IL-2基因的肿瘤减毒活疫苗奠定了基础.     

应用酶标双抗体夹心法检测痤疮和毛囊炎患者血清中白细胞介素2受体的初步探讨

应用酶标双抗体夹心法检测痤疮和毛囊炎患者血清中白细胞介素２受体的初步探讨门永继，曾柱庆，吴杉（第二临床学院免疫室）关键词白细胞介素２受体；寻常痤疮；单纯性毛囊炎为了研究痤疮和毛囊炎的发病机理，采用酶标双抗体夹心法检测血清中白细胞介素２受体含量，现将结...     

生物反馈电刺激对ⅢB型前列腺炎EPS中IL-10、PGE_2水平的影响及临床意义

目的:分析ⅢB型前列腺炎患者生物反馈电刺激治疗前、后前列腺液(EPS)中白细胞介素-10(IL-10)、前列腺素E2(PGE2)水平的变化以及与慢性前列腺炎症状的关系,探讨生物反馈电刺激治疗ⅢB型前列腺炎的作用机制。方法:50例ⅢB型前列腺炎患者作为观察组,非前列腺炎患者、尿常规及EPS常规检查正常者23例作为对照组,观察组采用生物反馈治疗仪治疗12周,检测治疗前、后国际前列腺炎症状评分(CPSI)、IL-10、PGE2水平,并与对照组进行比较。结果:治疗前观察组CPSI和EPS中PGE2水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05～0.01),EPS中IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后3个月和治疗结束后1个月CPSI和EPS中PGE2水平明显低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),EPS中IL-10水平与治疗前相比变化不大(P>0.05),3个指标与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。观察组EPS中的IL-10、PGE2与CPSI呈正相关(r值分别为0.563 5、0.432 9,P<0.01)。结论:ⅢB型前列腺炎患者EPS中IL-10和PGE2水平升高,其慢性盆痛症状严重程度与EPS中IL-10、PGE2水平呈正比。生物反馈电刺激治疗可能通过降低PGE2水平以改善ⅢB型前列腺炎患者的临床症状。     

凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物、α_2-纤溶酶抑制物测定及临床意义

采用凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)、a_(2-)纤溶酶抑制物(a_(2-)PI)检测方法,检测96例冠心病患者。结果:急性心肌梗塞组(AMI,n=44)TAT和a_(2-)PI)水平分别为(16.00±13.20)μg/L、(1.40±0.46)kU/L,陈旧性心肌梗塞(OMI,n=16)分别为(8.76±6.74)μg/L、(1.22±0.41)kU/L;不稳定性心绞痛(UA,n=21)分别为(13.80±8.95)μg/L、(2.05±1.62)kU/L,稳定性心绞痛(SA,n=15)分别为(7.30±4.67)μg/L、(1.18±0.40)kU/L,正常对照组分别为(7.32±4.37)μg/L(n=45)和(1.05±0.14)kU/L(n=33)。结论:冠心病患者除SA组外,其他类型冠心病均有不同程度的血栓前状态以及纤溶受抑状态,其中AMI和UA组最为显著。     

弓形虫ROP2基因的体外扩增及真核表达重组质粒的构建

目的　构建弓形虫棒状体蛋白2（POP2）基因真核表达重组质粒。方法　根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ROP2,而后经EcoR　I、Not　I双酶切出ROP2基因片段,再亚克隆到载体pcDNA3中构建真核表达重组质粒pcDNA3-ROP2。结果　ROP2基因体外扩增产物大小约1043bp,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子,克隆基因测序结果与已知序列基本吻合。结论　在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因并构建了真核表达质粒pcDNA3-ROP2,为下一步弓形虫DNA疫苗研究打下了基础。     

利用体外定点诱变技术构建人突变型α-L-艾杜糖醛酸酶基因

【目的】构建突变型α L 艾杜糖醛酸酶基因 (IDUA)cDNA ,为体外表达、鉴定突变的性质提供物质基础。【方法】以野生型pcDNA3 IDUA为基础质粒 ,采用双引物法体外定点诱变技术 ,引入突变E40 4X。【结果】突变区域经PCR SSCP和测序证实诱导突变成功。【结论】本研究成功构建了突变型IDUAcDNA ,可用于下游的体外表达 ;此定点突变技术具有简便、诱变效率高等优点 ,是体外构建突变型基因的一种有效方法。     

ACE基因的插入/缺失多态性与2型糖尿病伴高血压的相互关系

目的探讨血管紧张素转换酶（ACE）基因插入/缺失（I/D）多态性与2型糖尿病伴高血压之间的相互关系。方法以ACE基因为候选基因,应用PCR方法,检测用例2型糖尿病伴高血压患者及117例2型糖尿病无高血压患者的ACE基因。结果2组研究对象DD、DⅠ、Ⅱ基因型分布频率分别为27.16％vs 20.51％、41.98％vs 41.88％、30.86％vs37.61％,D、I等位基因携带率分别为48.15％vs41.45％、51.85％vs58.55％,均有显著性差异（P<0.05）,提示ACE基因DD型及D等位基因与2型糖尿病并发高血压的发生有相关性。糖尿病患者中ACE基因I/D多态呈DD型者发生高血压的风险率为Ⅱ型者的1.32倍,且糖尿病伴高血压患者病程显著延长。正常血压糖尿病患者ACE基因 I/D多态性与单纯收缩压（SBP）升高患者ACE基因I/D多态性之间无显著差异,而与单纯舒张压（DBP）升高患者ACE基因I/D多态性之间显著相关。结论ACE基因I/D多态性参与2型糖尿病伴高血压的发病,D等位基因可能是2型糖尿病并发高血压的一个危险因子,且DBP升高在糖尿病伴高血压的发生中起重要作用。     

丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠脑组织TRPM2和核酸内切酶G的影响

目的:研究丁基苯酞(NBP)对老龄大鼠慢性脑缺血脑组织瞬时感受器电位M2型(TRPM2)及核酸内切酶G(EndoG)表达的影响.方法:80只老龄Wistar大鼠随机分为4组,每组20只,分别为假手术组、模型组、NBP低剂量治疗组和NBP高剂量治疗组.采用双侧颈总动脉永久结扎建立慢性脑缺血模型.3个月后,HE染色观察脑组...     

泛素结合酶E2-EPF高表达质粒的构建及对绒癌细胞JEG-3生长功能的初步探讨

目的：构建泛素结合酶E2-EPF高表达质粒,初步探讨E2-EPF在绒癌细胞增殖中的作用。方法：基因克隆技术构建pcDNA（3.1＋）-E2-EPF高表达质粒,通过瞬时转染将质粒导入绒癌细胞JEG-3中,使E2-EPF高表达;流式细胞仪检测及细胞增殖实验初步研究E2-EPF高表达对绒癌细胞生长速率的影响。结果：E2-EPF高表达质粒构建成功,瞬时转染后细胞E2-EPFmRNA升高约8.4倍,JEG-3细胞的生长速率显著高于对照组（P〈0.05）,处于G2-M期和S期细胞显著增加。结论：E2-EPF参与细胞的生长调控,促进E2-EPF表达可以加速绒癌细胞JEG-3的生长速率。     

急性特发性血小板减少性紫癜患儿外周血淋巴细胞过氧化物酶体增生物活化受体γmRNA表达及其与血清白细胞介素-2的相关性

目的检测急性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿外周血淋巴细胞过氧化物酶体增生物活化受体γ(PPAR-γ)mRNA表达变化及其与血清白细胞介素-2(IL-2)的相关性。方法急性ITP组为急性ITP患儿53例,对照组为同期体检儿童50例;反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测外周血淋巴细胞PPAR-γmRNA的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中IL-2水平。结果急性ITP组患儿外周血淋巴细胞PPAR-γmRNA表达显著高于对照组(P<0.05),血清中IL-2的含量显著低于对照组(P<0.05);急性ITP患儿血清中的IL-2含量与外周血淋巴细胞PPAR-γmRNA表达呈负相关(r=0.81,P<0.05)。结论急性ITP患儿外周血淋巴细胞PPAR-γmRNA的表达可能抑制了IL-2的生成,PPAR-γ与IL-2可能参与了急性ITP的发病过程。     

血清脂蛋白相关磷脂酶A2、白细胞介素-6水平对急性脑梗死患者阿替普酶静脉溶栓的预后评估

目的：探究血清脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、白细胞介素-6(IL-6)水平对急性脑梗死患者阿替普酶（rt-PA）静脉溶栓的预后评估情况。方法：选取2019年1月-2022年1月萍乡矿业集团有限责任公司总医院接诊的60例rt-PA静脉溶栓治疗的急性脑梗死患者作为研究对象,采用改良Rankin量表（mRS）对其预后情况进行评估,以m RS评分为依据,分为预后良好组（mRS评分≤2分,n=41）和预后不良组（mRS评分>2分,n=19）,比较两组血清Lp-PLA2、IL-6水平。并采用Pearson相关性分析患者血清Lp-PLA2、IL-6水平与其预后的相关性,在此基础上,进一步明确血清Lp-PLA2、IL-6水平对其预后不良的评估价值。结果：预后良好组血清Lp-PLA2、IL-6水平均明显低于预后不良组,差异均有统计学意义（P<0.05）;急性脑梗死患者血清Lp-PLA2、IL-6水平与预后情况均呈正相关（P<0.05）;血清Lp-PLA2+IL-6对脑梗死溶栓治疗后预后不良的预测价值较Lp-PLA2、IL-6单一预测更高,差异均有统计学意义（P<0.05...