黄芪注射液治疗Coxsackie B病毒性心肌炎的临床疗效

<正> 1993午1月—1996年12月,我们用黄芪注射液治疗Coxsackie B病毒性心肌炎32例,并与单用西药组36例作比较,观察临床疗效及探讨其作用机理.现报告如下.     

牛磺酸对实验性小鼠Coxsackie B3病毒性心肌炎的疗效研究

用Coxsackie B3病毒(CV B3)感染BALB/C小鼠建立实验性病毒心肌炎(VMC)模型,观察了牛磺酸对此模型的作用.结果发现,牛磺酸能减少感染病毒后小鼠的死亡只数,减轻心肌组织病理损害,减少感染CVB3后ECG的异常变化,加快血清及心肌CVB3RNA转阴,感染CVB3后血清牛磺酸浓度明显增加.本实验结果显示,牛磺酸对实验性VMC具有良好的保护作用.     

黄芪对病毒性心肌炎心脏细胞因子mRNA表达的影响

目的 :研究黄芪治疗病毒性心肌炎 (VMC)对心脏组织白细胞介素 2 (IL 2 )mRNA、肿瘤坏死因子 α(TNF α)mRNA及白细胞介素 10 (IL 10 )mRNA表达的影响 ,探讨其治疗VMC的免疫调节作用机制。方法 :6 0只小鼠随机分成 4组 ,其中黄芪治疗组以黄芪口服液灌胃 ,0 .2ml/次 ,2次 /d ,共 10d。采用半定量RT PCR方法检测所有存活小鼠心脏组织中细胞因子mRNA表达情况。结果 :与病毒对照组比较 ,应用黄芪治疗后 ,VMC小鼠心脏组织中IL 2mRNA与TNF αmRNA表达下降 (P <0 .0 5 ) ,而IL 10mRNA表达则升高 (P <0 .0 5 )。结论 :黄芪通过改变细胞因子在心脏组织的表达而发挥其治疗VMC的有益的免疫调节作用。     

黄芪对实验性病毒性心肌炎细胞凋亡及Fas/FasL基因转录的影响

目的　探讨黄芪对实验性病毒性心肌炎细胞凋亡及Fas/FasL基因的影响。方法　Balb/c小鼠 2 4只腹腔感染柯萨奇病毒B3(CVB3)后随机分成 2组 :治疗组 (每天腹腔注射黄芪注射液 10 0mg/ 10g)及对照组。第 8d取心脏标本 ,进行病理学检查、细胞凋亡TUNEL法检测以及逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)分析Fas和FasLmRNA的表达水平。结果　①黄芪治疗组病变积分明显低于对照组 (P <0 0 1)。②黄芪治疗组心肌细胞凋亡指数 (AI)明显低于对照组 (P <0 0 1)。③黄芪治疗组心肌组织Fas和FasL的mRNA相对表达量均明显低于对照组 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。结论　黄芪可通过下调病毒性心肌炎小鼠心肌组织Fas和FasL基因转录 ,减少心肌细胞凋亡和心肌损伤。     

黄芪甲甙对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的抗氧化作用

目的观察黄芪甲甙对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的抗氧化作用。方法Balb/c小鼠50只随机分5组(每组10只),空白对照组腹腔无菌注射不含病毒的Eagle’s培养基0.1 mL,在腹腔注射病毒培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7d;病毒性心肌炎对照组小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含1×102TCID50柯萨奇B3病毒的Eagle’s培养基,在腹腔注射含病毒的Eagle’s培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组在腹腔注射病毒30 min后,用黄芪甲甙剂量分别为0.07、0.2、0.6 g/(kg.d)0.1 mL灌胃,共7 d。观察小鼠生存数;心肌病变积分;心肌谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活力及逆转录聚合酶链反应检测铜锌超氧化物歧化酶-mRNA水平表达。结果(1)与空白对照组比较,病毒性心肌炎对照组小鼠的生存数明显下降,心肌病变积分明显升高(3.23±0.83,P<0.01);与病毒性心肌炎对照组比较,黄芪甲甙高剂量干预组可明显提高小鼠的生存数(P<0.01),心肌病变积分明显下降(1.86±0.59比3.23±0.83,P<0.01);(2)与病毒性心肌炎对照组比较,黄芪甲甙高剂量干预组心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活力呈增高趋势,心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(39.73±8.02比9.99±2.71,P<0.05)、过氧化氢酶(6.35±2.33比1.36±0.87,P<0.05)、超氧化物歧化酶(65.71±4.93比40.15±6.03,P<0.01)活力明显增强,铜—锌超氧化物歧化酶-mRNA水平表达明显增高(0.43±0.11比0.32±0.01,P<0.01)。但黄芪甲甙低、中剂量干预组,虽然也在一定程度使心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活力及逆转录聚合酶链反应检测铜—锌超氧化物歧化酶-mRNA表达水平增加,有一定的量效关系,但与病毒性心肌炎对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论黄芪甲甙通过增加心肌抗氧化酶活力,对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎具有明显的保护作用。     

黄芪对病毒性心肌炎小鼠心脏柯萨奇病毒和腺病毒受体表达的影响

目的:研究黄芪对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心脏柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)表达的影响。方法:建立小鼠VMC模型,将120只小鼠随机分为3组:病毒组、治疗组和正常组。在感染病毒后第0、3、7、14天,无菌取出小鼠心脏分别用RT-PCR法半定量检测CAR的表达。结果:病毒组的CAR表达高于正常组,CAR表达高峰在柯萨奇病毒3型(CVB3)感染后第7天;黄芪治疗后的CAR表达明显降低(P<0.01)。结论:感染CVB3后,心脏组织CAR升高,黄芪可降低CAR的表达,从而减轻CVB3对心肌的损害。     

小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎心脏炎症细胞因子基因和蛋白表达及黄芪甲甙干预研究

目的 探讨黄芪甲甙对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎心脏炎症细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6和白细胞介素10 mRNA表达和蛋白质产生的影响.方法 Balb/c小鼠50只随机分为5组,空白对照组,腹腔无菌注射不含病毒的Eagle's培养基0.1 mL,在腹腔注射病毒培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;病毒性心肌炎对照组,小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含1×105TCID50柯萨奇B3病毒的Eagle's培养基,在腹腔注射含病毒的Earle's培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组,在腹腔注射病毒30 min后,用黄芪甲甙剂量分别为0.07、0.2和0.6 ms/(kg·d)0.1 mL灌胃,共7 d.14 d后处死全部小鼠并取其心脏.心脏组织一半用于逆转录聚合酶链反应法测定心脏细胞因子mRNA表达.另一半用Western blot测定细胞因子蛋白质生成量.结果 空白对照组上述细胞因子均无明显表达,心肌炎对照组肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β,白细胞介素6和白细胞介素10 mRNA和蛋白产生均显著高于空白对照组;同心肌炎对照组比较,高剂量黄芪甲甙组的肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β.白细胞介素6 mRNA和蛋白生成均显著下降,而白细胞介素10mRNA和蛋白明显升高.结论 黄芪甲甙明显降低小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎心脏的致炎症细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6,而升高炎症保护因子白细胞介素10.     

急性病毒性心肌炎小鼠相关基因差异表达的研究

目的应用基因表达谱芯片筛选急性病毒性心肌炎相关基因,并对这些基因的功能进行初步分析。方法将8 464条小鼠PCR产物按微聚阵排列点样于化学涂层的载玻片上,制成基因芯片;用柯萨奇B3 (CVB3)病毒感染BALBc小鼠,在感染后的第4、8、21天,分别将正常和病毒性心肌炎心肌中mRNA逆转录,合成荧光分子(cy3／cy5)掺入的cDNA链制备表达谱探针,芯片杂交和严格洗片后,用ScanArray3000荧光扫描芯片荧光信号图像,利用计算机分析病毒性心肌炎心肌与正常心肌中丝氨酸苏氨酸磷酸化酶基因(PIM-3)、血管形成因子基因(Ang)-1、组织相容性基因-2的表达,并对获得的基因进行生物信息学分析。结果小鼠在CVB3感染后的第4、8、21天,心肌中分别发现了1 684、284、98条差异表达基因:PIM-3、Ang-1、组织相容性基因-2的表达被持续抑制。结论应用基因表达谱芯片可筛选出差异表达基因,PIM-3、Ang-1、组织相容性基因-2的差异表达可能与病毒性心肌炎发生和发展有关。     

Experimental Coxsackie virus B-3 and B-4 myocarditis in mice

Mice were inoculated with recently isolated Coxsackie virus B-3 and B-4 intraperitoneally. Severest lesions in the hearts were observed in mice between the age of 7 and 14 days. Grossly yellow-white patches were seen on the hearts of mice from the 7th day to the 6th month after virus inoculation. Microscopically, the heart showed extensive myocardial necrosis, inflammation with small mononuclear cells and calcification on the day of 7. There were myocardial fibrosis and calcification at the 6th month after inoculation with Coxsackie virus B-3, and at the 3rd month after inoculation with Coxsackie virus B-4, but generally pathologic changes were less severe in the latter. Myocardial fibrosis in the present experiment was most prominent among the experiments we have studied. It was confirmed that chronic myocardial fibrosis follows acute Coxsackie virus myocarditis in mice. Possible role of Coxsackie virus myocarditis in the development of cardiomyopathy was briefly discussed.     

酮替芬对小鼠病毒性心肌炎的作用研究

目的研究肥大细胞膜稳定剂酮替芬对脑心肌炎病毒（EMCV）心肌炎的作用。方法4周龄DBA／2小鼠经腹腔接种EMCV制成病毒性心肌炎模型,评价灌胃给予酮替芬对小鼠病毒性心肌炎的作用。观察小鼠在接种EMCV后14d生存率的变化。小鼠心肌切片HE、Masson trichrome染色,观察心室肌坏死和炎症细胞浸润面积的变化。荧光定量RT—PCR检测小鼠心脏促炎细胞因子（IL-6、TNF—α）和肥大细胞蛋白酶类胰蛋白酶及糜蛋白酶（mMCP-4、mMCP-5、mMCP-6）mRNA表达。结果酮替芬治疗使小鼠的14d生存率明显改善（75％比25％,P〈0．01）;小鼠心脏／体重比值显著改善（P〈0．05）;小鼠左心室坏死和炎症细胞浸润面积明显减少（P〈0．05）;IL-6、TNF—α、mMCP－4、mMCP－5及mMCP－6mRNA的表达明显下调（P〈0．05）。结论酮替芬可改善EMCV心肌炎小鼠的心肌炎症和生存率,其作用机制可能与下词心肌促炎细胞因子和肥大细胞特异蛋白酶类胰蛋白酶和糜蛋白酶的表达有关。     

硫氧还蛋白对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞保护的抗氧化机制

目的 探讨硫氧还蛋白保护病毒性心肌炎的抗氧化作用及其调节转录因子的作用.方法 选用Balb/C小鼠24只,随机分为3组:对照组、硫氧还蛋白(TRX)保护组、病毒感染组.病毒感染组、TRX保护组给予腹腔注射1000TCID50柯萨奇B3病毒(CVB3)0.1 ml,TRX保护组同时给予尾静脉注射rhTRX(2 mg/kg),而病毒感染组同时给予生理盐水作对照.14 d后处死动物,光镜下观察心肌病理形态学变化;用免疫组化法检测心肌组织NF-κB的含量,同时检测血清过氧化脂质(LPO) 含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果 光镜下可见病毒感染组小鼠出现局灶性心肌坏死和炎细胞浸润,对照组和TRX保护组心肌细胞未见异常.病毒组小鼠血清中丙二醛(MDA)含量与对照组相比明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),保护组与病毒组相比MDA 含量明显下降(P<0.01);血清GSH-Px活性与对照组比较明显下降(P<0.01),而TRX保护组与病毒组比较则明显升高(P<0.01).病毒组心肌组织中NF-κB的表达与对照组相比明显增高,而保护组心肌组织中NF-κB的表达与病毒组相比明显下降(P<0.01).结论 重组人硫氧还蛋白能够减轻心肌细胞的损伤,其机制与清除自由基、提高谷胱甘肽过氧化物酶活性以及调节转录因子的表达密切相关.     

柯萨奇B3病毒感染小鼠心肌硫氧还蛋白的表达

目的研究硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)在柯萨奇B3病毒感染小鼠心肌炎模型中表达的变化,探讨Trx在病毒性心肌损伤中的作用。方法建立柯萨奇B3病毒感染鼠心肌炎模型,采用光镜检测心肌形态改变,应用RT鄄PCR技术比较接种病毒后不同时间点(7,14,21d)TrxmRNA表达变化。结果7d时心肌病损严重;14d时部分心肌病损开始修复;21d时心肌修复较完全。接种病毒后21d时,硫氧还蛋白mRNA表达与对照组比较明显上调(P<0.01),7d和14d时同对照组相比表达无显著性差异(P>0.05)。结论在急性柯萨奇B3病毒性心肌炎中,Trx可能被急性炎症刺激素特异地诱导,在疾病的后期TrxmRNA表达上调,促进心肌修复,提示适当剂量的Trx可能对急性柯萨奇B3病毒性心肌炎有潜在治疗作用。