人IL-2真核表达质粒对副肌球蛋白核酸疫苗的免疫调节作用

目的：观察IL－2表达质粒对副肌球蛋白（AgB)核酸疫苗的免疫调节作用。方法：将人的IL－2全长cDNA插入到真核表达质粒pcDNA3中构建成pcDNA3－IL－2重组质粒，然后接种C57BL／6小鼠（分为pcDNA3组、AgB组、联合免疫组），ELISA法检测小鼠血清中的IgG和IgG2a的水平；用MTT法检测小鼠脾细胞增殖反应，用ELISA法检测其分泌的IL－2和IL－4的水平，最后在仔猪中进行攻击实验，观察pcDNA3－IL－2质粒的免疫刺激作用。结果：注射疫苗后，pcDNA3－IL－2协同注射组增强了副肌球蛋白特异性的IgG物IgG2a的水平，增强了脾细胞的增殖反应，提高了其分泌IL－2的水平，但对IL－4的水平产生轻微影响，仔猪攻击实验中，共同注射IL－2基因组提高了仔猪的相对保护率，结论：对于副肌球蛋白核酸疫苗而言，人的IL－2表达质粒是一种很好的免疫佐剂。     

基因重组人淋巴毒素免疫特性研究

细胞因子对免疫系统产生何种影响是现代免疫学研究的重点课题之一．基因重组的细胞因子已被临床广泛采用。目前有关IL－1至IL－6的研究很多，但对淋巴毒素（又称TNF－p）的研究还较少．该文较全面地研究了基因重组人淋巴毒素对免疫系统的影响。基因重组淋巴毒素由E．COltSG／20050淋巴毒素21菌株制备．活性单位为10’p／ml。实验结果如下；①淋巴毒素对血清抗体水平、脾脏抗体形成细胞水平具有刺激作用。用3X10－’‘一‘’M．淋巴毒素绵羊红细胞共同免疫CBA小鼠，结果实验组血清抗体水平明显高于只用绵羊红细胞免疫的对照组；用3X1…     

微囊化转mIFN-γ基因CHO细胞皮下移植促进荷瘤小鼠TH1/TH2的漂移

目的：通过观察微囊化转mIFN-γ基因CHO细胞皮下移植对荷瘤小鼠TH1／TH2类细胞因子的影响，进一步了解外源性IFN－γ对TH1／TH2平衡的调节作用，同时验证微囊化基因工程细胞移植治疗恶性肿瘤的可行性。方法：将mIFN-γ基因转染到正常细胞CHO，然后进行微囊化，移植到荷瘤小鼠的皮下，2周后，测定小鼠血清TH1和TH2类细胞因子IFN－γ、IL－2、IL－12、IL－4、IL－10的水平，并与对照组相比较。同时测量肿瘤的平均直径，以观察肿瘤的生长速度，并观察荷瘤小鼠的生存期。结果：经微囊化转mIFN-γ基因CHO细胞皮下移植干预治疗后，小鼠血清TH1类细胞因子IFN－γ、IL－2、IL－12水平明显升高，而TH2类细胞因子IL－4、IL－10变化不明显；小鼠肿瘤的生长速度明显减慢，生存期明显延长。结论：外源性IFN－γ促进荷瘤小鼠TH1细胞的分化，使TH1／TH2向着TH1方向漂移；微囊化基因工程细胞的移植，有望替代基因工程药物，成为治疗恶性肿瘤的又一新平台。     

动物致伤的特点及两种接种程序的抗体水平比较

目的 了解动物致伤特点及注射狂犬疫苗后抗体水平。方法 注射狂犬疫苗首针后45天采血检测狂犬病毒抗体。结果 常规程序（0、3、7、14、30天）接种狂犬疫苗的狂犬病毒抗体总阳性率为75．70％,应用2－2－1程序（0、7、14天）接种狂犬疫苗的狂犬病毒抗体总阳性率为92．18％。结论 犬伤为本地区动物致伤首位,注射狂犬疫苗是预防狂犬病最重要措施之一,2－2－比常规程序免疫时间短,效果更好。     

HIV-1重组核酸疫苗质粒诱导小鼠免疫应答的研究

目的：研究白细胞介素6（IL－6）对人类免疫缺陷病毒（HIV）gp120基因免疫小鼠的调节作用。方法：构建表达中国流行株HIV－1B亚型gp120基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV－1B亚型gp120基因与IL－6基因的核酸疫苗质粒pGPIL-6，检测其在哺乳动物细胞中的表达并 将上述两种质粒注射Balb/c鼠，检测小鼠产生的CD4^ 和CD8^ T细胞数情况及诱导CTL反应能力。结果：以间接免疫荧光法（IFA）检测到gp120在哺乳动物细胞中得到表达。pGPIL-6免疫鼠，小鼠产生的CD4^＋和CD8^ T细胞数及诱导产生CTL反应的能力明显高于单纯注射gp120的小鼠。结论：协同应用IL－6基因可明显加强HIV－1gp120基因免疫效果，为中国流行株HIV－1核酸疫苗的可行性提供了重要实验依据。     

多器官衰竭综合征小鼠模型的炎性细胞因子变化

MoniqueJetalCritCareMed．-1996；24（7）．-1096～1120多器官衰竭综合征（MOF）是急救科和外科死亡的主要原因，而巨噬细胞M的持续活化和全身性炎性细胞因子增加在MOF的发生机理中起重要作用。用小鼠模型研究了MOF时血清中细胞因子和M产生细胞因子能力的变化。以1mg／g体重的剂量腹腔注射酵母多糖，诱导C57BC／C雄鼠产生类似人MOF的症状。观察12天中的①小鼠的一般状况；②血清中IL－la，IL－18，TNG－a和IL－6，TNF－a的生物学活性；腹腔＊O及其在体外＊％（IO吵m！）刺激后产生细胞因子的能力等变化。酵母多糖诱导的小…     

大蒜对老龄BALB/c小鼠血浆IL-1β、IL-6水平影响的研究

本文研究大蒜对老年小鼠血浆IL 1β、IL 6水平变化的影响。小鼠经饮用大蒜液后 2周 ,继用 5 μgLPS/鼠腹腔注射 4h后 ,取血用ELISA测血浆中细胞因子水平。老年小鼠血浆IL 1β基础水平明显高于青年小鼠 (P <0 0 5 ) ,经LPS刺激后 ,老年小鼠血浆IL 1β、IL 6水平无明显增高 ,而饮用大蒜液后 ,老年小鼠的IL 1β、IL 6血浆基础水平有所降低 ,但在LPS刺激下 ,血浆IL 1β、IL 6较基础水平明显上升 (P <0 0 5 ) ,提示大蒜能明显改善老年小鼠的细胞因子紊乱状况。     

乙肝病毒核酸疫苗诱导H-2b小鼠特异性免疫反应的初步研究

目的：观察并证实adr和adw亚型NHBs核酸疫苗单独应用，或与HBc核酸疫苗联合免疫诱导H－2^b小鼠的特异性体液和细胞免疫反应，方法：C57BL／6（H－2^b)小鼠随机分为4组：pJW4303组（P组，5只），pJW4303/MHBs/adw组（W组，6只）；pJW4303/MHBs/adr组（R组，6只）;pJW4303/MHBs/adr pJW4303/HBc组（R＋C组，6只），免疫方法为各组小鼠每只每次注射相应的质粒DNA疫苗100μg(100μl)，免疫程序为0，2，4w，小鼠血清抗HBs和抗HBc水平以及小鼠脾淋巴细胞培养上清中的IFN－γ和IL－4浓度用ELISA法检测，小鼠淋巴细胞抗原特异性增殖试验采用3H－TdR掺入法，计算刺激指数（SI），结果：W，R，R＋C各免疫组在末次免疫后4w所有小鼠均产生抗－HBs，但各免疫组间无明显差异，抗－HBs以R＋C组最早出现，R＋C组小鼠在第1次免疫后2w抗－HBc即全部阳性，P组免疫后始终末出现抗－HBs和抗－HBc，核酸疫苗免疫的W，R，R＋C各组免疫小鼠HBsAg特异性脾淋巴细胞增殖指数（SI）均高于P组（P＜0．01－P＜0．001），R＋C（n=6)组小鼠脾淋巴细胞HBsAg特异性SI比R组显著升高（P＜0．05），R＋C免疫小鼠HBcAg特异性脾淋巴细胞增殖指数（SI）均≥2，与P组（其SI均＜2）相比差异非常显著（P＜0．001），W，R，R＋C各免疫组小鼠脾淋巴细胞与HBsAg共培养的上清中IFN－γ的浓度比P组显著升高（P＜0．001），而它们的IL－4 浓度比P组明显下降（P＜0．001），R＋C免疫组小鼠脾淋巴细胞与HBcAg共培养的上清中IFN－γ浓度也较P组明显升高（P＜0．05），但其IL－4浓度与P组无差别（P＞0．05），结论：adr亚型和adw亚型HBV外膜中蛋白（MHBs)核酸疫苗和HBcAg核酸疫苗能诱导H－2b小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答，具有良好的体液和细胞免疫原性，MHBs核酸疫苗与HBcAg核酸疫苗联合免疫能加强MHBs核酸疫苗诱导的体液和细胞免疫反应，所诱导出的辅助性T细胞免疫反应为Th1型。     

细胞因子对乙肝病毒基因疫苗诱导产生抗体的影响

将构建的三套乙肝病毒基因疫苗（分别编码Ｓ蛋白、ｐｒｅＳ１＋ｐｒｅＳ２＋Ｓ蛋白及ｐｒｅＳ２＋Ｓ蛋白）注射于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠胫前肌内。基因疫苗接种３天后，以同样部位注射ｒｈＩＬ－２、ｒｈＩＬ－４、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＩＦＮ－γ。运用ＥＬＩＳＡ检测不同时间小鼠血清中乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及抗－ＨＢｓ。结果显示：注射基因疫苗３天内，小鼠体内即可表达ＨＢｓＡｇ；两周后，血清中可测到抗－ＨＢｓ，两月后抗体水平达到高峰，并保持高水平至少两月以上；肌内注射的几种细胞因子均可提高血清中抗－ＨＢｓ水平，与对照组相比差异有极显著性（Ｐ＜０．０１），其中，ｒｈＩＬ－４、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＩＦＮ－γ较ｒｈＩＬ－２作用强。提示，细胞因子可作为基因疫苗的佐剂。该研究为增强基因疫苗免疫效果提供了新途径。     

感染柯萨奇病毒B3诱导人心肌纤维细胞因子的产生

目的：CVB3感染可导致严重的心脏病，其机制尚不清楚，细胞因子可能有重要作用，但确切来源细胞尚不清楚，心肌纤维细胞是主要间质分子，感染CVB3后检测其细胞因子的产生。方法：采用ELISA方法检测了感染CVB3心肌纤维细胞培养上清液IL－6、IL－8、IL－1α、IL－1β和TNF－α的产生，结果：发现感染CVB3 24小时后IL－6和IL－8即明显升高（P＜0．01），96小时后IL－1α有所升高（P＜0．05），IL－1β和TNF－α无明显变化，结论：IL－6、IL－8、IL－1α在CVB3心肌炎中可能有一定作用。     

类风湿性关节炎患者T细胞亚群失衡与炎性粘附分子的关系

目的：探讨类风湿性关节炎（RA）患者细胞免疫调节功能异常与参与介导免疫炎性损伤的细胞粘附分子之间的关系。方法：以ELISA方法检测40例RA患者外周血中IL－2、IL－10、 sICAM-1、sVCAM-1水平。结果：RA患者TH1，细胞因子IL－2水平明显低于健康对照组；TH2细胞因子IL－10及细胞粘附分子sICAM-1/sVCAM-1水平明显高于健康对照组，各组间比较均具有显著性差异（P＜0．01）。结论：RA患者高水平的 IL－10与低水平的IL－2提示TH2细胞功能亢进，进而TH1细胞被抑制，并导致细胞因子谱的偏移；高水平的sICAM-1、sVCAM-1是RA患者慢性炎症损伤的重要介质；异常升高的IL－10与细胞粘附分子的共同作用是导致RA患者病理损伤的重要原因。     

狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗的联合免疫研究

目的 研究联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗对小鼠的免疫效果。方法 构建狂犬病毒糖蛋白（GP）的真核表达质粒pcDNA3.1/CVS-N2c GP作为核酸疫苗，瞬时转染COS－7细胞，间接免疫荧光试验检测pcDNA3.1/CVS-N2c GP的表达；以基因枪方法进行初次免疫接种和首次加强免疫，以表达同一抗原的复制缺陷型重组腺病毒通过鼻腔接种进行第二次加强免疫；ELISA试验检测血清狂犬病毒特异性IgG抗体，快速荧光灶抑制试验（RFFTT）检测狂犬病毒中和抗体。结果 间接免疫荧光试验表明pcDNA3.1/CVS-N2c GP能有效地表达GP于转染的细胞膜上，ELISA试验表明小鼠接受基因核核酸免疫后，仅诱导产生低水平的特异性抗体，而且重组腺病毒进行加强免疫后，特异性抗体水平显著提高。结论 联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同种抗原核酸疫苗可克服它们单独使用时各自的缺点，能有效地诱导小鼠产生抗狂犬病毒特异免疫。     

瘤体内注射脂质体包裹的IL－2基因的抗肿瘤作用及其局部免疫机理分析

脂质体可以介导体内的细胞因子基因治疗。将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射到小鼠黑色素瘤（Ｂ１６－Ｆ１０）瘤体内，结果发现，肿瘤的生长明显受到抑制，部分小鼠的瘤体完全消退，存活期明显延长；从瘤体中分离的肿瘤细胞经Ｇ４１８筛选后产生阳性克隆，其上清中分泌有ＩＬ－２；肿瘤局部浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）具有较高的杀伤活性，揭示瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，可增强肿瘤细胞的免疫原性，激活瘤体局部的抗肿瘤免疫功能。结果表明瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因具有良好的抗肿瘤效果。     

Th1和Th2细胞在痢疫苗诱导小鼠产生粘膜免疫应答 …

目的 在初步了解ＣＤ４＾＋细胞参与痢疾疫苗诱导小鼠肠粘膜免疫应答的基础上，从细胞及分子水平进一步探索Ｔｈ１和Ｔｈ２细胞在小鼠肠粘膜对痢疾疫苗免疫应答中的调节作用。方法 以本室构建的福氏２ａ及宋内氏双价痢疾疫苗株ＦＳ－２１１７或ＦＳ－５４１６灌胃免疫小鼠，从细胞表型及几种细胞因子ｍＲＮＡ表达水平两方面观察小鼠肠粘膜中Ｐａｙｅｒ氏结（Ｐｅｙｅｒ’ｓ ｐａｔｃｈ，ＰＰ）及肠系膜巴结等免疫诱导部位Ｔｈ１和     

冷冻和TNF-α基因修饰肿瘤疫苗的研究

目的：探索用TNF－α基因修饰联合冷冻法制备更高效能的抗肝癌疫苗的可能性。方法：分别用冷冻和^60Co照射处理或者单独用^60Co照射处理TNF－α基因修饰的H22细胞，分别制备疫苗。比较这2种疫苗的抗小鼠接种性肝癌的作用。结果：用冷冻和^60Co照射处理TNF－α基因修饰的H22细胞制成的疫苗，其提高小鼠的抑瘤率、脾淋巴细胞IL－2和TNF诱生水平及脾脏NK细胞伤活性的作用，均明显优于单独用^60Co照射处理TNF－α基因修饰的H22细胞制成的疫苗。结论：冷冻处理TNF－α基因修饰的H22细胞，可提高该细胞的免疫原性，从而可提高疫苗的抗小鼠接种性肝癌的效能。     

双歧杆菌的脂磷壁酸对小鼠腹腔MΦ的激活作用

目的 探讨青春型双歧杆菌的脂磷壁酸（LTA）对MΦ功能的影响。方法 将LTA注射于小鼠腹腔，分别采用中性红吞噬试验，MTT法，小鼠胸腺细胞增殖法和ELISA法，检测MΦ的吞噬能力，能量代谢水平，IL－1的活性及IL－6含量。结果 LTA注射组小鼠腹腔MΦ的吞噬能力，能量代谢水平，IL－1活性及IL－6含量均显著高于对照组（P＜0．01）。结论 双歧杆菌的LTA能激活MΦ，提高其吞噬能力和能量代谢水平，同时可分泌多种的具有杀瘤作用的活性因子。     

基因佐剂注射时相对HBV preS2S疫苗免疫作用的影响

目的：HBV preS2S基因疫苗接种不同时相应用佐剂peDNA3．1IL-2／Fc，观察其对诱导免疫反应效果的影响。方法：采用HBV preS2S DNA基因疫苗作为基础免疫，重组质粒peDNA3．1IL-2／Fc作为佐剂加强免疫，设计实验组与HBVpreS2S基因疫苗同时及在注射BALB／c小鼠后第3天加用佐剂，采用0、2、4周的方案接种，检测各次接种后抗体水平、免疫脾细胞的杀伤活性、增殖活性和细胞因子分泌水平。结果：HBV preS2S注射3天后应用佐剂的免疫小鼠，其抗体滴度、免疫脾细胞杀伤活性、增殖活性和Th1型细胞因子分泌水平均比同时免疫组、单独应用HBV preS2S组及空载体对照组明显增强。结论：预先接种疫苗后加用IL-2／Fc佐剂，能明显增强疫苗免疫效应。     

高表达FasL的Sertoli细胞在睾丸局部感染时的免疫调节作用

目的：研究高表达FasL的转基因小鼠Sertoli细胞在睾丸局部感染时的免疫调节作用。方法：以溶脲脲原体（Ureaplasma urealyticum,UU)直接注入FasL转基因的小鼠膀胱模拟上行性感染的途径，分别在1、2和3周处死小鼠，分离取得睾丸组织，观察组织的病理变化，并从小鼠睾丸组织分离获得高纯度的Sertoli细胞，然后抽提总RNA，用RT－PCR方法比较正常组与UU感染组之间FasL、IL－1α、TGF－βmRNA的表达差异。结果：与正常组相比，UU感染的小鼠，睾丸组织发生明显的病理改变，Sertoli细胞表达的调节因子在mRNA水平也发生了明显的变化：其FasLmRNA的表达在1周，3周时与正常无明显区别，2周时明显升高；IL－1α、TGF－βmRNA的表达在1－3周均为升高。结论：FasL转基因小鼠的睾丸ertoli细胞可通过改变有关细胞因子的表达格局发挥免疫调节作用。     

髓鞘碱性蛋白(MBP)特异的Wistar大鼠T细胞系的建立

目的：建立特异的大鼠T细胞系，为T细胞疫苗的研制打下基础。方法：采用足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆（GPSCH）－福氏完全佐剂（CFA) 合乳剂和百日咳疫苗，诱导Wistar大鼠EAE模型。腹股沟淋巴结细胞经豚鼠髓鞘碱性蛋白（GPMBP）反复刺激，^3H-TdR掺入法筛选针对GPMBP特异增殖的T细胞。FACS检测T细胞表型。RT－PCR测定T细胞的细胞因子格局。结果：一次性足垫皮内注射GPSCH－CFA混合乳剂可诱导Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型，并证实了同时注射百日咳疫苗能提高发病率和发病程度。EAE大鼠脑、脊髓组织HE染色见大量淋巴细胞浸润，在血管周围形成淋巴鞘、但未见脱髓鞘改变。T细胞对GPMBP呈特异性增殖，为CD4^ 表型。RT－PCR结果显示T细胞IL－2和IFN－γmRNA表达水平较高，TNF-α亦低水平表达。结论：Wistar大鼠可用于制备EAE动物模型。GPMBP特异性T细胞系为CD4^ 表型，呈TH1类细胞因子格局。     

非复制重组痘苗病毒中白细胞介素6的表达及其对重组病毒免疫效果的影响

目的 研究白细胞介素6（IL－6）在非复制型痘苗病毒中的表达及其对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法 利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK11β75IL6和重组病毒RVJ123，通过两步重组构建能同时表达IL－6和乙型肝炎病毒（HBV）HBsAg的非复制型重组痘苗病毒PVJ123ΔCK11β75IL6。免疫动物并观察其免疫效果。结果 Southern blot证实痘苗病毒C、K片段间基因缺失的同时伴有IL－6基因的插入，IL－6和HBsAg可同时表达。鼻腔吸入分别免疫BALB／c小鼠和新西兰白兔，ELISAPOT实验证实免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗－HBsAg IgA、IgG抗体分泌细胞（ASC）数比对照组（RVJ123ΔCK11β75）显著增加，并可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其他分泌液样品中检测到抗－HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体。与对照组相比，IgA、IgG抗体阳转率及抗体滴度提高。结论 非复制型痘苗病毒载体中表达的IL－6可增强其诱导的免疫反应，为细胞因子IL－6作为有效的载体疫苗佐剂提供了实验基础。