枯草芽孢杆菌性眼内炎误诊一例

感染性眼内炎对视功能的影响非常严重,枯草芽孢杆菌性眼内炎是感染性眼内炎的一种,因其毒力较强,可在12～24h内导致失明。     

枯草芽孢杆菌原生质体转化的初步研究

对１１株耐药性金黄色葡萄球菌Ｒ质粒进行分析研究，并对枯草芽孢杆菌原生质体进行转化。结果表明：金黄色葡萄球菌Ｒ质粒ＤＮＡ可转化枯草芽孢杆菌原生质体，转化频率为６．５×１０－４，转化效率为１．３×１０３，而染色体ＤＮＡ则不能进行原生质体转化。     

培养基对枯草芽孢杆菌产抗酵母活性物质的影响

目的探讨不同培养基对枯草芽孢杆菌产抗菌物质的影响。方法以6种培养基为基础,以酿酒酵母为抑菌活性指示菌,用琼脂孔扩散法测定不同发酵液对酿酒酵母的抑菌活性,对枯草芽孢杆菌合适的培养基和培养条件进行筛选。结果 6种培养基中,枯草芽孢杆菌在马铃薯葡萄糖(PDB)培养基中培养后的发酵上清液对酿酒酵母具有明显的抑制作用,抑菌活性主要在胞外,且PDB培养基有利于芽孢的形成。装液量对枯草芽孢杆菌在PDB培养基中的生长有很大影响,较少的装液量有利于枯草芽孢杆菌芽孢的形成。结论 PDB培养基适合枯草芽孢杆菌产生抗酿酒酵母活性物质。     

酵素菌中芽孢杆菌的分离鉴定

目的　对分离自酵素菌的 18株芽孢杆菌 (Bacillus)进行分类鉴定。方法　观察实验菌株的形态大小、染色特征、动力、芽孢的形态位置 ,菌细胞苏丹黑颗粒染色。触酶反应 ,气体要求。糖醇类发酵产酸、产气试验 ,有机酸盐利用试验 ,酪蛋白、酪氨酸、七叶苷、尿素、明胶、淀粉、土温 -80水解试验。吲哚试验 ,V P反应 ,硝酸盐还原试验 ,二羟丙酮形成试验 ,生长因子试验、厌氧生长试验 ,石蕊胨化试验。马尿酸盐结晶试验 ,卵磷脂酶试验 ,溶菌酶抗性试验 ,进行表型性状的观察研究。结果　 9株芽孢菌被鉴定为地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis) ;6株芽孢菌被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussutilis) ;1株芽孢菌鉴定为腊状芽孢杆菌 ;1株芽孢菌鉴定为环状芽孢杆菌 ;1株芽孢菌被鉴定为巨大芽孢杆菌。结论　地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、环状芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌是酵素菌的主要活性菌种。     

枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶的克隆和表达

目的：运用分子生物学手段获得葡萄糖脱氢酶基因,并表达该基因。方法：根据枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因序列设计引物,通过PCR获得该基因并与源序列进行比较分析,与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行表达．并在全自动生化分析仪上用速率法测定其活性。结果：克隆到的葡萄糖脱氢酶基因与源基因的同源性为99％,克隆到的GDH编码的氨基酸序列167位左右存在突变：EVI(GAAGTGATT)→AF(GCGTTT)．利用酶的初提液测定的葡萄糖脱氢酶活力为75U／L,比活性为10U／mg。结论：运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因,与表达载体连接后的重组体经大肠杆菌初步表达有活力,经诱导有望获得高产量的葡萄糖脱氢酶,从而为临床服务。     

枯草芽孢杆菌葡聚糖内切酶的克隆与表征

利用已公布的枯草芽孢杆菌基因组序列中假定的葡聚糖内切酶基因进行引物设计,从菌株Bacillus sp. ECU0013中克隆表达得到重组葡聚糖内切酶BsEG。经镍柱纯化后进行酶学性质表征,其最适反应pH约为6.0;最适反应温度为50 ℃,具有较好的热稳定性,50 ℃时半衰期达101 h。K_m值为20.1 g/L,相应的V_max值为0.075 g/(L·min)。并且初步对酶BsEG的底物特异性及对纤维素的吸附性进行了探究。     

枯草芽孢杆菌对凤仙花离体快繁的影响

目的 研究生物因子(枯草芽孢杆菌)对凤仙花离体繁殖的影响。方法采用不同浓度枯草芽孢杆菌(0，5×10^{4、5×105、5×106、5×107、5×108个/mL)处理凤仙花后，以其叶和茎为外植体，接种于MS+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA培养基上进行愈伤组织诱导和植株再生。结果无论是叶还是茎作外植体，经5×105个/mL浓度的菌液处理后愈伤组织诱导率最高(叶：95.3%，茎：13.3%)，与对照差异极显著。经5×105个/mL浓度的菌液处理后的幼苗生长速度也最快，50 d便达到了移栽要求。结论适当浓度的枯草芽孢杆菌处理有利于凤仙花的离体繁殖。}     

两株产生大环内酯Macrolactin S的海洋细菌的筛选及鉴定

目的:从中国东海分离筛选抗菌活性微生物,确定活性菌株的分类地位。方法:随机挑选30株本室保存的分离自中国东海的细菌,利用抗大肠杆菌模型进行活性筛选。对活性菌株进行形态特征、生化特征、盐需求测试及16S rDNA序列分析,并将所测得的序列在NCBI数据库进行相似性搜索,选取其中具有代表性的序列以邻接法构建系统进化树,将菌株鉴定到属。结果:筛选出活性菌株F81612和F201721,它们的最适生长盐浓度分别为10%和7.5%,菌株形态特征、生化性质与Bacillus sp.相符,菌株F81612和F201721的16S rDNA序列分别与Bacillus subtilis和Bacillus amyloliquefaciens相似程度最大。结论:利用抗大肠杆菌模型筛选到两株产大环内酯Macrolactin S的细菌,均为中等嗜盐的海洋Bacillus sp.。     

沙漠枯草芽孢杆菌 PJS 产生的环脂肽类抗生素研究

目的 分离鉴定枯草芽孢杆菌PJS发酵液中的环脂肽类抗生素PJS-0。方法 采用溶剂萃取、薄层色谱（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）等分离方法 对菌株PJS发酵产物的活性组分PJS-0进行分离;并通过紫外（UV）、质谱（MS）和核磁共振波谱（NMR）联合分析对其结构进行鉴定。结果 从塔克拉玛干沙漠来源植物内生枯草芽孢杆菌PJS的发酵液中分离得到一个环脂肽类抗生素：PJS-0,经结构鉴定为Mojavensin A。结论 本文首次从陆生芽孢杆菌中分离得到Mojavensin A,并首次用ESI^＋-MS／MS对其氨基酸序列进行鉴定。     

市售川产水豆豉分离株中高产蛋白酶与β-葡萄糖苷酶菌株的菌属鉴定与产酶能力评价

目的 筛选并鉴定72株川产水豆豉分离株中高产蛋白酶及β-葡萄糖苷酶的菌株,为深入研究水豆豉的营养价值及开发其发酵菌株提供实验依据。 方法 采用酪蛋白法和对硝基苯-β-D半乳糖吡喃糖苷(pNPG)法分别测定菌株产蛋白酶和β-葡萄糖苷酶的能力,选出优势菌株,通过形态学、生化特征、16S rRNA和基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行鉴定。绘制菌株生长曲线和产酶曲线并测得其遗传稳定性。 结果 选择产蛋白酶能力前10名菌株中β-葡萄糖苷酶活力最高者(0.084 U/L)作为优势菌株,表型及分子生物学法鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株生长曲线、产酶曲线符合枯草芽孢杆菌特性,遗传稳定性结果显示其产酶能力能稳定遗传至第9代并于第10代开始下降。 结论 从72株川产水豆豉分离株中筛选出的高产蛋白酶和β-葡萄糖苷酶菌株经鉴定为枯草芽孢杆菌。     

胞苷生产菌的选育及发酵

目的选育胞苷脱氨酶缺失枯草芽孢杆菌,提高胞苷发酵单位,并对间歇补料分批发酵方式进行了初步研究。方法（1）以胞苷脱氨酶缺失枯草芽孢杆菌CDS36为突发菌株,对其进行紫外诱变,经6-杂氮尿嘧啶（6AU）、5-氟胞苷（5FCR）等进行定向抗性筛选;（2）采用间歇补料分批发酵,葡萄糖初始浓度10．0％,48h后补加10．0％,72h补加5．0％的补料方式培养,并测定发酵单位。结果（1）通过紫外诱变和抗性筛选得到了6-杂氮尿嘧啶、5-氟胞苷抗性的突变株CDS36—800—17,抗6-杂氮尿嘧啶和5-氟胞苷的临界浓度分别为1000mg／L和800mg／L;（2）通过间歇补料分批发酵方式发现培养96h,胞苷发酵单位可达4．86g／L,培养120h可达5．58g/l,比未经补料分批发酵时提高了20．0％。结论（1）筛选获得胞苷发酵单位较高的突变株CDS36—800—17,并具有较好的遗传稳定性,可稳定发酵;（2）间歇补料分批发酵方式可提高胞苷产量。     

一株具有抗稻瘟霉活性的海洋细菌32-11-2-2的筛选和分离鉴定

目的:从中国东海微生物样品中分离筛选活性细菌菌株,并对活性菌株32-11-2-2进行鉴定.方法:采用无限稀释和平板划线法分离微生物样品,利用稻瘟霉模型进行活性筛选;并对其中的活性菌株32-11-2-2的形态、培养特征以及生理生化特征进行研究,使用16S rDNA序列分析的方法对菌株32-11-2-2进行了分类鉴定.结果:分离得到421株细菌,包括活性菌株54株,其中活性菌株32-11-2-2是一株弱嗜盐菌,具有陆地芽孢杆菌的形态特点,能产生胞外淀粉酶、过氧化氢酶,液化明胶、石蕊牛奶反应阳性,16S rDNA序列分析该菌株与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)同源性达到98%以上.结论:活性菌株32-11-2-2是一株适应了海洋环境的枯草芽孢杆菌.     

Purification and characterization of keratinase from a new Bacillus subtilis strain

The aim of this study was to purify and characterize a keratinase produced by a new isolated Bacillus subtilis KD-N2 strain. The keratinase produced by the isolate was purified using ammonium sulphate precipitation, Sephadex G-75 and DEAE （diethylaminoethyl）-Sepharose chromatographic techniques. The purified enzyme was shown to have a molecular mass of 30.5 kDa, as determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis （SDS-PAGE） analysis. The optimum pH at 50 ℃ was 8.5 and the optimum temperature at pH 8.5 was 55 ℃. The keratinase was partially inactivated by some metal ions, organic solvents and serine protease inhibitor phenylmethanesulfonyl fluoride （PMSF）. Sodium dodecyl sulfate （SDS） and ethylene diamine tetraacetic acid （EDTA） had positive effect on the keratinase activity. Reducing agents including dithiothreitol （DTT）, mercaptoethanol, L-cysteine, sodium sulphite, as well as chemicals of SDS, ammonium sulfamate and dimethylsulfoxide （DMSO） stimulated the enzyme activity upon a feather meal substrate. Besides feather keratin, the enzyme is active upon the soluble proteins ovalbumin, bovine serum albumin （BSA）, casein and insoluble ones as sheep wool and human hair. Calf hair, silk and collagen could not be hydrolyzed by the keratinase.     

基因工程枯草杆菌生产中性蛋白酶的研究

使用一株基因工程枯草杆菌ＤＢ４０３（ｐＷＬ２６７）生产中性蛋白酶，其宿主ＤＢ４０３失去了野生菌株９９％的胞外蛋白酶生产能力，质粒ｐＷＬ２６７则带有野生菌株中性蛋白酶的全部结构基因。在分批培养中，中性蛋白酶的活性为２６２ｍｇ／ｍｉｎ·Ｌ左右，通过培养基改进达到３．２８６ｇ／ｍｉｎ·Ｌ。连续培养表明，中性蛋白酶的比生产速率在比生长速率为０．２ｈ￣（－１）时最大。在控制补加葡萄糖和其它培养基成分的补料分批培养中，中性蛋白酶活性达１７．６７０ｇ／ｍｍ·Ｌ。     

海洋芽孢杆菌次生代谢产物的分离、鉴定及生物学活性的初步研究

目的:开发药用海洋微生物资源,从微生物代谢产物中获取活性物质.方法:利用硅胶柱、凝胶柱、高效液相等色谱技术对抗菌模型筛选到的活性菌株F81612发酵液的乙酸乙酯浸膏进行分离,通过1HNMR、13CNMR和MS对化合物进行结构鉴定,利用纸片法和四甲基偶氮唑盐比色法对单体化合物进行生物学活性评价.结果和结论:分离鉴定了11个化合物,它们分别为:macrolactin A(1),3-羟基乙酰基吲哚(2),3-吲哚乙醇(3),环(色-脯)二肽(4),环(异亮-色)二肽(5),环(亮-脯)二肽(6),环(亮-缬)二肽(7),环(异亮-脯)二肽(8),环(苯丙-缬)二肽(9),N-苯乙基乙酰胺(10).对羟基苯甲醛(11).化合物1为主要活性成分,对稻瘟霉、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的MIC值分别为3.6、0.45和6.3ìg/ml,对肿瘤细胞株HeLa及HepG2的IC50值分别为2.0和1.8ìg/ml.     

Screening and characterization of extracelluar L-asparaginase producing Bacillus subtilis strain hswx88, isolated from Taptapani hotspring of Odisha,India

Objective

To screen and isolate an eco-friendly, a thermophilic and potent L-asparaginase producing bacterium, with novel immunological properties that may obviates hypersensitivity reactions.

Methods

In the present study bacterial strain isolated for extracellular L-asparaginase production from hotspring, identified by morphological, biochemical and physiological tests followed by 16S rDNA technology and the L-asparaginase production ability was tested by both semi quantitative and quantitative enzymatic assay.

Result

The bacterial strain was identified as Bacillus subtilis strain hswx88 (GenBank Accession Number: {"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"JQ237656.1","term_id":"374341559","term_text":"JQ237656.1"}}JQ237656.1). The extracellular enzyme yielding capacity isolate Bacillus subtilis strain hswx88 (23.8 IU/mL) was found to be 1.7 and 14.5 times higher than the reference organism Pectobacterium carotovorum MTCC 1428 (14.2 IU/mL) and Bacillus sp. BCCS 034 (1.64 IU/mL).

Conclusion

The isolate is eco-friendly and useful to produce bulk quantity of extracellular, thermophilic L-asparaginase for the treatment of various tumor cases and for preparation of acrylamide free fry food preparation.     

枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊对肝硬化患者肠道屏障功能及肝功能的影响

目的探讨枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊对肝硬化失代偿期患者肠道屏障功能及肝功能状态的影响,为肝硬化患者肠道屏障功能的维护提供实验依据。方法将40例肝硬化患者随机分为对照组和观察组各20例,对照组给予常规保肝、利尿、降门静脉压力治疗和一般对症支持处理;观察组在对照组治疗基础上加用枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊治疗。在治疗前后分别测定血清内毒素及尿液乳果糖/甘露醇排出比(L/M),同时测定血清白蛋白(ALB)、天门冬氨酸转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平,并以Child-pugh分级进行评分。结果治疗前,观察组和对照组的血清内毒素水平、尿液L/M比值及血清ALB、AST和TBIL水平、Child-pugh评分差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,观察组和对照组的血清内毒素水平、尿液L/M比值、血清AST和TBIL水平均较治疗前降低,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后血清ALB水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,观察组的血清内毒素水平、尿液L/M比值、血清AST水平及Child-pugh评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);但2组的血清ALB和TBIL水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊联合常规治疗可有效保护肝硬化患者的肠道屏障功能,降低肠道通透性,对肝硬化患者肝功能的恢复有一定辅助作用。     

复性速率液相分子杂交法测定枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌DNA杂交度

目的　研究DNA DNA杂交率和 (G C)mol%测定方法 ,并把获得的数据应用于芽孢杆菌细菌分类、鉴定。方法　以枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌为研究材料 ,采用简便、实用又有很好重复性的热变性温度法 (Tm)测定DNA中 (G C)mol% ,以及复性速率液相分子杂交法测定DNA DNA杂交度。结果　热变性温度法 (Tm)测定枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的DNA中 (G C)mol%分别为 42 .7和 40 .2 6 ,采用复性速率液相杂交法测定上述两菌DNA DNA杂交度为 9 6 6 %。结论　显示枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌为同属中相互关系并不十分密切的两个种。     

康复干预措施联合枯草杆菌二联活菌颗粒对早产儿黄疸及早期生长发育的影响

目的 探讨康复干预措施联合枯草杆菌二联活菌颗粒对早产儿黄疸及早期生长发育的影响。方法 选取2015年1月～2018年12月我院妇产科出生的早产儿80例,随机分为干预组和对照组各40例。两组早产儿出生后早期予以母乳、奶瓶、胃管或滴管喂养,营养不足部分通过静脉补液供给,并予以常规育儿指导及定期体检干预。对照组在此基础上加枯草杆菌二联活菌颗粒。干预组早产儿在对照组基础上再予以康复干预措施。观察两组早产儿胆红素的峰值、黄疸持续时间、胎便排空时间及大便频率,并在纠正胎龄40周时比较两组早产儿腹围、体重、头围和身长等指标。结果 干预组早产儿胆红素峰值、黄疸持续时间和胎便排空时间少于对照组,干预组早产儿大便频率多于对照组(P0.05)。纠正胎龄40周时,干预组早产儿腹围和体重明显高于对照组(P0.05),两组早产儿头围和身长比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 康复干预措施联合枯草杆菌二联活菌颗粒不仅可降低早产儿血胆红素水平,缩短黄疸持续时间,加快胎粪排泄,而且能增加腹围和体重,促进早产儿的生长发育。     

急性腹泻病人粪便中检出O139霍乱弧菌和鉴定报告

霍乱是由O1群和O139群霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病,是发病急、传播快、波及面广、危害严重的甲类传染病,也是当今三种国际检疫传染病中最严重的一种。O139霍乱弧菌是近年来出现的一种新型霍乱弧菌,是目前唯一能产生霍乱样肠毒素CT,具有CT基因的非O1群霍乱弧菌,发病率、病死率都很高。最初于1992年印度孟加拉国等地出现爆发流行,我国于1993年在新疆等地相继检出。我院检验科微生物室于2006年6月22日的1例急诊腹泻病人粪便中检出O139霍乱弧菌,此菌得到市疾控中心进一步鉴定认可,为我地区首次检出,现报告如下。