多巴胺对大鼠前额叶皮层锥体神经元NMDA受体通道的影响

[目的]探讨多巴胺(DA)对前额叶皮层锥体神经元谷氨酸/N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的调节作用.[方法]使用细胞贴附式膜片钳技术进行单通道记录,观察不同浓度DA对急性分离的前额叶皮层锥体神经元NMDA受体通道电流的影响.[结果]结果表明:当DA浓度为0逐渐升高到60 μmol/L时,NMDA受体通道的电流幅度由(2.78±0.68)pA升高到(5.42±1.26)pA;短开放时间常数变化不明显,但长开放时间常数由(13.59±1.26)ms升高到(36.19±1.17)ms;长关闭时间常数由(19.73±1.46)ms降低到(2.67±0.75)ms;通道开放概率由0.25±0.09升高到0.56±0.25;当DA浓度继续由60 μmol/L升高到100 μmol/L时,NMDA受体通道的电流幅度回落到(3.56±0.79)pA,长开放时间常数回落到(14.40±1.37)ms;长关闭时间常数恢复为(17.74±1.79)ms,与对照组比较无显著性变化;通道开放概率由0.56±0.25降低到0.17±0.08.[结论]DA可以影响前额叶皮层锥体神经元NMDA受体通道的活动,而且具有浓度依赖性,低浓度有明显促进作用,高浓度则促进作用减弱,甚至有抑制作用.     

大鼠脑内多巴胺受体超敏与Na^＋—K^＋—ATP酶活性变化的相关性研究

目的 研究超敏状态下多巴胺（ＤＡ）受体调节功能的变化与Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性活性变化的可能相关性。方法 采用慢性连续给予ＤＡ受体拮抗剂的方法导致大离内ＤＡ受体的超敏。应用分光光度法测定Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶经ＡＴＰ水解释放的无机磷而确定酶的活性。结果 生给予利血平、氯氮平和氟哌啶醇对大鼠纹状体、海马和皮层Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰ酶的活性均无显著影响。而以相同剂量的利血平、氯氮平和氟哌啶醇连续给     

海洛因成瘾大鼠相关脑区多巴胺及其代谢产物的变化

目的 初步探索多巴胺(DA)递质释放与海洛因成瘾和神经毒性的相关性.方法 建立海洛因成瘾大鼠模型,应用高效液相色谱层析技术检测前额叶皮质、海马、伏隔核和纹状体的DA及其代谢产物3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)的含量.结果 海洛因成瘾大鼠前额叶皮质和伏隔核的DA及其DOPAC含量相对于对照组增高(P＜0.01,P＜0.05),纹状体反而明显降低(P＜0.01);海马仅检测到DA且与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05);成瘾大鼠的前额叶皮质的DOPAC/DA值比对照组显著增加(P＜0.01),而伏隔核和纹状体明显降低(P＜0.01).结论 DA的变化进一步证明了包括伏隔核和额叶皮质在内的奖赏系统在海洛因成瘾中的重要作用,DA减少预示纹状体功能受到损害.     

大鼠纹状体区多巴胺受体的变化对动物行为的影响

目的 研究大鼠黑质区注射脂多糖(LPS)后,纹状体区多巴胺2型受体(D2R)亚型mRNA含量的变化,初步探讨D2R与帕金森病(PD)发病的关系。方法 利用立体定向技术将LPS注人大鼠单侧黑质区,注射后21 d左右,以阿扑吗啡诱导大鼠旋转,RT-PCR方法半定量检测各组大鼠双侧纹状体区D2R两亚型mRNA的表达量。结果 单侧黑质注射LPS的大鼠经阿扑吗啡诱导后向损毁同侧旋转,实验组大鼠纹状体区DL和DS的mRNA表达量损毁侧较对照侧明显增高(P<0.05,P<0.01)。结论LPS损毁大鼠的纹状体部位D2R mRNA含量的变化,可导致大鼠行为的改变,提示D2R可能与PD的发病有一定关系。     

海洛因成瘾易感性的前额叶皮质多巴胺D2受体及多巴胺转运体机制

目的 建立大鼠海洛因成瘾易感性差异模型,探讨其可能的前额叶皮质D2受体(D2R)及多巴胺转运体(DAT)机制.方法 130只雄性SD大鼠随机抽取30只为生理盐水对照组(SC),其余100只大鼠为海洛因处理组,根据海洛因诱导的CPP强度不同再分为高CPP组(HP)和低CPP组(LP),利用免疫组化方法对高、低偏爱组及生理盐水对照组大鼠末次海洛因注射后30min、戒断第1,3,7,14天PFC区D2R和DAT蛋白表达进行动态检测.结果 ①高、低偏爱组和对照组之间D2R蛋白灰度值在成瘾期[(149.33±2.51),(135.83±1.78),(99.33±2.84)]及戒断第1[(141.83±2.50),(131.67±1.87),(99.17±3.61)]、3[(132.83±2.40),(122.00±2.67),(100.33±4.26)]、7[(125.67±2.22),(113.17±2.81),(98.33±3.25)]、14天[(116.86±1.94),(108.63±2.31),(98.17±3.82)]的差异均有统计学意义(F值分别为114.59,65.45,26.50,31.88,11.33,P＜0.05),两两比较显示,在各检测时点高、低CPP组均高于对照组(P＜0.05),而高CPP组均高于低CPP组(P＜0.05);②高、低偏爱组和对照组之间前额叶皮质DAT蛋白灰度值在成瘾期及戒断第1,3天的差异均有统计学意义(F值分别为89.17,34.68,12.03,P＜0.05),两两比较显示,高、低CPP组均高于对照组(P＜0.05),至戒断第7天和戒断第14天3组间的差异无统计学意义(P＞0.05);高、低偏爱组之间在所有检测时点DAT蛋白灰度值差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 海洛因慢性处理后,大鼠PFC区D2R和DAT均出现适应性下调;PFC区低D2R可能与海洛因成瘾的高易感性与有关;海洛因成瘾易感性与PFC区DAT的表达可能没有直接的相关性.     

雌激素对卵巢切除大鼠肾脏VDR mRNA表达的影响

目的 探讨雌激素对卵巢切除(OVX)大鼠肾脏维生素D受体(VDR)mRNA表达的影响.方法 25只成年雌性SD大鼠随机分为为假手术组、OVX组、OVX 补充雌激素组、OVX 补充孕激素组和OVX 补充雌、孕激素组(n=5).于分组处理2月后处死大鼠取肾脏组织,RT-PCR检测各组VDR mRNA的相对表达量.结果 OVX组大鼠肾脏VDRmRNA表达显著低于假手术组(P<0.05);与OVX组相比,OVX 补充雌激素组和OVX 补充雌、孕激素组大鼠肾脏VDR mRNA表达显著增加(P<0.05).结论 OVX大鼠肾脏组织VDR mRNA表达减少;雌激素能促进OVX大鼠肾脏组织VDR mRNA的表达.     

雌激素对卵巢切除大鼠肾脏VDR mRNA表达的影响

目的 探讨雌激素对卵巢切除(OVX)大鼠肾脏维生素D受体(VDR)mRNA表达的影响.方法 25只成年雌性SD大鼠随机分为为假手术组、OVX组、OVX+补充雌激素组、OVX+补充孕激素组和OVX+补充雌、孕激素组(n=5).于分组处理2月后处死大鼠取肾脏组织,RT-PCR检测各组VDR mRNA的相对表达量.结果 OVX组大鼠肾脏VDRmRNA表达显著低于假手术组(P<0.05);与OVX组相比,OVX+补充雌激素组和OVX+补充雌、孕激素组大鼠肾脏VDR mRNA表达显著增加(P<0.05).结论 OVX大鼠肾脏组织VDR mRNA表达减少;雌激素能促进OVX大鼠肾脏组织VDR mRNA的表达.     

RNA干扰沉默VDR基因对小鼠成骨细胞Dmp1?Cbfa1及BMP-2 mRNA 表达的影响

目的:利用RNA干扰技术,阻断VDR在小鼠成骨细胞株mc3t3-E1中的表达,观察VDR表达受抑后对小鼠成骨细胞Dmp1、Cbfa1及BMP-2基因mRNA表达的影响.方法:针对小鼠VDR mRNA 144、594、852、3 628位点设计、合成4对21核苷酸siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3、siRNA4);在阳离子脂质体介导下转染mc3t3-E1细胞,以空白及非特异性siRNA作为对照,各组于转染24 h及72 h后收集细胞分别抽提RNA及蛋白.采用RT-PCR法检测细胞中VDR mRNA表达水平的改变,Western blot法检测VDR蛋白表达的变化,从而筛选有效序列.进一步应用SYBR Green荧光实时PCR方法定量检测成骨细胞功能基因-Dmp1、cbfa1及BMP-2基因mRNA表达情况.结果:与空白对照组相比,转染siRNA3、siRNA4的mc3t3-E1细胞VDR mRNA和蛋白表达明显下调(P＜0.01).转染siRNA1、2及非特异性siRNA的mc3t3-E1细胞VDR的表达与对照组相比无显著差异(P＞0.05).荧光定量PCR结果显示,转染siRNA3、siRNA4的mc3t3-E1细胞Dmp1、cbfa1、BMP-2mRNA表达明显下调(P＜0.01).结论:针对小鼠VDR mRNA 852、3 628位点设计、合成的siRNA可有效抑制小鼠成骨细胞株VDR的转录和表达;VDR表达受抑可下调mc3t3-E1细胞功能基因Dmp1、Cbfa1、BMP-2mRNA的表达;VDR在维持成骨细胞功能中起着一定的作用.     

缬沙坦对糖尿病大鼠肾皮质中肾上腺髓质素受体mRNA表达的影响

目的:探讨肾上腺髓质素受体(ADMR)在糖尿病(DM)肾脏病变时的变化及缬沙坦对ADMRmRNA表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为3组:正常对照组、糖尿病对照组和缬沙坦干预组。采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备DM动物模型,缬沙坦10mg/(kg·d)灌胃。通过RT鄄PCR方法检测肾皮质中ADMRmRNA的表达。结果:①缬沙坦干预组大鼠体重较DM组明显增加(P﹤0.01),24h尿白蛋白排泄率(UAER)显著降低(P﹤0.01),两组间糖化血红蛋白(HbA1c)及血糖(Glu)无显著性差异(P﹥0.05);②缬沙坦干预组大鼠肾皮质中ADMR的mRNA表达显著高于DM组。结论:缬沙坦可上调糖尿病大鼠肾皮质中ADMRmRNA的表达,ADMR可能参与了缬沙坦对肾脏的保护作用。     

雌激素对直肠炎大鼠背根神经节P2X3受体mRNA表达的影响

目的:观察结直肠三硝基苯磺酸(TNBS)致炎条件下,改变大鼠体内雌激素和孕激素水平对背根神经节(DRG)中P2X3和P2X2 mRNA表达的影响。方法:SD大鼠分为4组:假手术组、去卵巢组、去卵巢加雌激素替代组、去卵巢加雌孕激素替代组,每组手术完成后饲养5周,再行TNBS致炎,5~7 d后用于实验。实时定量RT-PCR法检测各组P2X3 和P2X2 mRNA的表达。结果:去卵巢组大鼠DRG中P2X3 mRNA表达明显低于假手术组,差异有统计学意义(1.08±0.35 vs 1.66±0.66,P<0.05,n=4),雌激素替代组有明显上升(2.06±0.58),明显高于去卵巢组(P<0.01,n=5),而雌孕激素同时替代组明显低于单独添加雌激素组(2.06±0.58 vs 0.87±0.28,P<0.01,n=5)。各组大鼠DRG中P2X2 mRNA表达无统计学差异。结论:结直肠TNBS致炎条件下,雌激素可促进大鼠DRG中P2X3 mRNA表达,但对P2X2 mRNA无明显影响;孕激素的作用可能与雌激素正好相反。炎性条件下,雌孕激素可能通过影响P2X3受体的表达发挥调节炎性痛作用。     

雌、孕激素对去卵巢大鼠肝脏维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨雌、孕激素对去卵巢大鼠维生素D受体mRNA的影响。方法25只成年SD雌性大鼠,随机分为Sham组(假手术组)、OVX组(单纯去卵巢组)、OVX+E组(去卵巢+补充雌激素组)、OVX+P组(去卵巢+补充孕激素组)OVX+E+P组(去卵巢+补充雌、孕激素组),每组5只。喂养3个半月后处死,取肝脏检测1,25-二羟维生素D3受体mRNA。结果与去卵巢组比较:(1)雌激素对去卵巢大鼠肝脏1, 25-二羟维生素D3受体mRNA的表达有显著上调作用;(2)雌、孕激素联合用药组1, 25-二羟维生素D3受体mRNA的表达介于单用雌激素和孕激素之间;(3)孕激素对去卵巢大鼠肝脏1,25-二羟维生素D3受体mRNA的表达无显著上调。结论雌激素能促进去卵巢大鼠肝脏1, 25-二羟维生素D3受体的表达。     

雌、孕激素对去卵巢大鼠肝脏维生素D受体mRNA表达的影响

目的：探讨雌、孕激素对去卵巢大鼠维生素D受体mRNA的影响。方法：25只成年SD雌性大鼠，随机分为 Sham组（假手术组）、OVX组（单纯去卵巢组）、OVX＋E组（去卵巢＋补充 雌激素组）、OVX＋P组（去卵巢＋补充孕激素组）、OVX＋E＋P组（去卵巢＋补充雌、孕激素组），每组5只。喂养3个半月后处死，取肝脏检测1，2，5－二羟维生素D3受体mRNA结果:与去卵巢组比较 :(1)雌激素对去卵巢大鼠肝脏1,2,5-二羟维生素D3受体mRNA的表达有显著上调作用;(2)雌、孕激素联合用药组1，25－二羟维生素D3受体mRNA的表达介于单用雌激素和孕激素之间；（3）孕激素对去卵巢大鼠肝脏1，25－二羟维生素D3受体mRNA的表达无显著上调。结论：雌激素能促进去卵巢大鼠肝脏1，25－二羟维生素D3受体的表达。     

糖尿病大鼠肠道、胰腺GLP-1受体mRNA的表达

目的:研究胰高血糖素样多肽1(GLP-1)受体mRNA表达水平在大鼠肠道不同部位和胰腺分布的特点及两者间的差异.方法:以Wistar大鼠为对照,口服葡萄糖耐量试验确定自发性2型糖尿病模型GK大鼠已发病,采用实时定量PCR方法(SYBR Green法)检测大鼠不同肠段和胰腺的GLP-1受体mRNA表达水平.结果:GLP-1受体mRNA表达中,正常大鼠不同肠段以空肠表达量最低,与回肠和结肠相比较差异有统计学意义(P<0.05),回肠与结肠相比较差异无统计学意义(P>0.05).糖尿病组大鼠空肠GLP-1受体mRNA相对表达量为0.27,而对照组大鼠空肠的相对表达量为0.59;糖尿病组大鼠结肠GLP-1受体mRNA相对表达量为0.5,对照组大鼠结肠的相对表达量为1;糖尿病组大鼠胰腺GLP-1受体mRNA相对表达量为0.37,而对照组大鼠胰腺的相对表达量为0.97,两组间空肠、结肠和胰腺GLP-1受体mRNA相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05).糖尿病组回肠GLP-1受体mRNA相对表达量为0.73,对照组回肠的相对表达量为0.86, 两组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:糖尿病大鼠GLP-1受体mRNA相对表达量在空肠、结肠和胰腺的下调,提示空肠、结肠和胰腺GLP-1受体的表达变化可能与GK大鼠的糖尿病发生发展有关.