早期细胞凋亡的流式细胞术分析

目的：探讨多参数流式细胞术分析肿瘤细胞早期凋亡的方法。方法：采用Annexin V FITC／PI双染法及JC-1染色法标记食管癌EC6细胞，通过多参数流式细胞术分析X射线、顺铂诱导产生的细胞凋亡情况及线粒体膜电位的变化。结果：随着剂量的增加，凋亡细胞的百分率逐渐增加，线粒体膜电位下降，去极化细胞增多，并且有明显的剂量依赖性。结论：多参数流式细胞术具有广阔的应用前景，短时间内能够获得大量统计学意义上可靠的数据，为探讨细胞凋亡机制、寻找治疗靶点提供了有益线索。     

流式细胞术Annexin Ⅴ细胞凋亡检测方法探讨

目的:研究流式细胞术用Annexin Ⅴ/PI双染方法来检测细胞凋亡的合理的实验操作步骤.方法:将Annexin Ⅴ/PI中的抗体先加入到单个细胞样本中,再加入PI,最后加入Buffer工作液,反应30min后再加入Buffer工作液上机.结果:图像清晰,细胞凋亡率明显增加并与临床和科研的结果一致.结论:Buffer工作液必须在样本加入PI之后再加入,以避免出现所测细胞物理特性的改变.     

细胞凋亡流式细胞仪分析方法的比较及选择

以凋亡诱导剂喜树碱影响下的ＨＬ－６０细胞为检测对象,对以流式细胞仪为基础建立的３种细胞凋亡定量分析方法,进行了敏感性和特异性比较,结果：３种方法对凋亡均有定性和定量作用,均能同时提供细胞周期方面的信息。加入喜树碱（ＣＭＭ）１２０ｍｉｎ后,低分子量ＤＮＡ抽紧后荧光染料（ＰＩ）染色法（Ｓｕｂ－Ｇ１法）和ＴｄＴ酶探测ＤＮＡ断端方法（ＴｄＴ法）均可检测到凋亡细胞;而ＤＮＡ变性后Ｙ啶橙染色法（ＡＯ法）在加入     

流式细胞术检测细胞周期分析软件的比较

目的探讨流式细胞术中不同细胞周期分析软件在细胞周期分析中的特点和差异。方法采用碘化丙啶染色,在Epics XL流式细胞仪上检测细胞周期,分别应用MultiCycle和Modfit LT软件对检测数据进行分析,并比较分析结果。结果 MultiCycle和Modfit LT软件分析细胞周期各时相比例、DNA倍体分析、细胞增殖及细胞凋亡数值,比较其结果基本一致。仅人肺癌细胞系A549细胞G2/G1值应用2种不同软件分析其数据差异有统计学意义(P<0.01);Jurkat T细胞聚集体的比例应用2种不同软件分析其数据差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MultiCycle和Modfit LT软件分析同一样本所得拟合结果有较高的一致性;对G2/G1值进行限制的操作可能更适用于组成成分较复杂的样本;虽然不同采集软件区分粘连细胞和细胞集落的方法不同,导致聚集体的比例差异显著,但并未对细胞周期分析结果的判定产生影响。     

细胞凋亡流式细胞仪分析方法的比较及选择

以凋亡诱导剂喜树碱影响下的ＨＬ－６０细胞为检测对象,对以流式细胞仪为基础建立的３种细胞凋亡定量分析方法,进行了敏感性和特异性比较,结果：３种方法对凋亡均有定性和定量作用,均能同时提供细胞周期方面的信息。加入喜树碱（ＣＡＭ）１２０ｍｉｎ后,低分子量ＤＮＡ抽提后荧光染料（ＰＩ）染色法（Ｓｕｂ－Ｇ１法）和ＴｄＴ酶探测ＤＮＡ断端方法（ＴｄＴ法）均可检测到凋亡细胞;而ＤＮＡ变性后Ｙ啶橙染色法（ＡＯ法）在加入ＣＡＭ１００ｍｉｎ后,就能够证实细胞凋亡的存在。ＴｄＴ法所显示的检测结果最清晰、直观。Ｓｕｂ－Ｇ１法操作最简便、迅速,费用最低。结论：ＡＯ法敏感性好;ＴｄＴ法更适合于细胞凋亡的细胞周期特异性分析;Ｓｕｂ－Ｇ１法最具实用性。     

DADS诱导人白血病细胞HL-60凋亡的流式细胞术检测

目的 运用流式细胞术检测二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的作用. 方法 实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养,进行细胞形态学观察,应用流式细胞术检测凋亡率、早期凋亡细胞以及caspase-3活性. 结果 DADS诱导前后,HL-60细胞形态学发生明显改变,PI单染法检测结果 :随着不同浓度DADS作用HL-60细胞24 h,HL-60细胞出现明显亚二倍峰,细胞周期也发生了相应的改变;Annexin V/PI 双染法检测结果 :10 mg/L DADS作用HL-60细胞4、8、12和24 h后,早期凋亡细胞显著增加,具有明显的时间依赖性(P<0.05);间接免疫荧光流式细胞术结果 显示在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有caspase-3的活化,且与作用时间呈依赖关系. 结论 流式细胞术检测结果 表明,DADS能有效诱导HL-60细胞凋亡.     

流式细胞术检测石见穿多糖诱导的肝癌细胞凋亡率

目的 探讨石见穿多糖抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖的机制. 方法 利用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测经不同浓度石见穿多糖作用的SMMC-7721肝癌细胞的凋亡率.结果石见穿多糖各浓度组平均细胞凋亡率为(7.87±1.860)%、(13.63±2.87)%、(21.05±2.68)%,显著高于对照组(0.67±0.28)%. 结论 石见穿多糖能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,且凋亡率随着石见穿多糖浓度的增加而增高.     

流式细胞定量检测细胞凋亡

目的研究流式细胞仪定量检测细胞凋亡。方法用流式细胞仪检测雷公藤多甙对慢性肾疾病患者的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）凋亡，再用琼脂糖凝胶电泳观察ＤＮＡ电泳情况。结果流式细胞仪出现亚二倍体峰，凋亡细胞百分比明显增多。琼脂糖凝胶电泳呈现特征性的“梯状”带。结论流式细胞仪可定量检测细胞凋亡。     

细胞凋亡：流式细胞术DNA含量分析中的第三类信息

喜树碱（ＣＡＭ）诱导人类急性早幼粒细胞白血病细胞株（ＨＬ－６０）细胞怪高渗磷酸－柠檬酸盐缓冲液（ＰＣ）处理，并同时用线性放大和对数放大进行ＤＮＡ含量分析。结果显示，在ＤＡＮ直方图上，可将亚Ｇ１凋亡峰和坏死细胞碎片峰有效地分开，并且不影响Ｇ１期细胞与Ｇ２期细胞ＤＮＡ含量间的线性关系。提示流式细胞术ＤＡＮ含量分析是细胞生物学和临床分析的重要手段。     

《流式细胞术及其临床应用》多媒体课件设计

流式细胞术及其临床应用相关知识多媒体课件设计包括目标、内容、方法、达到的效果、关键问题及其解决措施等内容,旨在规范流式细胞术教学内容、解决教学内容多与课时少的矛盾,节约教学经费,使相关理论知识和技术要领学习实现“三化”,全面提高教学质量和教学水平.     

流式细胞术免疫分型在形态学诊断困难的白血病中的应用

目的：应用流式细胞仪对11例临床形态学诊断困难的急慢性白血病进行快速、有效地免疫分型,协助临床诊断,以指导临床化疗。方法：采用单克隆抗体三色（FITC、PE、Per-CP）直接免疫荧光标记法及多参数流式细胞术（FCM）检测,分型根据抗体积分系统,并与FAB分型进行比较。结果：①2例临床形态学拟诊断毛细胞白血病,经FCM免疫分型表达为B淋巴细胞性白血病,得以确诊;1例慢性淋巴细胞白血病经FCM免疫分型诊为T淋巴细胞性白血病;②4例临床诊断急性淋巴细胞白血病（L2、L3）的患者经FCM免疫分型确诊为B淋巴细胞性白血病;③3例临床形态学诊断困难急性非淋巴细胞性白血病经FCM免疫分型确诊3例为髓系白血病。结论：流式细胞仪多参数白血病免疫表型分析,可以弥补FAB分型的不足,为临床诊断提供重要依据,并为白血病治疗措施的个体化提供依据。     

应用流式细胞术检测结核分枝杆菌药敏试验

目的建立流式细胞术检测结核分枝杆菌药敏试验的方法。方法利用结核分枝杆菌水解FDA的特点,选用FDA作为荧光染料,用流式细胞术检测H37Rv标准株,临床分离到的20株结核分枝杆菌对RFP、INH、SM和EMB的敏感性,根据细菌培养物在不同浓度药物作用后所检测到的平均荧光强度与阳性对照的比值,从而推断MIC值,并于传统的绝对浓度法检测结果进行比较。结果20株结核分枝杆菌的流式细胞术所得药敏试验结果与绝对浓度法基本一致。结论所建立的流式细胞术检测结核分枝杆菌药敏试验可以应用于临床,并有快速、准确、方便的优点。     

流式细胞术检测胸腔积液和外周血T淋巴细胞亚型及比例的研究

目的:探讨流式细胞技术检测恶性、结核性胸腔积液(PE)和外周血中T淋巴细胞亚型及比例的临床意义.方法:用流式细胞技术检测53例为结核性胸腔积液(PE)、62例为恶性积液患者和17例单纯性漏出液的胸水中的T淋巴细胞亚型及比例.结果:结核性胸腔积液患者胸水中淋巴细胞总数高于恶性胸腔积液或单纯漏出性胸腔积液患者(P=0.032),差异有统计学意义.亚型分析表明主要为T淋巴细胞,其中结核性和单纯漏出性胸腔积液的CD4+T细胞和CD4+/CD8+比值明显高于恶性胸腔积液(均为P＜0.05),而恶性胸腔积液患者的CD8+T细胞则明显高于结核性和单纯漏出性胸腔积液的患者(P=0.006).不同细胞亚型在结核性、恶性和单纯漏出性胸腔积液中无明显差别(P＞0.05).结论:结核性和单纯漏出性PE中CD4+T细胞和D4+/CD8+比值高于恶性肿瘤的患者,可作为鉴别诊断的参考.     

多参数流式细胞术分析骨髓增生异常综合征患者原始细胞的免疫表型特点

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者原始细胞免疫表型特点及其在诊断、分型及预后中的临床意义.方法:应用多参数流式细胞术,对41例MDS患者和24例非MDS患者原始细胞免疫标志的表达率进行检测.结果:MDS组与非MDS(non-MDS)组相比,CD34、CD123和CD133在原始细胞群表达显著增高(P＜0.01)...     

流式细胞术分析p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝细胞凋亡

目的观察p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝细胞凋亡。方法用流式细胞仪检测6、12、18、24月龄p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠和p21^＋/＋野生型小鼠新鲜肝脏组织。结果转基因小鼠肝细胞凋亡率低于同月龄野生型小鼠。结论HBsAg基因的转入和表达，抑制转基因小鼠肝细胞凋亡。     

用流式细胞术检测白细胞DNA含量推测死亡时间

目的:用流式细胞术检测离体血液白细胞二倍体峰荧光强度、细胞碎片含量等指标推测死亡时间。方法:抽取18周岁男性新鲜血液样本13份,分别用采取肝素钠抗凝和不抗凝两种方式,隔绝空气20℃保存。结果:在0-144 h内,离体抗凝血细胞碎片的比例从0.64%上升到15.07%,二倍体峰荧光均道值无明显变化;未抗凝血(微凝血)细胞碎片比例变化无明显规律,二倍体峰荧光均道值在12-132 h内无明显变化。结论:流式细胞术检测的抗凝血、微凝血液白细胞二倍体峰均道值与离体时间无相关性;抗凝血白细胞碎片的比例与离体时间有较强的相关性。     

羟基磷灰石纳米粒子抑制结肠癌SW-480细胞生长的体外实验

目的:本研究旨在明确羟基磷灰石纳米粒子(HAP)在体外能否诱导人结肠癌SW-480细胞凋亡并从凋亡角度探讨其抑癌机制。方法:用HAP以不同浓度作用于人结肠癌SW-480细胞,以诱导其凋亡。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞术(FCM)等方法来检测凋亡,观察其形态学和生化方面的变化。结果:HAP以剂量和时间依赖的方式抑制人结肠癌SW-480细胞的生长。25 mg/L,50mg/L HAP作用72 h细胞的生长抑制率分别是49.71%和61.03%。12.5-100 mg/L的HAP处理48 h后,结肠癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形式等凋亡特征的形态学改变。流式细胞仪均能检测到凋亡峰,12.5,25,50,100 mg/L HAP作用48 h,凋亡率分别是3.57%,21.45%,37.10%和49.45%。结论:HAP在体外能抑制人结肠癌SW-480细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

小儿血管瘤细胞周期分析及凋亡观察

目的探讨婴幼儿血管瘤增生和自行消退的机制.方法收集未经任何治疗的婴幼儿血管瘤手术切除标本37份(增生组24份和消退组13份).先制备单细胞悬液，运用流式细胞术对血管瘤细胞进行细胞周期参数分析，获取S、G2/M和G0/G1各期细胞比例数S％、G2/M％和G0/G1％，得到细胞增殖指数(PI)，了解细胞增殖情况.测定血管瘤细胞凋亡情况，得细胞凋亡比例数(AV ％).结果增生组和退化组的PI分别是13.49±2.08、7.85±1.78，差别有显著性意义(P＜0.01)，增生期的PI明显高于退化期.增生组和退化组的S％分别是5.99±1.85、1.92±0.65；G2／M％分别是7.46±1.82、5.94±1.63，在细胞周期中，增生组处于S期的细胞多于退化组(P＜0.01)，而处于G2/M的细胞数增生组多于退化组，但不如S期显著(P＜0.05).增生组和退化组的AV ％分别是9.84±3.05、16.18±4.89，退化组明显高于增生组(P＜0.05).结论细胞增殖、凋亡的失衡是婴幼儿血管瘤增生、消退的机制之一，凋亡在血管瘤的消退过程中发挥重要的作用.     

酒石酸锑钾在诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡中的影响

目的:本研究旨在明确酒石酸锑钾(PAT)在体外对人肝癌BEL7402细胞凋亡的影响及抑癌机制。方法:用PAT以不同浓度、不同时间作用于人肝癌BEL7402细胞,以诱导其凋亡。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜、TUNEL染色法及流式细胞术(FCM)等方法来检测凋亡,观察其形态学和生化方面的变化。结果:PAT以剂量依赖和时间依赖的方式抑制BEL7402细胞的生长。5～40μmol·L-1的PAT处理48h后,形态学上,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形式等凋亡特征的形态学改变。DNA末端原位标记染色法、流式细胞仪均能检测到凋亡细胞。结论:PAT在体外诱导肝癌BEL7402细胞凋亡,能作为一种凋亡诱导剂用于肝癌的治疗。