亚低温对颅脑损伤后脑内皮细胞紧密连接开放影响的实验研究

背景亚低温已作为治疗重型颅脑损伤的常规措施之一,但对亚低温治疗的指征、时程和疗效仍存在争论.继发性颅脑损伤尤其是血脑屏障破坏所致血管源性脑水肿相当普遍,亚低温如何保护血脑屏障及降低其通透性等诸问题迫切需要进一步研究.目的观察颅脑损伤后早期亚低温治疗对脑毛细血管内皮细胞紧密连接开放的影响,阐明亚低温降低伤后血脑屏障通透性的可能机制.设计随机对照的实验研究.单位汕头大学医学院第一附属医院神经外科.对象实验于2002-05/2002-12在汕头大学医学院中心实验室完成,选择90只Wistar大鼠(常温对照组10只、常温损伤组40只、亚低温治疗组40只,常温损伤组和亚低温治疗组分为伤后3,24,48,72 h 4个时相点,每个时相点10只大鼠).方法镧示踪电镜法和干-湿重法.主要观察指标颅脑损伤后内皮细胞紧密连接的开放及其程度,颅脑损伤后不同时相脑组织含水量.结果常温损伤组伤后3 h紧密连接初步开放,24～48 h紧密连接开放达高峰,72 h紧密连接仍大量开放.亚低温治疗组紧密连接仅轻度开放;亚低温治疗组脑组织含水量[伤后3 h(78.94 ±0.38)%,伤后24 h(79.13±0.56)%,伤后48 h(79.41±0.71)%,伤后72 h(79.20±0.44)%]较常温损伤组[伤后3 h(79.56±0.51)%,伤后24 h(79.80±0.49)%,伤后48 h(80.46 ±0.47)%,伤后72 h(79.83±0.44)%]明显减少,伤后3,24,72 h差异有显著性意义(t=3.127 5,2.206 9,2.465 4,P＜0.05),伤后48 h差异有非常显著性意义(t=2.272 7,P＜0.01).结论亚低温有减轻颅脑损伤后血脑屏障毛细血管内皮细胞紧密连接的开放程度及减轻脑水肿的作用,亚低温减轻伤后内皮细胞紧密连接开放是降低伤后血脑屏障通透性机制之一.     

亚低温治疗改善急性颅脑损伤后近期运动功能的机制研究

背景：目前已有大量国内外研究显示亚低温能够改善脑缺血和脑创伤后的神经功能预后，然而其脑保护作用的机制尚未明确，尤其尚未深入到分子生物学水平。目的：探讨亚低温对脑创伤的治疗作用，并从分子生物学角度探讨其可能的机制。设计：随机对照的实验研究。单位：北京天坛医院麻醉科、检验科、神经外科。地点和对象：实验在首都医科大学附属北京神经外科研究所完成。对42只Wistar大鼠进行研究。42只健康大鼠随机分为3组：常温组15只，亚低温组15只和假手术对照组12只。干预：常温组和亚低温组用液压装置制成创伤性颅脑损伤(traumatic brain injury，TBI)侧方打击模型，伤后早期(5miu)脑温分别维持在37～38℃和33～34℃，假手术对照组除不损伤外处理同常温组。控温1h后每组5只立即灌注固定取脑，冷冻切片免疫组织化学方法染色显示c-fos的表达产物Fos蛋白。其余放回动物房，观察24h死亡率并进行运动功能评分。主要观察指标：①运动功能评分。②c-fos的表达产物Fos蛋白表达情况。③24h死亡率。结果：亚低温组与损伤有关的24h死亡率（10％)较常温组（60％)明显降低(，=5．495，P&;lt;0．05)，亚低温组前肢肌力、侧方推力、爬坡能力[(3．0&;#177;0．7)分，(2．7&;#177;0．7)分，（3．6&;#177;0．7)分]较常温组[(1．8&;#177;1．0)分．(1．5&;#177;0．6)分，（1．8&;#177;0．5)分]明显改善(t=-2．655，-2．88，3．165．P&;lt;0．05)，亚低温组损伤侧皮质Fos的表达(3．0&;#177;0．7)较常温组(1．2&;#177;0．4)明显增加(t=-4．811，P&;lt;0．01)。结论：亚低温对TBI有显著的治疗作用，其机制可能与Fos表达增加有关。     

亚低温条件下局部脑神经元c-fos蛋白表达变化

目的：研究颅脑枪弹伤常温下及全身亚低温治疗后脑神经元c-fos蛋白表达的变化。方法：18只杂种犬，随机分为常温组(正常犬温为38．5～39．5℃)，亚低温组（31．5～32．5℃)。以德国小口径步枪子弹致伤犬颅脑贯通伤(penetrating craniocerebral injury，PCI)模型为对象，采用免疫组化法检测两组脑组织伤后30min，2，3h弹道挫伤区，震荡区及脑干神经元中fos蛋白的表达。结果：全身亚低温治疗3h组弹道挫伤区、震荡区及脑干神经元中fos蛋白阳性数分别为(15．5&;#177;1．6)，(21．6&;#177;2．1)，(6．7&;#177;1．8)个，较常温对应组弹道挫伤区，震荡区及脑干神经元中fos蛋白阳性数分别为（21．6&;#177;5．4)，(32．2&;#177;1．7)，(11．2&;#177;1．8)个显著减少（P&;lt;0．01)。结论：颅脑枪弹伤后全身亚低温治疗能够抑制脑神经元c-fos蛋白的表达。     

亚低温对缺血再灌注大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax表达动态变化的影响

目的：研究脑缺血再灌注后全身亚低温的脑保护作用及其对Bcl-2和Bax表达的动态影响，探讨亚低温脑保护作用的机制。方法：实验于2002-01／12在江苏省麻醉医学研究所(省级重点实验室)完成。实验动物选择126只SD雄性大鼠随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。采用Pulsinelli四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型，即刻全身亚低温4h，分别在再灌注后4，8，24，48，72，96h，7d，7个时间点取脑标本，进行Bcl-2和Bax免疫组织化学及苏木精-伊红染色。结果：与常温组相比，全身亚低温组海马CA1区死亡细胞数明显减少[常温比亚低温24h：(195&;#177;18)比(214&;#177;20)个／mm，P&;lt;0．05；48h：(185&;#177;17)比(215&;#177;21)个／min．P&;lt;0．01；72h：(130&;#177;20)比(200&;#177;17)个／mm，P&;lt;0．01)]；Bcl-2蛋白免疫反应强度峰值增高，持续时间延长[灰度值：常温比低温：24h(40&;#177;8比57&;#177;8，P&;lt;0．01)；48h(42&;#177;6比55&;#177;8，P&;lt;0．01)；72h(38&;#177;4比41&;#177;6，P&;lt;0．01)]。Bax蛋白免疫反应强度峰值减低，持续时间缩短[灰度值：常温比低温24h(32&;#177;4比24&;#177;5．P&;lt;0．05)；48h(30&;#177;7比24&;#177;6，P&;lt;0．05)；72h(26&;#177;4比22&;#177;5，P&;lt;0．05)]。结论：全身亚低温对缺血性锥体细胞损害有较好的保护作用。可增强具有抗凋亡的Bcl-2蛋白的表达，延长其表达持续时间，而减弱具有促凋亡的Bax表达，同时缩短其表达持续时间，此可能是亚低温对缺血性脑组织损害产生保护作用的分子机制之一。     

亚低温联合升压治疗对局灶脑缺血再灌注后病灶体积及血脑屏障的影响

背景：研究表明，亚低温和适当升压对脑缺血都有一定的保护作用，二者联合应用可能产生协同作用，起到更好的脑保护效果。目的：通过升压联合亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑梗死体积、血脑屏障的影响，探讨脑保护作用机制。设计：以实验动物为研究对象，完全随机对照设计。单位：两所大学医院的神经科和一所市级医院的皮肤科。材料：实验于2001-03／07在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经科实验室和武汉大学人民医院神经科实验室完成。选择64只成年Wistar大鼠由武汉大学人民医院实验动物中心提供。干预：制备大鼠局灶性脑缺血模型，随机分为对照组、升压组、亚低温组及升压联合亚低温治疗组(联合组)，每组16只动物，缺血3h再灌注；对照组常温不予处理，升压组缺血2h给予升压处理3h，亚低温组缺血2h开始亚低温干预，联合组联合应用亚低温组和升压组治疗方法。缺血24h处死动物。主要观察指标：神经功能缺失评分、脑梗死体积和血脑屏障破坏情况：结果：升压组、亚低温组及联合组的神经功能缺失评分分别为(2．12&;#177;0．54)分、(2．14&;#177;0．69)分、(1．78&;#177;0.61)分，脑梗死体积分别为(17．65&;#177;4．78)％，(16．21&;#177;3．79)％，(11.31&;#177;3．64)％，Even’s蓝染色体积分别为(56．63&;#177;10．70)mm]，(53．52&;#177;8．44)mm^3，(38．45&;#177;5．25)mm^3均明显低于对照组[(2．70&;#177;0.64)分，(28．34&;#177;4．13)％和(94．87&;#177;15．34)mm^3]；而联合组脑梗死体积和Even’s蓝染色体积明显小于单独升压组和亚低温组(P均&;lt;0．05)。结论：升压和亚低温能明显减轻局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑梗死体积和血脑屏障破坏程度，联合应用作用更强。     

高压氧对重型颅脑损伤大鼠血浆内皮素含量的影响

目的：研究高压氧对重型颅脑损伤小鼠血浆内皮素的变化的影响。方法：将100只健康Wistar大鼠按随机数字表法分为创伤对照组和1次／d高压氧疗组，利用自由落体原理制成重型颅脑损伤模型，观测伤后1次／d高压氧治疗后8，24，48，72，96h血浆内皮素含量变化。结果：高压氧治疗组血浆内皮素含量：大鼠伤后8，24，48，72，96h为(199．84&;#177;20．34)，(200．38&;#177;21．17)，(203．12&;#177;19．11)，(206．81&;#177;21．54)，(211．24&;#177;23．57)ng／L较同期对照组[(231．32&;#177;17．18)，(234．03&;#177;18．24)，(240．39&;#177;16．37)，(254．32&;#177;17．25)，(268．91&;#177;36．65)ng／L]显著降低(t=3．72～5．46，P&;lt;0．01)。结论：重型颅脑损伤后血浆内皮素活性升高，高压氧治疗通过纠正脑缺氧，在一定程度上抑制了内皮细胞产生、释放内皮素，从而减轻了脑水肿和血管痉挛避免了脑继发性损害。     

水通道蛋白4基因干预对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障形态及功能的影响

目的：探讨水通道蛋白(aquaporin，AQP)4水平的变化对大鼠血脑屏障结构和功能的影响，以寻找防治血脑屏障损伤的新靶点。方法：应用自行构建的含AQP4基因的真核表达质粒，在大鼠脑内进行预先转染，正向调控大鼠脑内AQP4的表达水平，观察其对正常大鼠以及缺血再灌注损伤后血脑屏障对伊文思蓝(EB)的通透率和紧密连接蛋白(ZO-1)表达水平的影响。实验分正常健康组、AQP4基因干预(实验质粒)组和基因干预对照(对照质粒)组。结果：①AQP4水平的升高并不影响正常大鼠血脑屏障对EB的通透率以及ZO-1的表达水平。②预先升高AQP4水平可明显加剧缺血再灌注损伤后血脑屏障对EB的通透率，再灌注12h实验质粒组的伤侧皮质及皮质下血脑屏障对EB的通透率分别为(74．10&;#177;9．64)，(100．72&;#177;7．63)μg／g，对照质粒组相应部位的通透率分别为(48．11&;#177;7.34)，(66．72&;#177;7．70)μg／g，再灌注24h实验质粒组的伤侧皮质及皮质下血脑屏障对EB的通透率分别为(100．90&;#177;2.63)，(127．71&;#177;7.80)μg／g，对照质粒组相应部位的通透率分别为(60．39&;#177;2．54)μg／g,(99.71&;#177;5．10)μg／g；同时降低ZO-1的表达水平，再灌注12，24h实验质粒组伤侧半球ZO-1表达评分分别为2．13&;#177;0．69，0．33&;#177;0．24，对照质粒组相应时间相应部位的评分分别为2．60&;#177;0．49，1．00&;#177;0．33。结论：①正常生理状态下，AQP4水平的变化并不影响成年大鼠血脑屏障的结构和功能。②病理条件下，AQP4水平的变化对血脑屏障的结构和功能将产生明显的影响。③调节病理状态下的AQP4水平可望成为新的防治血脑屏障损伤的治疗靶点。     

局灶脑缺血再灌注期亚低温对神经元凋亡及Bcl－2和Bax表达的影响

目的：研究再灌注期实施亚低温治疗对大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)后神经元细胞的凋亡及Bcl-2，Bax基因表达的影响。方法：采用Longa线栓法制作MCAO模型，模型成功后分别进行缺血期3h、再灌注期3h、缺血期至再灌注期6h的亚低温治疗。再灌注后24h断头取脑，连续切片作TUNEL染色及Bcl-2，Bax免疫组化染色。结果：①与对照组的Bcl-2阳性细胞百分率[(19．79&;#177;0。92)％]相比，缺血期亚低温3h组[(23．04&;#177;3．76)％]和缺血亚低温至再灌亚低温6h组[(25．47&;#177;2．03)％]的Bcl-2阳性细胞率增加(q=4．19,0．O1&;lt;P&;lt;O．05；q=7．17，P&;lt;0．01)。比较单纯再灌亚低温3h组[(22．21&;#177;2．25)％]与缺血亚低温至再灌亚低温6h组的Bcl-2阳性细胞百分率，前者Bcl-2阳性细胞率较后者低(q=4．1l，P&;lt;0．01)。②与对照组的Bax阳性细胞百分率[(52．15&;#177;6．18)％]相比，缺血期亚低温3h组[(32．35&;#177;3．71)％]和缺血亚低温至再灌亚低温6h组[(26．86&;#177;2．43)％]的Bax阳性细胞百分率均降低(q=14．21，P&;lt;0．O1；q=18．95，P&;lt;0．01)；而单纯再灌亚低温3h组的Bax阳性细胞百分率[(47．26&;#177;4．52)％]降低不明显(q=2．75，P&;gt;0．05)。③凋亡细胞阳性率与Bcl-2／Bax的比值呈负相关关系(r=-O．9759，P&;lt;O．01)。结论：①单纯于再灌注期实施亚低温3h不能明显抑制神经元细胞凋亡，对Bcl-2和Bax基因的表达也无明显影响；但将缺血期实施的亚低温延长至再灌注期后3h能进一步抑制神经元细胞凋亡并降低Bax基因的表达。②Bcl-2／Bax的比值能影响细胞凋亡的发生。     

亚低温治疗对弥漫性轴索损伤患者运动及生活能力的影响

目的：探讨亚低温治疗对弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury，DAI)患者早期运动及日常生活活动能力(ADL)的影响。方法：在常规药物治疗和康复训练的基础上，实验组46例早期(伤后3～22h)加用亚低温治疗，并与同等条件下未用亚低温治疗的同类患者46例比较。于治疗前、治疗后3及7d分别测定两组血浆内皮素含量，于入院时和伤后3个月时分别采用Fugl—Meyer(FMA)评定两组患者ADL。结果：治疗3及7d后，实验组血浆内皮素为(73&;#177;8)和(55&;#177;6)ng／L，而对照组同期为(80&;#177;9)和(65&;#177;7)ng／L，实验组较对照组下降明显(P&;lt;0．01)。伤后3个月时实验组的FMA积分为(70&;#177;19)分，Barthel指数为(65&;#177;17)分，而对照组两项评分分别为(49&;#177;14)，(47&;#177;13)分，两组比较差异均有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：早期应用亚低温治疗DAI，有利于DAI患者早期运动功能及ADL的康复。     

延迟性低温对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤的影响

目的：研究全脑缺血后30min开始的低温对沙土鼠行为学和组织病理学的影响，并与脑缺血后即刻低温进行比较。方法：采用沙土鼠全脑缺血模型，缺血时间10min。动物随机分为4组：假手术组、常温组、延迟性低温组和即刻低温组，每组7只。于脑缺血后第5天行开阔法行为学检查，第7天行海马CA1区组织病理学检查。结果：常温组10min爬过的格子数(651&;#177;108)较假手术组(278&;#177;67)、延迟性低温组(478&;#177;89)、即刻低温组(368&;#177;46)有明显增多(t=7．76，2．21,6．37，P&;lt;0．01-0．05)。延迟性低温组较假手术组和即刻低温组增多(t=4．75，2．90，P&;lt;0．01～0．05)。海马CA1区内侧神经元数(以正常海马成活神经元的百分数表示，即各组成活神经元数与假手术组之比)：延迟性低温组[(42&;#177;7)％]较常温缺血组[(5&;#177;1)％]多(t=13．00，P&;lt;0．01)，不及即刻低温组[(66&;#177;10)％](t=5．20，P&;lt;0．01)。海马CA1区中间神经元计数：延迟性低温组[(60&;#177;9)％]较常温缺血组[(10&;#177;4)％]多(t=13．20，P&;lt;0．01)，不及即刻低温组[(77&;#177;16)％]多(t=2．45，P&;lt;0．05)。海马CA1区外侧成活神经元计数：延迟性低温[(71&;#177;13)％]和即刻低温组[(80&;#177;14)％]之间无差别(t=1．25，P&;gt;0．05)，均较常温组[(23&;#177;5)％]多(t=9．14，t=10．14，P均&;lt;0．01)。结论：延迟性低温可以减轻全脑缺血后神经功能障碍和海马神经元坏死，但作用不及即刻低温。     

缺血缺氧及再灌注后海马神经元损伤的时间窗特性

目的：探讨缺血缺氧及再灌注损伤后大鼠海马神经元在伤后不同时间的凋亡及死亡特性，阐明神经元损伤发生的时间窗特征。方法：实验于2004—05／06在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所进行。体外培养胚胎大鼠海马神经元，模拟临床缺血过程致神经元缺氧损伤，采用Annexin V联合PI标记和流式细胞检测技术观察伤后不同时间点的凋亡与死亡情况。结果：海马神经元缺氧损伤后，其细胞损伤的形式为凋亡和坏死同时存在；模拟缺血15，30min，1．0，1．5，2．0，2．5和3．0h，其坏死率分别为(1．37&;#177;0．12)％，(3．71&;#177;0．34)％，(16．47&;#177;1．27)％，(18．73&;#177;2．02)％，(19．77&;#177;2．32)％，(22．13&;#177;2．12)％和(28．78&;#177;2．69)％，相互间差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，各时间点的凋亡率分别为(6．23&;#177;1．67)％，(6．56&;#177;2．38)％，(6．73&;#177;2．42)％，(6．95&;#177;1．89)％，(7．16&;#177;2．82)％，(6．93&;#177;2．56)％和(7．23&;#177;2．89)％，凋亡率无明显变化(P&;gt;0．05)。各时间点再恢复糖和氧供应后至24h，海马神经元存活率进一步明显下降，坏死率进一步增多，各时间点神经元坏死率分别为(6．98&;#177;1．23)％，(8．46&;#177;1．37)％，(17．68&;#177;2．97)％，(20．79&;#177;3．16)％，(21．67&;#177;3．05)％，(35．53&;#177;3．33)％和(50．22&;#177;4．19)％，差异亦有显著性意义(P&;lt;0．05)；凋亡率亦逐渐增多，模拟缺血15，30min，1．0，1．5和2．0h时间点的再灌注24h，其神经元凋亡率分别为(11．89&;#177;2．06)％，(14．92&;#177;2．64)％，(28．67&;#177;3．05)％，(44．67&;#177;3．78)％和(61．67&;#177;4．89)％，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，但模拟缺血2．5h和3．0h时间点再灌注24h的神经元凋亡率为(27．76&;#177;3．15)％和(12．67&;#177;2．27)％，其凋亡率反而显示明显下降。结论：凋亡是延迟性神经元死亡的重要通路，脑缺血缺氧的干预治疗时间窗可以提前至2h内。     

颅脑损伤24h内大鼠肺组织结构和功能的改变

目的：观察大鼠颅脑损伤24h内肺组织结构和功能的改变。 方法：实验于2004-09／2005-01在北京市神经外科研究所动物实验室完成。选择雄性SD大鼠52只，随机数字表法分为对照组10只和颅脑损伤组42只。颅脑损伤组采用60g重物从100cm高度自由坠落建立弥漫性闭合性颅脑损伤动物模型。于损伤后6h和24h各选取14只大鼠进行肺组织透射电镜观察、血气分析、肺灌洗液白蛋白浓度测定、肺湿／干比和脑湿／干比测定、肺组织和脑组织光镜病理检查，并与伤后1min内死亡大鼠的各项指标进行比较。 结果：纳入动物52只，均进入结果分析，伤后1min内死亡大鼠14只，死亡率为33.3％。①伤后1min内死亡大鼠肺灌洗液白蛋白浓度、肺湿／干比明显高于对照组、颅脑损伤组损伤后6，24h大鼠[分别为（1.33&;#177;1．02），（0．10&;#177;0．07），（0．24&;#177;0．16），（0．18&;#177;0．12）g/L；5．64&;#177;0．74，4．44&;#177;0．09，4．59&;#177;0．16，4．91&;#177;0．191，肺病理评分明显升高。②颅脑损伤组pH、标准碳酸氢根、脑湿／干比与对照组比较无明显差异。 结论：6000g&;#183;cm的冲击力可以成功地复制出神经源性肺水肿动物模型。在颅脑损伤后24h之内，血气分析、肺湿／干比及肺部病理变化逐渐加重。     

亚低温对大鼠缺血再灌注脑组织的保护作用

背景：近年来亚低温对脑缺血组织的保护作用以及亚低温治疗对脑缺血再灌注后的炎症反应已越来越引起重视。 目的：探讨亚低温对大鼠脑缺血区炎性细胞因子的影响，及其再灌注损伤的脑保护机制。 设计：以动物为观察对象的随机对照试验。 单位：湖北省人民医院。 材料：实验于2004-10／2005-02在武汉大学人民医院实验中心进行，选取健康清洁级SD大鼠50只。 方法：将SD大鼠50只，先随机选取10只分正常组和假手术组，每组5只；余下的40只随机分为常温脑缺血组和亚低温脑缺血组，每组20只。除正常组5只外，其余大鼠均采用Longa改良线拴法建立可逆的大鼠左侧大脑中动脉线栓模型。假手术组及常温组置于20℃室温，肛温稳定在37℃左右；亚低温组将大鼠置于4℃环境中，全身采用亚低温方法，控制大鼠肛温在（33．0&;#177;1．01℃，缺血结束后立即自然复温，脑缺血3h后开始再灌注过程。所有造模大鼠均进行神经功能缺失评分（0分为无神经缺损症状；1分为不能伸展对侧前爪；2分为行走时向偏瘫侧转圈；3分为向偏瘫侧倾倒；4分为不能自发行走，意识丧失）。 主要观察指标：观察缺血脑组织大鼠的肿瘤坏死因子和白细胞介素-1的表达，脑梗死灶体积百分比和神经功能评分。 结果：实验过程中有15只大鼠因颅内出血、麻醉意外、神经功能缺失评分不满足要求而被剔除，随机补充15只造模成功大鼠，进入结果分析大鼠保持50只大鼠。①肿瘤坏死因子免疫组化染色阳性细胞数：正常组和假手术组差异无显著性意义[（3．54&;#177;1．24，3．71&;#177;1．50）个／视野]；亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低[（31．94&;#177;7．23,69．20&;#177;9．43）个／视野，F=179．16， P〈0．001]。②白细胞介素-1免疫组化染色阳性细胞数：正常组和假手术组差异无显著性意义[（3．20&;#177;1．34，3．89&;#177;2．08）个／视野]；亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低[（28．95&;#177;4．97，55．79&;#177;7．93）个／视野，F=174．95， P〈0．001]。③梗死灶体积百分比：亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低[（21．06&;#177;2．42）％，（30．32&;#177;2．71），F=374．87， P〈0．001]。④神经功能评分：亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低[（1．35&;#177;0．27）％，（2．04&;#177;0．34）％，F=117．17， P〈0．001]。 结论：①亚低温脑缺血组大鼠脑梗死灶体积较常温脑缺血组明显缩小，提示亚低温对缺血神经元具有保护作用。②正常组和假手术组仅见少许肿瘤坏死因子和白细胞介素1阳性表达，而缺血后再灌注24h脑缺血区即有较多阳性细胞表达，提示脑缺血启动了炎性细胞因子表达，诱发炎症级联反应，从而加重脑缺血再灌注损伤，因此对炎症级联反应的抑制是发挥脑保护作用的重要机制之一。     

脑温改变对大鼠脑缺血再灌注组织兴奋性氨基酸的影响

目的 研究轻度高温、亚低温对局灶脑缺血组织兴奋性氨基酸(EAA)的影响。方法 91只Wistar大鼠按随机数字表法分为：轻度高温、常温、亚低温条件下缺血2h再灌注0，l，2，3h组(按不同脑温分别标志为O2R0，O2R1，O2R2，O2R3组)及假手术组，共13组(n=7)；采用大鼠大脑中动脉(MCA)缺血再灌注线栓模型，诱导目标脑温，用HPLC荧光法检测脑组织谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)含量。结果 不同时间点轻度高温组Glu，Asp，Gly含量明显高于相应时间点常温组或假手术组(0h：轻度高温组的Glu，Asp，Gly含量分别为(4．3&;#177;0．6)，(9．4&;#177;1．0)，(3．4&;#177;0．5)μmol／g；常温组分别为(3．0&;#177;0．4)，(7．0&;#177;0．6)，(3．O&;#177;0．4)μmol／g；假手术组分别为(2．4&;#177;0．3)，(4．8&;#177;0．5)，(1．7&;#177;0．3)μmol／g;(F=8．17～174．17，P=0．0052～0．0001)，不同时间点亚低温组Glu,Asp，Gly含量明显低于相应时间点常温组或轻度高温组(F=5．80～174．17，P=0．0179～0．0001)；再灌注后3h内，各脑温组Glu，Asp及亚低温组和常温组Gly均有不同程度下降，但轻度高温组Gly无明显下降，仍高于常温组(F=8．57，P=0．0043)。结论 轻度高温促进EAA增高，在持续增加Glu“兴奋毒性”方面起重要作用；亚低温抑制EAA增高，在降低Glu“兴奋塞性”方面起重要作用。     

亚低温对大鼠缺血脑组织血管内皮生长因子表达的影响

目的：观察亚低温对大鼠脑缺血后血管内皮生长因子的表达的影响，探讨亚低温的脑保护作用机制。 方法：实验于2005—05／07在武汉大学人民医院神经内科实验室完成。选择成年雄性SD大鼠20只，随机数字表法分为常温对照组和亚低温组，每组10只。采用改良线栓法制备持续性大脑中动脉闭塞模型，神经功能缺损评分1-3分为模型成功标志。常温对照组在室温下喂养，亚低温组在术后2h开始低温诱导，肛温控制在34-35℃，持续72h，两组均在术后第7天断头处死取脑，测定脑梗死体积和免疫组织化学染色检测血管内皮生长因子的表达（胞浆呈棕黄色为阳性细胞）。 结果：纳入动物20只，均进入结果分析。大脑中动脉阻塞后，亚低温组脑梗死体积明显低于常温对照组[分别为（153．25&;#177;23．14），（253．45&;#177;36．21）mm^3，P〈0．01]。亚低温组血管内皮生长因子阳性细胞数明显低于常温对照组[分别为（24．02&;#177;5．05），（36、07&;#177;2．69）个／高倍视野，P〈0．01]。 结论：亚低温能使脑梗死体积减小，抑制血管内皮生长因子的表达，亚低温抑制血管内皮生长因子表达可能是亚低温脑保护机制之一。     

黄芪对急性脑损伤后一氧化氮合酶活性的抑制作用

背景：黄芪在机体免疫功能调节中具有重要作用，而在对急性颅脑损伤干预中是否具有神经元保护作用，且其发挥作用的途径何在。目的：观察黄芪对脑损伤后脑组织一氧化氮合酶活性的影响。设计：随机对照的实验。单位：兰州军区神经外科研究所。对象：实验于2001-09／12在兰州军区神经外科研究所实验室完成。取健康雄性SD大鼠54只，随机分为3组：脑损伤组(n=24)，黄芪组(n=24)，对照组(n=6)，损伤组与黄芪组均分为伤后0．5．2．6和24h4个时间点，每个时间点6只动物。方法：脑损伤组和黄芪组制备脑损伤模型，对照组仅开骨窗，不致伤。黄芪组致伤后立即腹腔注射黄芪200mg／kg．用化学定量法检测大鼠脑损伤后不同时间点脑组织中一氧化氮合酶的活性。主要观察指标：各组大鼠脑组织中一氧化氮合酶活性。结果：54只大鼠全部进入结果分析。脑损伤组、黄芪组大鼠在伤后0．5h一氧化氮合酶活性较对照组升高[46．44&;#177;13．45)(43．15&;#177;12．43)，(40．46&;#177;12．85)nkat／L，P&;lt;0．05]，伤后2h达高峰[(67．49&;#177;22．45)，(64．26&;#177;19．78)nkat／L，P&;lt;0．0l]，伤后6h开始下降[(63．46&;#177;24．68)，(52．9l&;#177;21．36)nkat／L．P&;lt;0．0l]，伤后24h降至基础水平[(41．23&;#177;12．57)，(40．92&;#177;12．25)nkat／L．P&;gt;0．05]。黄芪组在伤后2，6h一氧化氮合酶活性较损伤组明显降低(P&;lt;0．01．0．05)。结论：颅脑损伤后．受损脑组织中一氧化氮合酶活性呈节段性升高．黄芪可通过抑制损伤后脑组织中一氧化氮合酶活性．起到保护创伤神经元的作用。     

针刺对大鼠颅脑损伤后血浆中血栓烷B2和6-酮-前列腺素F1α的影响

目的：颅脑损伤后脑血液循环障碍是病情发展的主要病理生理基础之一，在继发性颅脑损伤中起着重要作用。观察针刺对大鼠颅脑损伤后血浆中血栓烷B2(thromboxane B2，TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto prostaglandin F1α，6-keto-PGF1α)的影响。方法：实验于2002-05／09在甘肃中医学院中心实验室、兰州医学院第一附属医院内分泌科完成。56只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组(24，72h)、针刺治疗组(24，72h)、药物治疗组(24，72h)，每组8只。参照Feeney自由落体法致大鼠左侧颅脑损伤。按预定时间采集静脉血，将标本作相应处理，用放射免疫分析法测定血浆中TXB2，6-keto-PGF1α的含量。结果：①大鼠颅脑损伤后，血浆中TXB2的含量显著升高，且随着病情的发展上升更高，24，72h分别为(3420．71&;#177;1153．16)，(3701．21&;#177;1133．67)ng／L；血浆中6-keto-PGF1α的含量下降，在72h后缓慢恢复，24，72h分别为(18．91&;#177;12．19)，(21．99&;#177;9．45)ng／L；TXB2／6-keto-PGF1α(T／K)值明显升高，在72h缓慢恢复，24，72h分别为(204．28&;#177;76．28)．(176．07&;#177;57．94)。②24h针刺组血浆中TXB2的含量下降，为(2935．32&;#177;1166．47)ng／L，6-keto-PGF1α的含量逐渐恢复，为(27．56&;#177;14．17)ng／L；T／K值升高，为108．04&;#177;41．71，与假手术组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)，但低于模型组，与模型组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。③72h针刺组血浆中TXB2的含量下降，为(1409．48&;#177;675．55)ng／L与模型组相比差异有显著性意义(P&;lt;0．01)，与假手术组比较差异已没有显著性意义(P&;gt;0．05)；6-keto-PGF1α的含量上升，为(39．30&;#177;22．65)ng／L；T／K值(42．66&;#177;25．47)ng／L，虽仍高于假手术组，但与假手组比较差异已没有显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：针刺可使颅脑损伤后血浆中升高的TXB2含量下降，降低的6-keto-PGF1α含量升高，可恢复T／K的失衡水平；针刺可改善血管的异常收缩状态，缓解痉挛，抑制血小板的异常聚集，保证脑的能量供应，促使损伤组织的修复，抑制继发性颅脑损伤。     

局部亚低温对脑梗死大鼠的脑保护作用

背景：目前尚缺乏满意的治疗脑梗死的手段。亚低温治疗脑梗死虽然有效，但副作用较大。局部亚低温对脑梗死的治疗可能有较好的作用。目的：观察局部亚低温对大鼠缺血脑组织的保护作用，进一步探讨其作用机制。设计：以实验动物为研究对象，随机对照的基础研究。单位：一所大学医院的神经内科研究所。材料：实验于2000—04／2002—01在哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科动物实验室完成，动物为雄性Wistar大鼠50只，体质量(250&;#177;25)g，清洁级。干预：50只大鼠中随机取10只，分为正常组和假手术组，每组5只。余40只随机分为常温脑缺血组和局部亚低温脑缺血组，各20只。制作大鼠大脑中动脉脑缺血模型，进行局部亚低温处理。主要观察指标：各组大鼠脑梗死灶体积、神经功能和血清神经元特异性烯醇化酶的影响。结果：大鼠栓塞48h时亚低温组和常温组大鼠脑梗死体积分别为(128．95&;#177;13．42)和(84．90&;#177;11．36)mm^3，神经功能评分分别为1．60&;#177;0．24和0．95&;#177;0．17，血清神经元特异性烯醇化酶浓度分别为(13．55&;#177;4．07)和(9．19&;#177;3．42)μg／L，差异均有显著性意义。结论：局部亚低温治疗对缺血脑神经元具有保护作用。     

胶质细胞源性神经营养因子对脑出血大鼠神经功能的保护作用

目的：研究胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic faetor，GDNF)对脑出血大鼠的保护作用，探讨其发生机制。方法：克隆胚胎鼠的GDNF基因，构建pCDNA3-GDNF-GFP质粒，注射于大鼠脑出血部位。选用成年SD大鼠制备脑出血模型，共分9组，每组20只，假手术Ⅰ组，脑出血Ⅰ组，干预Ⅰ组观察大鼠行为学、脑组织含水量、Na^+，K^+离子浓度的变化；假手术Ⅱ组，脑出血Ⅱ组，干预Ⅱ组观察血脑屏障的改变；假手术Ⅲ组，脑出血Ⅲ组。干预Ⅲ组观察组织形态学和GDNF。阳性细胞的表达。结果：出血组和干预组相比，神经缺损评分在出血后24h为8．53&;#177;1．44和8．34&;#177;1．28(P&;gt;0．05)，72h，7d，14d为7．58&;#177;1．08，5．46&;#177;0．74，3．06&;#177;0．43和4．21&;#177;0．76，3．25&;#177;0．52，1．92&;#177;0．26(P&;lt;0．01)。72h，7d时脑组织含水量为(84．26&;#177;0．64)％，(80．38&;#177;0．86)％和(78．26&;#177;0．42)％，(77．51&;#177;0．33)％(P&;lt;0．01)。72h，7d时Na^+，K^+离子浓度两组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。干预组坏死体积较出血组减小，GDNF阳性细胞表达明显增加(P&;lt;0．01)。结论：GDNF能改善出血大鼠行为学，减轻脑水肿，促进神经功能恢复，增加脑组织抗损伤能力，有一定的治疗意义。     

脑心通对局灶性脑缺血大鼠行为学和脑组织肿瘤坏死因子α的影响

目的：探讨脑心通对大鼠局灶性脑缺血损伤后行为学及脑组织肿瘤坏死因子α表达的影响。方法：实验于2004-03／11在河北医科大学第二医院神经内科实验室进行。取成年健康雄性SD大鼠150只，制造大鼠局灶性大脑中动脉阻断造模手术后，将大鼠随机分为5组，即脑心通4g／kg组、2g／kg组、1g／kg组、生理盐水和假手术组，各组又分为6，24，48，72h，7d 5个亚组，每亚组均为6只大鼠。脑心通各剂量组均为灌胃给药，生理盐水组给同体积的生理盐水，于相应时间点进行行为学评分后处死动物快速取脑，观察脑含水量的变化，病理切片苏木精一伊红染色观察组织病理学改变，免疫组织化学的方法测定肿瘤坏死因子α的动态变化。结果：实验中有8只大鼠死亡，后随机补充，进入结果分析仍为150只大鼠。①行为学评分：大鼠在大脑中动脉阻断后手术对侧肢体存在不同程度瘫痪，在术后48和72h时神经功能缺损最为明显，7d时神经功能基本恢复正常。②病理观察：除假手术组外，其余各组在脑梗死后6h局部可见少量散在炎性细胞浸润；梗死后48h，炎性细胞浸润明显增多；并持续到7d。③脑组织含水量：与假手术组相比，其他各组在各时间段均增加。术后24，48h脑心通4g／kg组为(78．95&;#177;1．36)％，(79．44&;#177;1．01)％，脑心通2g／kg组为(79．03&;#177;0．87)％，(80．46&;#177;1．54)％，低于同期的脑心通1g／kg组和生理盐水组[(79．21&;#177;0．68)％，(82．02&;#177;1．76)％．(79．30&;#177;1．11)％，(82．68&;#177;0．91)％，P&;lt;0．05]。④肿瘤坏死因子d阳性细胞表达：与假手术组相比，其他各组在各时问段均增加，梗死后6h开始增多，48h达高峰。术后24，48h脑心通4g／kg组为(27．6&;#177;2．1)，(18．4&;#177;1．5)个，脑心通2g／kg组为(38．4&;#177;2．1)，(23．2&;#177;3．3)个，低于同期的脑心通1g／kg组和生理盐水组[(50．4&;#177;5．6)，(30．8&;#177;5．3)，(52．8&;#177;3．7)，(33．0&;#177;4．7)个，P&;lt;0．05]。结论：脑心通可能通过减轻脑水肿，降低脑内肿瘤坏死因子α的表达减少炎性细胞的浸润，从而对大鼠缺血脑组织损伤产生保护作用。