沉默B7-H3基因表达对人肝癌细胞侵袭能力的影响

目的 研究靶向沉默B7-H3基因表达对HepG2细胞侵袭能力的影响及可能机制。方法 设计针对B7-H3基因的shRNA沉默质粒,转染HepG2细胞,下调B7-H3的表达。划痕修复实验检测转染前后HepG2细胞移行能力的变化,Transwell实验检测基因沉默对细胞侵袭能力的影响,MST-1法和ELISA凋亡试剂盒分别检测细胞增殖和凋亡水平变化。通过Western blot实验和明胶酶谱实验检测侵袭相关分子MMP-2、MMP-9的表达和活性变化。结果 成功构建B7-H3 shRNA沉默质粒并转染HepG2细胞。与对照质粒转染组和未转染组比较,沉默B7-H3基因表达后,B7-H3 shRNA转染组HepG2细胞的移行（24 h: P=0.001; 48 h: P<0.001; 72 h: P<0.001）和侵袭（P<0.001）能力受到显著抑制,细胞的增殖和凋亡水平没有明显变化（P>0.05）。MMP-2、MMP-9的蛋白表达（MMP-2: P<0.001; MMP-9: P=0.007）和活性（MMP-2: P<0.001; MMP-9: P<0.001）均显著下降。结论 通过B7-H3 shRNA沉默质粒靶向沉默B7-H3的基因表达能抑制HepG2细胞的侵袭能力,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性有关。     

LncRNA SNHG6调控miR-186表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究SNHG6通过调控miR-186表达对人肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测57名肝癌患者癌组织和肝癌细胞系中SNHG6和miR-186的表达;双荧光素酶报告实验验证SNHG6和miR-186的靶向调控关系;将SNHG6的小干扰RNA（si-SNHG6组）、阴性无意义对照序列（si-con组）、si-SNHG6与anti-miR-186抑制剂（si-SNHG6+anti-miR-186组）、si-SNHG6与miR-186抑制物阴性对照（si-SNHG6+anti-miR-con组）,均以脂质体法转染至肝癌HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖;Transwell检测肝癌细胞迁移和侵袭;Western blot实验检测肝癌细胞CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9及EMT的标志物（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达。结果:与癌旁正常组织或正常肝细胞相比,SNHG6在肝癌患者和肝癌细胞系中的表达升高,而miR-186表达降低,两者存在负相关性。与si-con组比较,si-SNHG6组HepG2细胞活力明显下降,迁移和侵袭细胞数明显减少,CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达增加。SNHG6靶向负调控miR-186表达,抑制miR-186表达可部分逆转下调SNHG6对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:下调SNHG6可能通过负调控miR-186表达和调控细胞EMT过程抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞侵袭转移及USP22蛋白表达的影响

目的:探究不同浓度三氧化二砷(As2O3)对肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响以及对HepG2细胞中USP22蛋白表达的影响,进一步完善其分子机制。方法:CCK8细胞增殖实验检测不同浓度As2O3在不同时间点对HepG2细胞增殖的影响;细胞划痕和Transwell方法检测HepG2细胞在不同浓度As2O3作用下侵袭转移能力的变化;Western blot检测As2O3作用下HepG2细胞中USP22蛋白的表达水平。结果:随着As2O3浓度和作用时间的增加,HepG2细胞增殖明显受到抑制。与对照组相比,24 h时分别用2、4、8 μmol/L的As2O3处理的HepG2细胞侵袭转移能力降低,细胞中USP22蛋白表达水平明显下降。结论:As2O3可抑制人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力,其分子机制可能与下调的USP22蛋白水平相关。     

miR-526b-3p通过靶基因TNKS2调控肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制探讨

目的:探讨miR-526b-3p对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其潜在的作用机制。方法:运用qRT-PCR检测人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721、BEL-7402和正常肝细胞L02中miR-526b-3p和TNKS2的mRNA表达水平。建立miR-526b-3p过表达和TNKS2抑制表达的HepG2细胞株,采用MTT法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力,Western blot检测TNKS2蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因分析法验证miR-526b-3p可能的靶基因。结果:与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞HepG2、SMMC-7721及BEL-7402中miR-526b-3p的表达显著降低（P<0.05）,TNKS2的表达显著升高（P<0.05）。过表达miR-526b-3p或抑制表达TNKS2均可抑制HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.05）。TNKS2是miR-526b-3p的靶基因。过表达TNKS2可部分逆转过表达miR-526b-3p对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论:miR-526b-3p可通过下调TNKS2的表达,从而抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

姜黄素对乳腺癌细胞VEGF-C表达及增殖、侵袭性的影响

 目的探讨姜黄素对乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭性及VEGF-C表达的影响。方法MTT法,Transwell小室检测 姜黄素对MCF-7细胞增殖和侵袭性的影响;RT-PCR、Western blot方法检测姜黄素作用MCF-7细胞前后VEGF-C mRNA 及蛋白水平表达的变化。结果姜黄素能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,其IC50为37μmol/L,随浓度增高其抑制作 用增强（P＜0.05）,同时降低乳腺癌MCF-7细胞的侵袭性（P＜0.001）。不同浓度姜黄素可降低MCF-7细胞VEGF-C mRNA及蛋白水平的表达（P＜0.05）,40 μmol/L组比20 μmol/L组下降明显（P＜0.05）。结论姜黄素可以抑制乳 腺癌MCF-7细胞的增殖及侵袭性,其机制可能是通过下调VEGF-C的表达。     

miR-26a对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响及初步机制的研究

目的:探讨miR-26a对人肝癌细胞株HepG2侵袭迁移能力的影响及可能机制。方法:将miR-26a表达质粒及对照质粒分别转染HepG2细胞,qRT-PCR检测转染后miR-26a的表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测HepG2细胞迁移和侵袭能力的改变,qRT-PCR和Western blot检测转染后AEG-1 mRNA和蛋白的表达。结果:转染miR-26a表达质粒后,HepG2细胞miR-26a表达明显增高(P＜0．01),迁移和侵袭能力显著降低(P＜0.05),AEG-1 mRNA及蛋白表达水平明显下调(P＜0.05)。结论:过表达miR-26a,可抑制HepG2细胞迁移和侵袭,其机制可能与抑制AEG-1表达相关。     

水蛭素对肝细胞癌HepG2细胞抑制作用机制探讨

目的 研究水蛭素对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC,简称肝癌）HepG2细胞抑制作用及其抗肝癌的分子机制。方法 将含不同浓度（1 U/mL、2 U/mL、4 U/mL和8 U/mL）水蛭素的培养液作用于肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测水蛭素对肝癌HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测水蛭素对肝癌HepG2细胞凋亡的影响,Transwell法检测水蛭素对肝癌HepG2细胞迁移、侵袭的影响,荧光定量PCR检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因的mRNA表达水平,Western blot检测VEGF基因的蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,肝癌HepG2细胞增殖抑制率随水蛭素浓度（1 U/mL、2　U/mL、4 U/mL和8 U/mL）增加及作用时间（24　h、48　h、72　h）延长而增加,呈剂量-时间依赖效应（P<0.05）。不同浓度（2 U/mL、4 U/mL和8 U/mL）水蛭素作用48 h后,肝癌HepG2细胞凋亡率分别为（28.37±1.16）%、（40.27±0.97）%、（76.17±1.5）%,细胞侵袭个数分别为（204±9）个、（163±6）个、（94±4）个,细胞迁移个数分别为（86±5）个、（54±7）个、（20±5）个,细胞凋亡率、侵袭及迁移个数随水蛭素浓度增加而增加,呈浓度依赖性（P<0.05）。VEGF mRNA、蛋白的表达量随水蛭素浓度增加而明显下调（P<0.05）。结论 水蛭素能抑制肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭,其机制可能是通过下调VEGF表达。     

HDAC6对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的:明确HDAC6对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法:应用Western blot技术检测正常肝细胞系LO2和肝癌细胞系HepG2细胞中 HDAC6的表达。应用HDAC6抑制剂Tubastatin A抑制HepG2细胞中HDAC6的表达,运用Western blot及荧光定量PCR技术检测HepG2细胞中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和上皮间充质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关分子标志物（N-cadherin,β-catenin,Vimentin）的表达;用TGF-β1抑制剂SB431542刺激HepG2细胞后,检测HepG2细胞中 EMT标志蛋白的表达,应用TGF-β1刺激HepG2细胞后观察HepG2细胞的形态变化。应用过表达HDAC6的质粒P3-HDAC6、P3-HDAC6+TGF-β1分别作用于HepG2细胞,通过Western blot检测HepG2细胞中EMT相关分子标志物的表达,应用划痕及Transwell技术检测HepG2细胞处理前后的迁移和侵袭能力变化。结果:肝癌细胞系HepG2细胞内HDAC6的蛋白表达量明显低于正常肝细胞系LO2（P＜0.05）。 HepG2细胞Tubastatin A组中N-cadherin、β-catenin、Vimentin、TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平相较于空白对照组明显增高（P均<0.05）。SB431542组中EMT标志蛋白表达水平相较于空白对照组明显降低（P均<0.01）。 TGF-β1刺激HepG2细胞后细胞变得分散且狭长。同时发现P3-HDAC6+TGF-β1组的细胞迁移和侵袭能力在48 h后明显强于P3-HDAC6组且弱于空白对照组（P均<0.05）。结论:HDAC6可通过下调TGF-β1的表达从而抑制HepG2细胞的EMT进而抑制HepG2细胞的迁移和侵袭。     

β-榄香烯抑制HepG2细胞侵袭及转移的作用机制

目的:研究β-榄香烯（β-elemene）对体外培养的人肝癌细胞HepG2迁移与侵袭能力的影响及可能的作用机制。方法:细胞分为试验组和对照组,试验组细胞给予β-榄香烯处理,对照组细胞不添加任何药物。采用MTT法检测HepG2细胞的活力;分别采用划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验、细胞-基质黏附实验测定HepG2细胞的体外迁移、侵袭和黏附能力;采用明胶酶谱法及western blot检测HepG2细胞MMP-9酶活性及蛋白表达;采用免疫荧光染色及western blot检测HepG2细胞NF-κB p65核转位的情况。结果:划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验、细胞-基质黏附实验表明试验组细胞的迁移、侵袭和黏附能力均明显低于对照组（P＜0.05）,呈浓度依赖性;明胶酶谱法及western blot表明β-榄香烯能明显降低MMP-9的酶活性及其蛋白表达,呈浓度依赖性;免疫荧光染色及western blot表明与对照组相比,β-榄香烯可以明显抑制HepG2细胞NF-κB p65的核转位,从而抑制其活化,呈浓度依赖性。结论:一定量的β-榄香烯在体外可以抑制HepG2细胞迁移、侵袭和黏附,其机制可能与其通过抑制NF-κB p65活化从而抑制MMP-9的表达有关。     

阿克替苷通过调控ERK1/2信号通路抑制肝癌细胞上皮间质转化

目的探讨阿克替苷(ACT)通过调控ERK1/2通路抑制人肝癌HCCLM3细胞上皮间质转化(EMT)的作用及其机制。方法CCK-8法检测肝癌细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测肝癌细胞侵袭及迁移能力;实时定量PCR和蛋白质印迹实验检测ACT对ERK1/2信号通路和上皮间质转化相关基因(E-cadherin、N-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果CCK-8法检测结果显示,ACT可降低肝癌HCCLM3细胞的活性,抑制肝癌细胞的增殖能力,并与药物浓度和时间有一定的相关性。划痕实验和Transwell实验结果显示,ACT能抑制肝癌HCCLM3细胞迁移和侵袭能力,并呈浓度依赖性。荧光定量PCR和蛋白质印迹实验表明,ACT可下调ERK1/2信号通路相关基因mRNA和蛋白的表达,上调EMT相关基因E-cadherin mRNA和蛋白的表达,下调N-cadherin mRNA和蛋白的表达。结论ACT可抑制人肝癌HCCLM3细胞EMT、侵袭及迁移,其作用机制与下调ERK1/2信号通路密切相关。     

二甲双胍对人肝癌细胞HepG2增殖及乙酰辅酶A羧化酶影响的实验研究

目的 探讨二甲双胍在人肝癌细胞HepG2中的抗肿瘤活性及其作用机制。方法 选取二甲双胍不同浓度（0、1、5、10、15 mmol／L）处理HepG2细胞24、48及72 h,用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响。设二甲双胍不同浓度（0、5、10、15 mmol／L）处理HepG2细胞72 h,用Western blotting检测腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、P-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、P-ACC蛋白表达,Real-time PCR检测ACC mRNA的表达水平。结果 二甲双胍对HepG2细胞的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性。经不同浓度二甲双胍处理HepG2细胞72 h后,P-AMPK蛋白表达随药物浓度增高而上调,P-ACC蛋白表达随药物浓度增高而上升;与空白对照组（0 mmol／L）中P-AMPK、P-ACC表达比较,10、15 mmol／L组中两者的差异均有统计学意义（P＜0.01）。ACC mRNA表达随二甲双胍浓度的增加呈下降趋势,5、10、15 mmol／L组表达量均较空白对照组显著下降（P＜0.01）。结论 初步实验研究发现,二甲双胍能够抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,并从蛋白磷酸化水平和基因水平抑制ACC的活性,其抗肿瘤作用可能与激活AMPK和抑制ACC有关。     

慢病毒介导的RNA干扰FOXC2表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞功能影响

目的:探讨慢病毒介导的RNA干扰叉头框C2（FOXC2）表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和免疫印迹法检测人正常永生化上皮Hecate细胞和皮肤鳞状细胞癌A431细胞中FOXC2 mRNA和蛋白的表达水平。将体外培养的A431细胞分为对照组（正常培养）、NC-shRNA组（LV-NC-shRNA慢病毒感染）和FOXC2-shRNA组（LV-FOXC2-shRNA慢病毒感染）,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞中蛋白激酶B（AKT）、磷酸化（p）-AKT、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）蛋白表达水平。结果:与Hecate细胞比较,A431细胞中FOXC2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P＜0.05）。与对照组比较,NC-shRNA组细胞中FOXC2 mRNA表达水平、细胞存活率、侵袭数目、克隆形成率、细胞凋亡率和FOXC2、p-AKT、CyclinD1、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平差异均无统计学意义（P＞0.05）;与对照组或NC-shRNA组比较,FOXC2-shRNA组细胞中FOXC2 mRNA表达水平、细胞存活率、侵袭数目、克隆形成率和FOXC2、p-AKT、CyclinD1、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低,而细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）。结论:沉默FOXC2表达可抑制皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、侵袭并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制AKT信号通路活化有关。     

姜黄素对人黑色素瘤细胞凋亡机制探讨

目的：观察姜黄素对人恶性黑色素瘤细胞系A375凋亡的影响作用,探讨姜黄素抗癌的作用机制。方法：将人恶性黑色素瘤细胞系A375等分为4组,分别用0、5、10和20μmol/L的不同浓度姜黄素对该细胞株作用48h后,通过MTT法测定细胞增殖能力;利用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用RT-PCR方法检测细胞BIRC mRNA的表达;蛋白质印迹法检测细胞BIRC7蛋白及Caspase-3蛋白的表达。结果：5μmol/L姜黄素对A375细胞增殖抑制率为（13.28±5.28）%,10μmol/L为（19.24±4.15）%,20μmol/L为（36.93±4.78）%,各组间差异有统计学意义,F=65.68,P〈0.01。5μmol/L姜黄素作用于A375细胞48h后凋亡率为（15.88±7.21）%,10μmol/L为（22.31±5.63）%,20μmol/L为（31.61±4.82）%,对照组为（3.36±1.54）%,各组间差异有统计学意义,F=25.78,P〈0.01。0μmol/L姜黄素作用A375细胞48h后BIRC7基因mRNA表达相对倍率为6.15±1.11,5μmol/L为4.54±1.23,10μmol/L为3.36±0.66,20μmol/L为2.54±0.65,各组间差异有统计学意义,F=4.743,P=0.015。0μmol/L姜黄素分别作用A375细胞48h后细胞BIRC7蛋白表达相对比值为0.88±0.36,5μmol/L为0.71±0.28,10μmol/L为0.56±0.14,20μmol/L为0.43±0.15,各组之间差异均有统计学意义,F=3.36,P=0.037。伴随姜黄素作用浓度的升高,A375细胞的生长呈显著抑制状态,呈剂量依赖性。肿瘤细胞生长、BIRC7mRNA和BIRC7蛋白表达水平均显著下调,呈剂量依赖性。结论：姜黄素可以抑制人恶性黑色素瘤细胞系A375的增殖,也可以促进其凋亡,具有抗癌作用,其作用机制之一可能通过下调BIRC7基因的表达促使黑色素瘤细胞凋亡。     

岩黄连水提物对肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响及其可能机制

目的 观察岩黄连水提物对原发性肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 将含不同浓度（0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL）的岩黄连水提物100 mL作用于肝癌 HepG2 细胞,以等量未处理培养基培养的肝癌HepG2细胞为对照组。采用CCK-8法检测肝癌HepG2细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞迁移能力,Western blot和荧光定量PCR分别检测NF-κBp65蛋白和mRNA的表达水平。结果CCK-8实验结果显示,24 h、48 h和72 h不同浓度岩黄连水提物作用肝癌HepG2细胞的增殖抑制率组内差异均有统计学意义（P<0.01）,且0.8 mg/mL、1.6 mg/mL干预的细胞增殖抑制率均高于0.4 mg/mL（P<0.01）。Transwell实验结果显示,不同浓度岩黄连水提物作用肝癌HepG2细胞48 h后的细胞迁移数均低于对照组（P<0.001）,且可上调NF-κBp65蛋白和mRNA的表达（P<0.001）。结论 岩黄连水提物能抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移能力,其作用机制可能与上调NF-κBp65表达有关。     

长链非编码RNA SNHG5在肝癌中表达及其对HepG2细胞增殖、凋亡的影响

目的 检测长链非编码RNA SNHG5在肝癌组织中的表达,并探讨其对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡等生物学行为的调控作用与相关机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测30例肝癌组织和对应癌旁组织中SNHG5的表达水平;采用小干扰RNA（siRNA）技术敲低肝癌HepG2细胞SNHG5的表达量,采用CCK-8法、流式细胞术、QPCR以及Western blotting检测HepG2细胞的增殖、凋亡情况以及凋亡通路相关标志物表达水平的变化。结果 肝癌组织中SNHG5的表达水平较其配对癌旁组织明显上调（P＜0.05）。敲低SNHG5表达后HepG2细胞的增殖、抗凋亡能力均受到抑制,细胞凋亡蛋白cleaved caspase-3、BAX表达上调。结论 相较于正常组织,肝癌组织中长链非编码SNHG5呈高表达,SNHG5可能通过调节肝癌细胞的增殖、凋亡能力以及抑制凋亡通路激活进程而发挥促癌作用,可能是肝癌治疗的潜在靶点。     

5-氮杂脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2中抑癌基因FHIT表达的影响

背景与目的：肝癌细胞中由于FHIT基因过度甲基化而导致其表达降低。本实验应用甲基化酶抑制剂5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza-2’deoxycytidine,5-Aza—dc）作用肝癌细胞株HepG2。观察用药后肝癌细胞中FHITmRNA和蛋白表达的变化,并观察5-Aza-dC对细胞增殖的影响。方法：以5-Aza—dC作用HepG2细胞．采用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation—specific polymerase chain reaction,MSP）检测HepG2细胞中FHIT甲基化变化;采用RT-PCR检测FHITmRNA的表达：采用细胞免疫组织化学染色和Western blot方法检测FHIT蛋白表达,MTT法检测HepG2细胞增殖情况。结果：5-Aza—dC处理前,HepG2细胞FHIT基因呈甲基化状态,mRNA及蛋白表达缺失;经5-Aza—dC作用后,MSP显示HepG2细胞FHIT基因甲基化逆转：经1．0μmol／L、2．0μmol／L及4．0μmol／L的5-Aza—dC作用48h后,FHIT基因mRNA扩增出产物的吸光度值分别为0．80±0．32、1.41±0．54和1．51±0．61。Western blot检测产物积分灰度值分别为0．33±0．20、1．00±0．26和1．12±0．38：当药物浓度达到1．0μmol／L时出现了对HepG2细胞增殖的抑制作用。结论：5-Aza—dC能明显逆转HepG2细胞的FHIT基因异常甲基化,激活因高甲基化所致基因沉默的再转录,诱导该基因的表达;同时抑制细胞增殖。