CREB及p-CREB在前列腺癌细胞增殖中的作用

目的:探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)及磷酸化CREB(p-CREB)在前列腺癌细胞增殖中的作用.方法:采用组织芯片技术检测人正常前列腺、前列腺增生、不同分级前列腺癌组织中CREB及p-CREB的表达水平;免疫荧光及Western blotting检测人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1、前列腺癌细胞PC3及LNCap中CREB及p-CREB的表达水平;构建重组人源CREB质粒,并转染PC3及LNCap细胞,Western blotting及CCK-8试剂盒检测转染效率及细胞增殖水平的变化.结果:CREB及p-CREB在前列腺癌组织中表达率明显高于正常前列腺(96％vs 50％,88％ vs 40％,P＜0.05)和前列腺增生组织(96％ vs 80％,88％vs 60％,P＜0.05);CREB及p-CREB蛋白水平在前列腺癌PC3及LNCap细胞中表达量显著高于正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1[PC3细胞:(5.10±0.62)vs(2.31±0.40)、(4.31±0.54)vs(2.02±0.38);LNCap细胞:(7.5±0.83)vs(2.31±0.40)、(6.15±0.69) vs (2.02±0.38),均P＜ 0.05)];转染重组质粒CREB可上调前列腺癌细胞PC3及LNCap中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达(均P＜0.05),且转染后的PC3及LNCap细胞增殖水平明显增加(P＜0.05).结论:CREB及p-CREB在前列腺癌组织、体外培养前列腺癌细胞PC3及LNCap中高表达,并可上调PC3及LNCap中增殖相关基因PCNA的表达,提高细胞增殖水平.     

慢病毒介导shRNA沉默QKI-6基因对人肺腺癌A549细胞生物学行为的影响

目的:探讨慢病毒介导shRNA沉默QKI-6基因对人肺腺癌A549细胞QKI-6基因表达、细胞周期、克隆形成和细胞迁移的影响。方法:构建QKI-6-shRNA慢病毒表达载体,并用其转染A549细胞,阴性对照组转染无意义序列,空白对照组为A549细胞。运用RT-PCR及Western blot检测各组细胞QKI-6 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期,琼脂成瘤实验检测细胞克隆形成能力,Transwell实验检测细胞迁移能力。结果:实验组QKI-6 mRNA及蛋白表达均较阴性对照组及空白对照组降低。实验组较阴性对照组及空白对照组,G0/G1期细胞比例降低（P<0.05）,S期细胞比例增高（P<0.05）。琼脂成瘤实验显示,实验组与空白对照组及阴性对照组比较,克隆形成率明显提高（P<0.05）。细胞迁移实验结果显示,实验组与空白对照组及阴性对照组比较,细胞迁移数量明显增多（P<0.05）。结论:QKI-6能够抑制肺腺癌细胞生长、克隆形成及迁移,QKI-6有望成为肺癌治疗的新靶点。     

雄激素受体调控的lncRNA ARLNC1对前列腺癌细胞增殖、克隆、迁移和细胞周期的影响

目的:探讨雄激素受体(androgen receptor, AR)调控的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ARLNC1对前列腺癌细胞增殖、克隆、迁移和细胞周期的影响。方法:选取正常前列腺上皮细胞株WPMY-1和前列腺癌细胞株PC3、VCaP、22RV1、DU145和LNCaP为研究对象,qRT-PCR分析lncRNA ARLNC1的表达水平;双氢睾酮(DHT)以时间和浓度依赖的方式刺激LNCaP细胞,分析lncRNA ARLNC1的转录水平;采用数据库预测和双荧光素酶报告基因系统分析雄激素受体与lncRNA ARLNC1的关系;将LNCaP细胞分为sh-NC和sh-lncRNA ARLNC1组,采用CCK-8分析细胞增殖,检测细胞克隆和迁移能力;流式细胞仪分析细胞周期变化,Western blot分析细胞周期蛋白CyclinD1、CDK6、p27的表达水平。结果:与正常前列腺上皮细胞相比,lncRNA ARLNC1在雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP、VCaP、22RV1)中的表达水平明显增加,而在雄激素非依赖性前列腺癌细胞株(PC3、DU14...     

沉默Y盒结合蛋白-1表达抑制SH-SY5Y细胞增殖促其凋亡的作用与机制

目的:观察短发夹RNA（shRNA）沉默Y盒结合蛋白-1（YB-1）对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖、凋亡的影响及其调控机制。方法:构建针对YB-1的短发夹RNA真核表达载体,利用LipofectamineTM2000脂质体转染SH-SY5Y细胞,检测蛋白表达水平,鉴别干扰效果;四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测干扰与否对SH-SY5Y细胞增殖的影响;流式细胞技术分析干扰与否对SH-SY5Y细胞凋亡的影响;Western blot法检测CyclinD1、Bcl-2及Bax在蛋白水平的变化。结果:Western blot结果显示转染组YB-1表达低于对照组和无效转染组,后两组无显著差异;MTT法检测显示转染组细胞增殖水平低于对照组,无效转染组细胞增殖水平接近对照组;流式细胞术检测结果显示转染组凋亡细胞数占总细胞数的（23.21±1.90）%,高于对照组（5.05±0.83）%（P<0.01）,无效转染组（6.24±1.05）%与对照组无显著性差异（P>0.05）;Western blot技术检测转染组CyclinD1、Bcl-2蛋白水平较对照组明显下降,Bax升高,无效转染组同对照组无明显差异。结论:shRNA介导的YB-1表达沉默可抑制SH-SY5Y细胞CyclinD1、Bcl-2表达,促进Bax表达,进而抑制细胞增殖、促进凋亡。     

沉默CHD1L对前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制

目的:探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白1样基因(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene,CHD1L)对前列腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响及其可能的作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR技术检测前列腺癌细胞株LNCAP、PC3、DU145以及前列腺上皮细胞株RWPE-1中CHD1L mRNA表达水平;转染siRNA干扰前列腺癌PC3细胞CHD1L的表达,并用Transwell侵袭实验和划痕实验分析沉默CHD1L对前列腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blotting 检测PC3细胞MMP-9、N-钙黏蛋白和E-钙黏蛋白的表达水平.结果:CHD1L mRNA在前列腺癌细胞中的表达水平明显高于前列腺上皮细胞(P＜0.01),其中以前列腺癌PC3细胞的表达水平最高.侵袭实验中,干扰组的穿膜细胞数明显低于阴性对照组和空白对照组[(49.67 ±6.67)vs(113.67 ±5.69)和(112.00±12.49)个,P＜0.05).划痕实验中,干扰组48 h伤口愈合率也低于阴性对照组和空白对照组[(21.27 ±3.27)％ vs(48.47±5.72)％和(49.93±3.35)％,P＜0.05].干扰组细胞MMP-9和N-钙黏蛋白表达下调,E-钙黏蛋白表达上调.结论:沉默CHD1L可降低前列腺癌PC3细胞的侵袭迁移能力,该作用可能是通过调控MMP-9和EMT相关蛋白表达实现的.     

RNA结合蛋白QKI-5对肾癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨RNA结合蛋白QKI-5在肾癌中的生物学功能。方法:应用以慢病毒为载体的过表达技术观察过表达QKI-5对肾癌细胞增殖作用的影响及对细胞周期的影响。结果:过表达QKI-5能够抑制肾癌细胞株786-O和A-498细胞的增殖能力、克隆形成能力;流式细胞术结果显示:过表达QKI-5使786-O和A-498细胞产生G1期阻滞,而这种阻滞与周期相关蛋白Cyclin D1表达降低及p21、p27表达增高有关。结论:QKI-5在肾癌中发挥着抑癌基因的功能,可以抑制肾癌细胞增殖,并使细胞周期阻滞在G1期。     

STAT3特异性小干扰RNA表达载体的构建及其对STAT3表达的抑制

目的　构建特异性抑制信号转导与转录激活因子3(STAT3)的小干扰RNA(siRNA)表达载体并检测其对STAT3表达及PC 3细胞增殖的抑制作用。方法　设计、合成STAT3特异性的短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到pSilencerTM2.1 U6载体中,构建STAT3特异siRNA的表达载体,HindIII和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染PC 3细胞,G418筛选出稳定表达细胞株,半定量反转录聚合酶链反应(RT PCR)方法和免疫印迹法检测STAT3mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性。结果　经双酶切与测序鉴定成功构建STAT3 siRNA表达载体,转染前列腺癌细胞株PC 3可显著抑制细胞中STAT3mRNA和蛋白的表达水平(抑制率分别为52.4% 及50.5% ),且细胞增殖活性亦较未转染PC 3细胞显著降低(p<0.05)。结论　运用pSilencerTM2.1 U6载体构建的STAT3 siRNA表达载体可有效抑制STAT3的表达及前列腺癌细胞的增殖。     

miR-409-3p通过抑制LHX2调控VEGF/VEGFR2信号通路促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖

目的:探讨微小RNA-409-3p（microRNA-409-3p,miR-409-3p）对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR与Western blot平行检测前列腺癌细胞中miR-409-3p与LIM同源框基因2（LIM-homeobox gene 2,LHX2）的表达;CCK-8实验检测miR-409-3p过表达对前列腺癌细胞增殖能力的影响,以及LHX2过表达对前列腺癌细胞增殖能力的恢复作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测miR-409-3p与LHX2的靶向作用关系;Western blot检测细胞中LHX2、CyclinD1、CDK4、Cleaved-caspase-3及VEGF/VEGFR2信号通路相关蛋白表达。结果:miR-409-3p在前列腺癌细胞中的表达水平显著低于正常前列腺上皮细胞（P＜0.05）,LHX2的表达水平高于正常前列腺上皮细胞（P＜0.05）;miR-409-3p过表达可显著抑制前列腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡（P＜0.05）,并可上调Cleaved-caspase-3的表达（P＜0.05）,下调CyclinD1、CDK4、VEGF、t-VEGFR2、p-VEGFR2的表达（P＜0.05）;双荧光素酶实验证明miR-409-3p与LHX2存在靶向关系,miR-409-3p可负性调控LHX2的表达;LHX2过表达可部分逆转miR-409-3p对前列腺癌细胞增殖、凋亡及VEGF/VEGFR2信号通路的影响。结论:miR-409-3p可通过下调LHX2的表达而促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖,其作用机制可能与抑制VEGF/VEGFR2信号通路激活有关。     

PTPN6通过抑制SP1/p38 MAPK信号通路促进前列腺癌细胞的化疗敏感性

目的:研究PTPN6对前列腺癌细胞PC3的作用及其作用机制。方法:RT-PCR和Western blot实验检测前列腺癌组织和细胞以及癌旁组织和人前列腺上皮细胞中PTPN6的表达量;CCK-8和EDU染色实验检测PTPN6对前列腺癌细胞PC3增殖的影响;Western blot实验检测耐药相关蛋白P-gp和MRP-1的蛋白表达水平。结果:RT-PCR和Western blot结果显示,PTPN6在前列腺癌组织和细胞中的表达量显著低于癌旁组织和人前列腺上皮细胞中的表达量;过表达PTPN6显著抑制前列腺癌PC3细胞的增殖,并降低PC3细胞的耐药性;进一步的研究结果表明PTPN6可通过抑制SP1,并抑制p38 MAPK通路抑制PC3细胞的增殖和耐药。结论:PTPN6能够抑制前列腺癌细胞PC3的增殖和耐药,提高其化疗敏感性,作用机制是通过调控SP1/p38 MAPK信号通路来实现的,这一结果能够为临床上前列腺癌的诊断和治疗提供分子基础。     

siRNA下调LSD1基因对卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和周期的影响

目的应用小分子干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（lysine specific demethylase 1,LSD1）基因的表达,探讨其对卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和生长周期的影响。方法采用脂质体介导法将LSD1-siRNA转染卵巢癌OVCAR-3细胞;实时荧光定量PCR（RFQ-PCR）和Western blot法检测基因的表达;MTT法检测细胞增殖能力;FCM分析细胞周期。结果成功转染LSD1-siRNA后,OVCAR-3细胞中LSD1 mRNA和蛋白表达均明显下降;细胞增殖明显抑制;G₂/M期细胞比例增加。结论 LSD1-siRNA可显著下调LSD1基因在卵巢癌OVCAR-3细胞中的表达水平,在一定程度上抑制卵巢癌细胞的增殖,导致细胞周期阻滞。     

The tumor suppressing effects of QKI-5 in prostate cancer: A novel diagnostic and prognostic protein

In recent years, the RNA-binding protein quaking 5 (QKI-5) has been recognized as a novel tumor suppressor in many cancers. To date, no studies have examined the role of QKI-5 in prostate cancer. The present study was designed to elucidate the correlation of QKI-5 expression with the clinical pathological features and prognosis of prostate cancer. In an overwhelming majority of the 184 cases of prostate cancer samples analyzed, the QKI-5 expression was significantly decreased, which was largely due to the high promoter methylation levels. Using lentiviral vectors, we established two stable prostate cancer cell lines with altered QKI-5 expression, including a QKI-5 overexpressing PC3 cell line and a DU145 cell line with knocked-down QKI-5 expression. The effects of the lentiviral-mediated QKI-5 knockdown on the PC3 cells and DU145 cells were assessed by cell growth curves, flow cytometry (FCM), and an invasion assay. The PC3 cells were transplanted into nude mice, and then, the tumor growth curves and TUNEL staining were determined. These results demonstrated that QKI-5 was highly expressed in benign prostatic hyperplasia (BPH) tissues but not in carcinomatous tissues and that QKI-5 effectively inhibited prostate cancer cell proliferation in vitro and in vivo. In addition, the decrease in QKI-5 expression was closely correlated with the prostate cancer Gleason score, poor differentiation, degree of invasion, lymph node metastasis, distant metastasis, TNM grading, and poor survival. These results indicate that the QKI-5 expression may be a novel, independent factor in the prognosis of prostate cancer patients.     

下调fascin抑制卵巢癌细胞从G0/G1期向S期转变的实验研究

目的:研究下调聚束蛋白（fascin）对卵巢癌细胞周期、增殖和凋亡的影响。方法:卵巢癌细胞SKOV3感染阴性对照慢病毒载体、shRNA fascin 1慢病毒载体、shRNA fascin 2慢病毒载体,用Real-time PCR和Western blot检测干扰效果。MTT检测增殖活性,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、细胞周期依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,Cdk4)、活化型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）和p21蛋白水平。结果:shRNA fascin 1慢病毒载体、shRNA fascin 2慢病毒载体感染后的SKOV3细胞中fascin mRNA和蛋白表达水平均降低,并且shRNA fascin 1慢病毒载体感染后细胞中fascin mRNA和蛋白表达水平下降更多。下调fascin后的卵巢癌细胞增殖能力降低,细胞克隆形成能力也降低,细胞G0/G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中活化型Caspase-3、活化型Caspase-9蛋白水平升高,p21蛋白水平也升高,Cdk4蛋白水平降低,与感染阴性对照慢病毒载体和未经感染的细胞比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:下调fascin可降低卵巢癌细胞增殖能力、抑制卵巢癌细胞从G0/G1期向S期转变并诱导卵巢癌细胞凋亡。     

ZONAB和E-cadherin在膀胱癌细胞系中的表达及RNA干扰ZONAB表达对癌细胞侵袭力的影响

目的:探讨慢病毒介导ZONAB基因的RNA干扰对膀胱癌侵袭力的影响.方法:用Realtime PCR法分别检测人类尿路上皮永生细胞系sv-huc-1和膀胱尿路上皮癌细胞系UM-UC-3、T24、5637中ZONAB和E-cadherin的mRNA表达水平,用Western blot法分别检测各细胞系中ZONAB蛋白表达水平,设计、合成干扰靶点,构建纯化重组慢病毒,感染人膀胱癌UM-UC-3细胞,根据ZONAB基因的抑制率,筛选最有效的ZONAB基因RNAi靶序列组,验证ZONAB基因的沉默效果,用Transwell侵袭试验检测UM-UC-3细胞体外侵袭力的改变.结果:Realtime PCR法和Western blot法测得UM-UC-3、T24、5637中ZONAB的表达水平高于sv-huc-1,均具有显著性差异(P<0.05);而Realtime PCR法测得UM-UC-3、T24、5637中 E-cadherin的mRNA表达水平低于sv-huc-1(P<0.05).成功构建ZONAB基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,与对照组相比RNA干扰组UM-UC-3细胞ZONAB基因mRNA水平的抑制率为71.4%(P<0.05),蛋白水平抑制率为76.8%,其穿过人工基底膜的平均细胞数为13.1±2.8/HP,明显少于阴性对照组和空白对照组(P<0.05).结论:ZONAB在膀胱癌细胞系中表达上调,慢病毒介导ZONAB基因的RNA干扰能够抑制UM-UC-3细胞侵袭.     

siRNA抑制人前列腺癌细胞PC3的MDM2表达及细胞增殖

 目的 研究siRNA MDM2对人前列腺癌细胞PC3的MDM2表达和细胞增殖的作用。 方法 构建PGCsilencer^TM MDM2 siRNA,并转染入PC3细胞,分别用RT-PCR和 Western blot检测siMDM2对PC3细胞MDM2基因和蛋白表达的抑制作用;用MTT法检测siMDM2对PC3增殖抑制的作用,用流式细胞术检测siMDM2对PC3细胞凋亡的影响。 结果 PT-PCR和Western blot结果显示siMDM2能显著抑制PC3细胞MDM2基因和蛋白的表达,抑制率最高可达65%;MTT和流式细胞术结果证明siMDM2能显著抑制PC3细胞增殖并诱导细胞凋亡。 结论 siMDM2能特异有效地抑制MDM2在PC3中的表达,并抑制PC3细胞增殖,促进其凋亡。     

沉默半乳糖凝集素-3体外诱导卵巢癌细胞凋亡和内质网应激的实验研究

目的:研究沉默半乳糖凝集素-3(Galectin-3)对卵巢癌细胞凋亡和内质网应激的影响。方法:卵巢癌SKOV3细胞感染Galectin-3 siRNA 重组慢病毒,Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT方法测定细胞增殖变化,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中c-caspase-3、CHOP、ATF4蛋白水平变化。结果:与感染阴性对照慢病毒和未感染的细胞比较,Galectin-3 siRNA 重组慢病毒感染后的SKOV3细胞中Galectin-3 mRNA和蛋白表达水平均降低。与感染阴性对照慢病毒和未感染的细胞比较,Galectin-3 siRNA 重组慢病毒可以明显下调SKOV3细胞的增殖、克隆形成能力,提高细胞凋亡率,促进细胞中c-caspase-3、CHOP、ATF4蛋白水平。结论:沉默Galectin-3抑制卵巢癌细胞生长,诱导卵巢癌细胞凋亡,促进细胞内质网应激。     

叶黄素对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡影响的机制

目的 探究叶黄素对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡影响的作用机制,为前列腺癌预防及治疗提供新的理论依据。方法 不同浓度叶黄素作用于PC3细胞,CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡变化;细胞划痕和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力;RT-PCR和Western blot技术检测细胞中Bax、Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达。结果 叶黄素显著抑制PC3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。叶黄素可以将细胞生长阻滞在G0/G1期,抑制细胞迁移和侵袭;还可促进细胞凋亡,使Bcl-2表达下降,Bax表达上升。叶黄素可在转录水平上下调Bcl-2 mRNA和上调BaxmRNA。结论 叶黄素抑制PC3细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与阻滞细胞周期、抑制细胞迁移、侵袭以及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性的实验研究

目的:研究shRNA靶向沉默E盒结合锌指蛋白2（zinc finger E-box binding homeobox,ZEB2）表达对肺癌细胞增殖活性的影响。方法:用shRNA-ZEB2慢病毒和shRNA阴性对照慢病毒感染肺癌细胞,Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、C-myc蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理沉默ZEB2的肺癌细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白水平。结果:shRNA-ZEB2慢病毒可以明显沉默肺癌细胞中ZEB2的表达和转录,shRNA阴性对照慢病毒对肺癌细胞中ZEB2的表达没有影响。沉默ZEB2后的肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中激活型Caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、C-myc蛋白水平降低。Wnt/β-catenin信号通路抑制剂下调沉默ZEB2的肺癌细胞株中Wnt/β-catenin信号通路的激活水平,同时可以降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,促进细胞中激活型Caspase-3的表达。结论:shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性。     

The inhibitory effects of gossypol on human prostate cancer cells-PC3 are associated with transforming growth factor beta1 (TGFbeta1) signal transduction pathway

BACKGROUND: Racemic gossypol [(+/-)-GP], a naturally occurring polyphenolic yellow pigment present in cottonseed products, inhibits in vitro proliferation of Dunning prostate cancer cells (MAT-LyLu), human prostate cancer cells derived from a bone marrow metastasis (PC3), MCF-7 and primary cultured human prostate cells. (+/-)-GP also has the ability to inhibit the metastasis of lung and lymph nodes of the androgen-independent rodent prostate cancer cell line, MAT-LyLu, after implantation into Copenhagen rats. MATERIALS AND METHODS: The effects of (+/-)-GP on the proliferation of human prostate cancer PC3 cells were determined by thymidine incorporation assay and doubling-time (DT) determination. The mechanisms of action of (+/-)-GP on the proliferation of PC3 cells were determined by RT-PCR analysis, ELISA assay and Western blot analysis. RESULTS: The results show that (+/-)-GP caused reductions in DNA synthesis and prolonged the DTs in PC3 cells. RT-PCR and ELISA results show that (+/-)-GP elevate the mRNA expression and protein secretion of transforming growth factor beta1 (TGFbeta1) in PC3 cells. Consistent with these findings, (+/-)-GP has been shown to decrease the cyclin D1 mRNA expression and protein expression in PC3 cells. Furthermore, the growth inhibition of PC3 cells by conditioned media collected from the (+/-)-GP-treated-PC3 cells was completely reversed by addition of 25 microg/ml of mouse monoclonal anti-TGFbeta1, -beta2, -beta3 antibody, suggesting the involvement of TGFbeta1 in (+/-)-GP-induced growth inhibition of PC3 cells. CONCLUSION: These results indicate that the inhibitory effects of (+/-)-GP on the proliferation of human prostate cancer PC3 cells are associated with induction of TGFbeta1, which in turn influences the expression of the cell cycle-regulatory protein, cyclin D1, in prostate cancer cells.     

PTTG1 siRNA增加塞来昔布对骨肉瘤细胞生长抑制作用的实验研究

目的:研究垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)siRNA和塞来昔布对骨肉瘤细胞生长的影响。方法:以不同浓度的塞来昔布处理骨肉瘤MG-63细胞,MTT方法测定细胞增殖和塞来昔布半数抑制浓度。用PTTG1 siRNA慢病毒和阴性对照慢病毒感染MG-63细胞,用Realtime PCR和Western blot检测干扰效果。以半数抑制浓度的塞来昔布处理感染siRNA慢病毒和阴性对照慢病毒的MG-63细胞,MTT法检测增殖,平板克隆实验检测克隆形成,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化的caspase-3（c-caspase-3）、活化的caspase-12（c-caspase-12）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白水平。结果:塞来昔布能够抑制MG-63细胞增殖,其半数抑制浓度约为85 μmol/L。siRNA慢病毒感染后细胞中PTTG1 mRNA和蛋白水平均低于对照慢病毒感染的MG-63细胞（P<0.05）。半数抑制浓度的塞来昔布或干扰PTTG1后的MG-63细胞增殖能力和克隆形成能力均降低,细胞凋亡增多,细胞中c-caspase-3、c-caspase-12和CHOP蛋白水平升高。干扰PTTG1的MG-63细胞经半数抑制浓度的塞来昔布处理以后,细胞的增殖和克隆形成能力均降低,细胞凋亡率及细胞中c-caspase-3、c-caspase-12、CHOP蛋白水平均升高,与单纯半数抑制浓度塞来昔布或干扰PTTG1的MG-63细胞比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:PTTG1 siRNA增加塞来昔布对骨肉瘤细胞生长的抑制作用,其作用机制可能与内质网应激诱导的细胞凋亡有关。     

HDAC5对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

  目的   探讨HDAC5在胃癌细胞中的表达及其对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。  方法   通过Western blot检测HDAC5和Twist1在胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮细胞中的表达。使用MTT及流式细胞术分别检测HDAC5和Twist1对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。  结果   HDAC5和Twist1在胃癌细胞株中的表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞（P < 0.05）。沉默HDAC5的表达可使胃癌SGC-7901细胞中Twist1表达降低,并抑制其增殖、促进凋亡;而过表达HDAC5作用相反（P < 0.05）。此外,沉默Twist1可抑制SGC-7901细胞的增殖、促进其凋亡（P < 0.05）。  结论   HDAC5可能通过上调Twist1的表达水平促进胃癌细胞的增殖、抑制凋亡,从而促进胃癌的发生发展。