整合素α5β1和细胞外信号调节激酶信号传导通路在非小细胞肺癌中的作用及其相关性研究

研究整合素α5β1 及磷酸化ERK1/2 （p-ERK1/2） 在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及整合素α5β1 和ERK1/2 信号通路在人肺癌A549 细胞生长和迁移中的作用。方法：采用免疫组织化学法和免疫印迹（Western blot）法检测41 例NSCLC 组织和15例正常肺组织中整合素α5β1 及p-ERK1/2 的表达并分析两者的相关性,体外培养肺癌A549 细胞,以Anti-α5β1 或ERK 激酶抑制剂PD98059 作为工具药物,采用四甲基偶氮唑盐比色 （MTT） 法和 Annexin-V FITC PI 双染色法检测A549 增殖和凋亡,采用Western blot 检测A549 中MMP-9 蛋白水平。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot 检测Anti-α5β1 处理后A549 中ERK1/ 2 蛋白和mRNA 表达水平的变化。结果：人NSCLC 组织中整合素α5β1 及p-ERK1/2 阳性表达率（分别为58.53%,65.52%）明显高于正常肺组织（分别为26.67%, 20.00%）（P<0.01）。整合素α5β1与p-ERK1/2 表达均与病理分级（分别为P<0.001,P=0.030）、淋巴结转移（分别为P=0.014,P<0.001）、临床分期（分别为P=0.027,P=0.038）相关。整合素α5β1 与p-ERK1/2表达具有相关性（r=0.375, P<0.05）。经Anti-α5β1 或PD98059 处理后,A549 细胞增殖效应和早期凋亡细胞百分率增加,MMP-9 的表达均明显减弱。经Anti-α5β1 处理后A549 细胞中ERK 的mRNA 和蛋白表达受到抑制,ERK1/2 的磷酸化水平显著减少。结论： 整合素α5β1 及p-ERK1/2 在人NSCLC 组织中高表达,Anti-α5β1 在下调了细胞内ERK 的mRNA 和蛋白磷酸化的同时,可以明显抑制A549 细胞的增殖和MMP-9 蛋白表达,表明整合素α5β1 可能介导ERK1/2 信号转导通路参与了非小细胞肺癌中的异常增殖和迁移的调控。

     

西咪替丁对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

摘要：目的研究西咪替丁对其增殖及凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法分别以不同浓度的西咪替丁处理A549细胞48 h后,采用MTT法测细胞存活率,流式细胞术测细胞凋亡率,Western blot测Bcl-2和Bax蛋白表达水平情况,观察西咪替丁对A549细胞增殖和凋亡的影响。结果经西咪替丁干预48 h后,A549细胞的增殖受到明显抑制,凋亡增加,且该抑制呈药物浓度依赖性增加。Western blot检测显示随着西咪替丁浓度增加,Bcl-2蛋白的表达减少,而Bax蛋白的表达增加。结论西咪替丁预处理能抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与其下调细胞Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。     

番荔枝内酯单体squamocin诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的 观察番荔枝内酯单体squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨squamocin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测不同浓度的squamocin对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响;流式细胞仪检测squamocin干预在不同时间点对人肺腺癌A549细胞凋亡率的影响;Western blotting检测squamocin干预前后细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 MTT法显示,squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用随着squamocin浓度的增加和作用时间的延长而增强,24、48、72h半数抑制浓度（IC50）分别为16.54、9.28、6.17μg／ml;流式细胞仪检测显示,在24、48、72h实验组人肺腺癌A549细胞凋亡率之间及其与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中实验组72h的细胞凋亡率最高,为（51.87±1.79）％Western blotting显示,squamocin干预后细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2表达明显下调。结论 squamocin可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,这可能与squamocin上调细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达以及降低抑制细胞凋亡基因Bcl-2表达有关。     

NDV-HN致人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

摘 要：［目的］ 探讨NDV-HN诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的相关机制。［方法］ （1）构建包含绿色荧光素蛋白（GFP）及NDV-HN的慢病毒sfGFP-HN载体,用293V细胞包装慢病毒Lv-sfGFP-HN,用293V细胞进行空载质粒转染组（空载组）慢病毒包装,命名为Lv-sfGFP;（2）以空载组A549-sfGFP细胞和空白组A549为对照,用慢病毒转染方法建立稳定表达NDV-HN蛋白的A549细胞株,即A549-sfGFP-HN细胞株,RT-PCR、Western blot检测A549细胞NDV-HN蛋白的表达;（3）分别在A549-sfGFP-HN和A549两组细胞中加入顺铂,流式细胞术检测细胞凋亡;（4）在基因水平和蛋白水平上分别用RT-PCR和Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。［结果］ （1）Lv-sfGFP-HN和Lv-sfGFP慢病毒分别转染A549细胞后,只在转染组A549-sfGFP-HN细胞检测到NDV-HN蛋白。（2）转染组A549-sfGFP-HN细胞凋亡率明显高于空白组A549细胞 (P＜0.01),转染组A549-sfGFP-HN细胞加入顺铂后,其细胞凋亡率明显增加。（3）转染组A549-sfGFP-HN细胞与空载质粒转染组A549细胞和空白组A549细胞相比,凋亡相关蛋白Bcl-2表达量明显下调(P＜0.01)。［结论］ 慢病毒转染NDV-HN到A549细胞后导致A549-sfGFP-HN细胞出现凋亡,且与Bcl-2下调有关。转染NDV-HN的肺癌细胞联合使用抗癌药物顺铂,增加了肺癌细胞凋亡率。     

曲古抑素A下调Bcl-2水平经线粒体途径诱导耐顺铂人肺腺癌细胞凋亡

背景与目的 以铂类为基础的联合化疗是非小细胞肺癌目前首选的治疗方案,然而由于铂类药物的毒副作用和耐药的发生,限制了铂类药物的广泛应用.曲古抑素A(Trichostatin A,TSA)是一种组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂,能诱导肿瘤细胞生长抑制、分化、凋亡,并可以增强多种肿瘤细胞对铂类药物敏感性.本研究探讨TSA诱导耐顺铂人肺腺癌A549/CDDP细胞株凋亡的作用及机制.方法 中性红法测定TSA对A549/CDDP细胞毒性,荧光显微镜观察细胞DNA的变化,流式细胞仪分析细胞周期及线粒体膜电位的变化,分别转染Bcl-2表达质粒过表达Bcl-2和利用siRNA干扰Bcl-2表达.Western blot分析凋亡相关蛋白的变化.结果 TSAX对A549/CDDP细胞的IC50是(446.59±27.32)nmol/L,随着TSA浓度升高A549/CDDP细胞生长率明显下降.细胞凋亡在浓度为(125-500)nmol/L TSA处理后24 h出现.凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强.流式细胞仪检测发现TSA阻断细胞于S期,线粒体膜电位降低.Western blot结果显示,TSA处理细胞后,Bcl-2蛋白水平下降,而Bax表达上调,同时观察到caspase-3被激活.转染Bcl-2表达质粒可以抑制TSA诱导的细胞凋亡,而沉默Bcl-2表达可以增加细胞对TSA的敏感性.结论 TSA可能通过线粒体途径诱导A549/CDDP细胞凋亡.     

GANT61诱导食管鳞癌细胞凋亡的作用及其机制

目的 研究Gli抑制剂GANT61诱导人食管鳞癌细胞OE21和KYSE-30凋亡的机制。方法 应用不同浓度（0、10、15 μmol/L）的GANT61处理OE21和KYSE-30细胞24 h后,Western blot观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1、Gli2、Fas和Bcl-2蛋白表达的影响。流式细胞术观察细胞凋亡及Fas、Bcl-2蛋白的表达。结果 Western blot显示GANT61可以剂量依赖性显著下调OE21和KYSE-30细胞Gli1、Gli2和Bcl-2蛋白表达,增加Fas蛋白表达。流式细胞术检测显示不同浓度GANT61作用24 h后,OE21和KYSE-30细胞表现出不同程度的细胞凋亡并且呈药物剂量依赖性,与空白对照组相比差异均有统计学意义（P=0.000）;与空白对照组相比,OE21和KYSE-30细胞中Bcl-2蛋白表达水平显著降低且呈药物剂量依赖性,差异均有统计学意义（P=0.000）; Fas蛋白表达水平显著增加且呈药物剂量依赖性,差异均有统计学意义（P=0.000）。结论 GANT61明显诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其通过特异性抑制OE21和KYSE-30细胞中Gli1、Gli2表达从而调节Fas和Bcl-2蛋白表达有关。     

Vacquinol-1对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨Vacquinol-1对非小细胞肺癌细胞系A549、NCI-H1299细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:以不同浓度的Vacquinol-1作用于A549和NCI-H1299细胞,应用CCK-8法检测其对细胞增殖能力的影响;以半数致死浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）作用于细胞,流式细胞术Annexin V/PI双染色法检测细胞的凋亡情况;Western blotting法检查凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax表达的变化情况。结果:CCK-8结果显示Vacquinol-1能显著抑制A549、NCI-H1299细胞的增殖能力;并且流式细胞术检测结果显示Vacquinol-1能诱导A549、NCI-H1299细胞的凋亡;Western blotting结果显示Vacquinol-1促进A549、NCI-H1299细胞Caspase-3、Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:Vacquinol-1能够抑制非小细胞肺癌细胞的增殖,并且通过激活线粒体通路诱导细胞凋亡。     

瘦素对人肺腺癌A549细胞增殖及p-ERK1/2、VEGF表达的影响

 目的观察瘦素对人肺腺癌 A549 细胞增殖及p-ERK1/2、VEGF 表达的影响。初步探讨瘦素在促进肿瘤血管生成中的机制。方法 对人肺腺癌 A549 细胞采用细胞培养,MTT 法检测不同浓度瘦素对人肺腺癌A549细胞增殖影响,免疫组织化学法检测VEGF表达、Western blot 方法检测瘦素对p-ERK1/2、VEGF表达的影响。结果 在一定范围内,瘦素呈时间、剂量依赖性促进A549细胞的生长(P<0.05);与阴性对照组相比,不同浓度瘦素作用48h 后p-ERK1/2、VEGF 蛋白表达明显增加并具有剂量依赖性(P<0.05);p-ERK1/2和VEGF 之间呈正相关性(r=0.694,P<0.05)。结论 在体外瘦素对人肺腺癌A549 细胞有明显增殖作用,通过促进p ERK1/2和VEGF的表达,瘦素在促进肺癌血管的生长机制中可能具有一定作用。     

雷公藤甲素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制的研究

目的:探讨雷公藤甲素(TP)诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制。方法:体外细胞培养,待细胞处于对数生长期时加入4.0μg/mLTP处理24和48h;Western blot检测Sur-vivin、Bcl-2和Fas蛋白质表达;Caspase检测试剂检测Caspase-3和Caspase-9活性。结果:4.0μg/mLTP呈时间依赖性降低Survivin和Bcl-2的表达(与对照组比较P<0.05),升高Fas的表达(与对照组比较P<0.05),TP作用后Caspase-3和Caspase-9活性增强,作用24、48h后Caspase-3活性分别为1.32±0.07和1.46±0.03,Caspase-9活性分别为2.36±0.06和2.41±0.03,与对照组比较,P<0.01。结论:降低Survivin和Bcl-2表达,促进Fas表达可能是TP诱导A549细胞凋亡的机制之一。     

蟾蜍灵诱导人肺腺癌细胞凋亡作用及其机制

目的 研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵(bufalin)对人肺腺癌细胞的作用及其机制。方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用;瑞氏 吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体跨膜电位;Western blot法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果 (1) 蟾蜍灵明显抑制A549细胞增殖,48h及72h的IC50分别为(56.14±6.72)nmol/L、(15.57±4.28)nmol/L。(2) 蟾蜍灵能诱导肺癌细胞凋亡,形态学表现为出现凋亡小体及流式细胞仪检测到的亚二倍体凋亡峰。(3) 蟾蜍灵可以明显降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)。(4) 蟾蜍灵诱导细胞凋亡过程中,下调Bcl-2蛋白表达(P<0.01),同时活化Caspase-3。结论 线粒体途径是蟾蜍灵诱导肺腺癌A549细胞凋亡的主要通路之一。     

倍半萜烯内酯诱导WEHI-3细胞凋亡的实验

目的探讨内质网Ca2+-ATP酶抑制剂Thapsigargin的抗白血病作用机制。 方法利用Annexin-Ⅴ/PI双染实验和琼脂糖凝胶电泳、TUNEL染色测定鼠白血病细胞株（WEHI-3）细胞凋亡,Fura-2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）,并检测在此过程中Caspase-12的表达。结果0.5、1、2 μmol/L Thapsigargin 作用于WEHI-3细胞后,分别用Annexin-V/PI双染实验、琼脂糖凝胶电泳、TUNEL法测定WEHI-3凋亡率结果均较对照组显著升高（如Annexin-V/PI双染实验测定凋亡率分别为(25.3±3.2)%、(46.7±3.9)%、(70.2±2.3)%较对照组(7.6±0.4)%显著升高(F=26.52,P＜0.01)）,且凋亡率呈剂量依赖性。Thapsigargin 作用后［Ca2+］i分别为（156.5±10.3）nmol/L、(180.3±15.6) nmol/L和(210.7±15.3)nmol/L,均较对照组(78.3±11.2)nmol/L显著升高（F=21.26,P＜0.01）。Caspase-12 mRNA的表达随着Thapsigargin 作用剂量增加而增加。结论Thapsigargin通过Ca2+超载后诱发内质网应激诱导了WEHI-3细胞凋亡,Ca2+可能成为抗肿瘤药物作用新靶点。     

乳腺癌放疗对甲状腺功能和钙磷离子水平的影响

目的:通过对比乳腺癌术后锁骨上区放疗前后甲状腺、甲状旁腺功能,甲状腺超声和钙磷离子的变化,探讨放疗对甲状腺损伤的影响因素。方法:选取甘肃省肿瘤医院放疗科2015年1月至2017年1月收治的120例分期为Ⅱ、Ⅲ期,且具有术后放疗适应证的女性乳腺癌患者,分别在放疗前、放疗结束、放疗结束后1个月、6个月、12个月、24个月检查甲状腺、甲状旁腺功能,甲状腺超声和钙磷离子水平。结果:放疗结束、放疗结束后1和6个月三碘甲状腺原氨酸（T3）［（2.01±0.33） nmol/L、（2.05±0.39） nmol/L、（2.05±0.27） nmol/L］与放疗前相比明显减低,差异有统计学意义（P＜0.05）;放疗结束后1个月血清游离甲状腺激素（FT4）［（13.63±1.67） pmol/L］与放疗前比较明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;放疗结束12个月后甲状腺过氧化物酶抗体（A-TPO）［（5.38±0.73） IU/L］与放疗前比较明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;放疗结束12个月后患者钙离子检测有下降趋势,磷离子和甲状旁腺激素无明显变化;甲状腺结节与结节附近丰富血流比例在放疗结束6个月后减少较明显。结论:乳腺癌术后锁骨上区放疗对甲状腺、甲状旁腺功能有影响,但影响有限,随时间延长,甲减风险增高;对甲状旁腺和磷离子无明显影响;钙离子放疗结束12个月后有降低趋势;放疗结束6个月后甲状腺结节和血流减少明显。     

大肠癌细胞HCT-15肿瘤干细胞样细胞分离及成瘤性比较

目的:依据人大肠癌细胞HCT-15的表面标志物,分离其中的干细胞亚群。建立裸鼠体内原代大肠癌荷瘤模型,比较各亚群肿瘤体积和质量。方法:利用免疫磁珠分选技术,分离其中CD133/CD44干细胞亚群。分选得到CD133+CD44+、CD133+CD44-亚群分别接种于裸鼠体内,并观察肿瘤大小和质量。结果:CD133+CD44+和CD133+CD44-细胞亚群成功的从HCT-15细胞中分离出来。接种CD133+CD44+细胞的裸鼠形成的肿瘤体积［（2.76±0.22）cm3］和质量［（5.2±0.21）g］明显高于接种CD133+CD44-细胞裸鼠的肿瘤体积与质量［（1.56±0.34）cm3,（3.4±0.18）g］（P＜0.05）。结论:CD44阳性的大肠癌肿瘤干细胞成瘤能力明显高于CD44阴性的大肠癌肿瘤干细胞。     

lncRNA BCAR4在肝癌细胞系中的表达及对增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察肝癌细胞系中长链非编码RNA BCAR4（lncRNA BCAR4）的表达,及对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其机制。方法:采用荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721和正常肝细胞系L02中lncRNA BCAR4的表达。将Huh7细胞系分为BCAR4-siRNA组、NC-siRNA组和Blank组,BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组经LipofectamineTM 2000分别转染BCAR4-siRNA序列和NC-siRNA序列,Blank组以PBST为阴性对照。CCK-8法和流式细胞数测定细胞增殖和凋亡,细胞划痕实验测定迁移能力。Western blot测定细胞周期相关蛋白（Cyclin D1）和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721中lncRNA BCAR4的表达显著高于正常肝细胞系L02(P<0.05)。转染BCAR4-siRNA后,Huh7的lncRNA BCAR4表达下调（P<0.01）。CCK-8示:转染72 h及96 h后,BCAR4-siRNA组 vs NC-siRNA组的OD450 nm值分别为0.71±0.07 vs 0.92±0.10（P<0.05）及0.93±0.08 vs 1.37±0.11（P<0.01）。BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组细胞凋亡率分别为（17.52±3.21）%和（4.69±1.56）%（P<0.01）。BCAR4-siRNA组细胞划痕愈合率为（19.65±2.41）%,显著低于NC-siRNA组的（47.50±5.88)%(P<0.05)。与NC-siRNA组比较,BCAR4-siRNA组Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达下调,分别为0.27±0.03 vs 1.0±0.05(P<0.01)、0.48±0.04 vs 1.0±0.04(P<0.05),Bax蛋白表达上调,为2.83±0.19 vs 1.0±0.03(P<0.01)。结论:lncRNA BCAR4高表达于肝癌细胞系,敲低lncRNA BCAR4的表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移,并促进凋亡,其机制可能与Cyclin D1和Bcl-2蛋白下调表达,Bax蛋白表达上调表达有关。     

缬沙坦对阿霉素所致心肌细胞损伤保护作用的初步研究

目的 研究缬沙坦（valsartan,VAT）对阿霉素（doxorubicin,DOX）所致心肌细胞损伤的保护作用。方法 采用不同浓度（0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L）DOX处理H9C2心肌细胞建立DOX心肌细胞损伤模型。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化。结果 与对照组比较,不同浓度（0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L）DOX作用H9C2心肌细胞12 h和24 h,细胞存活率均随药物浓度增加而降低（P＜0.01）。其中1 μmol/L DOX作用24 h即可明显引起H9C2心肌细胞损伤,细胞存活率为（75.5±5.6）%,细胞凋亡率为（11.94±2.07）%,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;10 μmol/L的 VAT预处理H9C2心肌细胞24 h后可明显抑制1 μmol/L DOX引起的心肌毒性作用,与单用 DOX组比较,细胞存活率升高［（74.2±3.0）% vs （89.3±4.0）%,P＜0.01］、细胞凋亡率下降［（13.15±6.07）% vs （11.01±3.17）%,P＜0.01］、G₀/G₁期细胞所占比例明显减少［（69.21±2.03）%  vs （50.28±1.21）%,P＜0.05］。结论 VAT能抑制DOX所致的心肌细胞损伤,保护作用可能与其调控细胞凋亡有关。     

Bim在克唑替尼诱导EML4-ALK融合基因阳性肺腺癌细胞株H2228凋亡中的作用机制

目的 探讨Bim在克唑替尼诱导EML4-ALK融合基因阳性肺腺癌细胞株H2228凋亡过程中的作用机制。方法 在不同时间点（24、48、72h）用不同浓度克唑替尼分别处理EML4-ALK阳性肺腺癌H2228细胞株和EML4-ALK阴性肺癌A549细胞株,采用MTT法检测克唑替尼作用72h的细胞增殖抑制情况;PI单染流式细胞仪检测经300nmol／L克唑替尼作用24、48和72h的细胞凋亡率;采用Western blotting法检测克唑替尼诱导前后Bim蛋白（Bim-EL、Bim-L和Bim-S）的表达水平,同时对促凋亡分子 Bid和抗凋亡分子 Bcl-2、Bcl-xL的蛋白水平进行联合检测;采用siRNA 技术“沉默”Bim 基因的表达,用流式细胞仪检测 siRNA“沉默”Bim基因后克唑替尼诱导H2228细胞株的凋亡率。结果 克唑替尼作用72h后,肺腺癌H2228细胞株和A549细胞株的细胞增殖抑制率均随着克唑替尼药物浓度的增加而逐渐升高,呈剂量依赖性。克唑替尼作用于H2228细胞72h的IC50值为335nmol／L。300nmol／L克唑替尼作用H2228 细胞株24、48、72h后的凋亡率分别为（19.19±0.61）％、（35.47±1.17）％、（43.58±4.84）％,作用A549细胞株的凋亡率分别为（12.71±0.1）％、（18.22±0.13）％、（19.36±0.45）％。随着克唑替尼（300nmol／L）作用时间的延长,细胞凋亡率亦随之增加,并呈时间依赖性（P＜0.05）。在凋亡细胞中发现Bim蛋白水平升高,以及抗凋亡蛋白 Bcl-2、Bcl xL表达降低,但促凋亡蛋白 Bid 在不同药物浓度及时间点的表达水平无明显变化。此外,经siRNA 技术“沉默”Bim 基因后,克唑替尼诱导的H2228细胞株凋亡率明显降低。结论克唑替尼通过下调抗凋亡蛋白 Bcl 2、Bcl xL及上调Bim的表达水平来发挥其诱导细胞凋亡作用,该过程可被Bim siRNA抑制。     

Testin在非小细胞肺癌组织和细胞株中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨Testin基因(TES)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞株中的表达及其对人肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法:收集2015年1月至2015年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院手术切除的27例NSCLC患者的癌组织及癌旁组织标本,用Western blotting法检测癌组织和癌旁组织,以及正常人胚肺成纤维细胞株MRC5和肺癌细胞株A427、A549、H1299、LK2、PC9和SW900中TES蛋白的表达水平.应用短发卡RNA(shRNA)瞬时转染肺癌细胞株A549干扰TES基因的表达,并进一步检测TES低表达对A549细胞增殖、迁移、侵袭以及凋亡的影响,同时检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cas-pase-3的表达.结果:在NSCLC组织和细胞株中TES蛋白的表达明显下降(均P＜0.05).shTES干扰A549细胞后,TES mRNA和蛋白表达水平均显著下降(均P＜0.05).抑制TES表达显著增强A549细胞的增殖[(2.75±0.04) vs (1.79±0.06),P＜0.05]、迁移[(52.3±2.6)％s(19.7±1.4)%,P＜0.05]和侵袭能力[(31.2±3.9)％vs(14.5±4.1)％,P＜0.05],同时降低了细胞凋亡率[(8.2±1.1)％s(23.1±1.7)％,P＜0.05].TES低表达使A549细胞Bax和Caspase-3蛋白表达明显下降(P＜0.05)、Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论:TES在NSCLC组织中呈低表达,TES表达下调具有促进肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭并抑制凋亡等生物学效应,其有可能成为肺癌治疗一个新靶点.     

同步放化疗治疗进展期实体恶性肿瘤对凝血指标的影响

目的:观察进展期实体恶性肿瘤患者同步放化疗期间凝血功能指标的动态变化,寻找敏感的凝血功能监测指标。方法:选取2016年11月至2018年3月于我科住院行同步放化疗且治疗有效的Ⅲ－Ⅳ期实体恶性肿瘤患者共93例,对比放化疗前、中、后凝血标志物:凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原浓度（FIB）、D－二聚体（D-D）和血栓前体蛋白（TpP）的数值变化。结果:治疗前33.3%（31/93）的患者D-D升高,72.0%（67/93）的患者TpP升高,D-D与TpP呈线性相关（P=0.00）。治疗前、中、后D-D值［（1.22±1.43）,（1.28±1.13）,（1.59±1.46） mg/L］和TpP值［（5.89±3.55）,（7.18±3.71）,（8.33±4.22） mg/L］均呈逐步上升趋势（治疗前、后对比P＜0.05）,而PT、APTT、FIB无显著变化(P＞0.05)。亚组分析显示治疗前D-D升高的31例患者群疗程中D-D值［（2.75±1.61）,（1.72±0.99）,（2.53±1.71） mg/L］先下降（治疗前、中对比P＜0.05）,后再升高（治疗中、后对比P＜0.05）。结论:（局部）晚期实体恶性肿瘤治疗前常伴有凝血功能异常,表现为D-D、TpP升高,同步放化疗引起D-D、TpP进一步动态升高,治疗期间应重点监测该指标,及时抗凝干预以降低静脉血栓风险。     

E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响

目的 探讨E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响及作用机制。方法 HCT116/L细胞分为HCT116/L+E2F1组、HCT116/L+NC组和HCT116/L组，HCT116/L+E2F1组和HCT116/L+NC组分别转染E2F1过表达重组慢病毒载体（pCMA-E2F1-HA）及其阴性对照慢病毒载体（pCMA-HA）。Western blot检测E2F1蛋白的表达水平；MTT法检测各组对化疗药物（阿霉素、5-FU和顺铂）的敏感性；流式细胞仪检测各组细胞内阿霉素的泵出率和细胞凋亡情况；细胞划痕实验检测细胞迁移情况。Western blot进一步检测耐药相关基因MDR1蛋白的表达水平。结果 HCT116/L+E2F1组的E2F1蛋白表达水平明显高于HCT116/L+NC组和HCT116/L组（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组对阿霉素、5-FU和顺铂的IC₅₀值分别为（1.61±0.21） μg/mL﹑（5.22±0.12） μg/mL﹑（3.52±0.15） μg/mL，高于HCT116/L+NC组的（0.61±0.11） μg/mL、（3.93±0.54） μg/mL、（2.31±0.45） μg/mL和HCT116/L组的（0.69±0.13） μg/mL、（4.19±0.51） μg/mL、（2.51±0.42） μg/mL（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组阿霉素的泵出率为（22.51±0.12）%，亦高于HCT116/L+NC组的（10.92±0.09）%和HCT116/L组的（8.45±0.11）%（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组细胞凋亡率为（6.42±0.52）%，低于HCT116/L+NC组的（12.81±0.69）%和HCT116/L组的（11.45±0.31）%（P＜0.05），HCT116/L+E2F1组能增强细胞迁移能力（P＜0.05），并阻滞细胞于S期。HCT116/L+E2F1组中MDR1蛋白表达量为0.41±0.08，高于HCT116/L+NC组的0.19±0.08和HCT116/L组的0.15±0.07（P＜0.05）。结论 E2F1 基因过表达可降低人结肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L 对化疗药物的敏感性，上调MDR1基因表达，使化疗药物在结肠癌细胞内的蓄积浓度降低，从而增强人结肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L的多药耐药性。     

血清HO-1、SCC-Ag在中晚期食管鳞癌术后化疗中的变化及临床意义

目的:探讨血清血红素加氧酶-1（HO-1）、人鳞状细胞癌相关抗原（SCC-Ag）在中晚期食管鳞癌术后化疗中的变化及临床意义。方法:选2015年9月至2017年9月行体检的174例健康人群及同期收治的116例中晚期食管鳞癌患者,分别抽取血清进行HO-1、SCC-Ag水平的监测并比较;分别于化疗前后进行上述指标的测定,并分析其HO-1、SCC-Ag水平与临床分期及病理分级之间的关系。结果:食管癌患者HO-1阳性表达率（93.97%）、SCC-Ag水平（2.49±0.63）μg/L均高于健康体检者［5.75%、（0.51±0.11）μg/L］,差异有统计学意义（P<0.05）。中、晚期食管鳞癌患者术后化疗后HO-1阳性表达率（72.55%、80.00%）、SCC-Ag水平［（1.98±0.56）μg/L、（3.76±0.97）μg/L］明显低于化疗前HO-1阳性表达率（90.20%、96.92%）和SCC-Ag水平［（2.34±0.78）μg/L、（4.08±0.98）μg/L］,差异有统计学意义（P<0.05）。晚期食管鳞癌患者HO-1阳性表达率、SCC-Ag水平高于中期食管鳞癌,差异有统计学意义（P<0.05）;肿瘤分化程度越低,HO-1阳性表达率、SCC-Ag水平越高,中、低分化食管鳞癌患者HO-1阳性表达率、SCC-Ag水平明显高于高分化食管鳞癌患者,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:中晚期食管鳞癌患者血清HO-1、SCC-Ag水平明显高于正常人,血清HO-1、SCC-Ag在中晚期食管鳞癌术后化疗后降低,血清HO-1、SCC-Ag水平与临床分期呈正相关,血清HO-1、SCC-Ag水平可以作为中晚期食管鳞癌患者的诊断和化疗疗效观察的重要指标。