LncRNA-AK058003在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨lncRNA-AK058003在缺氧诱导胃癌侵袭和转移中的作用。方法:SGC7901、MKN45、MKN28三个胃癌细胞系,分别经常氧/缺氧孵育24h后,Trizol法提取3例配对的胃癌细胞总RNA,利用高通量lncRNA芯片比较它们之间的表达谱差异。通过差异倍数、邻近编码基因信息分析、长度特征分析等策略初步筛选与缺氧诱导胃癌侵袭转移相关的关键分子。RT-PCR法检测lncRNA-AK058003在缺氧诱导的胃癌细胞中相对于常氧条件下的表达水平,进一步检测其在20例胃癌临床标本中相对于癌旁组织的表达水平。构建小干扰RNA慢病毒,稳定下调AK058003在SGC7901及MKN45中的表达。Transwell、划痕实验、裸鼠尾静脉注入不同胃癌细胞等体外和体内实验检测抑制AK058003后对常氧和缺氧条件下胃癌侵袭转移的影响。结果:高通量lncRNA 芯片比较发现:缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28与常氧条件下的细胞相比,有84个分子的表达在缺氧诱导的胃癌细胞中显著上调(P<0.05),其中差异倍数在3倍以上的共有5个。多重筛选策略提示AK058003可能是缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子之一。RT-PCR结果显示: AK058003在缺氧诱导的胃癌细胞中显著上调,其分别在SGC7901缺氧16h,MKN45缺氧24h,MKN28缺氧48h时达到峰值。进一步RT-PCR结果发现,AK058003在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织。缺氧条件下的Transwell实验结果显示缺氧能够显著增加SGC7901和MKN45的侵袭转移力,而抑制AK058003的表达后,胃癌细胞侵袭转移力明显下降。结论:通过高通量 lncRNA芯片比较,首次发现了一系列胃癌细胞中缺氧相关的lncRNAs 分子。通过临床标本验证以及功能缺失试验证实lnc-AK058003是系列分子中影响缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNAs分子之一。     

lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）-uc003uxs在缺氧诱导胃癌侵袭和转移中的作用。方法:三个胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MKN28分别经常氧和缺氧孵育 24 h ,提取3例配对的胃癌细胞总RNA,利用高通量lncRNA芯片比较它们之间的表达谱差异,初步筛选与缺氧诱导胃癌侵袭转移相关的关键分子。RT-PCR法检测 lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导的胃癌细胞（相对于常氧诱导的胃癌细胞）以及20对胃癌组织（相对于癌旁组织）中的表达水平。通过慢病毒转染,稳定下调SGC7901和MKN28细胞中lncRNA-uc003uxs的表达。通过Transwell迁移和侵袭实验以及裸鼠尾静脉注射内脏转移实验检测lncRNA-uc003uxs下调后对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响。结果:高通量芯片分析结果显示:与常氧诱导的胃癌细胞相比,缺氧诱导的胃癌细胞 SGC7901、MKN45和MKN28中有84个共同上调的lncRNA分子以及70个共同下调的lncRNA分子,而多重筛选策略则提示:lncRNA-uc003uxs可能是缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子之一。RT-PCR结果表明:lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28中显著上调,其在胃癌组织中的表达水平也显著高于癌旁组织。Transwell实验结果显示:缺氧能够显著增加SGC7901和MKN28细胞的迁移和侵袭能力,而下调lncRNA-uc003uxs的表达后,两种细胞的迁移和侵袭能力明显下降。此外,裸鼠尾静脉内脏转移实验也证实lncRNA-uc003uxs的下调抑制了胃癌细胞SGC7901的体内肝肺转移能力。结论:利用高通量芯片筛选,在胃癌细胞中发现了一系列缺氧相关的lncRNA分子。临床标本分析及功能缺失试验证实:lncRNA-uc003uxs是一个缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子。     

UHRF1在胃癌侵袭和转移中的作用及其机制

目的 探讨甲基化调节因子UHRF1在胃癌转移过程中的作用及其调控机制。方法 RT-PCR和Western blot检测胃癌高低转移细胞系中UHRF1的表达,应用UHRF1的siRNA和质粒改变UHRF1的表达,Transwell及体内转移实验检测胃癌转移能力的变化。甲基化特异性PCR和Western blot检测UHRF1表达改变后p16^INK4A和RB1的甲基化状态及蛋白表达。结果 UHRF1在高转移潜能的胃癌细胞系GC9811-P中的表达显著高于低转移潜能的细胞系GC9811。下调UHRF1的表达抑制胃癌细胞的体外和体内转移能力,同时减弱p16^INK4A甲基化,增加p16^INK4A蛋白表达。上调UHRF1的表达可见相反结果。结论 UHRF1可能通过调控p16^INK4A和RB1的甲基化促进胃癌细胞的侵袭和转移,其有望成为胃癌转移预警和治疗的新靶点。     

缺氧在诱导胃癌细胞上皮间质转化及侵袭中的作用

目的:研究常氧及缺氧对胃癌细胞侵袭性的影响以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transi-tion,EMT)在其中起的作用。方法:常氧条件下常规培养胃癌细胞SGC7901;缺氧条件下用二氧化碳/氧气/氮气三气培养箱培养胃癌细胞SGC7901 24h。分别用蛋白质免疫印迹(Western blot)和实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法在蛋白水平和mRNA水平测定与EMT有关的指标E-cadherin及β-catenin的表达,以明确缺氧诱导胃癌细胞EMT的能力。同时以Transwell侵袭实验验证EMT对胃癌细胞侵袭性的作用。结果:缺氧条件下刺激胃癌细胞24h后,细胞发生EMT,其中无论是在蛋白水平还是mRNA水平,E-cadherin表达下降,而β-catenin表达升高;Transwell侵袭实验也证实胃癌细胞接受缺氧刺激后其侵袭能力明显增强。结论:缺氧有增加胃癌细胞侵袭的作用,该作用机制可能与胃癌细胞的EMT改变有关。     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1与肿瘤侵袭转移的研究进展

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tlymphoma invasion and metastasis inducing factor 1，Tiam 1)，是Rho样GTPase的GDP分离刺激因子，具有调节细胞骨架结构重组，促进细胞运动的功能。研究表明，Tiam1过表达可以诱导肿瘤细胞侵袭、转移，其分子生物学基础主要基于：Tiam1与肿瘤“细胞骨架-粘附分子-细胞外基质”跨膜系统的相互作用，Tiam1对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响，以及其它肿瘤侵袭转移相关因子对Tiaml活性的调控几方面。同时，现有实验结果提示，Tiam1活性调节的多样性和生物效应的特异性，以及Tiam1与其他肿瘤侵袭转移相关因子间的关系及信号转导机制，尚有待深入研究。     

谷氨酸在调控胃癌细胞侵袭转移中的作用

目的:探讨谷氨酸受体NR1亚基在胃癌中的表达及谷氨酸对胃癌侵袭转移的调控作用。方法:运用Real-time PCR方法检测人胃癌高低转移细胞系中NR1亚基的表达情况;体外侵袭实验检测谷氨酸对胃癌细胞侵袭能力的影响及N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDA）的特异性阻断剂对胃癌细胞侵袭能力的阻断作用;全细胞膜片钳技术检测胃癌细胞上的谷氨酸受体诱发电流。结果:人胃癌细胞可表达NR1亚基,且NR1亚基在胃癌高转移细胞系中的表达量高于其在低转移细胞系中的表达量（P<0.05）;谷氨酸可增强胃癌细胞的侵袭能力,而阻断剂MK801可降低胃癌细胞的侵袭能力（P<0.05）;谷氨酸刺激后,胃癌细胞可产生谷氨酸受体诱发电流,MK801可部分有效阻断谷氨酸受体诱发电流。结论:谷氨酸受体NR1亚基在胃癌细胞中表达明显升高,谷氨酸与其结合可促进胃癌侵袭转移的发生,而特异性受体阻断剂可部分阻断其作用。     

Heparanase及bFGF在胃癌组织中的表达及其与胃癌侵袭转移的关系

目的:探讨乙酰肝素酶(Heparanase HPA)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系.方法:RT-PCR法检测HPA mRNA在胃癌组织中的表达,同时应用免疫组织化学法检测bFGF蛋白在胃癌组织中的表达.结果:HPA mRNA的高表达与胃癌的大体类型、浸润深度、细胞分化程度及组织学生长方式、淋巴结转移、腹膜转移、TNM分期呈正相关:而与肿瘤大小无明显关系.bFGF与浸润深度及TNM分期呈正相关.HPA与bFGF共同表达的病例腹膜转移率、淋巴结转移率、腹腔脱落癌细胞检出率均明显增高.结论:HPA在胃癌组织中的表达增高.HPA及bFGF的表达与胃癌的恶性程度密切相关,在胃癌的侵袭转移中发挥重要作用.两者共同表达时恶性程度明显增高.     

Syndecan-1和HPA-1 mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌侵袭转移的关系

背景与目的：Syndecan-1和HPA-1（乙酰肝素酶-1）可能参与多种恶性肿瘤的侵袭转移,但关于两者与胃癌的关系较少报道。本研究旨在探讨Syndecan-1mRNA和HPA-1mRNA在胃癌组织中的表达及两者与胃癌侵袭转移的关系。方法：采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测了58例胃癌及58例配对的癌旁组织（距癌2cm）和58例配对远离胃癌的手术切缘正常组织（距癌5cm以上）Syndecan-1和HPA-1的mRNA的表达水平,分析探讨两者与胃癌临床病理特征和胃癌侵袭转移的关系。结果：HPA-1mRNA在胃癌中表达的阳性率（86.2%）显著高于癌旁组织（27.6%）和正常组织（5.2%）（P均〈0.001）,癌旁组织明显高于正常组织（P均〈0.05）。Syndecan-1mRNA在正常组织中表达的阳性率（98.3%）显著高于癌旁组织（25.9%）和胃癌组（5.2%）（P均〈0.001）,癌旁组织中明显高于胃癌组织（P均〈0.05）。Syndecan-1的表达减弱和HPA-1的表达增强与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关（P〈0.05）。Syndecan-1mRNA的表达与HPA-1mRNA的表达呈负相关。结论：Syndecan-1mRNA在正常胃组织中呈高表达,HPA-1mRNA在胃癌组织中呈高表达,且Syndecan-1的表达减弱与HPA-1的表达增强可促进胃癌的侵袭转移。联合检测Syndecan-1mRNA及HPA-1mRNA对于指导胃癌临床治疗及判断预后有重要价值。     

Semaphorin 5A基因在胃癌侵袭和转移中的作用

目的探讨Semaphorin 5A基因在胃癌侵袭和转移中的作用机制。方法应用RNA干扰技术,构建Sema-phorin 5A-siRNA、Scrambled-siRNA表达载体,并分别转染胃癌细胞株SGC7901,建立Semaphorin 5A稳定表达抑制的胃癌细胞株SGC7901-Sema5A-si和对照组SGC7901-Scram-si胃癌细胞株;采用Western blotting、ELISA和RT-PCR方法,检测MMP2、MMP9在上述2种胃癌细胞株中的表达;应用MMP2、MMP9抗体处理胃癌细胞株,观察其对胃癌细胞株SGC7901-Sema5A-si和Semaphorin 5A侵袭、转移能力的影响。结果 SGC7901-Sema5A-si中MMP9表达水平明显低于SGC7901-Scram-si中的表达水平（P〈0.05）,MMP2在2种胃癌细胞株中表达水平无明显差异（P〉0.05）;MMP9抗体能够阻断Semaphorin 5A基因介导的胃癌侵袭和转移,MMP2抗体对Semaphorin 5A基因介导的胃癌侵袭和转移无影响。结论Semaphorin 5A可能通过MMP9表达促进胃癌发生侵袭和转移。     

细胞微环境microRNAs在肿瘤侵袭转移中的作用

肿瘤微环境是肿瘤发生、发展的重要组成成分,微环境中microRNAs作为原癌基因或抑癌基因能够进入靶细胞,调控相关靶基因的表达和功能,从而影响微环境的构成,并在肿瘤细胞侵袭和转移中发挥重要作用。因此,microRNAs在肿瘤诊断治疗中具有诱人的应用前景。     

CDKL1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(CDKL1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用.方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组.通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测CDKL1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,CDKL1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05),实验组胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:特异性下调CDKL1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明CDKL1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关.     

FHOD1 is upregulated in gastric cancer and promotes the proliferation and invasion of gastric cancer cells

Gastric cancer (GC) is one of the main causes of cancer-associated morbidity and mortality worldwide. The present study aimed to investigate the role of the gene encoding formin homology 2 domain containing 1 (FHOD1) protein in GC development. Data from The Cancer Genome Atlas were firstly analyzed, and immunohistochemistry was conducted on GC tissues. The results demonstrated that FHOD1 expression in GC tissues was significantly increased compared with adjacent non-tumor tissues. Furthermore, the expression level of FHOD1 was negatively associated with the overall survival of patients with GC. For the functional studies, lentivirus-mediated short hairpin RNA against FHOD1 and FHOD1-overexpression vectors were constructed to knockdown and overexpress the expression level of FHOD1 in human GC cell lines, respectively. The results indicated that FHOD1 knockdown inhibited the proliferation, colony formation and migratory and invasive abilities of GC cells. Conversely, overexpression of FHOD1 in GC cells promoted soft-agar colony formation and migratory and invasive abilities. In addition, it was demonstrated that genes of which expression levels were correlated with FHOD1 were enriched in the Gene Ontology term of ‘extracellular matrix (ECM) structural constituent’, suggesting that FHOD1 may serve an important role in the regulation of ECM. In conclusion, the present study demonstrated that FHOD1 may exert an oncogenic role in cultured GC cells and be inversely associated with the overall survival of patients with GC.     

Role for Daple in non‐canonical Wnt signaling during gastric cancer invasion and metastasis

In gastric cancer, the non‐canonical Wnt signaling pathway is activated by Wnt5a, which has a critical role in disease outcome. Previous studies have shown that Wnt5a mediates the expression of the extracellular matrix protein laminin γ2 through Rac and JNK activation to promote gastric cancer progression. However, the mechanism of this regulatory pathway has not been completely addressed. The scaffold protein Dvl is a major component of the Wnt signaling pathway. Here, we show that Dvl‐associating protein with a high frequency of leucine residues (Daple) mediates Wnt5a‐induced laminin γ2 expression. Immunohistochemical analysis showed marked expression of Daple in advanced clinical stages of gastric cancer, where it highly correlated with Wnt5a/b and laminin γ2 expression, the depth of wall invasion, and the frequency of lymph node metastasis. In cultured cancer cells, Daple depletion led to the suppression of Wnt5a‐induced Rac and JNK activation, laminin γ2 expression, and cell migration and invasion. Accordingly, Daple depletion also suppressed liver metastasis in a mouse xenograft model of gastric cancer. These results suggest that the non‐canonical Wnt signaling pathway contributes to gastric cancer progression at least in part via Daple, which provides a new therapeutic opportunity for the treatment of the disease.     

丙泊酚通过调控HDAC1抑制胃癌细胞转移的机制研究

目的:探讨静脉麻醉药丙泊酚抑制胃癌细胞转移的具体分子机制.方法:不同浓度(1、5、10、20μg/ml)丙泊酚作用MGC-803细胞48h后,MTT实验检测不同浓度丙泊酚细胞增殖的影响,以此选出合适浓度进行下列实验:Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力;化学比色法检测HDACs总活性;Western blotting实验检测HDAC1、上皮间质转化(EMT)相关蛋白和p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)通路相关蛋白的表达变化.同时,利用siRNA干扰HDAC1表达后进行上述实验检测相应指标.结果:丙泊酚呈浓度依赖性抑制MGC-803细胞增殖,以影响增殖的较小浓度5μg/ml进行后续实验,丙泊酚处理后侵袭和迁移的细胞数目均明显减少;HDAC1表达和HDACs总活性降低;E-cadherin表达明显上调,N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Slug、Snail1表达明显下调;p38蛋白表达无明显变化,p-p38蛋白表达明显减少.siRNA干扰HDAC1表达对MGC-803细胞的作用与丙泊酚一致.结论:丙泊酚可能是通过调控HDAC1表达和下游的p38 MAPK通路,抑制胃癌细胞MGC-803的侵袭、迁移和EMT过程.     

胃癌组织MYH-9蛋白表达及MYH-9 siRNA下调SGC-7901细胞MYH-9表达对细胞侵袭转移的影响

目的 非肌性肌球蛋白重链9基因(non-muscular myosin heavy chain 9,MYH-9)在多种恶性肿瘤中高表达,且预后差.检测胃癌组织MYH-9的表达及利用RNA干扰(RNA interference,RNM)技术特异性,抑制胃癌SGC--7901细胞中MYH-9的表达对细胞侵袭和转移的影响,探讨在胃癌治疗中将MYH-9作为基因治疗靶点的价值.方法 选取2009-06-01-2010-01-01南昌大学第一附属医院126例胃癌及癌旁组织.利用RNAi技术将MYH-9 siRNA转染到胃癌SGC-7901细胞中,蛋白质印迹法检测MYH-9蛋白的表达,RT-PCR法检测MYH-9 mRNA的表达;运用细胞迁移和侵袭实验检测MYH-9 siRNA下调胃癌SGC-7901细胞中MYH-9的表达对细胞侵袭转移的影响.结果 MYH-9在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织,x2=77.83,P＜0.001.胃癌MYH-9蛋白表达与肿瘤Lauren分型(x2=5.296,P=0.020)、肿瘤分化程度(x2=14.39,P=0.002)、肿瘤浸润深度(x2=5.296,P=0.026)、肿瘤淋巴结转移数(x2=11.15,P=0.003)、脉管癌栓(x2=5.255,P=0.022)、肿瘤远处转移状态(x2=6.683,P=0.009)和TNM分期(x2=10.73,P=0.002)密切相关.MYH-9蛋白表达(HR=2.825,95％CI=1.104～3.706,P=0.041)、胃癌远处转移状态(HR=1.749,95％CI=0.983～3.503,P=0.035)和胃癌淋巴结转移数(HR=3.235,95％CI=1.579～5.358,P＜0.001)可作为预测患者不良预后的独立指标.与空白对照组及阴性对照组比较,特异性siRNA可以高效抑制SGC-7901细胞MYH-9基因的表达,在mRNA水平其表达抑制率分别为87.5％(t=48.22,P＜0.001)和86.9％(t=57.30,P＜0.001);在蛋白质水平其表达抑制率分别为52.9％(t=11.01,P＜0.001)和60.1％(t=15.53,P＜0.001).在侵袭实验中,实验组细胞数为(49.5±13.8)个,显著低于阴性对照组(112±4.34)个(t=15.53,P＜0.001)和空白对照组(116±5.57)个(t=28.12,P＜0.001).在迁移实验中,实验组细胞数为(81.5±7.26)个,显著低于阴性对照组(185±7.33)个(t=47.29,P＜0.001)和空白对照组(189±3.46)个,t=46.40,P＜0.001.结论 MYH-9高表达患者预后较差,MYH-9可能成为胃癌基因治疗的新靶点.