小檗胺抑制兔Tenon囊和滤过道内成纤维细胞增殖的实验研究

目的:研究钙调素拮抗剂小檗胺(berbamine,BER)对兔Tenon囊成纤维细胞和兔小梁切除术后滤过道内成纤维细胞增殖的抑制作用。方法:体外培养兔Tenon囊成纤维细胞,经不同浓度BER处理不同时间后,细胞计数Kit8(CCK8)法检测BER对兔Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测其凋亡率及细胞周期的变化。HE染色检测BER对兔小梁切除术后滤过道内成纤维细胞增殖的抑制作用。结果:兔Tenon囊成纤维细胞经不同浓度BER处理不同时间后细胞增殖受到抑制,并呈时间剂量依赖性。流式细胞仪检测发现BER处理后兔Tenon囊成纤维细胞呈现G1期阻滞,细胞凋亡率明显增加,20mg/LBER处理9h,细胞凋亡率从0.64%增加到31.86%。HE染色显示BER显著抑制兔小梁切除术后滤过道内成纤维细胞的增殖。结论:小檗胺在体内外均能抑制成纤维细胞的增殖,其可能是通过诱导细胞凋亡方式抑制兔Tenon囊和滤过道内成纤维细胞的增殖。     

精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸肽对人Tenon囊成纤维细胞的贴壁抑制试验观察

目的：研究精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸（Arg-Gly-Asp-Ser，RGDS）肽对人Tenon囊成纤维细胞与纤维连接蛋白（FN）粘附、增殖的影响。方法：在传代培养的人Tenon囊成纤维细胞中加入不同浓度的RGDS（1、0.1、0.001g/L），用未贴壁细胞记数法及MTT法测定RGDS肽对人Tenon囊成纤维细胞粘附、增殖的影响。结果：RGDS肽能抑制成纤维细胞在FN上的粘附，呈浓度效应特点，能抑制成纤维细胞的增殖，呈浓度及时间效应特点。结论：在细胞水平上证实RGDS肽可阻止人Tenon囊成纤维细胞对FN的粘附和增殖，具有避免青光眼滤过术后瘢痕化形成的应用前景。     

晶状体和玻璃体提取物及地塞米松影响Tenon囊成纤维细胞增殖和胶原合成的实验研究

目的　探讨晶状体和玻璃体提取物对猪眼筋膜囊(Tenon囊)成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其在糖皮质激素作用下的变化。方法　体外培养猪眼Tenon囊成纤维细胞,应用噻唑蓝(MTT)比色法和逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)法观察在晶状体和玻璃体提取物及地塞米松单独或联合作用下,Tenon囊成纤维细胞增殖和胶原合成的变化。结果　与对照细胞吸光度(A值)(0 .305±0.013)比较, 10mg/L晶状体提取物( 0. 411±0. 000 )和10mg/L玻璃体提取物( 0. 349±0 .027)作用2d即具有促进细胞生长作用,差异有统计学意义(P=0. 00);且随着晶状体提取物、玻璃体提取物浓度的增高,A值相应增加,差异均有统计学意义(P=0. 00)。Ⅰ型胶原的相对含量在晶状体提取物作用细胞内为12 290±231,在玻璃体提取物作用细胞内为10 .853±231,与对照细胞(9389±178)比较,差异均有统计学意义(P<0. 01)。地塞米松对125mg/L晶状体提取物和125mg/L玻璃体提取物作用的Tenon囊成纤维细胞增殖分别具有一定抑制作用,差异有统计学意义(P=0. 00)。地塞米松和提取物联合作用细胞内Ⅰ型胶原的相对含量与提取物单独作用细胞比较,差异均无统计学意义(P>0 .05)。结论　晶状体和玻璃体提取物均可明显刺激Tenon囊成纤维细胞增殖,促进Tenon囊成纤维细胞内胶原合成,     

苏拉明抑制体外培养的Tenon囊成纤维细胞增殖的实验研究

目的观察苏拉明对体外培养的Tenon囊成纤维细胞增殖的影响,探讨其作为青光眼滤过术辅助用药的可能性。方法通过体外培养青光眼患者Tenon囊成纤维细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同作用时间及不同浓度的苏拉明对细胞增殖的抑制作用,并用流式细胞术分析细胞周期。结果MTT法显示苏拉明作用24h、48h及72h后,浓度分别为500mg·L-1、400mg·L-1、300mg·L-1以上的各实验组与对照组吸光度值A均数间比较有显著性差异;流式细胞术显示苏拉明将细胞阻抑于G2/M期,实验组G2/M期的细胞比对照组增加了15.8%.结论苏拉明能抑制体外培养的Tenon囊成纤维细胞增殖,并呈现剂量、时间依赖性,提示其有望成为青光眼滤过术后抗瘢痕增生的辅助用药。     

曲古抑菌素A对人Tenon囊成纤维细胞作用的研究

目的：研究曲古抑菌素A( trichostatin A,TSA)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞( human Tenon capsule fibroblast, HTF)增殖能力以及组蛋白去乙酰化酶1( histone deacetylase 1,HDAC1)和HDAC2蛋白表达的影响。
　　方法：取青光眼滤过术中Tenon囊组织进行HTF体外培养。选取第3~6代细胞进行实验。设置空白对照组及TSA组(600nmol/L TSA加入培养液中),分别于培养后1,2,3 d应用 MTT法检测细胞活力变化;以600 nmol/L TSA处理 HTF 2 d 后, Western blot 法检测细胞中 HDAC1和HDAC2蛋白的表达。
　　结果：与对照组比较,TSA作用1d后HTF活力下降,呈时间依赖性,具有统计学差异( P<0.05)。 TSA处理HTF后2d,Western blot法检测HDAC1和HDAC2蛋白表达受到明显抑制。
　　结论：TSA可以通过抑制HDAC1和HDAC2的表达量,抑制人Tenon囊成纤维细胞增殖,从而减少术后结膜瘢痕形成可能。     

RNA干扰技术抑制体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的初步研究

目的 探讨RNA干扰技术对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法 采用化学合成的靶向IKK-β的siRNA,转染体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞,同时以对任何基因均无作用的siRNA作为阴性对照。以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测IKK-βmRNA表达水平,免疫印迹法检测IKK-β蛋白表达水平。将siRNA的转染浓度分别设为5、10、25、50、100、200nmol／L,进行转染,于转染后48h采用四甲基偶氮唑盐法检测其转染后对成纤维细胞的抑制作用。结果 经转染了靶向IKK-β的siRNA,其成纤维细胞IKK-β的mRNA和蛋白表达水平均受到抑制。各个转染浓度（5、10、25、50、100、200nmol／L）均可抑制成纤维细胞的增殖（P〈0．05）,抑制率分别为10．72％、23．35％、30．84％、51．25％、50．06％、49．63％,50nmol／L时已达最大抑制率。结论 靶向IKK-β的siRNA转染可以降低IKK-β的表达水平,同时对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖具有抑制作用。抗IKK-β的RNA干扰技术可能是抑制抗青光眼术后滤过道瘢痕化的新手段。     

汉防己甲素对体外人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制效应

目的:研究汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人眼Tenon囊成纤维细胞(Tenon’s capsule fibroblasts,TCFs)的抑制效应。方法:用组织块和混合消化液培养法体外培养人眼Tenon囊成纤维细胞,并对培养的传代细胞进行形态学的鉴定。采用MTT法检测不同浓度的汉防己甲素(10-4,10-5,10-6,10-7mol/L)及0.2g/L丝裂霉素(MMC)对人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用。结果:人眼Tenon成纤维细胞体外生长良好,经光镜和免疫组化观察证明该细胞为成纤维细胞。MTT法证实,随着Tet药物浓度的增大,TCFs增生活性降低,对应的TCFs抑制率升高。结论:Tet对人眼Tenon囊成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用。     

MMC、5-Fu和地塞米松对Tenon囊成纤维细胞抑制作用的比较研究

28mg/L、5.9946mg/L、123.936mg/L.结论 三种药物均对兔眼Tenon囊成纤维细胞增殖具有抑制作用,三种药物对成纤维细胞抗增殖的效应是MMC＞5-Fu＞地塞米松.     

曲尼斯特对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖和移行的影响

目的 观察曲尼斯特对人眼Tenon囊成纤维细胞(human tenon fibroblast,HTF)增殖和移行的影响.方法 分别采用MTT法、BrdU掺入法、荧光辅助细胞筛选分析(FACS)及划线法研究0.0、12.5、25.0、50.0和100.0 mg/L的曲尼斯特对体外培养HTF细胞增殖、移行的影响.结果 与对照组(0.0 mg/L组)相比,当曲尼斯特浓度在12.5～100.0mg/L之间变化时,MTT法和BrdU掺入法均显示曲尼斯特能明显抑制HTF细胞的增殖(MTT法F=22.07、17.88、12.48、34.60,P＜0.01;BrdU掺入法F=234.34、278.39、458.92、554.48,P＜0.01),强度呈剂量依赖性;100.0mg/L的曲尼斯特能够提高HTF细胞G0/G1期比例(从56.7±3.5%升高到62.2±2.8%,P＜0.05)、降低S期比例(从6.63±0.4%降低到3.84±0.3%,P＜0.01);50.0 mg/L和100.0 mg/L的曲尼斯特能够明显抑制HTF细胞的移行.结论 曲尼斯特能够通过减少S期、提高G0/G1期细胞比例来抑制HTF细胞增殖,同时能够抑制细胞迁移.     

TGF-β1对Tenon囊成纤维细胞增生和HSP47表达的影响

目的探讨转化生长因子B1（TGF-β1）对人Tenon囊成纤维细胞（HTF）增生和热休克蛋白47（HSP47）表达的影响。方法青光眼患者Tenon囊组织体外培养，用不同质量浓度0．01、0．1、1、5、10ng／mLTGF-β1处理细胞，继续培养24h，用MTT比色法检测吸光度值（A），用免疫细胞化学检测HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白含量，用实时荧光定量PCR检测HSP47和Ⅰ型胶原mRNA表达。结果TGF-β1能促进HTF的增生（P〈0．05），诱导HTF表达HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白（P〈0．05），促进HTF表达HSP47和Ⅰ型胶原纤维mRNA（P〈0．05），其作用随TGF-β1质量浓度的增加而增强。结论TGF-β1通过促进HTF纤维增生，诱导下游介质HSP47和Ⅰ型胶原蛋白表达而促进HTF纤维化，可能是青光眼滤过手术后瘢痕形成的重要机制。     

曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子-β2表达的抑制作用

目的　观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子 β2 (TGF β2 )表达的影响。方法　体外培养的第 3～ 5代人眼小梁细胞经 0 0 (对照组 )、12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理 4 8h后 ,采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞TGF β2 表达的影响 ,以人甘油醛 3 磷酸酯脱氢酶 (G3PDH)作为内参照。结果　 12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理组TGF β2 /G3PDH象素值比值分别为 1 85± 0 35 ,1 6 6± 0 4 2 ,1 16± 0 2 4 ,与对照组比值 3 82± 0 5 6比较 ,差异有非常显著意义 (q′ =10 77,11 80 ,14 5 4 ;P <0 0 1) ;同时 ,TGF β2 /G3PDH比值随曲尼司特浓度增加而变小 ,呈现明显的量效关系。结论　曲尼司特能明显抑制小梁细胞TGF β2 的表达。可从发病学途径探讨曲尼司特对原发性开角型青光眼的治疗机制。     

Anti-allergic drugs inhibit the proliferation of human Tenon's capsule fibroblast and maintain the experimental filtering blebs on rabbit eyes

PURPOSE: To examine whether tranilast and ketotifen fumarate inhibit the growth of human Tenon's capsule fibroblasts and maintain experimental filtering blebs on rabbit eyes. METHODS: Human Tenon's capsule fibroblasts were grown in Dulbecco's modified Eagle's medium with 10% fetal calf serum and growth was measured with 3-[4,5-dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and direct counting of cell number. Production of collagen and transforming growth factor-beta 1 (TGF-beta 1) was measured with corresponding enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In experimental filtering surgery performed on rabbit eyes, the effects of the topical drugs on intraocular pressure and on maintenance of the filtering blebs were observed. RESULTS: Both tranilast and ketotifen inhibited the growth of the fibroblasts and half-inhibitory concentrations were 200 microM and 70 microM, respectively. Low concentration (10 microM) of tranilast and ketotifen decreased the synthesis of collagen but neither drug had any obvious effect on TGF-beta 1 production. Both drugs prolonged the life of the experimental filtering bleb significantly [12.5 +/- 3.2 (mean +/- standard deviation) days, 13.9 +/- 3.4 days, respectively; control, 10.5 +/- 2.4 days]. CONCLUSION: Tranilast and ketotifen inhibited the growth of human Tenon's capsule proliferation and are capable of maintaining experimental filtering blebs in rabbit eyes.     

载5-氟尿嘧啶聚乳酸纳米微粒对人眼球筋膜囊成纤维细胞抑制作用的研究

目的 探讨载5-氟尿嘧啶(5-FU)聚乳酸纳米微粒(5-FU-PLA-NPs)对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的抑制作用.方法 为实验研究.噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量(0.1、1.0、10.0、100.0和1000.0 mg/L)的空载聚乳酸纳米微粒(PLA-NPs)在不同时间点(48和72 h)对人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的影响,MTT比色法检测不同剂最(0.1、1.0、10.0、100.0和1000.0 mg/L)5-FU纳米药物和5-FU原药在1～7 d内共7个时间点对成纤维细胞生长的抑制作用,计算并比较两者在7个时间点对成纤维细胞的抑制率.RT-PCR分别检测剂量为100.0 mg/L的5-FU纳米药物和5-FU原药作用成纤维细胞1、5、7 d后Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达情况.对同一天各浓度A值的比较用单因素方差分析,同一天相同浓度5-FU原药组A值与5-Fu-PLA-NPs组A值的比较用两独立样本t检验分析,采用单因素方差分析分别比较不同时间点各组COI3的相对A值.结果 空载聚乳酸纳米微粒对成纤维细胞的增殖没有影响.载5-FU纳米微粒和5-FU原药均抑制成纤维细胞的增殖,并使Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达水平降低,该抑制作用具有时间和剂量依赖性.作用初期各剂量组5-FU纳米微粒的抑制作用低于原药,随时间延长抑制作用超过原药,差异有统计学意义(P<0.05).结论 聚乳酸(PEA)具有良好的生物相容性与安全性,可作为眼部用药的载体.载5-FU聚乳酸纳米微粒具有一定的缓释功能,可长期释放药物,随着作用时间的延长,5-FU纳米药物对成纤维细胞的抑制作用超过原药,其可作为靶向缓释药物载体.(中华眼科杂志,2009,45:26-31)     

银杏叶提取物对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：研究不同浓度的银杏叶提取物（ginkgo biloba extract,GBE）对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPFs)增殖和凋亡的影响。 方法：用噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度(12.5,25.0,50.0,100.0mg/L) GBE在不同作用时间(24,48,72h)对体外培养的HPFs增殖的影响。用流式细胞仪检测HPFs的细胞周期及凋亡率。 结果：MTT结果显示,GBE浓度为12.5mg/L组作用24h后对HPFs的增殖无明显抑制作用（P>0.05）,其余各时间段各组均可见明显抑制HPFs的增殖,且各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测发现GBE作用48h后G₀/G₁期细胞比例增加,S期细胞比例下降,计算不同浓度GBE作用下凋亡率分别为4.37%,8.14%,11.09%,15.18%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：GBE对HPFs的增殖有明显抑制作用,并与用药剂量和持续时间有关。     

Tranilast inhibits cell proliferation and collagen synthesis by rabbit corneal and Tenon's capsule fibroblasts

PURPOSE: To determine whether tranilast, N-(3,4-dimethoxycinnamoyl) anthranilic acid, influences cell proliferation and collagen synthesis by rabbit Tenon's capsule fibroblasts (TFs) and corneal stromal fibroblasts (CFs). METHODS: Rabbit TFs and CFs (7000 cells/well) were cultured in F-12 nutrient mixture supplemented with 1% FBS, plus 0, 3, 30, or 300 microM tranilast, and the number of cells was counted 72 hrs later. To determine the effect of tranilast on collagen synthesis, cells at confluence were cultured in a medium containing 0, 3, 30, or 300 microM tranilast and labeled with 3H-proline, and the amount of radioactivity incorporated into collagenase-sensitive proteins was measured. RESULTS: At 300 microM, tranilast decreased the number of TFs by about 27% and the number of CFs by about 45%, but had no effect on cell viability. The same concentration of tranilast reduced TFs collagen synthesis and CFs collagen synthesis. CONCLUSIONS: Tranilast may inhibit scar formation after trabeculectomy for glaucoma and after excimer laser photorefractive keratectomy.     

蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞钙离子蛋白激酶C信号通路的影响

 目的 观察蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞钙离子（Ca2+）蛋白激酶C（PKC）信号通路的影响。方法 体外培养并鉴定人视网膜色素上皮（RPE）细胞,取第4代人RPE细胞随机分组进行实验。采用蛋白免疫印迹法测定培养细胞PKC蛋白表达,检测佛波酯（PMA）和钙磷酸结合蛋白（calphostin C）对PKC活性的影响,确定PMA与calphostin C影响PKC活性的最适宜浓度。采用非放射性核素法测定蓝光照射处理对培养细胞PKC活性的影响。采用20 W,波长450～500 nm医用蓝光灯作为光源,光照强度（2000±500） Lux,照射6 h,24 h后终止培养,以此制造体外培养人RPE细胞光损伤。将培养细胞随机分成5个组,即无光照、单纯光照、光照联合硝苯地平、光照联合calphostin C、光照联合PMA组。其中,无光照组不接受光照;单纯光照组仅接受光照;光照联合硝苯地平组接受光照和0.1 mmol/L的硝苯地平;光照联合calphostin C组接受光照和100.0 nmol/L的calphostin C;光照联合PMA组接受光照和100.0 nmol/L的PMA。用乙酰氧基甲基酯Ca²⁺荧光探针标记各组培养细胞,激光扫描共焦显微镜测定各组细胞内Ca2+浓度。比较各组细胞内Ca2+浓度差异。结果 经鉴定,体外培养人RPE细胞成功。100.0、200.0 nmol/L PMA处理的RPE细胞中PKC蛋白相对表达量高于0.1、1.0、10.0、50.0 nmol/L PMA处理的RPE细胞,差异有统计学意义（F=217.537,P＜0.05）,但100.0、200.0 nmol/L PMA处理组间PKC蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P=0.072）。100.0、200.0 nmol/L calphostin C处理的RPE细胞中PKC蛋白相对表达量低于5.0、25.0、50.0、75.0 nmol/L calphostin C处理的RPE细胞,差异有统计学意义（F=164.543,P＜0.05）,但100.0、200.0 nmol/L calphostin C处理组间PKC蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P=0.385）。蓝光照射处理后,RPE细胞的PKC活性显著升高,与未接受蓝光照射处理的RPE细胞的PKC活性比较,差异有统计学意义（t=-9.869,P＜0.05）。单纯光照、光照联合硝苯地平、光照联合Calphostin C、光照联合PMA组的RPE细胞内Ca²⁺浓度均高于无光照组,差异有统计学意义（F=26 764.92,P＜0.05）;光照联合PMA组RPE细胞内Ca²⁺浓度高于单纯光照、光照联合硝苯地平及光照联合calphostin C组（P＜0.05）,单纯光照组高于光照联合硝苯地平和光照联合calphostin C组（P＜0.05）。结论 蓝光照射后人RPE细胞内PKC活性增高,Ca²⁺浓度增高。硝苯地平和calphostin C均能降低蓝光照射后人RPE细胞内Ca²⁺浓度,PMA增加细胞内Ca²⁺浓度。     

Comparative effects of TGF-beta 1 and TGF-beta 2 on extracellular matrix production, proliferation, migration, and collagen contraction of human Tenon's capsule fibroblasts in pseudoexfoliation and primary open-angle glaucoma

PURPOSE: To comparatively investigate the effects of TGF-beta(1) and TGF-beta(2) on extracellular matrix production, proliferation, migration, and collagen contraction of cultured human Tenon's capsule fibroblasts derived from patients with pseudoexfoliation (PEX) syndrome, PEX glaucoma, primary open-angle glaucoma (POAG), and cataract. METHODS: Tenon's capsule fibroblasts obtained from four groups of patients were cultured and stimulated with different concentrations (0.1-10 ng ml(-1)) of TGF-beta(1) or TGF-beta(2) for up to 14 days. Cell proliferation was determined with the WST-1 colorimetric assay, cell migration by using the Transwell assay system, and collagen contraction by computerised analysis of three-dimensional collagen lattices and immunohistochemistry for alpha-smooth muscle actin expression. Expression and synthesis of extracellular matrix components (fibronectin, collagen types I and III) was assessed by enzyme-linked immunosorbent assays, by real-time RT-PCR, and by transmission electron microscopy. RESULTS: Both TGF-beta(1) and TGF-beta(2) in pathophysiological concentrations of 0.1-5 ng ml(-1) stimulated cell proliferation, migration, collagen contraction, alpha-smooth muscle actin expression as well as mRNA expression and secretion of fibronectin, collagen type I, and collagen type III by Tenon's fibroblasts derived from all groups of patients. TGF-beta stimulation occurred in a concentration-dependent manner with different peak activities associated with different fibroblast functions. There was some variability among the different groups of patients with an increased response of cells derived from PEX and POAG patients as compared to cataract patients. Although no statistically significant differences were found between both TGF-beta isoforms, TGF-beta(1) had a more pronounced stimulatory effect on expression and synthesis of extracellular matrix components including the production of elastic microfibrils, particularly in cells derived from patients with PEX syndrome/glaucoma. CONCLUSIONS: These findings suggest a significant contribution of TGF-beta(1) in addition to TGF-beta(2) to the conjunctival scarring process following glaucoma filtration surgery. Due to its pronounced fibrogenic potential, TGF-beta(1) may become another focus for targeting drug therapy, particularly in patients with PEX glaucoma.     

Effect of growth factors on the activation of human Tenon's capsule fibroblasts

PURPOSE: To investigate stimulatory effects of PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, bFGF, IL-1beta, TGF-beta1 and TGF-beta2 on the proliferation and myofibroblast transformation of cultured human Tenon's capsule fibroblasts and to characterize expression of PDGF- and TGF-beta-receptors in these cells. METHODS: To determine cell proliferation, cell number of 2nd passage cultured human Tenon's capsule fibroblasts was measured before and after addition of growth factors using a computer-based cell counter system. Immunoblotting was used to detect and quantitate alpha-smooth-muscle actin (alpha-SMA) expression. Expression of PDGF- and TGF-beta-receptor mRNA was detected by RT-PCR, expression of the corresponding protein was demonstrated using Western blot. RESULTS: A significant increase in proliferation (p < or = 0.05) was detected after exogenous stimulation with PDGF-AA (10 ng/ml and 100 ng/ml), PDGF-AB (10 ng/ml and 100 ng/ml), PDGF-BB (10 ng/ml and 100 ng/ml), bFGF (100 ng/ml), IL-1beta (1 ng/ml and 10 ng/ml), TGF-beta1 (0.5 ng/ml) and TGF-beta2 (0.5 ng/ml). Both TGF-beta1 and TGF-beta2 stimulated expression of alpha-SMA in a dose dependent manner with peak activity at a concentration of 50 ng/ml (TGF-beta1) and 500 ng/ml (TGF-beta2). Protein and mRNA of PDGF-receptor type alpha and type beta and TGF-beta-receptors type I, II and III are expressed in cultured human Tenon's capsule fibroblasts. CONCLUSIONS: The present investigation strongly supports the hypothesis that PDGF-isoforms are major stimulators of proliferation of Tenon's capsule fibroblasts after glaucoma filtering surgery while TGF-beta-isoforms are essential for the transformation of Tenon's capsule fibroblasts into myofibroblasts.     

拉坦前列素滴眼液对人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的影响

目的研究拉坦前列素滴眼液对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖有无促进作用。方法体外培养人眼球筋膜囊成纤维细胞。按1∶10比例逐级稀释拉坦前列素滴眼液(0.005%),使药物浓度依次为5.00、0.50、0.05μg/ml直至5×10-8μg/ml。采用噻唑蓝比色法检测在不同浓度药物作用下的细胞增殖情况,并在光学显微镜下观察细胞的形态变化。结果较高浓度组(5.00μg/ml)拉坦前列素滴眼液对人眼球筋膜囊成纤维细胞存在明显的杀伤作用,细胞几乎全部死亡,吸光度(A)值与对照组相比明显下降(P<0.01);低浓度组(<0.05μg/ml)A值较对照组无明显变化(P>0.05)。比较拉坦前列素滴眼液在不同作用时间下的剂量效应曲线,24、48及72h差异均无统计学意义(P>0.05)。结论拉坦前列素滴眼液不能促进体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖,在较高浓度时具有细胞毒性,在较低浓度时则对细胞增殖无明显影响。