大豆异黄酮对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用

目的：探讨大豆异黄酮对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用。方法：体外培养内皮细胞，将细胞分为7组，即空白对照组（control）、溶剂对照组（DMSO）、氧化损伤组（H2O2）、氧化损伤加入槲皮素对照组（Quercetin＋H2O2）、氧化损伤加入大豆异黄酮低、中、高浓度组（1sonavone—L＋H2O2、Isoflavone--M＋H2O2、Isoflavone-H＋H2O2）。将750μmol／LH2O2作用于加入槲皮素及不同浓度大豆异黄酮预培养24小时的内皮细胞，继续培养18小时，以一氧化氟（N0）、丙二醛（MDA）、SOD、GSH—PX、流式细胞凋亡率为检测指标。结果：大豆异黄酮呈剂量依赖性降低H2O2对抗氧化酶SOD、GSH—PX的活力的影响，降低MDA量，增加培养液中No^2-／No^3-含量，并显著减少细胞凋亡数量，各指标差异有显著性（P〈0．01）。结论：大豆异黄酮可保护和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤，其作用可能与抗氧化、促进NO释放，增强抗氧化酶SOD、GSH-PX的活力有关。     

原花青素对过氧化氢损伤内皮细胞SOD、GSH-PX活性的影响

目的 观察原花青素对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,将细胞分为6组,即空白对照组、H2O2损伤组、H2O2+VitC组、H2O2+原花青素5、25、50μmol/L组.将750μmol/L H202作用于加入Vit C及不同浓度原花青素预培养24h的内皮细胞,继续培养18h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测原花青素对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的保护作用;用流式细胞仪分析-AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡;定量检测各实验组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力.结果 内皮细胞H2O2损伤后吸光度(OD)低于空白对照组,原花青素预处理后OD值增加且呈剂量依赖性;H2O2损伤可引起细胞SOD及GSH-PX活性明显降低,原花青素能维持SOD、GSH-PX活性,且呈剂量依赖性,各指标差异有显著性,并且呈剂量依赖性抑制H2O2诱导的内皮细胞的凋亡.结论 原花青素能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤及凋亡,其作用可能与维持SOD、GSH-PX活性有关.     

白刺总黄酮对血管内皮细胞损伤的保护作用的研究

目的研究白刺总黄酮对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法用过氧化氢（H2O2）诱导血管内皮细胞损伤,用酶标仪检测细胞内一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）以评价氧化的程度。结果不同浓度的白刺总黄酮可促进受损的内皮细胞修复,同时提高SOD、NOS、GSH—Px活力和NO水平。结论白刺总黄酮具有保护血管内皮细胞损伤的作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。     

榄香烯对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨榄香烯对内皮细胞增殖的影响和对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用。方法:体外培养内皮细胞,将不同浓度的榄香烯(1~200μg/ml)加入到细胞培养液中,用MTT法检测榄香烯对内皮细胞增殖的影响。将1 mmol/L H2O2作用于加入不同浓度的榄香烯预培养24 h的内皮细胞,继续培养1 h,以MDA、T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px、NO为检测指标。结果:榄香烯对内皮细胞的增殖呈剂量依赖性的抑制作用,而在抗氧化损伤方面,呈剂量依赖性降低MDA量,降低H2O2对抗氧化酶活力的影响,提高细胞内NO的含量,减少细胞调亡数量。结论:榄香烯可保护内皮细胞结果和功能的完整性,提高内皮细胞抗氧化能力。     

养心汤含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型Smad4 mRNA表达的影响

目的：观察养心汤含药血清对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型Smad4 mRNA表达的影响,从分子生物学水平探讨其可能的作用机制。方法：采用H2O2体外诱导人脐静脉内皮细胞损伤的方法,建立人脐静脉内皮细胞损伤模型。实验分为空白组、模型组、养心汤含药血清组,应用Affymetrix人基因组U133＋2.0芯片筛选出Smad4基因,采用实时定量PCR的方法观察养心汤含药血清对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型Smad4 mRNA表达的影响。结果：养心汤的含药血清可以下调过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA表达。结论：养心汤下调过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA的表达可能是其保护内皮细胞损伤,防治冠心病不稳定型心绞痛的主机制之一。     

大黄酚对脑缺血再灌注小鼠脑组织II2O2和CAT的影响

目的：研究大黄酚（chrysophanol，Chry）对脑缺血再灌注损伤后小鼠脑组织中过氧化氢（H2O2）及过氧化氢酶（CAT）的影响。方法：采用改进的Himori法暂时性阻断两侧颈总动脉制备小鼠脑缺血再灌注损伤的模型，测定小鼠脑组织中过氧化氢含量和过氧化氢酶活力。结果：大黄酚10、1mg/kg ip能明显减少脑缺血再灌注小鼠脑内H2O2含量，明显提高脑缺血再灌注小鼠脑内CAT活力。结论：大黄酚对脑缺血再灌注损伤的保护作用可通过提高脑内CAT活力进行作用的。     

菟丝子总黄酮对过氧化氢损伤的血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨菟丝子总黄酮对H202损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用.方法:于37℃、5％ CO2、95％空气饱和湿度的培养箱内体外培养内皮细胞,将细胞分为4组,即正常对照组:加入DMEM培养液(pH 7.2 ～7.4)、菟丝子对照组(菟丝子0.5mg·L-1)、模型组(过氧化氢终浓度为200 mmol·L-)、菟丝子+过氧化氢组(菟丝子0.5mg· L-1,过氧化氢200 mmol·L-),研究菟丝子总黄酮对受损血管内皮细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)释放情况、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及对细胞形态学的影响.结果:菟丝子总黄酮(0.5 mg·L-1)能明显减轻H2O2对HUVECs所致的氧化损伤,可明显改善氧化损伤的HUVECs形态学变化,H2O2模型组(200 mmol·L-)与空白组比较,LDH释放和MDA含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05),SOD释放水平和GSH-Px活力显著下降(P＜0.01),菟丝子(0.5mg·L-1)+ H2O2(200 mmol·L-1)组与H2O2模型组(200 mmol·L-1)比较,LDH释放和MDA含量显著下降(P＜0.01,P＜0.05),SOD释放水平和GSH-Px活力显著升高(P＜0.01).结论:菟丝子总黄酮对H202诱导的HUVECs的损伤具有保护作用.     

紫萍提取物对过氧化氢诱导内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

目的 研究紫萍提取物是否具有保护内皮细胞免受过氧化氢损伤的作用.方法采用MTT比色法筛选紫萍提取物作用于内皮细胞的安全剂量,建立H2O2对内皮细胞的氧化损伤模型,并研究紫萍提取物的保护作用.最后采用检测试剂盒方法分析紫萍提取物作用后内皮细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性变化.结果 紫萍提取物的浓度<100 μg/ml,作用时间为24 h时,无明显细胞毒性.以1 mmol/L的H2O2作用于ECV-304细胞1 h造氧化损伤模型,10,25,50 μg/ml的紫萍提取物具有预防氧化损伤作用,可使细胞的存活率由21.98%分别上升至37.49%,51.71%和64.74%,其机理可能是紫萍提取物能够剂量依赖性的增强SOD,CAT和GSH-Px等酶的活性.但是紫萍提取物无治疗氧化损伤的作用.结论紫萍提取物可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤.     

杨梅总黄酮对H_2O_2诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨杨梅总黄酮对过氧化氢(H2O2)诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞ECV-304,通过H2O2诱导建立血管内皮细胞损伤模型,利用噻唑蓝(MTT)染色法研究杨梅总黄酮对血管内皮细胞存活率的影响,以MDA、LDH、SOD、NO含量的测定研究杨梅总黄酮对血管内皮细胞氧化应激的影响。结果:与模型组比较,杨梅总黄酮各给药组细胞存活率及SOD、NO活性显著提高,MDA含量和LDH漏出量显著降低。结论:杨梅总黄酮可能通过抑制氧化应激,达到保护内皮细胞的作用。     

风轮菜乙醇提取物对血管内皮细胞的保护作用研究

目的 研究风轮菜乙醇提取物(EJCT)对血管内皮细胞的保护作用及机制.方法 分别用过氧化氢 (H2O2 )和高糖建立体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型.MTT法检测细胞存活率;用试剂盒方法检测细胞超氧化物歧化酶 (SOD)和乳酸脱氢酶 (LDH)活力;用Griess 法测定上清液中NO2-浓度反映内皮细胞释放的一氧化氮 (NO).结果 不同浓度的EJCT能明显提高H2O2和高糖损伤的内皮细胞存活率,使H2O2 损伤的内皮细胞内低下的SOD活力回升,降低高糖诱导的内皮细胞LDH释放.另外,EJCT(3,10,30,100 mg/L)能增加HUVECs培养液中NO含量.结论 风轮菜乙醇提取物对血管内皮细胞具有保护作用,机制可能与其抗氧化和促进NO的合成有关.     

黄芪含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性的影响

目的：观察养心汤方中单味中药黄芪不同浓度含药血清对H：O：诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VEC）氧化损伤模型细胞增殖的影响及对损伤HUVEC的保护作用,以进一步研究养心汤对冠心痛不稳定型心绞痛的确切作用机制。方法：以浓度为1．03g·mL^-1的黄芪药液灌胃大鼠1周,于末次给药后取血离心制备含药血清。将HUVEC与不同剂量浓度（2％、4％、6％）单味黄芪含药血清、基础培养液、空白血清培养液一起培养,共分5组,培养24h后加入H2O2作用2h,通过MTT法及形态学方法观察不同浓度黄芪含药血清对H2O2损伤HUVEC生长活性变化。结果：黄芪含药血清2％、4％、6％各组细胞OD值均较H2O2模型对照组明显升高,与H2O2模型组相比较均有统计学意义（P〈0．01）,且2％、4％、6％组间比差异有统计学意义（P〈0．05）。形态学方面,黄芪含药血清可使细胞体积变小,间隙变大,但彼此之间存在联系,脱落细胞较少;皱缩的程度明显改善。结论：黄芪含药血清可以促进H2O2损伤人脐静脉内皮细胞的增殖,增强HUVEC抗氧化损伤能力,逆转和改善内皮功能障碍,具有一定剂量依赖关系。     

回心草对脐静脉内皮细胞的保护作用及对分泌一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的:研究回心草水提取液及其含药血清对人脐静脉内皮活细胞数、内皮细胞一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NO合酶)的影响,探讨回心草抗动脉硬化的药理作用机制。方法:采用H₂O₂建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤模型。采用MTT法测定回心草提液对H₂O₂损伤的内皮细胞的吸光度(OD);采用经典Griess Reagent检测各剂量组细胞上清液中NO浓度,采用一氧化氮荧光检测探针DAF-FMDA(3-amino,4-aminomethyl-2′,7′-difluorescein,diacetate)检测细胞内NOS的活性。结果:H₂O₂12.5mmol·L^-1为最合适的细胞刺激浓度;回心草药液与H2O2损伤的血管内皮细胞共同孵育24h后,2.50mg·mL^-1、3.33mg·mL^-1浓度组与模型组比较有显著差异(P<0.05,P<0.01);回心草水提液作用于内皮细胞,进行NO,NOS含量的测定,其中回心草2.50mg·mL^-1剂量组有显著作用(P<0.05)。结论:12.5mmol·L^-1的H₂O₂作用24h,可成功建立内皮细胞氧化应激损伤模型;回心草水提液直接作用于H₂O₂损伤的内皮细胞,2.50,3.33mg·mL^-1两个浓度组可以减轻内皮细胞的损伤;回心草2.50mg·mL^-1可增加NOS活性,促进NO的分泌。     

罗布麻总黄酮对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨罗布麻总黄酮对过氧化氢（H2O2）所致的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法：采用MTT法观察不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC增殖的影响,流式细胞仪检测不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC细胞周期变化的影响,采用比色法分别检测细胞培养液NO和SOD的活性、MDA和LDH的含量,免疫组化法测定NF-κB的表达。结果：正常细胞组比,200μmol．L—H2O2模型组细胞增殖活性下降,细胞凋亡率明显增加,G0／G1期细胞比率增加,S期细胞和G2／M期细胞比率明显降低,培养上清液中NO和SOD活性明显下降,MDA和LDH的释放量明显增加,NF—κB的表达时明显增加（P〈0．01）。不同浓度的罗布麻总黄酮作用后,与模型组比较,可明显提高细胞增殖活性,降低细胞凋亡率,降低G0／G1期细胞比率,增加S期细胞和G2／M期细胞比率;并可提高细胞上清液中NO水平和SOD活性,降低MDA和LDH的释放,可抑制H2O2引起的NF-κB的过度表达。其中,中、高剂量组有显著性差异。结论：罗布庥总黄酮对H2O2引起HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节有关NF—κB的表达有关。     

复方薤白胶囊对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的：研究复方薤白胶囊对过氧化氢（H2O2）诱导的凋亡内皮细胞的保护作用,及相关凋亡基因表达的影响,以明确其作用机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,以H2O2行内皮细胞凋亡造模后,再加入不同浓度的复方薤白胶囊提取液作用24h。以MTT法检测细胞增殖率,Hoechst染色观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,Western Blot检测抗凋亡基因Bcl-2含量变化。结果：H2O2造模后,细胞增殖明显受抑,Hoechst染色见大量凋亡细胞,流式细胞检测出明显凋亡峰,抗凋亡基因Bcl-2含量降低,与正常组相比P〈0.01,具有明显的统计学意义。而各中药组提高了造模后细胞增殖率,降低了凋亡细胞及凋亡峰,提高了Bcl-2含量表达,且与浓度呈正相关,具有明显的统计学意义。结论：复方薤白胶囊能上调抗凋亡基因Bcl-2的表达,保护内皮细胞,抗内皮细胞凋亡。     

附子及附子、干姜配伍对H2O2导致心肌细胞损伤的抗氧化作用

目的 观察附子及附子、干姜配伍对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞抗氧化作用.方法 取1～3 d乳鼠的心肌细胞,常规培养,观察心肌细胞形态学,以免疫组化进行心肌细胞纯度鉴定.实验分为对照组、模型组、附子水煎液组20 mg/mL,附子干姜水煎液组20 mg/mL,预处理2h后,用1 mmol/LH2O2氧化损伤2h,检测培养液中心肌细胞跳动频率,丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）活性.结果 与模型组相比,用附子水煎液和附子干姜水煎液预处理后的心肌细胞跳动频率增加（P＜0.01）,附子干姜水煎液组SOD活性明显提高（P＜0.01）.结论 附子干姜水煎液对H2O2诱导的心肌细胞损伤具有一定的保护作用.     

榭皮素对GSNO诱导损伤的内皮细胞的保护作用及其机制研究

目的：考察榭皮素（Quercetin）对S-亚硝基化谷胱甘肽（GSNO）诱导损伤的内皮细胞的保护作用,探讨其保护机制。方法：内皮细胞（EA．hy926）预先给予不同浓度榭皮素,之后给予GSNO损伤,建立模型。采用：噻唑兰染色（MTT法）检测细胞存活率测定,之后通过对超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）,活性氧（ROS）,Caspase-3等指标测定进行分析。结果：榭皮素可明显提高内皮细胞内SOD,GSH—Px的活性,抑制MDA的产生,降低ROS的活性,减少细胞凋亡率,具有统计学差异（P〈0．05）。结论：榭皮素对GSNO诱导损伤的细胞具有保护作用,其机制可能与榭皮素可提高细胞内抗氧化酶活性有关。     

当归补血汤超滤物抗H2O2致人脐静脉内皮细胞（ECV-304）氧化损伤的影响

目的研究当归补血汤超滤物对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilieal vein endothelial cells,HUVECs)ECV-304氧化损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法通过酶消化法对离体的人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞进行消化传代,建立过氧化氢(peroxide hydrogen,H2O2)诱导的ECV-304细胞氧化损伤模型。采用超滤技术对当归红芪合剂进行分离与纯化,以不同分子量(2万以下、5万以下、10万以下)且浓度均为15.0 g/L的当归红芪超滤膜提取物作用于氧化损伤的ECV-304细胞,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法检测细胞内丙二醛(malondialdeyde,MDA)活力,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞内AT1 mRNA的表达。结果经0.5mmol/L H2O2刺激后细胞活性明显降低,SOD活力明显降低,MDA活力明显提高,G0/G1期细胞的数目明显增加,S期细胞的数目明显减少,AT1 mRNA表达增加(P﹤0.05);与H2O2组相比,当归红芪超滤膜提取物可以增强H2O2诱导ECV-304细胞氧化损伤的细胞活性,增加细胞的存活率且以作用72 h为佳,提高氧化损伤的ECV-304细胞的SOD活力,降低氧化损伤的ECV-304细胞的MDA活力,促进氧化损伤的ECV-304细胞向S期转变,减少细胞内AT1 mRNA表达(P﹤0.01,P﹤0.05)。结论当归补血汤超滤物对氧化损伤ECV-304细胞的保护作用可能与其提高了抗氧化酶活性,降低了脂质过氧化物活性,促进了内皮细胞DNA合成复制及减少了细胞内AT1 mRNA的表达有关。     

丹参酸A通过调控血管内皮细胞谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛含量抑制内毒素诱导的凋亡

目的：探寻丹参素（丹参酸A,SAA）对脂多糖（LPS）处理的血管内皮细胞（VEC）的保护作用及可能机制。方法：以LPS处理培养的人脐静脉血管内皮细胞,造成细胞凋亡,培养液中同时加入系列浓度的SAA;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;吖啶橙染色＋激光共聚焦显微镜观测凋亡小体：PI染色＋流式细胞仪测定细胞周期分布;MTT法检测细胞存活率;生化试剂盒检测细胞内谷胱甘肽脱氢酶（GSH—Px）活性及丙二醛（MDA）水平。结果：SAA可明显抑制细胞凋亡,提高细胞存活率。且该作用具浓度依赖性。对于LPS导致的细胞周期异常、GSH—Px活性下降、MDA水平升高,SAA均可明显逆转。结论：丹参酸A通过抗氧化作用抑制内毒素诱导的血管内皮细胞凋亡。     

麝香保心丸对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞增殖及氧化应激的影响

目的麝香保心丸对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖活性、氧化因子丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶亚基gp91、p22 mRNA表达的影响。方法体外胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞;溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）插入法测定细胞增殖活性;RT-PCR法测定NADPH氧化酶亚基gp91、p22 mRNA的表达;比色法检测细胞上清液MDA、SOD含量。结果与对照组相比,H2O2组细胞增殖活性明显降低（P〈0.01）。与对照组相比,1 g麝香保心丸药物血清组细胞增殖活性明显增高（P〈0.01）;与对照组相比,H2O2组人脐静脉内皮细胞上清液MDA含量显著升高,SOD活性明显降低（P〈0.01）,而麝香保心丸药物血清呈浓度依赖性抑制H2O2诱导HUVEC细胞上清液MDA水平升高及SOD活性降低,1 g药物血清组上清液MDA含量显著低于H2O2组（P〈0.01）,SOD活性明显高于H2O2组（P〈0.05）;RT-PCR结果显示：与对照组相比,H2O2组p22 mRNA表达水平明显升高,对照血清组p22 mRNA表达进一步增加;与对照血清组相比,麝香保心丸1 g、2 g药物血清组p22 mRNA的表达显著降低;麝香保心丸药物血清对H2O2诱导HUVEC细胞NADPH氧化酶gp91 mRNA表达无显著影响。结论麝香保心丸保护血管内皮细胞可能与抑制H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化应激有关。     

当归含药血清对阿尔兹海默病细胞模型损伤的保护作用

目的:观察当归含药血清对Aβ25-35与H2O2分别诱导的阿尔兹海默病(AD)细胞模型的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35与H2O2分别诱导PC12细胞损伤,以不同浓度当归含药血清对抗干预,以MTT比色法观测当归含药血清对两种AD细胞模型增殖的保护作用,以比色法检测当归含药血清对AD细胞模型培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、总超氧物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响,分析当归治疗AD机制。结果:10%当归含药血清对损伤的PC12细胞的存活率有明显提高作用,可显著降低细胞模型培养液中LDH活力、MDA含量,提高T-SOD活力(P<0.05)。讨论:当归含药血清对H2O2及Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制与当归阿魏酸提高细胞抗氧化能力有关。