中华眼镜蛇毒对人鼻咽癌等抑瘤作用的实验研究

目的：为了探讨中华眼镜蛇毒（ＮＮＡＶ）对鼻咽癌（ＮＰＣ）等抑瘤作用。方法：用ＭＴＴ法检测ＮＮＡＶ对人高、低分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ－１,ＣＮＥ－２）、慢性红白细胞血病（Ｋ５６２）和鼠肝癌（Ｈｅｐ－２）细胞株的体外细胞毒作用;同时在裸鼠异体移植性人ＣＮＥ－２肿瘤模型观察ＮＮＡＶ对ＮＰＣ的抑瘤作用。结果：ＮＮＡＶ对４种登攀上培养的肿瘤细胞均有明显细胞毒效应,ＮＮＡＶ对述细胞的作用２４ｈＩＣ５０分别为７     

中华眼镜蛇毒对K562和难治性白血病细胞体外作用的研究

目的：探讨中华眼镜蛇毒（Naja Naja Actra Venom，NNAV）抗白血病作用。方法：应用不同剂量NNAV和阿霉素（THP）于人红白血病细胞株（K562）和难治性白血病细胞株，观察NNAV直接或协同THP的细胞毒性及采用流式细胞仪进行凋亡检测。结果：NNAV对K562有明显的细胞毒及促进细胞凋亡作用，并剂量依赖地增强THP杀伤作用。但对难治性白血病细胞株作用不一：单用NNAV有细胞毒性25％（5／20）；单用无效联合THP有效55％（11／20），以NNAV100μg／ml＋THP5μg／ml作用最强；凋亡百分率增多60％（12／20）。临床对比研究结果，体外实验THP及NNAV无效的9例病人，含蒽环类全部无效（其他机制药物有效3例）；THP及NNAV有效的5名病人，含蒽环类缓解2例，1例其它药物缓解；双相吻合率超过60％。结论：NNAV体外对难治性白血病细胞株有一定杀伤作用，和适当剂量THP合用有效率及杀伤作用明显增加，提示蛇毒中可能含有特殊抗难治性白血病的组分。     

中华眼镜蛇毒对荷人鼻咽癌裸鼠血浆MDA和SOD的影响

目的：为了探讨中华眼镜蛇毒（ＮＮＡＶ）对荷人鼻咽癌（ＮＰＣ）裸鼠血浆丙二醛（ＭＤＡ）和超氧化物歧化酶鼠血浆ＭＤＡ和ＳＯＤ活性。结果：荷瘤鼠血浆ＭＤＡ（８．４２ｎｍｏｌ／ｍｌ）比正常裸鼠（３．９２ｎｍｏｌ／ｍｌ）明显升高，而荷瘤鼠血浆总ＳＯＤ（Ｔ－ＳＯＤ）、锰ＳＯＤ（Ｍｎ－ＳＯＤ）和铜锌ＳＯＤ（ＣｕＺｎ－ＳＯＤ）活性（５２．１９Ｎｕ／ｍｌ，２０．３１Ｎｕ／ｍｌ，３１．８８Ｎｕ／ｍｌ）比正常裸鼠（１２     

中华眼镜蛇毒对小鼠肉瘤S180的抑制作用和血浆内皮素的影响

目的：探讨中华眼镜蛇毒（ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ ｖｅｎｏｍ，ＮＮＡＶ）对小鼠肉瘤Ｓ１８０的抑制作用和血浆内皮素的影响。方法：通过体内实验，用不同剂量的ＮＮＡＶ对荷肉瘤Ｓ１８０小鼠进行治疗，观察其对小鼠肉瘤Ｓ１８０的影响，并利用放射免疫测定法（ＲＩＡ）测定荷瘤小鼠血浆内皮素（ＥＴ）含量。结果：经过小、中和大剂量（２０μｇ／ｋｇ，４０μｇ／ｋｇ和８０μｇ／ｋｇ）ＮＮＡＶ治疗后，其中大剂量组对小鼠肉瘤Ｓ１８０有明显的抑瘤作用，抑瘤率为４９．２５％，同时发现荷Ｓ１８０肉瘤小鼠血浆内皮素水平明显高于正常对照组（Ｐ〈０．０５），大剂量组荷Ｓ１８０肉瘤小鼠的血浆内皮素含量明显降低（Ｐ〈０．０５）。结论：ＮＮＡＶ对小鼠肉瘤Ｓ１８０的生长具有抑制作用，可能与其降低荷瘤鼠血浆内皮素水平有关。     

蝎毒联合眼镜蛇毒体外抗胃癌细胞BGC-803及作用机制的研究

目的:探讨蝎毒（scorpid poison）与眼镜蛇毒（cobra venom）联合应用对胃癌细胞BGC-803凋亡的影响及作用机制。方法:用蝎毒和（或）眼镜蛇毒处理体外传代培养的胃癌细胞株BGC-803。荧光显微镜下观察细胞增殖变化、进行活细胞计数及计算细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR观察凋亡相关基因Bcl-2表达的变化。结果:蝎毒与眼镜蛇毒联合应用相对于单用蝎毒或眼镜蛇毒可显著提高胃癌细胞凋亡率、抗凋亡基因Bcl-2表达明显下降（P<0.05）。随着蝎毒和眼镜蛇毒合用浓度的增高,胃癌细胞凋亡率增加、抗凋亡基因Bcl-2表达下降更明显（P<0.05）。同一药物浓度作用24h与48h相比,亦有明显差异（P<0.05）。结论:蝎毒与眼镜蛇毒联合应用具有协同抗胃癌细胞的作用,并具有浓度和时间依赖性,其机制可能与增强诱导胃癌细胞凋亡及调控凋亡相关基因Bcl-2的表达有关。     

体外观察中华眼镜蛇毒组分对KG1a 细胞增殖抑制作用及对其细胞周期的影响*

目的:探讨中华眼镜蛇毒组分（Naja Naja Actra Venom Component,NNAVC）对KG1a 细胞的增殖抑制作用及对其细胞周期的影响。方法:以人急性髓系白血病细胞株KG1a 细胞为研究对象进行实验。应用不同剂量的中华眼镜蛇毒组分作用于KG1a 细胞后,采用MTT 法测定其对KG1a 细胞的生长抑制作用,倒置显微镜镜下观察药物作用前后细胞形态学变化,流式细胞仪检测中华眼镜蛇毒组分对KG1a 细胞周期的影响。结果:中华眼镜蛇毒组分可以明显的抑制KG1a 细胞的增殖。在0.7 μ g/mL 至1.2 μ g/mL 的浓度范围内,中华眼镜蛇毒组分作用具有时间依赖性及剂量依赖性。显微镜镜下观察KG1a 细胞经中华眼镜蛇毒组分作用6h 后状态开始发生变化,随着药物作用时间的延长,细胞逐渐出现体积变小、变形、胞内空泡、细胞固缩等形态学变化。流式细胞仪检测证实中华眼镜蛇毒组分作用后,能够将KG1a 细胞阻滞于细胞周期的G0/G1 期,而处于G2/M期的细胞含量减少。结论:中华眼镜蛇毒组分对KG1a 细胞的增殖具有明显抑制作用,调节细胞周期停滞于G0/G1 期,减少G2/M期的细胞含量,提示影响细胞周期进程可能是中华眼镜蛇毒组分对KG1a 细胞的发挥增殖抑制作用的机制之一。      

中华眼镜蛇毒对K562和难治性白血病细胞体外作用的研究

目的:探讨中华眼镜蛇毒(Naja Naja Actra Venom,NNAV)抗白血病作用.方法:应用不同剂量NNAV和阿霉素(THP)于人红白血病细胞株(K562)和难治性白血病细胞株,观察NNAV直接或协同THP的细胞毒性及采用流式细胞仪进行凋亡检测.结果:NNAV对K562有明显的细胞毒及促进细胞凋亡作用,并剂量依赖地增强THP杀伤作用.但对难治性白血病细胞株作用不一:单用NNAV有细胞毒性25%(5/20);单用无效联合THP有效55%(11/20),以NNAV 100μtg/ml THP 5μg/ml作用最强;凋亡百分率增多60%(12/20).临床对比研究结果,体外实验THP及NNAV无效的9例病人,含蒽环类全部无效(其他机制药物有效3例);THP及NNAV有效的5名病人,含蒽环类缓解2例,1例其它药物缓解;双相吻合率超过60%.结论:NNAV体外对难治性白血病细胞株有一定杀伤作用,和适当剂量THP合用有效率及杀伤作用明显增加,提示蛇毒中可能含有特殊抗难治性白血病的组分.     

维生素C对神经胶质瘤的影响作用

神经胶质瘤是中枢神经系统(CNS)最常见的一类肿瘤,占了颅内原发肿瘤的35%～60%。2007年世界卫生组织(WHO)中枢神经系统肿瘤分类中将胶质瘤分为I～Ⅳ级,其中Ⅲ、Ⅳ级为恶性胶质瘤,大约占所有胶质瘤的77.5%。目前对神经胶质瘤的临床治疗采取以手术治疗为主,结合放疗、化疗等疗法的综合治疗,虽然能延长患者生存时间,但存在高复发率、高致残率、高病死率等问题,总体预后仍然较差。自20世纪70年代以来,维生素C(VC)抗肿瘤作用的研究日益进展,国外的医疗工作者已将其作为肿瘤治疗的补充和替代疗法之一,并报道了静脉注射维生素C治疗神经胶质瘤、卵巢癌、肾细胞癌、乳腺癌、大肠癌、非霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、膀胱癌等肿瘤的临床病例,认为其能改善患者的临床症状、提高生存质量、延长生存期。本文就维生素C对神经胶质瘤的治疗作用做一综述。     

葡萄球菌肠毒素C对胶质瘤的作用

目的观察经葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxin C,SEC)活化的淋巴细胞对胶质瘤的体外杀伤作用,并观察SEC联合手术、放疗、化疗对胶质瘤的治疗效果及SEC诱导生成细胞因子作用。方法常规分离并培养外周血淋巴细胞,其中加入不同浓度的SEC(2.5、5、10、20U/mL),将淋巴细胞和胶质瘤细胞(SHG-44、MGR2、MGR3、SF767、SF295、SKMG-1、T98G及UW28)混合培养,按MTT法测定淋巴细胞对瘤细胞的杀伤作用。37例胶质瘤患者,均经手术切除,结合放疗、化疗,随机分为对照组、处理A组(全身应用SEC)及处理B组(局部应用经SEC活化的淋巴细胞),结合颅脑CT片观察疗效。采用ELISA法测定SEC促淋巴细胞分泌IL-6、IL-12、TNF-α及IFN-γ作用。结果经SEC活化的淋巴细胞对8株胶质瘤细胞均产生强大的杀伤作用,其中以10U/mL剂量组作用最明显。临床资料显示对照组有效率为40%,处理A组及处理B组有效率分别为50%及62.5%。经SEC活化的淋巴细胞在作用的第1天就分泌多种细胞因子,第3~5天达峰值。结论SEC作为一种超抗原,体外实验证实被其活化的淋巴细胞对胶质瘤有明显的抗瘤活性,并能大量分泌IL-6、IL-12、TNF-α及IFN-γ等多种细胞因子。SEC与手术、放疗、化疗结合能明显提高临床疗效。     

雷公藤红素对荷SHG44胶质瘤裸鼠的抑瘤试验

背景与目的：胶质瘤是颅内常见恶性肿瘤，治疗效果一直不令人满意，本文探讨雷公藤红素治疗人脑胶质瘤的丌丁行性。方法：建立BALB／c裸小鼠SHG-44胶质瘤同种移植动物模型，将34只荷瘤裸鼠随机分为5组，空白对照组、高、中、低剂量雷公藤红素作用组、阳性对照组，采用腹腔内注射给药方法。雷公藤红素按三种浓度4mg／kg、2mg／kg、1mg／kg分组给药，每日1次，每周5天；阳性对照顺铂组按2mg／kg给药，每周两次；空白对照组只喂养不做任何处理。共给药四周。全部荷SHG44胶质瘤裸鼠于给药后第28天断颈处死并剔出肿瘤，将肿瘤组织分块处置。定期观察肿瘤生长情况测量肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。结果：5组荷SHG44胶质瘤裸鼠的移植瘤体积（处死后测量）比较，差异显著（F=5．519，P=0．002）；与空白对照组相比。雷公藤红素4mg／kg组、雷公藤红素2mg／kg组均能抑制肿瘤生长（P〈0．05），其体积抑瘤率分别为35％、26．9％。结论：雷公藤红素能明显抑制荷SHG44胶质瘤裸鼠的移植瘤生长，并存在剂量依赖性。     

整合素与胶质瘤细胞凋亡

 目的　研究整合素 β1在胶质瘤细胞中的表达及在胶质瘤细胞增殖、生存方面的作用。 方法　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞整合素 β1的含量 ,以不同浓度的抗整合素 β1抗体处理在胶原蛋白I上培养的SHG4 4胶质瘤细胞 ,MTT法测定ID50 ,测定细胞生长曲线 ,流式细胞仪分析细胞周期改变。结果　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞表达整合素 β1,MTT曲线测定发现 ,2 0 μg/ml抗整合素 β1抗体处理SHG4 4胶质瘤细胞 4 8小时后 ,显著抑制SHG4 4胶质瘤细胞的增殖。流式细胞仪分析可检出凋亡峰。结论　整合素 β1在SHG4 4胶质瘤细胞中高表达 ,并与胶质瘤细胞增殖、生存密切相关 ,抑制整合素 β1的表达可促进胶质瘤细胞的凋亡及坏死。     

苯乙酸对胶质瘤细胞中HoxA10基因mRNA表达的影响

目的:观察苯乙酸(PA)诱导分化胶质瘤细胞C6过程中,同源盒基因HoxA3和HoxA10mRNA水平表达的变化。方法:应用逆转录PCR(RT-PCR)及图像分析法,分组检测原代培养的大鼠星形胶质细胞中及应用PA前后胶质瘤细胞C6中HoxA3和HoxA10基因mRNA水平表达。结果:HoxA3基因在正常大鼠脑组织和应用PA前后的胶质瘤C6细胞中,均存在明显表达,图像分析显示各组间差异无显著性。HoxA10基因在正常大鼠脑组织中未见表达;在胶质瘤C6细胞中存在明显表达;应用0.5mmol/LPA后,胶质瘤C6细胞中HoxA10基因弱表达,与未用药的C6细胞比较,图像分析显示差异有显著性(P<0.05);应用1.0mmol/LPA后,HoxA10基因未见表达,与未用药的C6细胞比较,图像分析显示差异有显著性(P<0.01)。结论:苯乙酸抑制胶质瘤细胞增殖的作用机理可能与降低胶质瘤细胞HoxA10基因mRNA水平表达有关。     

人脑胶质细胞瘤中血管内皮生长因子基因的表达研究

目的　研究血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)在脑胶质细胞瘤中的表达及其与肿瘤病理分级、新生血管形成的关系。方法　采用Northern杂交和免疫组织化学染色检测 3 0例脑胶质瘤标本 ,2例脑胶质瘤细胞株 ,4例正常脑组织的VEGFmRNA和蛋白表达水平。结果　正常脑组织中VEGFmRNA的表达水平极低 ,而脑胶质瘤组织和细胞系中VEGFmRNA的表达水平高 ,P <0 .0 5。在正常脑组织中未见VEGF免疫组化染色阳性细胞 ,脑胶质瘤组织和细胞系中VEGF高表达 ,P <0 .0 5。随着脑胶质瘤恶性程度的增加 ,VEGFmRNA的表达增高 (γ =0 .85 ,P <0 .0 1)。VEGF的表达还与肿瘤的血管密度相关 (γ =0 .88,P <0 .0 1)。结论　脑胶质瘤中VEGF的异常表达 ,是判断脑胶质细胞瘤恶性程度和血管丰富程度的 1项客观指标。     

Inhibitory Effect of Benzyl Isothiocyanate on Proliferation in vitro of Human Glioma Cells

Malignant glioma, also known as brain cancer, is the most common intracranial tumor, having an extremelyhigh mortality and recurrence rate. The survival rate of the affected patients is very low and treatment is difficult.Hence, growth inhibition of glioma has become a hot topic in the study of brain cancer treatment. Among thevarious isothiocyanate compounds, it has been confirmed that benzyl isothiocyanate (BITC) can inhibit thegrowth of a variety of tumors, including leukemia, glioma and lung cancer, both inside and outside the body.This study explored inhibitory effects of BITC on human glioma U87MG cells, as well as potential mechanisms.It was found that BITC could inhibit proliferation, induce apoptosis and arrest cell cycling of U87MG cells. Inaddition, it inhibited the expression of SOD and GSH, and caused oxidative stress to tumor cells. Therefore, itis believed that BITC can inhibit the growth of U87MG cells outside the body. Its mechanism may be related tothe fact that BITC can cause oxidative stress to tumor cells.     

尼卡地平抑制胶质瘤生长的体外实验

 目的　研究钙拮抗剂尼卡地平(Nicardipine,NC)对 恶性胶质 瘤细胞系U25IMG的细胞生长效应。方法　在无血清培养基中，予不同剂量的NC、EGF及NC和EGF(10ng/ml)干预 ，应用MTT比色法观察它们的细胞生长效应。结果　EGF对U251MG细胞表现出剂量依赖性生长刺激作用，10ng/ml时接近 最大效应，与10%小牛血清的促生长效应相仿(P＞0.05)；NC抑制U251MG细胞生长，并 完全阻断EGF的效应。结论　尼卡地平能抑制胶质瘤细胞生长并完全阻断EGF的生长刺激作用，为 临床上治疗胶质瘤提供一条新的线索。     

诺帝抑制人恶性胶质瘤细胞CXCR4表达及功能活性

背景与目的:抑制血管生成将为胶质瘤的治疗提供新的希望,本研究观测我室自行合成的化合物诺帝(Nordy)对人恶性胶质瘤细胞系U87细胞CXCR4表达及其功能活性的影响。方法:通过免疫荧光标记,激光共聚焦扫描显微术观测诺帝对U87细胞CXCR4表达的影响;采用鬼笔环肽(Phalloidin)-FITC标记丝状肌动蛋白(F-actin),并通过激光共聚焦扫描显微术观察诺帝对CXCR4活化引起的F-actin聚合的影响;分别采用趋化试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测诺帝对CXCR4活化引起的细胞迁移活性增加和血管内皮生长因子(VEGF)分泌的影响。结果:25～100μmol/L诺帝处理12h可明显降低U87细胞中CXCR4的表达;用诺帝预处理细胞后,再加入间质细胞衍生因子(SDF-1α),结果发现诺帝可显著抑制CXCR4活化引起的U87细胞迁移活性增加、肌动蛋白聚合和促血管生成因子VEGF分泌。结论:抑制人恶性胶质瘤CXCR4的表达及功能活性可能是诺帝抗癌效应的机制之一。     

COX-2选择性抑制剂Celecoxib治疗胶质瘤的体内实验研究1231

目的　探讨选择性环氧化酶-2抑制剂 Celecoxib(塞来昔布)对 C6 胶质瘤生长抑制的体内实验研究。方法　将成瘤小鼠分为对照组和治疗组,应用肿瘤 HE 染色法、肿瘤生长曲线、前列腺素 E2(PGE2)检测及电镜检查方法观察Celecoxib对小鼠移植瘤的作用。结果　HE染色和电镜可见治疗组血管破坏、细胞坏死和凋亡,PGE2检测及肿瘤生长曲线分析有统计学意义,P <0.05。结论　Celecoxib能够抑制COX-2活性,降低PGE2合成,Celecoxib对 C6 胶质瘤生长具有抑制作用,对胶质瘤的治疗有重要意义。