生长抑素受体基因对胰腺癌细胞侵袭转移影响的研究

目的探讨腺病毒介导的生长抑素受体2（SSTR2）基因对胰腺癌BXPC-3细胞浸润、转移的抑制作用及其机制.方法利用腺病毒载体Adv-GFP-SSTR2将人类SSTR2全长cDNA转染导入胰腺癌细胞株BXPC-3,用RT-PCR及Westen-blot检测SSTR2在mRNA水平及蛋白水平上的表达.利用Transwell小室测定转染SSTR2前、后及转染空载体后细胞的穿膜侵袭运动能力;RT-PCR检测转染SSTR2前后及转染空载体细胞的MMP-2和TIMP-2的表达.结果Adv-GFP-SSTR2腺病毒转染胰腺癌BXPC-3后,可以稳定表达SSTR2;细胞计数示转染后胰腺癌细胞穿透基底膜的数量较转染前明显减少（P＜0.01）,细胞侵袭力明显减弱;MMP-2转染后较转染前表达明显上调（P＜0.01）、TIMP-2表达明显下调（P＜0.01）,MMP-2/TIMP-2比例下降.结论转染SSTR2可明显抑制胰腺癌细胞的侵袭转移,其可能的机制是通过改变MMP-2/TIMP-2的比例而抑制肿瘤细胞对细胞外基质的降解.     

生长抑素施他宁对结肠癌SW480细胞生长抑制和凋亡作用的实验研究

目的:探讨应用生长抑素类似物施他宁对人结肠癌细胞株SW480细胞的生长抑制和凋亡作用,及细胞周期的影响.方法:采用MTT比色法测定不同浓度施他宁对SW480细胞增殖的抑制作用;漉式细胞仪洲定SW480细胞细胞周期分布、增殖指教、凋亡率.结果:生长抑素施他宁能够明显抑制人结肺癌细胞株SW480细胞增殖(P<0.01),且呈浓度和时间依赖性(P<0.01,P<0.01).结论:生长抑素施他宁可押制人结肠癌细胞株SW480的生长;生长抑素可能通过押制G1/G2期SW480细胞进入S期及促进细胞凋亡两种途径抑制人结肠癌细胞株SW480增殖,影响其凋亡.     

内皮细胞抑制素-血管内皮细胞生长抑制因子151融合基因治疗胃癌的作用及其机制

目的探讨新型内皮细胞抑制素-血管内皮细胞生长抑制因子151融合基因(hENDOVEGI151)治疗胃癌的作用机制.方法应用重复感染系数(MOI=100)的重组腺病毒Ad hENDOVEGI151转染胃癌SGC-7901、MKN-28细胞和血管内皮ECV-304细胞4 h后,继续培养6 d,噻唑蓝(MTT)比色法检测第1至6天3种细胞的存活率;流式细胞仪(FCM)丙化碘锭(PI)单染色法检测转染后48 h胃癌和内皮细胞凋亡的情况;应用DNA片断化试验分析转染后12、24、36、48 h时ECV-304凋亡情况;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测融合基因转染对SGC-7901表达促血管生成因子VEGF165的影响.结果AdhENDO-VEGI151治疗强烈抑制ECV-304增殖,72 h抑制率为55.18%,144 h抑制率89.86%;FCM检测出现明显凋亡峰,凋亡细胞约占(20.70±5.83)%,并且出现G1期阻滞(65.41±2.38)%和S期明显减少(21.81±1.52)%,与Ad LacZ组和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);转染组细胞DNA出现典型的梯形条带,尤以转染后24～36 h最为明显,Ad LacZ组及对照组DNA无裂解.Ad hENDO-VEGI151转染对胃癌细胞无直接毒性作用,但明显下调胃癌细胞VEGF165的表达水平.结论Ad hENDO-VEGI151治疗一方面强烈抑制内皮细胞增殖,诱导凋亡;另一方面抑制胃癌细胞表达VEGF165,多角度联合抑制肿瘤新生血管形成,使肿瘤细胞因缺血而发生大量凋亡.     

3TSR对胰腺癌的抑制作用及机制探讨

目的研究血管形成抑制剂3TSR在体内外对胰腺癌的抑制作用,并初步探讨其机制。方法分别在体外培养条件下比较对照组、3TSR、键择(Gem)和3TSR Gem组对胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖及凋亡的影响,以及对裸鼠原位移植瘤肿瘤体积、细胞增殖指数及凋亡的影响。结果体外培养时3TSR对胰腺癌细胞无增殖抑制及诱导凋亡的作用,而Gem对胰腺癌细胞具有明显的抑制增殖及诱导凋亡的作用,但3TSR与Gem在体外无协同作用。体内实验时3TSR组、Gem组和3TSR Gem组肿瘤体积较对照组分别缩小70.1%,79.3%和84.9%;3TSR组、Gem组和3TSR Gem组胰腺癌细胞增殖指数分别为(19.7±3.1)%,(8.1±1.9)%和(13.2±4.2)%,其中3TSR组增殖指数与对照组比较差异无统计学意义,而Gem组和3TSR Gem组细胞增殖指数明显小于对照组和3TSR组(P<0.05);3TSR组、Gem组和3TSR Gem组胰腺癌细胞凋亡率分别为(5.0±2.2)%,(21.1±4.2)%和(22.8±4.2)%,其中3TSR组胰腺癌细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05),而Gem组和3TSR Gem组细胞凋亡率显著大于对照组和3TSR组(P<0.05);3TSR组及3TSR Gem组血管内皮细胞凋亡率又高于对照组和Gem组(P<0.05)。结论3TSR体内外对胰腺癌细胞无直接增殖抑制及诱导凋亡作用,但能显著减少肿瘤体积,其机制可能与诱导内皮细胞凋亡有关;3TSR与化疗药物Gem合用未明显提高胰腺癌的治疗效果。     

抑制miR-691通过调控VIM对人胰腺癌BXPC-3细胞侵袭转移的影响

目的探讨微小RNA-691(miR-691)在胰腺癌细胞系中表达状况及抑制miR-691对人胰腺癌BXPC-3细胞生物学行为的影响。方法 miR-691采用实时荧光定量PCR检测。人工化学合成抑制miR-691并转染BXPC-3细胞。流式细胞术检测细胞凋亡情况。通过Transwel~x室细胞侵袭转移实验检测BXPC-3细胞侵袭转移能力。结果人胰腺癌细胞系中BXPC-3对miR-691呈高表达;转染抑制miR-691后,BXPC-3细胞miR-691表达下降,其细胞凋亡无显著改变(P0.05);而转染抑制miR-691组中通过Transwel小室的细胞数明显高于空白组和对照组(P0.01)。结论 miR-691可有望成为人胰腺癌基因治疗的候选靶点。     

LDH-A shRNA对人胰腺癌细胞系PANC-1增殖凋亡和LDH-A表达的影响

目的 通过构建乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase,LDH-A)shRNA并转染PANC-1细胞,分析其对胰腺癌细胞生物学特性的影响.方法 构建3条LDH-A shRNA质粒,脂质体转染质粒至PANC-1细胞中,实时荧光定量PCR法检测不同质粒转染后LDH-A mRNA的表达变化.将抑制效率最高的shRNA质粒-3转染PANC-1细胞,MTT法检测转染前后细胞增殖的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.RT-PCR检测LDH-A表达以及酶化学染色检测转染前后LDH活性的变化.结果 3种LDH-A shRNA质粒转染胰腺癌细胞后,LDH-A shRNA质粒.3的2-△△Ct值为(0.47±0.02),较正常细胞(0.71±0.01)小,存在抑制作用,且抑制效率较高.PANC-1细胞在转染shRNA质粒-3后12 h转染组吸光度值显著低于对照组,细胞出现增殖抑制,24、36、48和72 h,转染组的吸光度值均显著低于对照组(P<0.01).转染质粒组细胞凋亡也明显增高,其凋亡率达到61.74%;转染shRNA质粒-3的胰腺癌细胞株,其LDH-A mRNA的表达明显抑制,酶化学染色显示LDH活性明显减弱.结论 LDH-A shRNA通过抑制胰腺癌细胞LDH-A mRNA的表达抑制其增殖及诱导细胞凋亡.     

生长抑素对鼠胰腺癌细胞凋亡的影响

目的观察在外源性类生长抑素善宁治疗后SD大鼠胰腺癌细胞凋亡的变化. 方法诱导大鼠胰腺癌模型, 模拟临床使用善宁治疗鼠胰腺癌, 于治疗后的第14d获取标本,采用原位末端标记法检测胰腺癌细胞凋亡状况.结果善宁治疗后, 胰腺癌肿瘤细胞凋亡指数与治疗前比较有所增高,但差异并无显著性(P>0.05).结论善宁对胰腺癌肿瘤细胞凋亡无明显影响.     

血管生长抑素基因抑制胰腺癌裸鼠移植瘤血管生成的实验研究

目的:探讨人血管生长抑素基因对胰腺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法:建立人胰腺癌细胞株BXPC-3裸鼠移植瘤模型,应用人血管生长抑素基因质粒转染胰腺癌裸鼠移植瘤,观察移植瘤生长情况。采用免疫组织化学技术检测肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)表达情况和微血管密度(MVD)差异,透射电子显微镜观察肿瘤细胞情况。结果:治疗组肿瘤体积明显小于空白对照组和空质粒组(P<0.01),VEGF主要表达在肿瘤细胞的胞质内,治疗组、空白对照组和空质粒组平均灰度分别为179.57±5.22、150.87±3.44和163.40±3.54;阳性单位分别为14.94±2.26、31.26±2.72和29.21±2.95;MVD分别为10.60±74.56、19.33±2.52和18.67±5.29,治疗组与空白对照组和空质粒组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。电子显微镜下治疗组可见大量肿瘤细胞坏死。结论:人血管生长抑素基因能明显抑制胰腺癌裸鼠移植瘤血管生成,促进肿瘤细胞坏死,进而抑制肿瘤生长。     

苯乙酸抑制胰腺癌BXPC-3细胞增殖及RNA编辑酶表达的研究

目的 探讨苯乙酸对胰腺癌诱导分化作用及RNA编辑在胰腺癌细胞增殖分化过程中的作用机理.方法 采用MTT比色法和流式细胞术检测苯乙酸对胰腺癌BXPC-3细胞系增殖抑制作用及对BXPC-3细胞周期的影响.RT-PCR方法检测RNA编辑酶ADAR mRNA在胰腺癌细胞系和胰腺癌组织中的表达以及应用苯乙酸后ADAR mRNA表达的变化.结果 人胰腺癌组织及胰腺癌BXPC-3细胞中均可检测到编辑酶ADAR2.应用1.0及2.0mmol/L苯乙酸后24h及72 h,BXPC-3细胞增殖抑制率增加,G0/G1期比例下降,S期比例显著升高.ADAR2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 ADAR2可能在胰腺细胞增殖分化过程中发挥作用,且苯乙酸可能通过调控ADAR2 mRNA的表达来发挥诱导分化作用.     

转染SSTR2对胰腺癌细胞的促凋亡作用

目的 通过包含SSTR2基因的重组腺病毒(AdCAG-SSTR2)转染人胰腺癌细胞,观察对胰腺癌细胞肿瘤特性的影响.方法 分别应用空载体、AdCAG-SSTR2转染SSTR2阴性的人胰腺癌细胞株BxPC-3.逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分析检测SSTR2在细胞中的表达.非转染细胞、转染空载体细胞和转染AdCAG.SSTR2细胞直接计数测定细胞生长速度.采用膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭(Annexin V/PI)标记法检测细胞凋亡.RT-PCR检测PCNA、bax和bcl-xl的表达.结果 AdCAG.SSTR2转染胰腺癌细胞后可以检测到SSTR2 mRNA和蛋白的稳定表达,转染AdCAG-SSTR2后细胞生长受到抑制,与对照组差异有统计学意义(P＜0.01);细胞凋亡率较对照组明显升高(P＜0.01);PCNA的表达无明显变化,是对照组的1.04倍;bax的表达明显升高,是对照组的3.18倍;bcl-xl的表达明显降低,是对照组的0.34倍.结论 SSTR2通过诱导胰腺癌细胞凋亡发挥抗肿瘤增殖的作用,其机制与上调bax的表达,下调bcl-xl的表达有关.     

目前国内普通外科临床科研中存在的主要问题

自1978年恢复研究生招生工作以来,同其他临床医学学科一样,普通外科的临床科研工作取得了长足进步,获得了一些有创造性的科研成果,为推动我国普通外科事业的发展作出了较大的贡献。近年,我国普通外科领域的科研论文数量增长较快,但不可否认的是,目前我国普通外科研究领域仍存在     

2015年乳腺癌辅助化疗进展

【摘要】〓乳腺癌是危害我国女性健康的头号杀手,尽管近年来辅助化疗的研究进展突飞猛进,但临床中仍有不少问题未能明确,如辅助化疗的合适人群、化疗的开始时间、蒽环及紫杉类的地位和用法、强化维持治疗的作用、疗效及预后的生物标志物等。本文结合乳腺癌辅助化疗在临床上的常见问题和2015年各大乳腺癌会议阐述乳腺癌辅助化疗的最新进展。     

Changes in neuroendocrine elements in bronchial mucosa in chronic lung disease in adults.

BACKGROUND--It is not clear whether there is any association between metaplasia of the bronchial epithelium and changes in the distribution of neuroendocrine cells. This study examined, by immunohistological techniques, the distribution of neuroendocrine cells and juxtamucoscal nerve fibres in bronchial biopsies showing metaplastic changes. METHODS--Bronchial biopsies from 12 subjects with epithelial metaplasia associated with bronchiectasis and diffuse pulmonary fibrosis were examined by conventional light microscopy and immunohistological techniques for protein gene product 9.5 (PGP), chromogranin A and B (CAB), serotonin, vasoactive intestinal peptide (VIP), substance P (SP), calcitonin gene-related peptide (CGRP), calcitonin (CT), and gastrin releasing peptide (GRP). RESULTS--Regions of non-metaplastic epithelium contained numerous PGP and serotonin immunoreactive cells. Sub-populations of these cells displayed CAB, CGRP, CT, and GRP immunoreactivity. Metaplastic epithelium contained only a few weakly stained PGP, serotonin, CAB, GRP, CT and CGRP immunoreactive cells in six cases. Metaplastic epithelium was characterised by a high number of CAB-containing cells in six cases and in these biopsies prominent PGP-containing nerve bundles were seen in the subepithelial layer beneath the metaplastic epithelium. CONCLUSIONS--The distribution patterns of neuroendocrine cells and neuronal elements vary between areas of normal and metaplastic epithelium and within areas of metaplastic epithelium. Neuronal hyperplasia was associated with an increase in the number of CAB-containing cells within the metaplastic epithelium.     

Disparities in Amputations in Minorities

Background  

As a result of the impact of health disparities on the healthcare system such as their influence on arenas significant to healthcare distribution, including cost, quality, and access, identification and resolution of health disparities is a primary national agenda item. Resolution of disparities in amputation is an area of opportunity that warrants further consideration.