铁皮石斛叶片多糖和醇溶性浸出物动态积累规律研究

该文通过揭示铁皮石斛叶片多糖和醇溶性浸出物含量的动态变化规律,为铁皮石斛叶片资源的开发利用提供依据.采用苯酚-硫酸法和醇溶性浸出物热浸法测定铁皮石斛3个优良品系不同月份的叶片中多糖和浸出物含量.结果表明,铁皮石斛叶片多糖质量分数为4.45％ ～ 12.17％,约为茎的1/4,醇溶性浸出物质量分数为7.45％ ～29.34％,约为茎的1.5倍.铁皮石斛叶片多糖含量变化与物候期密切相关,冬季、萌芽初期和落叶期植株代谢水平降低,叶片多糖含量减少;植株生长旺盛期,叶片多糖含量较高.叶片中浸出物含量在萌芽前达到最高值,促进了新芽的萌动.     

铁皮石斛F1代多糖和醇溶性浸出物变异规律研究

采用苯酚-浓硫酸法和醇溶性浸出物热浸法测定11个铁皮石斛F₁代家系多糖和浸出物的含量,结果表明5月与2月采集的样品多糖质量分数分别为32.89%~43.07%,25.77%~35.25%,醇溶性浸出物质量分数分别为2.81%~4.85%,7.90%~17.40%,家系间存在显著差异;多糖含量低的亲本通过与多糖含量高的亲本杂交,能显著提高子代多糖含量,杂交优势明显,杂交育种是提高铁皮石斛多糖含量而进行品种选育的有效途径。采收时间显著影响铁皮石斛多糖和浸出物含量,所有家系5月采样多糖含量均高于2月,浸出物含量则相反,但不同家系变化幅度差别很大,各个家系有其自身规律,研究铁皮石斛优良家系(品种)多糖和浸出物积累规律,确定其最佳采收时间,对充分发挥优良品种作用、提高药效具有重要意义。     

铁皮石斛多糖的研究

 目的 研究铁皮石斛多糖DT2,DT3的化学结构。方法 运用糖组成分析、甲基化分析及NMR等方法确定多糖的结构。结果 DT2,DT3的数均分子量分别为7.4×10⁵,5.4×10⁵,主要含有葡萄糖、半乳糖、木糖及少量阿拉伯糖和甘露糖,摩尔比分别为5.9:1.0:1.0:0.8:0.5和7.9:1.3:1.0:0.5:0.7。结论 这两个多糖为首次从铁皮石斛中分离得到。     

铁皮石斛原球茎多糖的研究

 目的 研究铁皮石斛原球茎多糖的理化性质。方法 经过水提醇沉、脱蛋白和透析等步骤获得铁皮石斛粗多糖（CDO）和原球茎粗多糖（CDOP）;CDOP经过纤维素DE-52和葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析获得6个均一多糖;用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定均一多糖的纯度及相对分子质量;用气相色谱法（GC）分析粗多糖和均一多糖的单糖组成;用高碘酸氧化-Smith降解反应研究均一多糖的一级结构。结果 CDO主要由甘露糖和葡萄糖组成,物质的量比为4.29∶1.00;CDOP主要由半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成,物质的量比为2.80∶1.00∶0.61。从CDOP中获得了6个质量均一的多糖,分别为DOPW-1（78×103）、DOPW-2（37×103）、DOPS1-1（287×103）、DOPS1-2（351×103）、DOPS1-3（335×103）和DOPS1-4（171×103）;它们的单糖组成及物质的量比等特点与DOP的相同;各均一多糖分子中的1→3糖苷键均主要由半乳糖组成,还含有阿拉伯糖、葡萄糖和鼠李糖;除DOPS1-4外,各均一多糖的一级结构中均不存在1→4糖苷键。结论 这6个均一多糖为首次从铁皮石斛原球茎中得到。     

我国近5年铁皮石斛多糖研究概况

铁皮石斛是我国传统的名贵中药,其药用价值备受历代医者推崇,享有救命仙草的美称.现代药理研究表明铁皮石斛多糖具有广泛的生物活性,故成为了现代的研究热点,近几年对其研究特别活跃,相关的研究成果报道也增加很快.查阅最近5年国内关于铁皮石斛多糖的文献资料,并对这些文献资料进行整理、分析和归纳,系统地总结了国内近5年关于铁皮...     

超声法提取铁皮石斛多糖工艺的研究

目的:探索铁皮石斛多糖的超声波提取工艺条件.方法:考察提取温度、固液比、提取时间和超声频率4个因素对铁皮石斛多糖提取得率的影响.在单因素实验的基础上,通过正交试验优化提取工艺.结果:综合确定的优化提取工艺条件为:1∶ 30的料液比,50℃超声水浴,45 kHz超声频率,提取1.5 h,在此条件下铁皮石斛多糖的平均提取得率为15.3%,结论:超声提取法的多糖得率大于常规水提法,更加高效.     

铁皮石斛悬崖附生栽培技术研究

以铁皮石斛设施栽培投入大、药材功效不如野生等问题为导向,通过水分调控、崖壁坡度选择,研究悬崖附生铁皮石斛生长情况、农艺性状、产量、多糖及醇溶性浸出物含量.结果表明,将铁皮石斛附生于85 ～ 90°悬崖表面,在生长季节喷水1 ～2 h·d-1的条件下,即使在裸露的环境中,不用基质,不施肥料也能够较好的生长,获得较高的产量,其形态与悬崖上野生铁皮石斛无异;多糖与醇溶性浸出物含量显著高于设施基质栽培,并与萌蘖生理年龄密切相关,逆境有利于铁皮石斛多糖与醇溶性浸出物等功效成分的积累.     

铁皮石斛多糖的提取、分离和分析

从铁皮石斛中提取制备一种水溶性多糖物质，具有显著性增强免疫功能的效应。其单糖组分由Ｄ－木糖、Ｌ－阿拉伯糖和Ｄ－葡萄糖组成，多糖含量达２２．７％。     

铁皮石斛快繁及多糖含量测定

目的测定铁皮石斛组培苗的多糖含量。方法对铁皮石斛进行组织培养,用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛组培苗的多糖含量。结果铁皮石斛组培苗的多糖含量为25.09%。结论铁皮石斛组培苗的多糖含量达到2010版《中华人民共和国药典》的规定标准,具有一定的药用价值。     

铁皮石斛试管苗栽培技术研究

目的:提高铁皮石斛试管苗移栽成活率,以实现产业化生产。方法:采用不同基质、不同来源种苗及在不同海拔高度栽培试验。结果:原球茎增殖超过4代或者茎段增殖超过6代的试管生根苗的移栽成活率显著下降;海拔高度对移栽成活率没有显著影响,但生长质量及石斛多糖含量有明显的差异;移栽的基质以松树皮与碎石、花生壳与碎石综合效果较好,移栽成活率达到95%以上。结论:种苗质量及适当的栽培基质是实现铁皮石斛组培苗产业化生产的根本保证,采用“平地育苗,高山栽培”是保证铁皮石斛药材质量的有效方式。     

基于多糖和黄酮类成分的铁皮石斛优良内生真菌筛选

为了揭示铁皮石斛内生真菌与功效成分的关系,该研究利用HPLC和紫外分光光度法测定21种铁皮石斛内生真菌菌丝及发酵液提取物中糖类和黄酮类成分。结果表明:21个供试菌株发酵产物乙酸乙酯提取物中均可检测到黄酮类成分,对比色谱保留时间和紫外光谱特征,发现DO49可产柚皮素,DO23,DO81,DO83可产芦丁;21个供试菌株发酵产物水提取物中均检测到多糖,但不同菌株单糖的组成存在差异,参照单糖种类以及甘露糖/葡萄糖的峰面积比,筛选与铁皮石斛多糖相关的优良菌株DO23,DO26,DO81,DO54,DO55,DO83。综合糖类和黄酮类两类成分,筛选出优良菌株DO23,DO81,DO83,既能产生与铁皮石斛相同的黄酮成分,又能产生单糖组分与铁皮石斛相近的多糖。     

铁皮石斛2种采收方式的比较

为了规范铁皮石斛采收方式,提高药材质量与产量,通过田间试验、多糖与浸出物含量的测定,比较保留母条与全采2种采收方式对铁皮石斛农艺性状、产量与质量的影响。结果表明,采收方式显著地影响铁皮石斛生长,保留母条能显著地促进铁皮石斛萌蘖数和茎长、茎节数、茎节间距的生长,提高单位面积茎鲜重、叶鲜重、总鲜重、茎干重,对茎粗、茎中多糖含量没有促进作用。铁皮石斛采收过程中,适度保留部分母条,有利于促进新芽萌动与生长,提高铁皮石斛药材的产量,并可通过调整栽培密度与光照保证多糖含量。     

铁皮石斛悬崖峭壁生长的生态基础

为了使铁皮石斛回归自然,在临安市天目山野生铁皮石斛自然分布区域建立不同坡度、不同坡向岩壁模型,用MHWS01温湿度自动记录仪全天候自动记录温度和湿度,结果表明:岩壁的坡度显著地影响岩壁表面的极端温度,夏季,水平的岩壁表面极端温度可高达69.4℃以上,垂直岩壁表面温度不高于50℃,冬季,垂直岩壁表面温度较高,低温持续的时间更短;岩壁坡度还显著地影响岩壁表面的湿度,垂直岩壁表面月均湿度都在80%RH以上;岩壁的坡向对岩壁表面的温度有显著的影响,但对垂直岩壁的日均温与极端温度影响不显著,对岩壁表面的湿度也有显著的影响。岩壁坡度通过影响岩壁表面的极端温度影响铁皮石斛生存,还通过影响岩壁表面的湿度影响铁皮石斛生长,岩壁坡度的选择是铁皮石斛岩壁附生栽培成败的关键。     

铁皮石斛品系与部位对氨基酸含量的影响

通过揭示铁皮石斛氨基酸在不同品系与部位的变异规律,为优良品种选育和药(食)用部位扩大应用提供理论依据.研究结果表明:铁皮石斛11个品系的叶片中总氨基酸平均质量分数为7.43％,茎为1.91％,叶片显著高于茎,且氨基酸组成接近FAO/WHO提出的理想蛋白质的标准,具有良好的功能食品开发前景;其中产量高、多糖含量高的9×66优良品系叶片和茎中各种氨基酸含量均为最高,表明通过杂交育种可选育综合性状优良的品种.此外,铁皮石斛2个主要采收期的样品氨基酸含量有显著差异,铁皮石斛叶片适合随茎一同在开花前采收.     

铁皮石斛附生树种对多糖含量的影响

为了揭示附生树种对铁皮石斛多糖含量的影响,通过采集野外与设施地不同树种上附生的铁皮石斛,并用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛多糖含量。结果表明,不同附生树种铁皮石斛多糖含量差异极显著,但多糖含量与附生树种树皮形态、树皮中的营养相关性不显著,而与附生树种上铁皮石斛接受的光强有关。树种通过对光照调控的生物特性对其附生的铁皮石斛多糖含量产生的影响。     

双阻滞位点特异性PCR鉴别铁皮石斛及其近缘物种

建立一种快速、准确鉴别铁皮石斛加工制品的方法。该研究通过对Gen Bank数据库收录的铁皮石斛及其同属近缘物种的ITS序列进行对比分析,根据变异位点设计双阻滞位点特异性鉴别引物,并优化PCR条件,对铁皮石斛及其69种近缘种共362个样品进行扩增和检测。结果显示,在退火温度为60℃的同一PCR反应中,铁皮石斛均扩增出397 bp条带,而其他69种近缘物种均无条带,且该方法灵敏度高,检出限可达0.03 mg·L~(-1)。该文所建立的位点特异性PCR方法可实现铁皮石斛的准确鉴别,具有操作简便、稳定可靠、应用范围广的优点。     

铁皮石斛转录因子基因DoWRKY1的克隆与表达分析

WRKY转录因子是植物中发现的新型转录调控因子,在调控植物生长发育和代谢等生理过程中发挥重要作用。该研究采用RT-PCR和RACE技术从铁皮石斛Dendrobium officinale中克隆得到一个新的WRKY转录因子基因cDNA全长,命名为DoWRKY1,提交GenBank获得登录号KF716131。生物信息学分析表明,该基因全长cDNA为1 704 bp,其中开放阅读框 (ORF) 1 629 bp,编码1条由542个氨基酸组成的多肽,具有2个WRKY保守结构域,属于WRKY家族第Ⅰ类转录因子。酵母单杂交表明,DoWRKY1可以激活下游报告基因 (His3,Ade2) 的表达,具有转录激活功能,属于转录激活子。半定量RT-PCR显示,DoWRKY1在根、茎、叶和类原球茎中均有表达。qRT-PCR分析表明,DoWRKY1响应茉莉酸甲酯 (MeJA) 和壳聚糖 (chitosan) 诱导,分别在2 h和1 h,表达量达到最高峰。研究结果为进一步研究其在铁皮石斛次生代谢过程的调控功能奠定基础。