白头翁汤正丁醇提取物对碱性pH条件下白念珠菌VVC临床株形态转化的影响

目的:探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)在碱性条件下对白念珠菌VVC(vulvovaginal candidiasis)临床分离株酵母-菌丝形态转化的影响。方法:采用肉汤稀释法测定白头翁汤不同溶剂萃取物对VVC临床株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);倒置显微镜观察不同p H环境下VVC临床株形态;采用XTT还原法评价在p H 8.0时菌丝活性;扫描电镜观察白念珠菌菌丝形态;荧光显微镜观察菌体代谢活力;固体培养基上观测菌落形态;半固体培养基上观察菌丝侵袭能力;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测菌丝特异性基因ALS3,CSH1,SUN41,HWP1和Ca PDE2的表达量。结果:白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对VVC临床株的MIC为64~128 mg·L-1,低于总提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和水提取物的MIC;p H 8.0时VVC临床株的菌丝形成能力最强;扫描电镜结果显示512,1 024 mg·L-1的BAEB明显抑制VVC临床株的形态转化,荧光显微镜结果显示1 024 mg·L-1的BAEB可以降低VVC临床株的代谢活性;512,1 024 mg·L-1BAEB浓度的固体菌落未出现褶皱,1 024 mg·L-1BAEB浓度的半固体培养基内部未见菌丝侵袭;qRT-PCR检测显示1 024 mg·L-1时,ALS3,CSH1,SUN41,HWP1分别下调4.26,3.2,2.74,5.12倍,Ca PDE2上调2.38倍。结论:BAEB在碱性p H条件下对白念珠菌VVC临床株的形态转化具有抑制作用。     

白头翁汤正丁醇提取物对热带念珠菌毒力因子的影响

目的:探讨白头翁汤正丁醇提取物butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB对热带念珠菌(Candida tropicalis)毒力因子细胞表面疏水性、菌丝及生物膜形成的影响。 方法:采用微量稀释法测定BAEB对热带念珠菌的最低抑菌浓度(MIC);XTT还原法测定BAEB对热带念珠菌生物膜抑制作用(SMIC₈₀),Time-Kill法检测BAEB对热带念珠菌活菌数的动态影响;水-烃两相法测定BAEB对热带念珠菌细胞表面疏水性(cell surface hydrophobicity,CSH)的影响;荧光显微镜观察BAEB对热带念珠菌菌丝形态的影响;扫描电镜观察BAEB对热带念珠菌生物膜形态的影响;激光共聚焦显微镜检测BAEB对热带念珠菌生物膜荧光信号强度的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测菌丝及生物膜相关基因UME6,NRG1,ALST3的表达量变化。 结果:BAEB对9株热带念珠菌的MIC在64~128 mg·L^-1,对热带念珠菌生物膜的SMIC₈₀为256~512 mg·L^-1,FLZ对热带念珠菌的MIC在1~1 024 mg·L^-1,SMIC₈₀为1 024 mg·L^-1或以上,Time-Kill曲线显示256,512 mg·L^-1BAEB具有明显的杀菌作用,CSH实验显示128,256,512 mg·L^-1BAEB均能够降低其表面疏水性,SEM观察到512 mg·L^-1BAEB能够有效抑制热带念珠菌在硅胶导尿管上生物膜完整度,CLSM显示256,512 mg·L^-1BAEB可以明显降低生物膜荧光信号强度,qRT-PCR检测显示在256,512 mg·L^-1BAEB作用下,ALST3,UME6基因表达量显著下调,NRG1无明显变化。 结论:BAEB可以抑制热带念珠菌细胞表面疏水性、菌丝及生物膜形成等毒力因子。     

黄连提取物体外对白念珠菌丝侵袭的抑制作用

该文探讨黄连提取物(extract of Coptidis Rhizoma,ECR)体外对白念珠菌丝侵袭的抑制作用。以XTT还原法评价ECR对白念珠菌丝代谢活性的影响;固体培养基上观测白念珠菌落边缘生长的情况;半固体培养基上观察ECR如何影响白念珠菌丝生长;扫描电镜观察ECR对白念珠菌丝形态的影响;荧光显微镜观察ECR对白念珠菌丝形态及活力的变化;qRT-PCR法检测白念珠菌丝侵袭素ALS3,SSA1基因的表达。结果显示,XTT法检测到在64,128,256 mg·L-1ECR干预下,白念珠菌丝活性逐渐降低;128,256 mg·L-1ECR在固体培养基上可抑制菌落褶皱,在半固体培养基中可明显抑制菌丝侵袭性生长;扫描电镜与荧光显微镜下发现,128,256 mg·L-1ECR能显著抑制白念珠菌丝形成;qRT-PCR法显示,64,128,256 mg·L-1ECR作用下,侵袭素ALS3,SSA1基因表达均下调,且在256 mg·L-1ECR干预下,侵袭素ALS3,SSA1基因表达分别下调4.8,1.68倍。该研究表明,黄连提取物通过抑制菌丝生长及侵袭素表达从而影响白念珠菌的侵袭力。     

龙胆泻肝汤不同提取部位对白念珠菌生物膜的抑制作用研究

目的： 观察龙胆泻肝汤提取物体外对白念珠菌生物膜形成影响,探讨其可能的作用机制。方法：采用XTT法和微量稀释法筛选龙胆泻肝汤各提取部位的抗菌活性并检测各提取物对白念珠菌生物膜的抑制作用。采用实时荧光定量PCR法检测其黏附相关基因ALS1和菌丝形成基因SUN41的表达量。结果：龙胆泻肝汤用石油醚、水、正丁醇、甲醇及乙酸乙酯提取部位对白念珠菌浮游菌的MIC分别为>1 000,>1 000,>1 000,125,125 mg·L^-1;对白念珠菌生物膜的SMIC₅₀分别为>1 000,>1 000,>1 000,500,500 mg·L^-1;SMIC₈₀分别为>1 000,>1 000,>1 000,>1 000,1 000 mg·L^-1;1 000 mg·L^-1的乙酸乙酯提取物能明显抑制黏附相关基因ALS1和菌丝形成基因SUN41的表达。结论：龙胆泻肝汤抗白念珠菌生物膜的活性部位为乙酸乙酯提取部位。     

白鲜皮提取物体外抗白念珠菌生物膜作用及相关基因的研究

目的:研究白鲜皮提取物在体外对白念珠菌生物膜及相关基因的影响。方法:M27-A2测定白鲜皮提取物对白念珠菌的最小抑菌浓度(MIC);XTT法评价白鲜皮提取物对白念珠菌生物膜形成及细胞黏附的影响;实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测白鲜皮提取物作用后,ALS3、HWP1基因表达情况。结果:白鲜皮提取物对白念珠菌的MIC为128μg/m L;对生物膜的SMIC50和SMIC80分别为256μg/m L和512μg/m L;与空白对照组相比,不同浓度白鲜皮提取物(16~512μg/m L)对培养1、2、3、4 h的白念珠菌细胞黏附均有明显抑制作用(P0.05);qRT-PCR结果显示药物作用后ALS3、HWP1基因表达降低(P0.05)。结论:白鲜皮提取物对体外白念珠菌生物膜有较明显的抑制作用,其机制可能通过抑制ALS3、HWP1等相关基因的表达,从而抑制Ras/c AMP通路的功能。     

穿心莲内酯衍生物炎琥宁对大鼠体内白念珠菌生物膜的影响

目的:探讨穿心莲内酯(AG)衍生物炎琥宁(YHN)对大鼠体内白念珠菌生物膜的影响。方法:构建白念珠菌生物膜大鼠皮下导管模型,采用YHN(40,20,10,5,2.5 mg·kg-1)腹腔注射治疗,设氟康唑(FLC)阳性对照组(80 mg·kg-1),7d后计数导管的菌落形成单位(CFU),XTT代谢法评估YHN对体外白念珠菌生物膜的影响;扫描电镜(SEM)观察YHN干预大鼠体内生物膜的形态变化;采用实时荧光定量PCR法检测白念珠菌黏附相关基因ALS1,ALS3,HWP1,EAP1和MP65的表达量。结果:YHN组导管片上CFU明显少于空白组;XTT代谢活性也显示YHN组低于空白组,且呈剂量依赖性;扫描电镜照片显示YHN能显著减少白念珠菌对大鼠体内导管的黏附;qRT-PCR结果显示,YHN可下调ALS1,ALS3,HWP1,EAP1和MP65的表达量。结论:YHN能抑制大鼠体内白念珠菌生物膜。     

黄连解毒汤联合氟康唑对耐药白念珠菌麦角甾醇的影响

目的:探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Huanglian Jiedu decoction,EAHD)联合氟康唑(fluconazole,FLZ)对耐药白念珠菌生物膜麦角甾醇的影响。方法:采用CLSI M27-A3的微量稀释法测定EAHD与FLZ对白念珠菌FLZ耐药株的MIC与SMIC80;棋盘稀释法测定EAHD与FLZ联用对白念珠菌的协同效应;稀释涂布平板法考察EAHD与FLZ联用不同时间对菌体的杀伤作用;分别用HPLC和qRT-PCR法检测耐药白念珠菌生物膜麦角甾醇含量及相关基因的变化。结果:对于9株白念珠菌FLZ耐药株,EAHD对其MIC介于156~1 250 mg·L-1,FLZ对其MIC介于256~2 048 mg·L-1以上,二者联用后MIC显著降低,FICI(部分抑菌浓度指数)最低达0.066;EAHD单用对其SMIC80均高于1 250 mg·L-1,FLZ单用对其SMIC80均高于512 mg·L-1,最高可达2 048 mg·L-1以上,联用组除个别组具有相加作用外也均有协同效应。时间杀菌(time kill,TK)实验显示当作用12 h,二者联用杀菌效应最强。HPLC结果显示联用组、EAHD组与空白组麦角甾醇量相比,分别降低了近85%,50%。qRT-PCR检测FLZ组ERG1,ERG2,ERG6,ERG7,ERG11均上调,ACS1,ACS2,MET6均下调;EAHD组所有基因均下调;联用组ERG2,ERG6,ERG11均显著上调,ERG1,ERG7,ACS1,ACS2,MET6均显著下调。结论:EAHD协同FLZ抗白念珠菌耐药株,可能与抑制麦角甾醇合成相关基因的表达来降低麦角甾醇的合成有关,造成细胞膜损伤,抑制菌体生长。     

云南重楼正丁醇提取物对白念珠菌生物膜形成的抑制作用

目的观察云南重楼正丁醇提取物(BEPP)对体外白念珠菌生物膜形成的影响。方法微量稀释法测定BEPP最低抑菌浓度(MIC),XTT法测定生物膜抑制80%浓度(SMIC80),平板法绘制时间-杀菌曲线,扫描电镜(SEM)观察生物膜形态结构,激光共聚焦显微镜(CLSM)观测生物膜厚度,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测生物膜形成相关基因HWP1、MP65、SUN41表达量的变化。结果 BEPP对白念珠菌的MIC为32~128μg/m L,对白念珠菌生物膜的SMIC80为128~512μg/m L,时间-杀菌曲线显示BEPP具有良好的杀菌作用,SEM观察到BEPP有效抑制白念珠菌生物膜形成,CLSM显示BEPP可以降低生物膜厚度,q RT-PCR检测显示在BEPP作用下,HWP1、MP65、SUN41基因表达量均显著下调。结论 BEPP可以有效抑制体外白念珠菌生物膜的形成。     

姜黄素对5种非白念珠菌菌丝及生物膜形成的抑制作用

目的观察姜黄素对5种非白念珠菌菌丝及生物膜形成的抑制作用。方法测定姜黄素对热带念珠菌Candidatropicalis、光滑念珠菌C.glabrata、近平滑念珠菌C.parapsilokis、克柔念珠菌C.Krusei、季也蒙念珠菌C.guilliermondii的最小抑菌浓度(MIC)以及抑制50%生物膜浓度(SMIC50),利用光学显微镜观察姜黄素对非白念珠菌菌落形态的影响,利用倒置显微镜与扫描电镜分别观察姜黄素对非白念珠菌菌丝形成以及生物膜形成的影响。结果姜黄素对热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌的MIC分别为64、128、256、256、128μg/m L;SMIC50分别为512、512、512、512、512μg/m L;倒置显微镜与扫描电镜观察发现姜黄素对5种非白念珠菌菌丝以及生物膜的形成均有抑制作用。光学显微镜观察发现姜黄素能抑制这5种非白念株菌在固体培养基上菌落周边菌丝的形成。结论姜黄素对5种非白念珠菌菌丝及生物膜的形成具有抑制作用。     

盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响

探讨盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响。以微量液基稀释法检测盐酸小檗碱对白念珠菌标准株与临床株的最低抑菌浓度(MIC);spot assay检测白念珠菌落形成;XTT法检测白念珠菌丝代谢;荧光显微镜观察白念珠菌丝活力;扫描电镜观察白念珠菌丝形态;透射电镜观察白念珠菌丝细胞壁结构;流式细胞术检测白念珠菌细胞壁β-葡聚糖暴露程度;qRT-PCR法检测白念珠菌丝特异性基因ECE1及β-葡聚糖合酶调控基因FKS1和FKS2的表达。结果显示,盐酸小檗碱对白念珠菌临床株及标准株的MIC为64~128μg·mL^-1;512μg·mL^-1盐酸小檗碱干预下能抑制白念珠菌落生长,64~512μg·mL^-1盐酸小檗碱能抑制菌丝代谢,512μg·mL^-1盐酸小檗碱能抑制白念珠菌丝活力,256~512μg·mL^-1盐酸小檗碱能抑制形态转化,512μg·mL^-1盐酸小檗碱能明显损伤细胞壁结构,128~512μg·mL^-1盐酸小檗能促进细胞壁β-葡聚糖暴露,512μg·mL^-1盐酸小檗碱能下调白念珠菌丝特异性基因ECE12.72倍及β-葡聚糖合成酶调控基因FKS1与FKS2分别3.49,3.26倍。研究表明,一定浓度的盐酸小檗碱可能通过下调白念珠菌丝特异性基因及β-葡聚糖合成酶相关基因的表达,从而破坏白念珠菌细胞壁的结构并促使β-葡聚糖暴露,进而影响整个细胞壁的完整性。     

黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对光滑念珠菌黏附作用的影响

目的:探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Huanglian Jiedu decoction,EAHD)对光滑念珠菌Candida glabrata黏附作用的影响。方法:采用二倍稀释法测定黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对光滑念珠菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);采用XTT还原法评价EAHD对光滑念珠菌黏附作用的影响;利用倒置显微镜、扫描电子显微镜与荧光显微镜观察EAHD对光滑念珠菌早期黏附形态学影响;采用半定量与实时荧光定量PCR检测其黏附相关基因EPA1,EPA6和EPA7的表达量。结果:EAHD对光滑念珠菌的MIC为320 mg·L-1,阳性对照药氟康唑对光滑念珠菌的MIC为1 mg·L-1;EAHD对光滑念珠菌2,4 h的黏附的干预作用较明显,其中对4 h效果优于2 h;PCR结果显示EAHD可显著抑制EPA1,EPA6和EPA7的表达。结论:EAHD可能通过抑制光滑念珠菌部分黏附基因的表达而抑制其早期黏附。     

Gomisin M1协同氟康唑对耐药白念珠菌毒力因子的作用研究

目的 探讨gomisin M1(从五味子科植物中提取的木脂素类成分)联合氟康唑抗耐药白念珠菌的作用及其机制.方法 采用倍比微量稀释法检测gomisin M1联合氟康唑对白念珠菌的最小抑菌浓度;通过时间-生长曲线动态观察gomisin M1联合氟康唑对白念珠菌的抑制作用;采用倒置显微镜观察gomisin M1联合氟康唑在...     

鲍氏针层孔菌的形态学观察

 目的对鲍氏针层孔菌的形态结构特征深入了解。方法对鲍氏针层孔菌的菌落、菌球、营养菌丝和子实体进行观察。结果菌落菌丝初期为白色,后逐渐变为淡黄色、黄色至黄褐色;营养菌丝多分枝,可见菌丝横隔,无锁状联合;菌球呈规则的圆球状,表面具柔软的毛刺;子实体呈半圆形、马蹄形或覆瓦状;担孢子卵圆形,平滑,(3.51～4.06)×(2.18～3.01)μm。结论鲍氏针层孔菌的形态学研究,有助于该菌和其他相似物种进行区别。     

白头翁汤正丁醇提取物抑制白念珠菌细胞膜

该文探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)对白念珠菌细胞膜的抑制作用。以Spot assay观察BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;酶标仪检测BAEB干预后白念珠菌细胞内渗透压变化;荧光显微镜观察BAEB对白念珠菌细胞膜通透性的影响;高效液相检测白念珠菌细胞膜麦角甾醇的含量;q RT-PCR法检测细胞膜麦角甾醇生物合成相关基因的表达。结果显示,256,512,1 024 mg·L~(-1)BAEB干预下白念珠菌活性逐渐降低;512,1 024 mg·L~(-1)BAEB组白念珠菌胞内甘油含量显著性增多(P0.05),与白念珠菌胞内渗透压相关的基因HOG1分别下调9.1,9.3,5.5倍;512,1 024 mg·L~(-1)BAEB组白念珠菌红色荧光细胞明显增多;1 024 mg·L~(-1)BAEB干预后麦角甾醇峰面积为35.884 95,有显著性差异(P0.05);1 024 mg·L~(-1)BAEB干预组ERG1,ERG2,ERG3,ERG4,ERG5,ERG6,ERG10,ERG11,ERG13,ERG24,ERG25,ERG251,ERG26与UPC2分别下调6.58,4.89,4.15,9.24,3.41,9.84,3.08,7.50,5.53,5.90,2.45,3.25,1.98,10.07倍。BAEB可通过抑制麦角甾醇及其生物合成相关基因的表达,进而抑制白念珠菌细胞膜完整性。     

艾叶挥发油诱导白念珠菌凋亡

研究艾叶挥发油(Artemisia argyi essential oil,AAEO)诱导白念珠菌凋亡的活性。实验采用微量液基稀释法检测AAEO对白念珠菌(Candida albicans)SC5314的MIC;采用XTT还原法检测AAEO对白念珠菌SC5314代谢的影响;采用流式细胞仪检测AAEO对白念珠菌SC5314细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平的影响;采用Annexin-V/PI法测定AAEO对白念珠菌SC5314细胞凋亡率的影响;采用荧光显微镜观察AAEO对白念珠菌SC5314细胞Caspase酶活性的影响;采用DAPI染色法观察AAEO对白念珠菌SC5314细胞核固缩的影响。结果显示,AAEO对白念珠菌SC5314的MIC为0.5 mL·L~(-1);XTT代谢活性显示AAEO对白念珠菌SC5314代谢呈剂量依赖性的抑制;0.5 mL·L~(-1)的AAEO干预后,白念珠菌SC5314细胞内活性氧水平显著升高、线粒体膜电位显著降低、凋亡比例明显增加、metacaspase活性显著升高、细胞核固缩。AAEO具有诱导白念珠菌细胞凋亡的活性,该作用可能与ROS积累和线粒体损伤相关。