鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶活性检测方法的建立

 目的  建立鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶 (mouse indoleamine 2,3-dioxygenase,mIDO) 活性检测方法。方法 利用基因工程方法表达纯化重组mIDO (recombinant mIDO,rmIDO),建立酶水平mIDO活性检测体系;构建过表达mIDO的小鼠Lewis肺癌 (Lewis lung cancer,LLC) 细胞株,建立细胞水平mIDO活性检测体系。比较L-1-甲基色氨酸 (L-1-methyl tryptophan,L-1-MT) 在酶及细胞水平上对mIDO及人源IDO （human IDO,hIDO）的抑制作用,测定抑制类型、抑制常数Ki值及半数抑制浓度 (IC50) 值。 结果 L-1-MT对mIDO和hIDO均有抑制作用,抑制类型及抑制常数Ki值相似,但IC50值在酶水平及细胞水平上均有差异。 结论 mIDO酶活性检测体系是筛选IDO抑制剂的有效工具,与hIDO酶活性检测体系联用,能反映种属差异,可更好地利用小鼠模型来替代人类进行IDO抑制剂治疗疾病的研究。     

吲哚胺-2,3-双加氧酶活性与非小细胞肺癌进展的关系

目的 吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)及其介导的色氨酸(tryptophan,Trp)-犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)代谢途径参与了肿瘤免疫逃逸.本研究探讨IDO活性与非小细胞肺癌(NSCLC)临床特征的关系.方法 利用高效液相色谱技术同期检测87例NSCLC患者、41例肺良性肿瘤患者及30例健康对照组血清中Kyn 与Trp浓度,IDO活性以血清中两者比值Kyn/Trp表示.结果 与30例健康对照组相比,NSCLC患者血清Trp水平明显降低 [(36.91 ±9.26)μmol/L vs(44.37±10.18)μmol/L,P＜0.01],其降低程度在NSCLC患者T4 [(35.51±9.12)μmol/L]及N3[(34.58±10.53)μmol/L] 亚组中尤为明显.但肺良性肿瘤组与健康对照组比较,Trp水平无明显差异.NSCLC组代表IDO活性的Kyn/Trp比值较健康对照组明显升高[(49.62 ±14.76)vs(30.32 ±11.43),P＜0.01],其差异有统计学意义.在NSCLC各亚组中,M1亚组的IDO活性程度最高,达到了(55.06±18.54).NSCLC组IDO活性在肿瘤切除术后1周时明显减弱.结论 NSCLC患者体内IDO活性明显增强,且与临床分期呈正相关.提示IDO可能参与了NSCLC的进展,代表其活性的Kyn/Trp 比值可作为判断NSCLC是否有远处转移的潜在指标.     

人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2的表达与纯化

 目的  构建人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2 (human indoleamine 2,3-dioxygenase-2,hIDO2)原核表达载体,表达、纯化获得hIDO2蛋白。方法  采用基因工程手段获得hIDO2原核表达载体并转化表达菌株,筛选合适的重组质粒及异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度进行蛋白表达;通过亲和层析纯化重组hIDO2,BCA法测定蛋白浓度并计算蛋白收率;SDS-PAGE电泳检测hIDO2表达情况,通过软件分析得到蛋白纯度;Western blot检测目的蛋白特异性。结果  重组质粒经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明构建成功;经筛选发现重组质粒pET28a-hIDO2比pGEX-4T-1-hIDO2的hIDO2表达效果好;SDS-PAGE电泳及Western blot均验证了在相对分子质量45 000处的特异性目的条带的存在;经测定及计算得出蛋白纯度为97.1%,蛋白浓度为20 mg/mL,蛋白收率为15 mg/L。结论  成功构建重组质粒用于表达及纯化hIDO2,蛋白浓度、纯度、收率及特异性均较高。     

硫氧还蛋白还原酶活性在肺癌患者化疗前后的变化

目的探讨肺癌病人的血浆硫氧还蛋白还原酶(TR)活性及化疗前后的变化。方法收集2012年10月至2013年1月本院49例肺癌病人化疗前后的血浆和同期49例健康查体人员的血浆,进行硫氧还蛋白还原酶活性检测。结果 49例肺癌病人化疗前血浆TR活性值为4.34±6.52 U/m L,化疗后为3.93±6.30 U/m L,健康查体人员为-5.61±7.39 U/m L,数据均采用LOG(X+4IQR)转换,并经t检验,结果显示,化疗前、后TR活性与健康查体组(对照组)相比较,P均<0.05。化疗前、后TR活性的变化,有统计学差异。结论肺癌病人的TR活性高;肺癌病人化疗前后血浆TR活性随疾病好转有降低。     

吲哚胺2,3-双加氧酶与白血病的关系研究

吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)是一种含铁血红素单体蛋白,其表达和活化可以被干扰素γ强烈诱导。通过催化色氨酸降解,使表达IDO的肿瘤细胞周围形成低色氨酸环境,由于色氨酸是体内必需氨基酸,缺乏色氨酸时蛋白质合成下降,外周T淋巴细胞的增殖受到抑制。目前大量研究表明IDO在白血病细胞中较高表达,抑制T细胞的增生和T细胞介导的免疫反应,使T细胞活化信号转导受阻,诱导白血病细胞发生免疫逃逸。     

急性白血病和恶性肿瘤患者化疗前后血清G—CSF水平的变化及意义

采用ＥＬＩＳＡ方法。检测了３６例急性白血病患者和４２例恶性肿瘤患者化疗前后血清Ｇ－ＣＳＦ水平,结果显示：两组化疗后血清－Ｇ－ＣＳＦ检出率分别为５２％和３３．３％,与化疗前比较无显著差异,而两组病程合并感染者,检出率高达８７．５％和７７．６％,显著高于无感染组（Ｐ〈０．００５）。Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析,急性白血病合并感染血清Ｇ－ＣＳＦ水平与白细胞总数呈负相关。恶性肿瘤仅于化疗后合并感染时,血清     

儿童急性白血病化疗前后血清碱性成纤维细胞生长因子变化及意义

目的:检测血清碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在急性白血病患儿(AL)化疗前后的表达水平,探讨其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附法分别检测63例AL患儿化疗前后及20例健康体检者的血清bFGF水平,比较其在化疗前后关系。结果:AL患儿化疗前血清bFGF水平[(5.15±2.27)ng/mL]明显高于对照组[(2.10±0.30)ng/mL]及化疗后[(2.51±1.27)ng/mL](P均<0.01),AL患儿化疗前bFGF水平与骨髓原始及幼稚细胞数量成正相关(r=0.301;P=0.045)。结论:bFGF与AL发生发展关系密切,动态监测AL患儿的bFGF水平,可能有助于疗效判定。     

哈萨克族食管癌患者外周血吲哚胺2,3双加氧酶与调节性T细胞的相关性

目的探讨外周血吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)与调节性T细胞(Treg)的相关性及与新疆哈萨克族食管癌的关系。方法 RT-PCR法检测43例哈萨克族食管癌患者及20例健康体检者血清IDO mRNA表达水平,流式细胞术检测两组Treg比例。结果哈萨克族食管癌患者外周血中IDO、Treg的表达分别为(1.802±0.518)×103、(7.294±1.797)%,高于健康体检者[(0.147±0.020)×103、(5.732±1.147)%],差异有统计学意义(P<0.05);哈萨克族食管癌患者外周血IDO与Treg呈正相关(r=0.587,P<0.05)。结论新疆哈萨克族食管癌患者外周血中存在Treg比例升高及IDO高表达,IDO可能通过调节Treg促进食管癌的发生,针对IDO的靶向治疗有望为临床食管癌免疫治疗提供新的思路。     

吲哚胺2,3-双加氧化酶1及其抑制剂的研究

 吲哚胺2,3-双加氧化酶1( indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)是肝脏以外催化色氨酸沿着犬尿氨酸途径(kynurenine pathway,KP)分解代谢的限速酶。IDO1过度活化而引起KP的神经毒性产物喹啉酸(quinolinic acid,QUIN)的蓄积,是导致神经紊乱和神经退行性疾病的重要原因。IDO1同时又是免疫耐受酶,在诱导母胎免疫耐受和肿瘤免疫逃逸中均发挥重要作用,被视为新的免疫检查点。IDO1与阿尔茨海默病、老年性白内障、癌症等多种疾病发病机制的相关性已被证实,因此IDO1抑制剂作为极具潜能的药物受到日益广泛的关注。本文就IDO1的生物活性及其抑制剂的研究作一综述。     

宫颈癌患者化疗前后骨桥蛋白表达水平的变化及意义

目的：探讨宫颈癌化疗前后骨桥蛋白（ OPN）含量变化,分析OPN表达对宫颈癌化疗效果的评价价值。方法选取80例接受化疗治疗的宫颈癌患者作为观察对象,对比患者接受化疗前后OPN含量及OPN阳性表达率差异。同时根据化疗结果将患者分为化疗无效组及化疗有效组两组,分别对比两组化疗前后OPN含量及OPN阳性表达率差异。对比化疗效果与治疗前后OPN含量差的相关性。结果患者化疗前OPN含量为（24.88±7.02）ng／mL,OPN阳性表达率为70.00％,明显高于化疗后的（19.77±7.17）ng／mL及41.25％（P＜0.05）。化疗无效组和化疗有效组化疗前的OPN含量及OPN阳性表达率分别为（24.61±7.06） ng／mL、69.39％及（25.15±6.36）ng／mL、70.97％,两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）,化疗后化疗有效组OPN含量及OPN阳性表达率为（17.16±7.12）ng／mL及35.48％,明显低于化疗无效组的（22.61±7.23）ng／mL及59.18％（P＜0.05）。化疗效果与治疗前后OPN含量差存在显著的正向直线相关关系（ P＜0.05）。结论化疗后宫颈癌OPN含量及OPN阳性表达率均明显降低,且以化疗有效者降低更明显。     

IL-6及TNF-α水平在急性白血病患者化疗前后的变化及临床意义

目的 :探讨急性白血病患者化疗前后IL -6及TNF -α水平的变化。方法 :采用生物活性测定法检测30例急性白血病患者化疗前后IL -6及TNF -α水平。结果 :化疗前白血病患者IL -6活性水平较正常对照组明显增高(P<0.05) ,化疗后IL -6活性水平较正常对照组明显降低(P<0.05) ,化疗后明显低于化疗前(P<0.05)。而化疗前白血病患者TNF -α活性水平明显低于正常对照组(P<0.05) ,化疗后TNF -α活性水平明显高于化疗前(P<0.05) ,也较正常有所增高(P<0.05)。结论 :提示IL -6及TNF -α参与急性白血病发病     

丹参酮ⅡA诱导白血病细胞分化前后端粒酶活性变化

持续的端粒酶活性高水平被认为是大部分具有无限增殖能力的永生细胞的一个新指标。抑制端粒酶活性成为肿瘤治疗的一个新思路。丹参酮 A(Tanshinone A,Tan A)是从活血化瘀中药丹参中提取的有效成分。体外研究表明 ,Tan A对多种肿瘤细胞具有诱导分化作用 [1～ 3 ]。本研究应用人白血病细胞株 K5 6 2和 HL- 6 0体外培养 ,对诱导分化前后端粒酶活性变化进行检测 ,以探索 Tan A诱导白血病细胞分化可能的机制。1　材料和方法1 .1　药物及其制备Tan A为中国药品生物制品检定所提供的化学标准品 ,溶解于二甲亚砜 (DMSO) ,DMSO终浓度 0 .0 …     

丹参酮ⅡA诱导白血病细胞分化前后端粒酶活性变化

目的 研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对HL-60和K562细胞的诱导分化作用和分化前后端粒酶活性变化。方法 将HL-60和K562与浓度为0.5μg/ml的TanⅡA分别培养5天或6天，进行形态学观察和NBT染色，并用PCR-TRAP方法检测药物作用前后细胞的端粒酶活性，同时设立ATRA阳性对照及0.01%DMSO空白对照。结果 TanⅡA抑制HL-60和K562细胞生长，TanⅡA作用5天，HL-60细胞生长抑制率为79.9%，TanⅡA还诱导细胞向终末细胞方向分化，HL-60经TanⅡA处理4天，分化率为72%；NBT试验阳性显示有白血病细胞分化。K562细胞经TanⅡA处理6天，分化细胞占76%，HL-60经TanⅡA处理5天、K562经TanⅡA处理6天端粒酶活性抑制率分别为30.8%，50.8%。结论 TanⅡA对HL-0和K562细胞具诱导分化作用，随着细胞的诱导分化，端粒酶活性明显下降。     

吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制剂联合铝佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的效应分析

目的 探讨吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂INCB024360类似物与铝佐剂联合对甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其复合佐剂效应.方法 分别将三种不同剂量的INCB024360类似物(150 μg,100 μg,50 μg)与Al(OH)3(300 μg)复合后与HepA-1共同免疫ICR小鼠分别作为复合佐剂1组,2组,3组,同时设空白对照组、单纯疫苗组、铝佐剂对照组和单一INCB024360类似物(100 μg)组,共免疫一次,于免疫后4周、8周、12周、16周进行尾静脉采血,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清抗甲型肝炎病毒(HAV) IgG抗体水平.结果 除空白对照组外,各组小鼠免疫后4周、8周、12周、16周,均产生抗HAV IgG抗体,抗体水平随免疫时间的延长逐渐升高,于12周达到峰值.复合佐剂2组[HepA-118 EU+Al(OH)3 300 μg+INCB024360类似物100 μg]产生的抗体水平最高且持续时间较长,在8周和12周时,其对HepA-1的免疫增强效应显著高于单一佐剂组以及铝佐剂对照组(P＜0.05,t值分别为3.169、2.439).4周、8周、12周、16周,单一佐剂组与单纯疫苗组差异均不具有统计学意义(P＞0.05).结论 IDO抑制剂INCB024360类似物与铝佐剂复合后具有较强的复合佐剂效应,免疫增强效应优于铝佐剂对照组;但是单一的INCB024360类似物不具有显著佐剂效应.     

吲哚胺-2,3-双加氧酶在非小细胞肺癌的表达及其意义

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织(肺癌组织及配对淋巴结转移癌组织)中吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,INDO)的表达水平与NSCLC临床病理学参数之间的关系。方法:用免疫组织化学检测80例肺癌组织(包括原发性肺癌组织和配对淋巴结转移癌组织)、癌旁正常肺组织石蜡切片中INDO的表达水平,Western blot法检测其中40例新鲜肺癌组织及其癌旁正常肺组织中INDO的表达情况,根据手术、病理和影像学结果判断有无转移并确定分期,分析INDO蛋白表达水平与临床病理学参数之间的关系。结果:INDO蛋白阳性部位位于肺癌细胞质,其在原发性肺癌组织中阳性率为80.00%,明显高于在癌旁正常肺组织中的阳性率20.00%(P<0.001),在有淋巴结转移组中的阳性率为95.56%,显著高于在无淋巴结转移组中的阳性率60.00%(P<0.01),且与淋巴结转移有一定关系(P<0.05)。淋巴结转移癌中INDO阳性表达率为97.78%,显著高于原发灶中INDO的表达率80.00%(P<0.01)。结论:INDO在肺癌原发灶表达显著高于正常肺组织,且与NSCLC的淋巴结转移显著相关,而淋巴结转移癌中的表达又显著高于配对肺癌原发灶中的表达,提示INDO异常高表达可能与NSCLC转移有关。     

旋毛虫重组抗原P53对小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的影响

目的 研究旋毛虫重组抗原P53对小鼠骨髓来源的树突状细胞（DC2.4）吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）的表达及炎性因子分泌情况的影响。方法 设立实验组（旋毛虫重组抗原P53,终浓度为20μg/mL）、阳性对照组（IFN-γ,来源于提高树突状细胞IDO表达的小鼠,浓度为1 000 U/mL）和阴性对照组（PBS）,分别刺激细胞0、3、6、12、24 h后收集样品,利用qPCR技术对细胞内IDO、IL-10、IL-6、TNF-α的mRNA的转录水平进行检测;利用Western-blot方法检测各组IDO蛋白表达水平。进一步利用间接免疫荧光技术对细胞内的IDO进行检测。结果 qPCR结果表明,旋毛虫P53蛋白能引起胞内IDO、IL-10、IL-6及TNF-α的mRNA的转录水平增加,且呈现出时间依赖性。在24 h时,相比于阴性对照组,P53蛋白刺激组IDO及IL-6转录水平上调了5倍左右,抑炎因子IL-10 mRNA转录水平更是上调了9倍左右,TNF-α mRNA转录水平上调了7倍左右;Western-blot结果显示,旋毛虫P53蛋白刺激组和IFN-γ阳性对照组的细胞内IDO的蛋白表达水平...     

内皮性吲哚胺2,3-过氧化酶抑制心脏移植后冠脉血管病的发生

目的 探讨内源性吲哚胺2,3-过氧化酶对小鼠心脏移植后移植物发生冠脉血管病变的影响.方法 分别利用IDO-/-、高表达IDO以及野生型C57BL/6小鼠作为供体,bm12小鼠作为受体,建立小鼠腹部心脏移植模型.分别测量心脏纤维化面积、冠脉血管狭窄程度以及细胞增殖指数.结果 IDO是小鼠心脏移植后自身保护机制,IDO-/-供心纤维化面积大大提高.相反,与对照组相比,SB-hIDO治疗的实验组可明显缓解冠脉血管狭窄程度.结论 血管内皮源性吲哚胺2,3-过氧化酶对心脏移植后纤维化和冠脉血管病变发生的有明显的抑制作用.     

肿瘤患者化疗前后体液免疫变化观察

目的:探讨肿瘤患者化疗前后体液免疫变化情况。方法:分别检测肿瘤患者化疗前后血清Ig G、Ig M、Ig A、C3、C4 含量,并运用统计学方法进行比较分析。结果:化疗前后肿瘤患者血清中Ig G、Ig M、Ig A、C3、C4 差异均有显著性(P<0 .0 5 ) ,化疗后血清中的含量均高于化疗前。结论:在肿瘤患者化疗过程中,体液免疫发挥着重要的抗感染作用。