应用大肠杆菌LT基因探针检测几种肠道菌LT的初步研究

为探讨肠毒原性大肠杆菌（ETEC）以外的肠道致病菌的不耐热肠毒素（LT）的情况,我们应用国内LT基因探针检测了志贺氏菌属等9种肠道菌共200株,并用健康人大肠杆菌102株作对照观察,现将结果报告如下。     

产志贺毒素大肠杆菌毒力基因检测

目的 分析河南省2000～2002年分离的351株与产志贺毒素大肠菌(STEC)感染有关的菌株，了解不同来源标本各种毒素基因携带模式。方法 应用多重PCR技术，检测所有菌株志贺毒素(stx1和stx2、hlyA、eaeA、rfbO111和rfbO157基因。结果 351株待检菌株分为枸橼酸杆菌、O157：H7大肠杆菌、rfbO157基因阳性不携带志贺毒素基因的大肠杆菌和rfbO157基因阴性携带志贺毒素基因的大肠杆菌4种不同类型。4种类型菌株具有6种rebO157、stx2、stx1基因模式。携带志贺毒素基因的菌株主要源自波尔山羊、普通本地羊和病人，其它家畜家禽中有不同程度感染STEC。结论 河南省存在STEC的感染．主要以O157：H7大肠杆菌为主，但也存在其它非O157的STEC。     

大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)基因探针检测霍乱弧菌(Vc)的实验研究

自六十年代初霍乱第七次世界大流行以来,检测方法发展很快,种类繁多,但都属表型(Phenotype)检测范畴,常会受到影响抗原、毒素和酶活性表达的各种外环境因素的     

大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)基因遗传探针检测致儿童腹泻的产毒性大肠杆菌(ETEC)

辽宁省金县于1980年开始在中国预防医学中心流研所的指导下,建立四个乡疾病长期监测点,五年来对监测所收集的资料,进行了统计、整理、分析。     

基因探针试验检测大肠杆菌不耐热肠毒素的初步应用

本文报道用LT基因探针试验检测了从已排除其它肠道致病菌的急性腹泻病人粪便标本中挑出的109株大肠杆菌(每例病人1株),同时用平板免疫溶血试验及家兔肠段结扎试验检测ETEC进行比较。结果LT基因探针试验检出率最高,达66.06%,比平板免疫溶血试验的6.42%及家兔肠段结扎试验的5.50%均高了约10倍,证实了LT基因探针试验具有极高度的敏感性,适合于一次过地大量筛选出含毒素基因的菌株。     

平板免疫溶血与基因探针试验检测ETEC中LT的比较研究

产毒性大肠杆菌(ETEC)是人和家畜感染性腹泻的重要病原菌。它产生两种肠毒素:热稳定肠毒素(ST)和热敏感肠毒素(LT)。后者有多种检测方法,包括经典的兔肠结扎、组织培养、皮肤试验以及近来的 SPA 协同凝集法,固相放射免疫、ELISA 等。国内学者杨氏根据 Evans 的被动免疫溶血试验原理结合自己的实际工作创建了平板免疫溶血试验(PIHT),取得了较好的效果。但该法需高质量的特异性抗体,最近北京302医院制备 LT-McAb、LT     

沙门氏菌属基因探针检测研究进展

沙门氏菌属是肠杆菌科的一个大属,该属细菌是一种重要的人兽共患病病原菌,迄今为止已发现2100多个血清型,它们大多具致病性并广泛存在于家畜、家禽、野禽和鼠类等各类动物的肠道和内脏中,以及被动物粪便污染的水和土壤中。沙门氏菌污染的动物性食品可引起人的沙门氏菌性食物中毒。目前在世界各地无论发达国家还是发展中国家,沙门氏菌食物中毒是所有食物中毒中最常见的一种,据统计,约占细菌性食物中毒的42.6％～60％,是食物中毒占居首位或第二位的病原菌。为此,WHO     

碱性磷酸酶标记寡核甘酸探针检测致病性大肠杆菌成束菌毛基因

用合成的碱性磷酸酶标记27bp寡核酸探针检测178株EPEC和320株其他肠道致病菌，并对EPEC菌株同时进行HEp—2细胞粘附及荧光肌料蛋白染色（FAS）试验。结果显示，探针只与EPEC杂交，EPEC中bfpA基因的携带率为25．28％，不同血清人群之间bf－pA基因的携带率有很大差异。HEP—2细胞粘附试验和FAS的检测结果一致。探针杂交与HEp—2细胞粘附及FAS试验相比，符合率为100％，敏感度和特异度分别为95。5％和100％。表明该探针具有很高的特异性和敏感性，操作简便，对健康无害，可用于EPEC的诊断。关键词致病性大肠杆菌成束菌毛寡核甘…     

产毒性大肠杆菌LT测定方法的比较

<正> LT 的测定方法有回肠结扎、组织培养、平极免疫溶血试验、放射免疫、酶联免疫吸附试验及 DNA 探针法.上述方法中有些需要特殊的仪器或者操作较复杂,不适于一般实验室应用和推广。我们选出了能在一般实验室开展的家兔回肠结扎、平极免疫溶血和酶标法进行比较,报告如下。     

不同荧光探针检测微囊藻毒素-LR诱导的氧自由基

目的 研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对人肝细胞内超氧阴离子自由基(O<,2><'.->)、羟自由基(OH)水平的影响,探讨不同荧光探针的检测效果.方法 调整人肝癌HepG2细胞密度为5×10<'4>mL,分别设终浓度为10,30,100μmol/L的MC-LR染毒组和去铁敏(DFO,1 mmol/L)对照组以及MC...     

TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR联合检测难辨梭菌菌属基因及毒素基因方法学的建立

目的 建立一种简便、快速难辨梭菌菌属鉴定及其毒素基因筛查的荧光定量PCR检测方法。方法 采用TaqMan-MGB探针,通过real-time PCR分析系统,同时检测难辨梭菌菌属基因磷酸丙糖异构酶（Tpi）、A毒素（TcdA）、B毒素（TcdB）及缺失部分基因的A毒素（TcdAT）,从特异度、灵敏度及其抗干扰性等方面评价该方法,并联合全自动酶联荧光免疫系统（VIDAS）检测50 例临床不明原因腹泻病例粪便标本探讨其应用价值。结果 难辨梭菌非产毒株 Tpi 基因（tpi）的检测下限是6×10^-2 CFU/μl,产毒株 tpi、tcdA、tcdB、tcdAT 的检测下限为 6×10^-1 CFU/μl;难辨梭菌非产毒株tpi检测下限批内、批间变异率分别为2.1%和2.3%;产毒株tpi、tcdA、tcdB、tcdAT的检测下限批内、批间变异率依次为3.0%和3.4%、2.9%和3.2%、5.3%和5.7%、2.7%和2.8%。临床常见分离菌株及梭菌属其他细菌对检测无干扰。50 例不明原因腹泻病例粪便标本中,采用TaqMan-MGB 探针实时荧光 PCR 与 VIDAS 酶标免疫检测 39 例阴性标本其符合率为 100%;6 例两方法检测均为阳性;3例VIDAS酶标免疫检测为可疑及2例为阴性,经TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测为A-/B＋菌株。结论 建立的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR具有高通量、高灵敏度和重复性好的特性,且可筛查携带缺失部分基因的TcdA难辨梭菌菌株。     

致病性大肠埃希菌毒素基因的Allglo探针技术鉴定

目的：基于Allglo探针技术结合多重荧光PCR,建立快速、简便鉴定致病性大肠埃希菌相关毒素基因的方法。方法选取致病性大肠埃希菌的紧密黏附素基因（ eae）、志贺样毒素Ⅰ基因（ stx I）、志贺样毒素II基因（ stx II）和转录激活因子基因（ aggR）作为靶点。通过设计引物和Allglo探针,建立多重荧光PCR反应体系。同时,构建了4种毒素基因标准质粒,进而评价方法的特异性、灵敏性和重复性。结果基于Allglo探针技术的多重荧光PCR方法可同时准确、特异地鉴定致病性大肠埃希菌所携带的4种毒素相关基因,eae基因和aggR基因的灵敏度为10 copies/μL,stx I基因和stx II基因的灵敏度为1 copies/μL;定量检测的批间和批内变异系数均小于5%。对356份腹泻粪便样本进行评价,结果显示检出39份基因阳性。39份阳性样本中,eae基因阳性为53.85%,stxⅠ基因和stx II基因阳性为23.08%,aggR基因阳性为46.15%。通过直接测序方法进行鉴定,符合率达到100.00%。结论本实验建立的基于Allglo探针技术结合多重荧光PCR方法具有操作简便、特异性好和灵敏度高等特点,为致病性大肠埃希菌鉴定提供了一种快速、可靠的检测方法。     

肠出血性大肠杆菌SLT毒素的特性及实验室检测

肠出血性大肠杆菌ＳＬＴ毒素的特性及实验室检测邓曼玲综述陈忠德审校广西桂林地区防疫站（桂林５４１００１）ＷＨＯ在不久前指出，在过去的２０年里，世界出现了大约３０种新的感染症，１９８２年美国首次报告的Ｏ１５７∶Ｈ７大肠杆菌引起的出血性肠炎即是其中之一。这...     

多重PCR检测霍乱弧菌的毒素相关基因

目的 探索建立一种快速、敏感地检测霍乱弧菌O1群、O139群、非O1／非O139群的毒素相关基因的方法。方法 针对霍乱弧菌霍乱肠毒素A亚单位基因(ctxA)、小带联结毒素基因(zot)、辅助霍乱肠毒素基因(oce)、霍乱弧菌毒素共调菌毛A基因(tcpA)、毒素表达调控蛋白基因(toxR)分别设计引物，建立多基因PCR方法；通过一次扩增反应之产物经琼脂糖凝胶电泳，可检测出菌株的毒素相关基因的携带情况。结果 阳性对照菌株：MO45(霍乱弧菌O139群)检出5种毒素相关基因，结果符合设计要求；其他不同来源的霍乱弧菌(O1群、O139群、非O1／非O139群)检出1—5种不等的毒素相关基因；根据毒素相关基因携带情况，可将菌株分为5个基因型，并可区分为产毒株和非产毒株；多重PCR敏感度可达10^2cfu／ml。结论 该方法快速、特异、敏感，具有较大的应用价值。     

应用cDNA探针检测DMD患者基因缺失

假肥大型肌营养不良(DMD)是较为常见的遗传性肌病,呈X连锁阴性遗传,发病率约占出生男婴的1/3500。本文采用cDNA_8探针对20名正常成年人与8例DMD/BMD进行了基因分析。DMD基因位于X染色体短臂2区1带2亚带(Xp21.2),全长2300kb,其cDNA长14kb,由65个外显子组成,蛋白质产物为抗肌萎缩蛋白(dystrophin)。近年来的DMD分子遗传     

时间分辨荧光免疫分析法检测产志贺毒素大肠杆菌

目的基于时间分辨荧光免疫分析技术,建立高灵敏性、高特异性的产志贺毒素II(StxⅡ)大肠杆菌(STEC)全自动超微量检测方法。方法以StxⅡ单克隆抗体S1D8包被96孔板,采用双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+标记StxⅡ单克隆抗体S2C4,以β-二酮体为主的增强液为发光增强系统。建立StxⅡ双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法,并其对特异性、检出限、健全性进行评估。结果建立以StxⅡ为靶标的时间分辨荧光免疫法检测STEC法,检出限为0.023μg/L,与产StxI的STEC无交叉反应;平均回收率为98.95%,批内、批间CV分别为3.5%和4.7%。该方法灵敏性和特异性分别为100.0%和97.4%,阳性预测值和阴性预测值各是92.6%和100.0%,误诊率和漏诊率则分别是2.6%和0,假阳性率和假阴性率分别是2.6%和0。TRFIA检测StxⅡ毒素的诊断符合率为98.1%;约登系数为0.974,Kappa检验u系数为0.95。结论 StxⅡ时间分辨荧光免疫分析法灵敏度高、稳定性好,具有很好的临床应用前景。     

用Premierr EHEC测定法检测产志贺氏毒素大肠杆菌

最近,研制出一种可以检测粪便中志贺氏毒素1(Stx1)和志贺氏毒素2(Stx2)的酶免疫测定法Premier EHEC测定。作者用这种方法检测了974份粪便标本中的产志贺氏毒素大肠杆菌(STEC),并与检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的常规山梨醇-Mac-Conkey(sMac)琼脂培养进行了比较。