斑点杂交及PCR检查宫颈癌中人乳头瘤病毒核酸

应用生物素标记人乳头瘤病毒６、１１、１６、１８型探针斑点杂交检查４８例宫颈癌标本，其中１５例ＨＰＶ１６阳性，其余均阴性。又对该组标本中３４份进行聚合酶链反应，１４例ＨＰＶ１６阳性、２例ＨＰＶ１８阳性。     

反向斑点杂交技术应用于人乳头瘤病毒基因分型的研究

人乳头瘤病毒（HPV）感染、传播是宫颈癌与尖锐湿疣发生的重要病因，且HPV多重感染是宫颈癌的一个极其重要的危险因素。目前，已经确定的HPV型别有100多种，其中42种与生殖道疾病有关，不同地区HPV感染类型有较大差异。本研究利用反向斑点杂交法，可同时检测23种HPV型别，包括18种高危型与5种低危型。     

人乳头瘤病毒PCR

】     

SYBR Green实时荧光PCR方法检测广谱人乳头瘤病毒的方法建立

目的建立实时荧光PCR方法以检测广谱人乳头瘤病毒。方法该实时荧光PCR方法利用了degenerate PCR引物与非特异性的SYBR Green染料替代通常使用的PCR特异性引物与探针,并与市售高危13型、低危6型试剂盒以及degener-ate PCR方法进行比较。结果对于用高危13型试剂盒及低危6型试剂盒检测的100例黏膜型人乳头瘤病毒阳性标本,用SYBR Green实时荧光PCR方法检出的阳性数为69例,敏感性为69%,相反,用SYBR Green实时荧光PCR方法检测出的40例皮肤型人乳头瘤病毒阳性标本,用高危13型试剂盒以及低危6型试剂盒检测均为阴性;对于用SYBR Green实时荧光PCR方法及degenerate PCR方法检测的90例黏膜型、60例皮肤型标本,其检测结果显示两种方法有高度一致性(Kappa=0.907)。结论与市售试剂盒相比,SYBR Green实时荧光PCR方法可以覆盖广谱的HPV型别(皮肤型与黏膜型),并且比degenerate PCR方法高效、快速和简便,不失为一个可用于临床与科研的良好检测手段。     

女性感染人乳头瘤病毒基因分型结果分析

目的探讨女性生殖道人乳头瘤病毒(HPV)感染和基因型分布情况。方法采用HPV分型基因芯片检测系统同时检测5种低危型和18种高危型HPV。结果 4 832例标本中共检出HPV阳性874例(18.1%),共检出15种HPV型,其中单纯低危型HPV感染162例(3.4%),单纯高危型HPV感染654例(13.5%),高危、低危型共同感染58例(1.2%);检出感染单一HPV型738例(15.3%),感染2种HPV基因型以上136例(2.8%)。低危型主要为HPV6、11;高危型主要为HPV16、18、58、33、59等。结论女性宫颈HPV感染率较高,主要为单一感染,HPV分型基因检测对于HPV混合感染检测有其独特优势,对于生殖道感染以及子宫颈癌的早期发现、预防及治疗具有重要意义。     

1722例已婚女性宫颈细胞中人乳头瘤病毒基因的分型

目的探讨已婚女性宫颈细胞中23种人乳头瘤病毒(HPV)感染的基因分布情况及其临床意义。方法采用基因扩增芯片技术对1 722例已婚女性的宫颈上皮细胞标本进行23种HPV基因型别的检测,并对受检者进行相关资料分析。结果 1 722例中检出HPV感染者178例,总的HPV感染率为10.34%(178/1 722),其中单一型别的阳性检出率为8.89%(153/1 722);单一型别的感染中HPV43型为27例,其阳性检出率为1.57%(27/1 722),是最主要的感染型别。混合型HPV感染25例,其阳性检出率为1.45%(25/1 722);其中HPV16型+X型7例及16型+X型+X型2例,占混合型感染的36.00%(9/25),是混合型感染的主要型别,其次是HPV43型的2型感染6例和3型感染2例,占混合型感染的32.00%(8/25)。结论 HPV43、58型单一型别及HPV16、43型的混合型是感染的主要基因型别,基因扩增芯片检测技术可应用于宫颈细胞标本,一次性可检测23种HPV基因型别,特异性强,敏感性高。     

喉乳头瘤中人乳头瘤病毒DNA的PCR检测

喉乳头瘤中人乳头瘤病毒ＤＮＡ的ＰＣＲ检测董菁，庄坚，余秀葵（汕头大学医学院微生物学教研室，广东汕头５１５０３１）关键词乳头瘤，人乳头瘤病毒，聚合酶链反应喉乳头瘤（Ｌａｒｙｎｇｅａｌｐａｐｉｌｌｏｍａ，ＬＰ）为耳鼻喉科常见病之一，该病虽可自发缓解，但易...     

陕西延安地区妇女人乳头瘤病毒基因分型检测及人群分布特征

目的探讨延安地区妇女感染人乳头瘤病毒的人群分布特征,为宫颈癌的早期预防和全国的流行病学调查提供理论参考。方法采用PCR-反向点杂交法对4 733例门诊、住院、体检妇女宫颈组织进行HPV基因检测及分型。结果 4 733例筛查样本中,HPV阳性标本856例(18.09%)。排在前五位的HPV型别分别是HPV-16(3.8%)、HPV-58(2.3%)、HPV-52(2.0%)、HPV-53(1.5%)、HPV-51(1.2%)。各年龄组主要感染亚型是HPV-16,20岁及以下组以HPV-52为主。阳性标本中以单一亚型感染(82.47%)和40岁以上年龄组为主(42.86%)。结论延安地区总体以高危型HPV-16感染为主,HPV感染率和高危亚型感染率随年龄增加呈现增高趋势。40岁以上妇女为HPV高危型易感人群。     

外阴尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒分型研究

目的了解外阴尖锐湿疣（CA）患者人乳头状瘤病毒（HPV）感染情况及基因型特点。方法应用导流杂交基因芯片技术对64例外阴CA患者病损组织或宫颈脱落细胞进行21种HPV基因分型检测。结果64例患者中HPV感染率为73．44％,其中单一型感染率为46．88％,以HPV11型、6型为主;多重感染率为26．56％,其中含高危型的感染率为21．88％。共检出14个亚型,感染率最高为HPV11（37．5％）,其次为HPV6（26．56％）和HPV16（14．06％）,其余各型别感染率为1．56％-9．38％,低危型感染率高于高危型,但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论南宁地区外阴CA患者HPV感染以单-6、11型为主,高危型感染率较高,且表现为多重感染。     

PCR-反向点杂交技术在女性下生殖道人乳头瘤病毒感染分型检测的应用研究

目的 探讨PCR-反向点杂交分型技术在临床人乳头瘤病毒(HPV)感染基因分型中的应用.方法 采用PCR-反向点杂交分型技术,对1 702例女性进行下生殖道23种HPV亚型感染筛查.结果 HPV总感染率为17.6%(300/1 702),有21种型别被检出,感染率最高的为低危HPV43型(3.82%),其他型别分别为HPV16(3.70%)、52(2.70%)、6(2.47%)、58(1.88%)、18(1.76%)、56(1.53%)、68(1.29%)、11(0.88%)、33(0.82%)、66(0.71%)、59(0.59%)、53(0.53%)、42(0.53%)、31(0.35%)、73(0.24%)、51(0.18%)、35(0.18%)、83(0.12%)、45(0.06%)和39(0.06%),高危型感染13.9%(237/1 702),低危型感染6.4%(109/1 702),多型感染3.5%(59/1 702);1 702例HPV感染高峰年龄为大于或等于50岁(29.41%),各年龄段HPV感染检出率差异有统计学意义(P<0.05).结论 PCR-反向杂交分型技术能够同时检测高危和低危HPV,可判断多型感染,在临床诊断和普查方面均有重要意义.     

Clinical validation of a single-tube PCR and reverse dot blot assay for detection of common α-thalassaemia and β-thalassaemia in Chinese

ObjectiveTo evaluate a novel reverse dot blot assay for the simultaneous detection six types of common α-thalassaemia alleles (three deletional and three common non-deletional mutations) and 19 types of common β-thalassaemia alleles in a Chinese population.MethodsGenomic DNA samples were collected from three hospitals in southern China. The novel thalassaemia gene assay involved one multiplex polymerase chain reaction amplification system and one round of hybridization. Each of the clinically validated DNA samples was re-tested using the new multiplex polymerase chain reaction/reverse dot blot assay II (M-PCR/RDB II) assay in a double-blind manner.ResultsA total of 1060 unrelated study participants, including 829 patients with thalassaemia and 231 healthy control subjects, were analysed. The whole PCR and RDB procedures were completed in 260 min. All the samples, including heterozygous thalassaemia, homozygous thalassaemia and compound heterozygous thalassaemia, were correctly genotyped, yielding 100% concordance with the reference assays. HKαα/--^SEA and HKαα/−α^4.2, which were not included in the detection panel, yielded a contradictory result with this new assay.ConclusionThe novel M-PCR/RDB II assay was simple, rapid and accurate, suggesting that it could be used for the genetic screening and clinical diagnosis of common α-thalassaemia and β-thalassaemia variants in Chinese populations.     

反向斑点杂交技术应用于青少年女性HPV感染检测的研究

目的利用反向斑点杂交技术检测青少年女性的人乳头状瘤病毒(HPV)的感染情况并进行型别分析,为该类人群的HPV感染情况提供流行病学数据。方法应用PCR-反向斑点杂交(RDB)法对85例青少年女性进行23种HPV亚型检测(低危型为HPV6、11、42、43、45和高危型为HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4)。结果 85例样本中,HPV感染者40例,阳性率为47.06%,高危型占感染例数的50.62%,低危型占49.38%,二型或二型以上混合感染占52.5%(21/40)。结论应大力加强青少年女性HPV感染的宣传和筛查力度;反向斑点技术是很好的青少年女性HPV感染的筛查手段。     

反向斑点杂交技术检测HBV基因型方法的评价

目的评价用于检测乙型肝炎病毒（HBV）基因型的反向斑点杂交（RDB）方法。方法应用RDB检测723例HBV阳性标本的HBV基因型。其中对423例HBV序列测序结果清晰可读的样本进一步使用NCBI在线数据库分析、系统进化法分析其HBV基因型,并与RDB法结果进行比较。将样本HBV序列与所用的探针序列进行比对,以评价单个碱基突变对该方法的影响。结果 RDB法检测的检出率为97.6%。RDB检测结果与NCBI在线数据库分析法的一致性为98.8%;与系统进化分析法一致性为100%。与对应探针有1个碱基差异的HBV A型1例、B型12例、C型46例和D型1例均被成功检出。结论 RDB是一种灵敏、准确、有效,且具有很高临床应用价值的HBV基因型检测方法。单碱基的突变不会影响其对HBV的分型结果。     

反向斑点杂交技术检测HBV基因型方法的评价

目的评价用于检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型的反向斑点杂交(RDB)方法。方法应用RDB检测723例HBV阳性标本的HBV基因型。其中对423例HBV序列测序结果清晰可读的样本进一步使用NCBI在线数据库分析、系统进化法分析其HBV基因型,并与RDB法结果进行比较。将样本HBV序列与所用的探针序列进行比对,以评价单个碱基突变对该方法的影响。结果 RDB法检测的检出率为97.6%。RDB检测结果与NCBI在线数据库分析法的一致性为98.8%;与系统进化分析法一致性为100%。与对应探针有1个碱基差异的HBV A型1例、B型12例、C型46例和D型1例均被成功检出。结论 RDB是一种灵敏、准确、有效,且具有很高临床应用价值的HBV基因型检测方法。单碱基的突变不会影响其对HBV的分型结果。     

人乳头状瘤病毒与沙眼衣原体在女性生殖道感染中的相关性分析

目的分析人乳头状瘤病毒(HPV)与沙眼衣原体(CT)在女性生殖道感染中的相关性。方法对348例女性宫颈脱落细胞标本进行HPV DNA和CT DNA检测,对检测结果进行统计学分析。结果 HPV DNA检测总阳性率为13.2%(46/348),CT DNA检测总阳性率为9.2%(32/348);HPV DNA阳性及阴性患者CT DNA检测阳性率分别为23.9%(11/46)和7.0%(21/302),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论女性生殖道HPV与CT感染可能存在一定的相关性。