黄精地龙方对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤中的保护作用研究

目的探讨黄精地龙方(RPEWM)对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤的影响。方法 SH-SY5Y细胞经维甲酸诱导分化,再经Aβ25-35造成细胞老年痴呆(AD)损伤,观察不同浓度RPEWM提取液对损伤后的细胞形态学、细胞增殖情况及培养液中MDA、LDH含量,细胞中SOD、GSH-Px活性和细胞内游离钙含量、Caspase-3酶活性的影响。结果 RPEWM提取液在10~125 mg/L浓度范围内能明显抗细胞AD损伤,促进细胞增殖;RPEWM提取液30,60,90 mg/L均能明显降低MDA、LDH含量及细胞内钙离子、Caspase-3酶活性,升高细胞内SOD、GSH-Px酶活性,且呈剂量依赖性。结论 RPEWM对分化的SHSY5Y细胞Aβ25-35损伤有良好的保护作用,对AD有一定治疗作用。     

淫羊藿中不同部位及单体化合物对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响

目的通过比较淫羊藿Epimedium brevicormon不同洗脱部位及其单体化合物对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用,筛选淫羊藿活性部位和活性成分。方法淫羊藿提取物经大孔树脂柱、硅胶柱、Sephadex LH-20及制备液相的分离纯化,得到不同洗脱部位和单体化合物。运用Aβ_(25-35)体外诱导的神经细胞损伤模型,采用Hoechst33342和PI双染法,对淫羊藿的不同洗脱部位和成分进行活性筛选。结果与模型组比较,除淫羊藿95%乙醇部位外,所有洗脱部位及其中的单体化合物山柰酚-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)-β-D-半乳糖苷]-7-O-α-L-鼠李糖苷、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B均对Aβ_(25-35)所致SH-SY5Y细胞损伤有显著保护作用。结论淫羊藿对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其二氯甲烷-甲醇(5∶1)部位作用最强,其次是30%乙醇部位、50%乙醇部位。     

39个中药材提取物对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用筛选研究

以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,建立茁淀粉样蛋白（Aβ_{25-35）诱导细胞损伤的阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）体外细胞筛选模型,并将其应用于筛选39个中药材提取物中的抗神经细胞损伤活性组分。方法：采用CCK-8法进行活性初筛,CCK-8法和Hoechst33342/PI双染色分析法复筛活性组分。结果：初筛和复筛结果一致表明,39个药材提取物中黄柏40%乙醇部位（HB40）和95%乙醇部位（HB95）有较好的抗Aβ损伤活性。结论：提示黄柏有潜在的治疗抗阿尔茨海默病的药用价值。}     

参知健脑方组分对淀粉样β蛋白β25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探讨SZJ对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用机制。方法:以Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率,应用Western blot检测Aβ25-35以及SZJ/APP17肽对SH-SY5Y细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:25μmol/L的Aβ25-35减低SH-SY5Y细胞存活率,SZJ/APP17肽预处理24h可提高SH-SY5Y细胞存活率,相同浓度Aβ25-35 SZJ预处理组与非处理组比较差异显著(P<0.05);25μmol/L Aβ25-35处理的SH-SY5Y细胞Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Caspase-3的表达增高,SZJ/APP17肽预处理能抑制其表达升高,与非预处理组比较差异显著(P<0.05)。结论:SZJ可对抗Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的毒性作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3的表达,促进Bcl-2的表达有关。     

西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探究在以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默症(Alzheimer′s Disease,AD)体外细胞模型中,西洋参水提物(water extracts of American Ginseng,WEAG)对神经元的保护作用.方法:流式细胞仪(FCM)检测确定Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的最佳浓度和时间,以及WEAG抗凋亡的浓度,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞形态的变化.结果:50 μmol/L Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72 h后,细胞变圆,聚集,Hoechst33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,FCM检测凋亡率达(37.30±0.69)%,与对照组(1.56±0.80)%比较,差异具有显著性意义(P<0.05).而Aβ25-35和不同浓度的WEAG(0.5、1、5 mg/ml)同时孵育后,细胞形态明显改善,MTT值显著高于Aβ25-35处理组(P<0.01),凋亡率分别降低到(16.71±1.08)%、(10.52±2.11)%和(3.39±1.65)%,与Aβ25-35损伤组(37.30±0.69)%相比,差异具有统计学意义(p<0.05),并呈现出剂量依赖关系.结论:西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用.     

6种开心散类方对不同物质损伤神经细胞的保护作用

目的:研究组方相同,比例不同的6种开心散类方对模拟抑郁、阿尔茨海默病和帕金森病细胞模型的保护作用.方法:以0.4 mmol· L-1皮质酮损伤SH-SY5Y细胞,20 μmol·L-1β-淀粉样肽(Aβ25-35)损伤PC12细胞,250 μmol·L-1 1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)损伤SH-SY5Y细胞,建立体外模拟抑郁、阿尔茨海默病及帕金森模型,采用MTT法检测细胞的存活率及LDH法检测细胞损伤程度.结果:100,500 mg·L-1《备急千金要方》之定志小丸可显著提高皮质酮损伤的SH-SY5Y细胞的存活率并明显减少LDH的释放浓度;各开心散类方均有明显增加Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率、减少LDH的释放浓度的作用;其中以10,100,500 mg·L-1《备急千金要方》之开心散的作用最为显著;500 mg·L-1《古今录验》之茯神丸可显著提高MPP+损伤的SH-SY5Y细胞的存活率、减少LDH的释放.结论:定志小丸对皮质酮损伤的神经细胞有明显的保护作用,有潜在抗抑郁作用;6种开心散类方对Aβ25-35损伤的PC12细胞均有保护作用,有潜在抗阿尔茨海默病作用,《备急千金要方》之开心散作用最为显著;《古今录验》之茯神丸高剂量组对MPP+损伤的SH-SY5Y细胞有一定的保护作用.     

甘松对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及成分分析

目的通过比较甘松不同提取物对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用,筛选活性部位并进行成分分析。方法采用体外细胞培养法,建立6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞帕金森模型。MTT法检测甘松不同提取部位对6-OHDA诱导损伤的SH-SY5Y细胞活力的影响,计算抑制率;进一步观察细胞形态明确活性提取部位对细胞生长的影响。采用GC-MS技术对该部位进行化学成分分析。结果甘松石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及乙醇部位均能抑制6-OHDA所致的SH-SY5Y细胞损伤,提高细胞存活率,其中石油醚部位的保护作用最强,从该部位中分离鉴定出22个成分,主要为倍半萜类化合物。结论甘松不同提取部位对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤均有一定保护作用,其中石油醚部位活性较强,主要成分为倍半萜类化合物。     

鸢尾苷元通过GSK-3β/Nrf2信号通路减轻Aβ1-42诱导的 SH-SY5Y细胞损伤

目的：探讨鸢尾苷元对β淀粉样蛋白(Aβ)_1-42诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其潜在机制。方法：以Aβ_1-42诱导人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y建立阿尔茨海默病(AD)神经元损伤模型,MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;相关试剂盒检测LDH、Caspase-3、氧化应激和GSK-3β水平;免疫荧光法检测4-HNE表达;PDB数据库和分子对接预测鸢尾苷元和GSK-3β的结合;Western Blot分析凋亡和GSK-3β/Nrf2通路相关蛋白表达。结果：鸢尾苷元可呈浓度依赖性缓解Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞活力损伤、凋亡及氧化应激,并可通过靶向GSK-3β从而调控GSK-3β/Nrf2信号。结论：鸢尾苷元可通过调控GSK-3β/Nrf2通路进而抑制Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤。     

人参糖蛋白降低Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡中一氧化氮释放的保护作用

目的确定人参糖蛋白的基本化学构成,探讨人参糖蛋白抗β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)引起的神经炎症和神经保护作用。方法采用超滤、葡聚糖凝胶等方法分离纯化得到人参糖蛋白(Pg Gp),采用苯酚-硫酸法测定总糖含量,Lowry法测定蛋白含量,高效液相色谱法测定纯度和分子量分布。利用MTT法考察Pg Gp(5,25,125μg/m L)对细胞存活率的影响;Griess法测定Pg Gp对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞一氧化氮释放的影响。结果Pg Gp总糖含量为25.9%,蛋白含量为73.4%,分子量分布在200~50 000 Da。Pg Gp在不影响细胞存活率情况下,中、高剂量组与模型组比较,表现出保护Aβ25-35诱导的SH-SY5Y释放NO的能力(P<0.05,P<0.01)。结论人参糖蛋白可降低Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞一氧化氮释放量,从而具有保护神经细胞的作用。     

葛根素对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞线粒体 途径凋亡的保护作用

目的:探讨葛根素对MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护机制.方法:台盼蓝染色检测细胞存活率;PI单染流式细胞术分析细胞凋亡率、细胞周期分布;ELISA和Western blotting法检测胞浆Cyt C的变化;ELISA方法检测Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9酶活性;DNA ladder分析药物对细胞凋亡的干预作用.结果:在12.5～50 μmol·L-1,葛根素对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有一定的保护作用,并呈一定的量效关系;PI单染流式细胞术检测结果显示MPP+诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,并阻滞细胞于G2/M期,预先加入不同剂量的葛根素可以逆转MPP+对SH-SY5Y细胞损伤作用.Western blotting和ELISA分析结果均显示葛根素能够抑制MPP+诱导SH-SY5Y细胞的Cyt C的释放.不同剂量的葛根素也能够抑制MPP+诱导SH-SY5Y细胞的Caspase-3和Caspase-9的活性,但对Caspase-8的活性影响不明显;DNA ladder分析也显示葛根素可以抑制MPP+诱导SH-SY5Y细胞凋亡.结论:葛根素可以提高MPP+诱导的SH-SY5Y损伤的细胞存活率,抑制细胞凋亡的发生,其机制可能与调节线粒体Caspase通路和干预细胞周期有关.     

连二亚硫酸钠诱导SY5Y细胞缺糖缺氧模型及泽泻白术药对的作用观察

目的：建立连二亚硫酸钠（Na₂S₂O₄）诱导SH-SY5Y神经细胞缺氧缺糖损伤模型,进行提取物筛选,对筛选出的有活性提取物初步探讨其对神经细胞的保护作用。方法：CCK-8检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放,超氧化歧化酶活性（SOD）,丙二醛含量（MDA）,荧光探针负载法检测细胞内活性氧（ROS）和细胞内钙离子（[Ca²⁺]i）荧光强度。结果：连二亚硫酸钠诱导SH-SY5Y细胞损伤模型上进行提取物初筛,发现泽泻白术药对提取物有一定活性。与模型组比较,提取物组细胞的LDH 释放降低,SOD活性升高,MDA含量降低,细胞内ROS水平和[Ca²⁺]i荧光强度均减弱。结论：泽泻白术药对提取物对连二亚硫酸钠致SH-SY5Y神经细胞损伤有一定的脑保护作用。     

β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35建造体外PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达的影响。结果 10μmol/L的Aβ25-35与PC12细胞共培养24 h出现明显损伤,细胞活力下降,培养液中LDH含量增多,Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平增高。15 mg/L、30 mg/L、60 mg/Lβ-细辛醚可有效改善Aβ25-35引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少LDH渗漏,明显降低Aβ25-35引起的PC12细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平。结论β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞损伤有保护作用。     

灯盏细辛对神经细胞尼古丁受体表达的影响及其神经保护作用研究

目的研究中药灯盏细辛对神经母细胞瘤（SH-SYSY）细胞神经型尼古丁受体表达的影响及其对抗β淀粉样蛋白（Aβ）神经毒性作用机制。方法采用比色法测定细胞MTT还原率筛选药物浓度安全范围,选取一定浓度的灯盏细辛乙醇提取物醋酸乙酯部位处理SH-SY5Y细胞后,再加入Aβ1-42处理,测定MTT还原率,蛋白质印迹法（Western blotting）方法测定神经型尼古丁受体α3、α7蛋白表达的变化;采用改进的Ellman比色法测定细胞培养基中乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase,AChE）及丁酰胆碱酯酶（Butyrylcholinesterase,BuChE）活性。结果灯盏细辛乙醇提取物醋酸乙酯部位能提高细胞α3及α7尼古丁受体亚单位蛋白质表达水平;降低细胞乙酰胆碱酯酶活性;并能对抗Aβ引起的MTT还原率降低。结论灯盏细辛乙醇提取物醋酸乙酯部位能上调尼古丁受体亚单位蛋白表达水平,降低细胞乙酰胆碱酯酶活性,且能对抗Aβ的神经毒性作用,在阿尔茨海默氏病的治疗中可能起到一定作用。     

红花黄色素对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨红花黄色素对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用Aβ_(1-42)损伤SH-SY5Y细胞模拟体外AD,不同浓度(0. 01、0. 1、1g/l)红花黄色素进行干预。倒置显微镜下观察细胞形态; MTT法测定细胞存活率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞内Aβ_(1-42)水平; Western Blot检测SH-SY5Y细胞内APP、BACE-1、SAPPα、NEP、IDE、ERK和P-ERK蛋白表达水平。结果:红花黄色素各剂量均能够减少Aβ_(1-42)引起的SH-SY5Y细胞的损伤,使细胞的存活率显著提高,且具有剂量依赖性;ELISA结果显示,红花黄色素0. 1、1g/L可降低SH-SY5Y细胞内的Aβ_(1-42)水平; Western Blot结果显示红花黄色素各剂量均可以上调SAPPα、NEP、IDE和P-ERK蛋白的表达,下调APP和BACE-1蛋白的表达。结论:红花黄色素可以通过调节Aβ_(1-42)相关代谢酶而减少Aβ_(1-42)的含量,发挥抗AD作用,该作用可能与MAPK/ERK通路的激活有关。     

人参水提物对β淀粉样蛋白诱导SH—SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的研究人参水提物（water extracts of Ginseng,WEG）对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用方法用Aβ25-35诱导体外培养的SH-SY5Y细胞凋亡,并用WEG进行保护。MTT法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞形态的变化,流式细胞仪分析亚二倍体峰和DNA含量,检测细胞凋亡。结果Aβ25-35 50μmol／L诱导SH—SY5Y细胞72h后,镜下观察到细胞变圆,损伤并聚集,Hoechst33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,流式细胞仪检测到明显的亚二倍体峰,凋亡率达（37．30&#177;0．69）％。而Aβ25-35和不同浓度的WEG（1,5,10,15mg／m1）同时处理后,细胞形态明显改善,MTT值显著高于Aβ25-35处理组（P〈0．01）,流式细胞仪检测凋亡率分别降低到（14．70&#177;3．18）％,（7．23&#177;1．51）％,（6．14&#177;0．40）％,（5．88&#177;1．33）％,呈现剂量依赖关系。结论人参水提物对Aβ25-35诱导的SH—SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用。     

琐琐葡萄多糖对阿尔茨海默病细胞模型APP表达的影响

目的:观察琐琐葡萄多糖(polysaccharide from Vitis viniferal,VTP)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞β-淀粉样前体蛋白(beta-amyloid precursor protein,APP)基因表达的影响,探讨VTP在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病机制中的作用。方法:体外培养PC12细胞,分为对照组,AD模型组(20μmol·L-1Aβ25-35作用24 h),VTP低、中、高剂量组质量浓度分别为20,40,80 mg·L-1。VTP作用24 h后,检测细胞活性、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量和细胞超微结构,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测APP mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组细胞活性及SOD活力降低(P0.01),MDA含量及APP mRNA表达增高(P0.01),细胞超微结构明显异常;与模型组比较,给药组细胞活性及SOD活力增强(P0.05),MDA含量及APP mRNA表达下降(P0.01),减轻神经细胞损伤。结论:VTP对Aβ25-35诱导的氧化损伤有保护作用,通过抗氧化和调节APP mRNA表达,抑制Aβ形成,保护神经细胞,起到防治AD的作用。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:用Aβ25-35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染流式细胞计量法检测细胞凋亡,JC-1和Fluo-3荧光探针法分别观察线粒体膜电位和细胞内钙离子变化,Western印迹法检测Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,观察芍药苷对PC12细胞损伤的保护作用。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,并呈剂量相关性,其保护作用可能是通过提高线粒体膜电位、降低Ca2+浓度;增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的激活而实现的。结论:芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

补脑软胶囊对Aβ_(1-42)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的:研究补脑软胶囊对Aβ1-42诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用。方法:建立β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导SH-SY5Y细胞损伤模型,采用PBS溶解的补脑软胶囊内容物干预24h,采用CCK-8法测定细胞存活率,在Hochest33258染色荧光显微镜下观察SH-SY5Y细胞凋亡情况。结果:SHSY5Y细胞经Aβ1-42诱导损伤后采用补脑软胶囊干预24h,与模型组相比,用药组细胞突触结构消失减少,贴壁状态明显改善,提高了细胞存活率;Hoechst33258染色结果显示,对照组细胞呈现弥散均匀的弱荧光,而Aβ1-42模型组细胞核出现固缩形态和颗粒状荧光,补脑软胶囊干预后可明显减少细胞颗粒状荧光及固缩形态,提示补脑软胶囊可有效抑制Aβ1-42引起的细胞凋亡。结论:补脑软胶囊对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有一定的保护作用。     

中药复方更年春含药血清及其主要单体对β淀粉样蛋白所致细胞损伤的保护作用

目的:观察中药复方更年春含药血清及其主要单体成分对β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)所致肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞损伤的保护作用。方法:采用Aβ25-35作用PC12细胞构建阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)细胞模型,相差显微镜观察细胞形态改变。运用中药血清药理学方法制备大鼠更年春含药血清,以四甲基偶氮唑盐法观察更年春含药血清及其主要单体芍药苷、黄连素、知母皂苷A-Ⅲ、淫羊藿苷对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗Aβ损伤的作用,采用流式细胞仪观察更年春复方含药血清及复方主要单体对Aβ诱导的PC12细胞凋亡的影响。结果:PC12细胞在Aβ25-35作用后,有活力细胞数目减少,细胞间连接较松,胞浆较暗淡,细胞碎片较多,贴壁细胞欠透明,部分发生皱缩,胞浆中有较多颗粒。Aβ25-35剂量、时间依赖性地抑制PC12细胞的活力。更年春含药血清可以增强PC12细胞活力,不同浓度更年春含药血清培养细胞24、48、72h后,其增强PC12细胞活力均在20%浓度作用最强。更年春复方含药血清及复方主要单体之一的黄连素及主要单体混合液(包括芍药苷、黄连素、知母皂苷A-Ⅲ、淫羊藿苷)均有拮抗Aβ对PC12细胞损伤的作用,且均能抑制Aβ诱导的PC12细胞早期凋亡,其中更年春含药血清作用最强,中药单体混合液作用其次,而单体黄连素作用最弱。结论:更年春对AD细胞模型有保护作用,其含药血清作用强于主要中药单体及主要单体的混合液。     

五味子超临界萃取物对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用

目的:研究五味子超临界萃取物对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,建立Aβ引起的细胞损伤的AD细胞模型,采用MTT法和LDH法检测细胞生存活力。结果:五味子超临界萃取物能降低LDH含量,升高细胞线粒体脱氢酶的活性,增加活细胞数。结论:五味子超临界萃取物能减轻Aβ25-35损伤后的PC12细胞的受损程度,保护细胞膜,提高细胞生存活力。