复方银杏叶颗粒对H_2O_2致H9c2细胞损伤的保护作用

目的观察复方银杏叶颗粒(YXY)对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤的影响。方法采用H2O2建立心肌损伤模型,给予YXY 25、50、100、200μg/m L预处理24 h,MTT法测定细胞生存率,相差显微镜观察细胞形态学改变;试剂盒法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶-MB(CK-MB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)水平;共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)、钙离子浓度及线粒体膜电位。结果 H2O2 500μmol/L作用6 h可显著降低H9c2细胞生存率,诱导氧化应激损伤;YXY预处理可提高细胞生存率,改善损伤细胞形态学改变,减轻LDH、CK外漏,降低细胞上清中MDA、NO水平,增加SOD活性,减少H9c2细胞内ROS生成,降低细胞内钙离子浓度、减轻线粒体膜电位的下降。结论 YXY对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤有保护作用。     

山核桃叶总黄酮对H9c2细胞氧化损伤的保护作用

目的研究山核桃叶(Carya cathayensis)总黄酮对H2O2诱导的H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其与PI3K/Akt(磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶B)信号通路的关系。方法使用MTS(溴化噻唑蓝四氮唑)检测H2O2诱导氧化应激损伤的H9c2细胞存活率,Hoechst 33342染色观察其凋亡,Western blot技术检测p-AKT和AKT表达量,并用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002进行验证。结果山核桃叶总黄酮可显著的提高氧化应激损伤细胞的存活率,减少细胞凋亡,增加细胞中p-AKT的表达,但其作用可被PI3Ks抑制剂LY294002抵消。结论山核桃叶总黄酮激活PI3K/Akt信号通路来有效抑制H9c2细胞的氧化损伤。     

四君子汤(生晒参/红参)对H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用研究

该研究首先筛选了四君子汤(红参)等药液组体外干预H9c2心肌细胞的给药浓度,优选其中高、中、低3个剂量组进行后续实验;建立了体外H₂O₂诱导H9c2心肌细胞凋亡模型以考察四君子汤(生晒参/红参)对其保护作用,从而为优选用于临床治疗缺血性心脏病的四君子汤中的人参炮制品提供参考,以更好地体现其疗效;并考察其对SOD,MAD和LDH等指标影响以初步阐明作用机制。结果表明,四君子汤中用红参较生晒参对H₂O₂诱导心肌细胞损伤保护作用为好,二者均可提高SOD活性,减少MDA产生和LDH释放,从而明显减少心肌细胞凋亡数量,起到一定的保护作用。     

氧化苦参碱对H_2O_2诱导L02细胞损伤的抑制作用及其机制的研究

该文研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)抑制H2O2诱导的L02细胞损伤的作用及其机制。以人正常肝实质细胞L02为研究对象,采用H2O2诱导氧化应激建立肝损伤模型进行实验,通过CCK-8检测OMT对L02细胞活性的影响;CSFE荧光实验检测OMT对L02细胞增殖的影响;流式细胞术检测OMT对H2O2诱导的L02细胞凋亡率的影响;DCFH-DA荧光探针检测OMT对H2O2诱导的L02细胞内ROS含量;微板比色法检测OMT对GSH-PX和SOD活性的影响。结果显示,OMT在6.25~100 mg·L-1通过诱导NADPH的产生,增强L02细胞内GSH-PX酶和SOD酶的活性,进而促进GSH介导的活性氧ROS的清除,从而抑制H2O2诱导的L02细胞凋亡的发生,达到抑制H2O2诱导L02细胞损伤的作用。     

尖叶假龙胆有效成分的活性追踪分离及对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用研究

目的从尖叶假龙胆不同极性部位中寻找对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤具有较强保护作用的化合物。方法采用活性追踪分离的方式,通过H_2O_2诱导PC12细胞损伤建立氧化应激损伤模型,利用实时细胞分析技术(real-time cell analysis,RTCA)研究尖叶假龙胆不同极性部位对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用;采用HPLC法测定具有活性的单体化合物的质量分数,并确定其化学结构。结果尖叶假龙胆正丁醇和醋酸乙酯部位对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用。同时,从尖叶假龙胆正丁醇和醋酸乙酯部位中分离得到的化合物1、2、3、5也对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用。其中化合物1和2的保护作用在3.125-50.000μmol/L呈一定剂量依赖性,浓度为50.000μmol/L时,对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用最强;而化合物3和5的保护作用在3.125-50.000μmol/L内不具有剂量依赖性,浓度分别为25.000、3.125μmol/L时,对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用最强。经结构鉴定,化合物1、2、3、5分别为雏菊叶龙胆酮、去甲基雏菊叶龙胆酮、当药醇苷及去甲基当药醇苷。结论化合物1、2、3、5对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用,可能是尖叶假龙胆抗氧化的主要活性成分。     

槲皮素保护H2O2诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤的作用机制

目的:探讨在H_2O_2诱导的氧化应激损伤中槲皮素对H9C2心肌细胞存活率、活性氧分子(ROS)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶、细胞凋亡等关键因子的影响,初步阐明槲皮素对心肌细胞的保护机制。方法:H_2O_2刺激H9C2心肌细胞建立氧化应激损伤模型,分为正常组、模型组、槲皮素组,采用噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞活力,活性氧检测试剂盒检测槲皮素处理后ROS变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞氧化应激反应、细胞凋亡机制相关分子[NADPH氧化酶-4(NOX-4),NADPH氧化酶亚单位p22phox,B淋巴细胞瘤-2原瘤基因(Bcl-2),Bcl-2相关X基因(Bax),半胱胺酸蛋白酶-8(Caspase-8)]基因和蛋白表达水平。结果:10μmol·L-1槲皮素具有显著的抗氧化、抗凋亡作用。与模型组比较,槲皮素组细胞存活率明显提高(P0.05),ROS水平与细胞凋亡率明显降低(P0.05,P0.01)。此外,槲皮素组中Bcl-2,NOX-4基因表达上调(P0.05);p22phox,Bax,Caspase-8基因表达明显下调(P0.05)。同时槲皮素能够抑制Bax,p22phox蛋白的表达(P0.05),上调磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:10μmol·L-1槲皮素能有效减少H_2O_2介导的心肌细胞氧化损伤,进而抑制心肌细胞凋亡。该机制可能是通过调节NADPH氧化酶亚型NOX-4与p22phox,减少ROS生成,激活PI3K表达,升高Bcl-2实现。     

黄芪苷Ⅳ通过PI3K/Akt信号通路抗H_2O_2诱导的H9c2细胞氧化损伤

目的研究黄芪苷Ⅳ对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率,DNA抽提及琼脂糖凝胶电泳、Hoechst 33258染色、caspase-3活性检测细胞凋亡,Western blotting检测t-Akt和p-Akt蛋白的表达。结果与H2O2组比较,10、20mg/L的黄芪苷Ⅳ均显著提高细胞存活率,降低caspase-3活性,减轻细胞凋亡;且均显著上调p-Akt蛋白的表达;PI3K/Akt抑制剂LY294002部分阻断10、20 mg/L黄芪苷Ⅳ的保护作用。结论黄芪苷Ⅳ部分通过PI3K/Akt通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用。     

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的研究银杏内酯B(Ginkgolide B,GB)对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响。方法将对数生长期的H9c2心肌细胞随机分为5组:空白对照组、H_2O_2干预组、GB(50、100和200μmol/L)干预组。检测细胞存活率、培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量、细胞中氧自由基(ROS)含量和抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量;检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,检测NF-k B蛋白表达并进行半定量分析。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高;培养液中AST、CPK、LDH含量和细胞中ROS、MDA含量显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡状况明显改善、凋亡率显著降低,NF-k B蛋白表达显著下调;其中GB(200μmol/L)干预组GSH-Px活性显著降低。结论 GB能够有效提高细胞存活率,改善抗氧化酶活性、降低ROS含量、降低氧化应激损伤,下调NF-k B蛋白表达、降低细胞凋亡率,提示GB对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激具有抑制作用。     

吉马酮改善H_2O_2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用

该文主要研究吉马酮对过氧化氢(H_2O_2)诱导的脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。使用500μmol·L~(-1)H_2O_2诱导脐静脉内皮细胞3 h,从而建立氧化损伤模型,再用不同浓度吉马酮(20,40,100,150,200μmol·L~(-1))保护24 h。利用MTT法检测吉马酮对H_2O_2损伤HUVECs细胞活力的影响;ELISA法检测PGI2,TXB2,ET-1,t-PA,PAI-1,TNF-α和IL-6;硝酸还原酶法检测NO;比色法检测NOS及GSH-Px;再分别采用TBA法、WST-1法和微量酶标法检测MDA,SOD和LDH的含量等;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达。结果表明500μmol·L~(-1)H_2O_2作用3 h细胞损伤率达到52%,而在20~200μmol·L~(-1)随着吉马酮浓度的增大被损伤细胞活性不断增强。与正常组比较,H_2O_2损伤使PGI2,NO,T-NOS,t-PA,SOD,GSH-Px和Bcl-2 mRNA降低,使PAI-1,ET-1,IL-6,TNF-α,TXB2,LDH,MDA,Bax mRNA和Caspase-3 mRNA增加;与模型组比较,吉马酮(200,100,50μmol·L~(-1))使PGI2,NO,T-NOS,t-PA,SOD,GSH-Px和Bcl-2 mRNA增加,使PAI-1,ET-1,IL-6,TNF-α,TXB2,LDH,MDA,Bax mRNA和Caspase-3mRNA减少。Hoechst 33258荧光染色与正常组比较,模型组细胞膜与细胞核呈浓缩致密的强蓝色荧光,细胞数量明显减少;与模型组比较,给药组的蓝色荧光强度降低等。以上研究结果表明,吉马酮可能通过抗氧化及抑制细胞凋亡等作用,从而改善H_2O_2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用。     

芪参益气方对H_2O_2损伤的心肌细胞线粒体结构和功能的保护作用及机制探讨

目的制备H_2O_2诱导的心肌H9c2细胞损伤模型,通过线粒体结构、功能改变的多指标综合评价方法探讨芪参益气方对H9c2细胞的保护作用及作用机制。方法体外培养H9c2细胞,分为对照组、模型组(H_2O_2)、模型阳性对照羰基-氰-对-三氟甲氧基苯腙组(5μmol/L)、芪参益气方组(0.2 mg/mL),每组3个复孔,加入相应药物孵育24 h,H_2O_2诱导2 h制备心肌细胞损伤模型。采用Operetta高内涵成像系统评价H9c2细胞线粒体功能及形态纹理的改变;海马生物能量测定仪检测线粒体能量代谢的变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果芪参益气方能够明显降低H_2O_2损伤的H9c2细胞线粒体质量,增加线粒体膜电位和纹理的量化数值,同时增加线粒体基础耗氧率、ATP相关耗氧率、最大耗氧率以及储备能力,明显降低细胞早期及晚期凋亡率,增加活细胞率。结论基于细胞的线粒体结构和功能评价,证实芪参益气方通过改善线粒体功能及能量代谢减轻细胞凋亡保护H9c2细胞。     

参芎葡萄糖注射液对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨参芎葡萄糖注射液(Shenxiong glucose injection,SGI)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养H9c2心肌细胞,用H2O2(300μmol·L-1)处理0.5 h,建立H9c2心肌细胞H2O2氧化损伤模型,SGI组:H9c2细胞用(100,200,400μmol·L-1)SGI处理6 h后,另设空白组与模型组,再用H2O2处理0.5 h。利用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP);用MTS法检测细胞存活率;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;用蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)的表达情况。结果:在300μmol·L-1H2O2作用细胞0.5 h的情况下,细胞存活率降低至50%左右,降低的程度合适,且实验结果重复性好,因此后续实验用该条件建立氧化损伤模型。与模型组比较,SGI预处理6 h能显著升高细胞存活率(P0.05,P0.01),减少LDH的外漏和MDA的生成(P0.05,P0.01),显著增加SOD,GSH-Px和CAT的活性(P0.01),明显减少H9c2细胞内ROS含量(P0.01),并使MMP丢失减少(P0.01),Western blot表明,SGI能显著上调Bcl-2的表达,下调Caspase-3的表达(P0.05,P0.01)。结论:参芎葡萄糖注射液能保护H9c2心肌细胞对抗H2O2诱导的氧化损伤,其作用机制可能与其提高细胞清除ROS能力和抑制细胞凋亡有关。     

竹节参总皂苷对H2 O2致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:通过建立H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤模型,观察竹节参总皂苷(SPJ)对心肌细胞的保护作用.方法:将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为正常组,模型组(H2O2),SPJ低剂量组(50 mg·L-1),SPJ高剂量组(100 mg·L-1).H2O2诱导心肌细胞氧化损伤2h后SPJ孵育24 h,显微镜下观察细胞搏动频率,MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶( LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛( MDA)含量.结果:SPJ(50,100 mg·L-1)可明显增加心肌细胞搏动频率,降低H2O2所致乳鼠心肌细胞LDH释放量,升高SOD,CAT,GSH-Px活性,降低MDA含量(P＜0.01或P＜0.05).结论:SPJ对H2O2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤有明显保护作用.     

黄芪甲苷对ChangLiver细胞酒精性和非酒精性氧化损伤的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对Chang Liver细胞酒精性和非酒精性氧化损伤的保护作用。方法:以Chang Liver细胞为研究对象,使用乙醇、H2O2分别建立酒精性及非酒精性氧化损伤模型,MTT法测定细胞存活率,微板法、比色法检测转氨酶活力及抗氧化能力,DCF荧光法检测细胞内活性氧,流式细胞术检测细胞周期,DNA ladder法检测细胞凋亡。结果:2种氧化损伤均可导致Chang Liver细胞存活率和抗氧化酶活性下降、以及细胞外液中转氨酶活力和丙二醛含量升高,黄芪甲苷对上述损伤均有显著或极显著的保护效果;同时,乙醇能够显著降低损伤细胞内的活性氧水平,而H2O2能够显著升高损伤细胞内的活性氧水平,黄芪甲苷则能使上述异常的活性氧水平趋于正常。同时缓解乙醇或H2O2对Chang Liver细胞G0/G1期的阻滞现象,并对二者诱导的细胞凋亡均有一定的抑制作用。结论:黄芪甲苷对Chang Liver细胞的酒精性和非酒精性氧化损伤均有保护作用。     

通络化痰胶囊对H2O2所致的PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的:探讨通络化痰胶囊对过氧化氢(H2O2)所致的大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)细胞凋亡的保护作用及机制.方法:PC12细胞常规培养后,首先通过MTT检测细胞存活率的方法进行H2O2损伤模型的摸索和通络化痰胶囊药物浓度的筛选;确定造成PC12细胞损伤的H2O2浓度和通络化痰胶囊的安全作用浓度后,将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组、模型组和通络化痰胶囊6.25,12.5,25,50,100mg·L-15个治疗组.用200 μmol· L-1H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞存活率、Hoechst33342荧光核染色观察细胞凋亡形态学改变、流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率、Western blot 方法检测与细胞凋亡线粒体途径密切相关的蛋白细胞色素C(CytC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的变化.结果:200 μmol· L-1H2O2诱导PC12细胞损伤明显,浓度小于等于100 mg·L-1的通络化痰胶囊浓度对正常PC12细胞的存活率没有抑制作用.与模型组比较,各通络化痰治疗组PC12细胞存活率提高(P＜0.01),凋亡率下降(P＜0.01),Cytc和Caspase-3的表达减少(P＜0.01),其作用与剂量有关.结论:通络化痰胶囊可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞凋亡线粒体途径中凋亡相关CytC和caspase-3的表达有关.     

复方银杏叶颗粒改善人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其机制研究

该实验于体外使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与复方银杏叶颗粒(80,160,320,640 mg·L-1)预孵育,合并使用H2O2(1 200μmol·L-1)建立氧化应激损伤模型。采用MTT法研究药物对HUVEC细胞增殖情况的影响,检测细胞培养上清中的LDH,MDA,NO含量及SOD活性,判断药物对内皮细胞的保护作用。通过Casepase-3活性检测以及Annexin V-FITC/PI流式细胞术,检测药物对细胞凋亡的保护作用。使用Western blot法测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。研究发现1 200μmol·L-1H2O2能够诱导内皮细胞产生氧化应激损伤,使细胞存活率降低,且细胞增殖抑制程度与H2O2的作用时间呈正相关。而80,160,320,640 mg·L-1的复方银杏叶颗粒能够明显减轻该模型下内皮细胞的氧化应激损伤,恢复细胞正常增殖水平,改善细胞状态,抑制细胞凋亡,同时能够上调Bcl-2的表达以及下调Bax的蛋白表达。该实验证明了复方银杏叶颗粒对H2O2诱导的内皮细胞氧化应激损伤及细胞凋亡具有一定的保护作用,其机制可能与复方银杏叶颗粒抑制了内皮细胞凋亡的线粒体途径有关。